黑松未成熟胚的体细胞胚胎发生和植株再生

以未成熟合子胚为外植体,建立黑松体细胞胚胎发生和植株再生体系。研究基本培养基、2,4-D和6-BA对胚性愈伤组织诱导的影响,探讨ABA和PEG对体细胞胚成熟及植株再生的影响。结果表明:在添加4mg·L-12,4-D+2mg·L-16-BA的DCR培养基上胚性愈伤组织诱导率为3.33%;在添加30mg·L-1ABA+25g·L-1PEG的培养基DCR上,每克愈伤组织体细胞胚数量达72个,体细胞胚的萌发率为63.8%、植株转化率为43.5%,高质量的黑松体胚能提高体胚萌发率和植株转化率,再生植株1个月移栽成活率为50%。该研究可为抗病黑松的快速大规模繁殖提供一条新途径。     

刺槐未成熟合子胚的体细胞胚胎发生和植株再生

以刺槐不同胚龄的未成熟合子胚为外植体,采用混合正交试验设计,研究幼胚胚龄和不同外源激素种类及质量浓度对刺槐胚性愈伤组织的诱导和体细胞胚分化、萌发的影响.结果表明:开花后8周(55天左右)是胚性愈伤组织和体胚诱导的最佳外植体取材时期;MS+2,4-D 5.0 mg·L-1 +BA0.5 mg·L-1是诱导胚性愈伤组织的最佳培养基,出愈率最高为95.42％±0.02％;MS +NAA0.5 mg·L-1 +BA0.5 mg·L-1+谷氨酰胺250 mg·L-1+水解酪蛋白500 mg·L-1是体细胞胚诱导和分化的最佳培养基,直接体细胞胚发生率最高为92.40％±0.12％,通过愈伤组织诱导体细胞胚发生的频率最高为90.73％ ±0.49％.一旦形成球形胚,将培养物转接到不含任何生长调节剂的MS培养基上,体细胞胚经成熟萌发可进一步形成完整小植株.     

香樟未成熟合子胚体胚发生及植株再生研究

以香樟的未成熟幼胚为外植体进行诱导体胚发生影响因素的研究.成功地从香樟幼胚中诱导出胚状体并获得再生植株,MS为基本培养基,蔗糖是最佳的碳源.经2年对初生胚的继代培养,获得胚性愈伤组织;胚性愈伤组织经体胚诱导、体胚成熟、体胚萌发3个过程的诱导后能够获得再生植株.     

雷公藤体细胞胚发生及其植株再生

雷公藤(Tripterygium wilfordii)系卫矛科(Celastmceae)雷公藤属植物,在我国很早以前就用于医学和害虫防治,是生产无公害农药的宝贵资源之一(李琰等,2008;夏焱等,2005;陈同素,1933).雷公藤的活性成分主要存在于根部(杨春欣等,2001),但其属多年生木质藤本,生长较慢,人工栽培极少,因而人们对野生资源大量盲目采挖,使资源遭到严重破坏.目前对雷公藤的研究主要集中在有效成分分离鉴定、开发利用等方面(Jun et al.,2007;Canter et al.,2006;周琳等,2006),未见到关于组培快繁及体细胞胚诱导方面的报道.     

落叶松体细胞胚发生研究进展

以体细胞胚发生的发展阶段为线索，对落叶松胚性培养物的诱导、胚性愈伤组织的保持和增殖、体胚成熟、体胚的萌发进行了全面的论述。     

日本落叶松体细胞胚胎发生的研究

日本落叶松日永 10、日永 6 9和日草 34三个优株 ,将其未成熟种子和成熟种子的胚及成熟种子萌发的胚根、胚轴和绿色愈伤组织 5种外植体进行体细胞胚胎发生的试验 ,其中只有未成熟胚诱导出胚性愈伤组织 ,筛选出1)胚性愈伤组织诱导培养基 :S培养基 6_BA 0 5mg·L- 1 KT 0 5mg·L- 1 2 ,4_D 1 0mg·L- 1 ;2 )胚性愈伤组织保持与增殖培养基 :S培养基 6_BA 0 2 5mg·L- 1 KT 0 2 5mg·L- 1 2 ,4_D 0 1mg·L- 1 ;3)成熟体细胞胚诱导培养基 :S培养基 ABA 15mg·L- 1 PEG4 0 0 0 10 0g·L- 1 。以上 3种培养基均需附加蔗糖 30g·L- 1 ,谷氨酰胺 4 5 0mg·L- 1 ,水解酪蛋白 5 0 0mg·L- 1 ,凝胶 (Sigma#) 3g·L- 1 ,pH5 8。 4 )体细胞胚萌发培养基 :S培养基 ,不加任何激素 ,附加蔗糖 2 5g·L- 1 ,凝胶 (Sigma#) 3g·L- 1 ,pH5 8。     

落叶松不同类型胚性和非胚性愈伤组织的生理生化差异

以华北落叶松替代、增殖培养的不同类型的胚性及非胚性愈伤组织为材料，测定其氨基酸、糖类、酚酸、激素以及离子的含量。结果表明：氨基酸含量的差异十分明显，质地硬的非胚性愈伤组织中18种游离氨基酸含量为胚性愈伤组织的2倍以上，经ABA处理后，胚性愈伤组织中多糖及邻苯二酚含量急剧升高；三糖含量与不同基因型密切相关；乙烯释放量 在非胚性愈伤组织中高于胚性愈伤组织；金属离子CO^ 的含量，胚性愈伤组织是非胚性愈伤组织的12倍，胚性愈伤组织中铵态氮（NH4^ ）与硝态氮（NO3^-)的比值是非胚性愈伤组织中的10倍以上;实验结果为进一步探讨针叶树体细胞胚胎发生的生理生化机理提供依据。     

雷公藤胚性愈伤组织再生植株的增殖及其稳定性

以雷公藤胚性愈伤组织为材料,研究继代培养时间对植株再生和基本培养基、生长素浓度及其与细胞分裂素组合对再生苗增殖的影响.结果表明:在继代培养过程中,愈伤组织再生率和再生苗数经历了一个由低到高再到低的过程,以8个月到1年之间的胚性愈伤组织的再生能力最强,达100%,每块愈伤组织平均形成的芽数也比较多,雷公藤胚性愈伤组织在继代20个月后已经丧失再分化能力.愈伤组织再分化过程易发生变异,从叶形上看,再生苗出现6种类型的变化.再生苗茎段增殖以1/2MS为基本培养基附加2.0 mg·L-1IBA为好,以1/2MS+2.0mg·L-1IBA+O.5 g·L-1活性炭的培养基有利于芽苗生根培养,生根率达100%.移栽至珍珠岩与腐殖质土(1:1)的混合基质中成活率达96%.     

紫锦木叶片体细胞胚发生和植株再生

紫锦木(Euphorbia cotinifolia)为大戟科(Euphorbiaceae)大戟属常绿灌木或小乔木(中国植物志编委会,1998),又名红叶乌桕、非洲红,具有很高的观赏价值(图版Ⅰ-1),适合各种庭园绿化利用,紫锦木叶片提取的红色素可用于饮料、食品、化妆品等产品中(黄卓烈等,2002).目前,对紫锦木组织培养的报道还很少.紫锦木虽可用扦插或嫁接繁殖,但繁殖系数低,用组织培养方法可在短期内得到大量试管苗(韩珊等,2006).     

蒙古栎体细胞胚胎发生技术研究

为建立蒙古栎体细胞胚胎发生体系,以蒙古栎未成熟合子胚为外植体,通过不同种源、外植体的取材时间、诱导培养基配比、培养条件等筛选得到胚性愈伤组织,进而进行体胚增殖。结果表明:7月上旬是最佳的取材时期(合子胚大小约10 mm),蒙古栎合子胚在培养基MS+2,4-D1 mg·L~(-1)+6-BA 0.5 mg·L~(-1)+水解酪蛋白0.5 g·L~(-1)中胚性愈伤组织诱导率可达85.7%,光照条件对胚性愈伤组织的诱导率影响不显著。不同种源对胚性愈伤组织的诱导率有显著影响。在培养基MS+NAA 0.5 mg·L~(-1)+6-BA 0.5 mg·L~(-1)+水解酪蛋白0.5 g·L~(-1)中体胚增殖率最大72.3%,且培养4周时胚性愈伤组织状态最佳。     

杉木成熟合子胚器官发生和体胚发生

以杉木成熟合子胚为起始外植体,研究基本培养基、不同种类的细胞分裂素及生长素对杉木器官发生和体胚发生及不定芽生根的影响,并用石蜡切片法观察不定芽和体胚的发生和发育过程.结果表明:DCR 6-BA 1.0mg·L-1 TDZ 0.002 mg·L-1 NAA 0.1 mg·L-1对成熟合子胚诱导不定芽最有效;DCR 6-BA 1.0 mg·L-1 TDZ 0.003mg·L-1 NAA 0.1 mg·L-1是成熟合子胚诱导体胚的最佳培养基;不定芽在DCR基本培养基中可有效伸长;1/4MS IBA 0.2 mg·L-1 NAA 0.1 mg·L-1对不定芽生根最有效.石蜡切片观察表明:不定芽有2种发生方式,一种是表皮及表皮下的3～4层细胞分生组织化发育而成,另一种是外植体内部的小维管束脱分化发育而成.2种发生方式均为直接器官发生途径.     

火炬松体细胞胚胎发生体系的优化

目的 建立和优化火炬松体胚发生技术体系,为火炬松优良基因型体胚繁育及遗传转化体系建立提供技术支撑。 方法 以火炬松优良基因型的未成熟合子胚为材料,从基因型、球果采集期、基本培养基、植物外源激素组合及浓度等方面对胚性愈伤组织诱导条件进行优化;选取增殖效果好、具有胚性胚柄细胞团（ESM）的胚性愈伤组织开展体胚成熟的正交试验,选择发育正常的子叶胚进行萌发,8周后移栽。 结果 基因型、球果采集期、基本培养基和外源激素(PGR)组合及浓度等因子均对胚性愈伤组织诱导有不同程度的影响。火炬松6种基因型中荣山52胚性愈伤组织诱导率最高,达63.33%;处于裂生多胚期的合子胚为外植体的最佳采样期（7月20日左右）;6种基本培养基中,在DCR基本培养基上胚性愈伤组织诱导率最高,达40.00%;不同PGR组合及浓度中,以0.5 mg·L−1 6-BA+1.0 mg·L−1 2,4-D + 2.0 mg·L−1 NAA + 5.0 mg·L−1 ABA的胚性愈伤组织诱导率最高,达50.00%。胚性愈伤组织在基本培养基MLP上培养14 d后,转入含有ABA 8.0 mg·L−1、PEG 8000 140 g·L−1以及麦芽糖40.0 g·L−1的体胚成熟分化培养基上,体胚发生数平均为411个·g−1,体胚萌发率可达93.33%;体胚苗移栽成活率可达86.30%。 结论 本研究优化了火炬松胚性愈伤组织诱导与体胚发生技术体系,体胚诱导率显著提升,为火炬松良种规模化繁育及遗传转化提供技术支撑。     

花曲柳体胚发生和植株再生

以花曲柳合子胚的单片子叶为外植体成功诱导出体胚并获得再生植株。未成熟合子胚的子叶在添加400mg·L-1水解酪蛋白、0.25mg·L-16-BA、1.5mg·L-1NAA、70g.L-1蔗糖和6g·L-1琼脂的MS1/2培养基上可以成功诱导产生体胚,诱导率达到34.7%,每个外植体上体胚数量为2～9个。成熟合子胚的子叶在添加0.25mg·L-16-BA、2mg·L-1NAA的MS1/2培养基(其他成分同上)上可以成功诱导产生体胚,诱导率为10.0%。体胚在MS1/2培养基上经过成熟培养后可以正常萌发,萌发率87.6%。萌发的体胚植株在MS1/2+0.01mg·L-1NAA培养基上生长较好,具备实生幼苗的外观特征。经炼苗后的体胚苗移植到栽培基质(草炭土:蛭石:珍珠岩体积比为5:4:1)中可以正常生长,成活率为75.0%。     

利用悬浮培养和培养基选择改善火炬松的体细胞胚胎发生和植株再生(英文)

三个基固型的火炬松成熟合子胚被培养在附加 8mg·L-12 ,4 D ,4mg·L-1BA ,4mg·L-1KT ,5 0 0mg·L-1水解酪蛋白和 5 0 0mg·L-1谷氨酰胺的愈伤组织诱导培养基上诱导愈伤组织 .来自于子叶、胚轴和胚根的愈伤组织在附加 1 6mg·L-12 ,4 D ,0 8mg·L-1BA和 0 8mg·L-1KT的愈伤组织增殖培养基上培养 9周后 ,可获得 16 9%的胚性愈伤组织 .通过建立胚性细胞悬浮系和研究ABA、PEG和活性炭对体细胞胚成熟的促进作用 ,优化的体细胞胚胎发生体系被建立 .71棵再生小苗被用于移栽试验 ,2 3棵小苗在田间移栽成活