猪源乳酸片球菌的分离及体外生物学特性研究

本试验分离得到一株猪乳酸片球菌ZLP025,对其进行了生长曲线、耐酸碱、产酸以及抑制病原菌等体外益生特性的研究。结果表明：乳酸片球菌ZLP025最佳接种量为2.5%,培养16 h时生长活菌数最高,且能够耐受的pH为3 ～ 10,在16 h时产乳酸最高,为73.75 mmol/L,具有较好的耐酸碱性能以及产乳酸性能。乳酸片球菌ZLP025对大肠杆菌抑菌圈直径能够达到28 mm,上清液稀释4倍能有效抑制大肠杆菌生物膜形成,猪源乳酸片球菌ZLP025上清液抑菌效果相应的抗生素效价分别为：盐酸四环素1.01 mg/mL、氨苄青霉素1.08 mg/mL、硫酸庆大霉素97.54 mg/mL及链霉素硫酸盐1.26 mg/mL。研究结果对今后该菌株的深入研究及产品开发提供科学依据。 [关键词] 猪|乳酸片球菌|益生特性|抑菌性能     

一株乳酸片球菌的分离鉴定

研究从青贮饲料中分离筛选获得3株乳酸菌,通过产酸试验、不同温度和pH培养试验及对糖类利用及抑菌试验,筛选出1株适合作为青贮接种剂的优良菌种,通过形态学、生理生化和分子鉴定相结合的方法对获得的菌株进行鉴定,最终确定菌株P1为乳酸片球菌,为青贮接种剂提供优良菌株。     

牦牛漫游球菌的分离与生物学特性鉴定

为探究1只牦牛屠宰后肝脏有干酪样结节形成的原因,对肝脏进行细菌的分离培养,对分离到的1株细菌的16S rRNA和16S～23S rRNA基因序列用通用引物扩增和并用NCBI blast和MEGA 7进行序列分析,并用Vitek 2全自动微生物鉴定仪进行生化表型的鉴定,用K-B法进行药敏试验,结果显示:该菌的16S rRNA为1 524 bp,NCBI GenBank登录号为MG753544.1,与水獭漫游球菌的同源性较高,16S～23S rRNA有大小不同的2个片段,分别为522,425 bp,NCBI GenBank登录号分别为MG758122.1和MG758123.1。Vitek 2全自动微生物鉴定仪鉴定为迟缓葡萄球菌。该菌对妥布霉素、头孢哌酮、米诺环素等多种药物高度敏感,对苯唑西林、头孢西丁有抗性。结果表明,分离出的细菌为漫游球菌,该菌是否具有致病性还有待进一步试验验证。     

羊源屎肠球菌的分离鉴定与生物学特性研究

某养殖场羔羊突然死亡,为了查明死亡原因,采集病死羔羊病变肺脏等进行细菌的分离培养,分离到1株革兰阳性、短链状排列的球菌,在血琼脂培养基上呈β溶血。通过对该菌的16S r RNA进行扩增和序列分析,其与屎肠球菌的同源性高达99%,应用通用引物对16S～23S rRNA的序列进行PCR扩增产生2个条带,分别为522 bp和619 bp。用Vitek 2全自动微生物分析仪鉴定为屎肠球菌,可能性为98%。该菌对万古霉素和米诺环素敏感,对青霉素、庆大霉素等药物表现耐药。结果显示,分离到的细菌为屎肠球菌,且该菌具有多重耐药性,本实验为兽医临床肠球菌的分离和鉴定提供了参考。     

牛瘤胃微生物的分离鉴定与生化特性分析

【目的】通过对瘤胃液中分离所得的菌株进行研究,为益生菌制剂的制备提供基础数据。【方法】采集10头健康荷斯坦奶牛的瘤胃液,通过涂布、特性培养、纯化等步骤获得单一菌株,提取细菌DNA,进行16S rDNA的PCR扩增。通过16S rDNA基因测序鉴定后进行序列比对并构建系统发育树,确定菌株种类。对不同种类的细菌进行0～48 h的培养测定其生长特性,并进行耐酸碱和耐胆盐试验。【结果】通过涂布分离菌株得到20株分离菌,经PCR扩增后测序发现20株菌属于7种不同的菌,大致确定L7为解淀粉芽孢杆菌、K7为枯草芽孢杆菌、S7为嗜麦芽窄食单胞菌、C2为地衣芽孢杆菌、M7为马链球菌、F7为弗氏酸柠檬杆菌、T7为吉氏库特菌。通过生长曲线可以看出,7株菌分别在24～36 h达到最快生长期。M7和K7对酸有较强的耐受性,而S7、C2和F7对酸性较为敏感,C2对碱的耐受性最强,而T7对胆盐的耐受性最强,S7对胆盐最不耐受。【结论】本研究从瘤胃中分离得到的7个菌株对酸碱和胆盐具有不同程度的耐受性,以及最适生长周期。     

牛瘤胃乳酸菌的分离与鉴定

为分离筛选用于牛活菌制剂的乳酸菌菌株,本试验采用API 50CHL对从牛瘤胃中分离的60株乳酸菌进行生化鉴定,对鉴定出的菌株进行耐酸、耐碱、耐氧、生长温度、耐药和抑菌性测定。结果显示,经生化鉴定出的3株乳酸菌分别为嗜酸乳杆菌(L.acidophilus)、发酵乳杆菌(L.fermentum)和乳明串珠菌(L.holzapfelii),分别命名为L1、L2和L3。其中,L1耐酸性最强,L2耐碱性最强,L1在37~40℃均生长良好且兼性厌氧;L1、L2、L3耐药率分别为80%、67%、53%;3株乳酸菌对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有不同程度的抑制作用;L1抑菌效果最好,抑菌直径为18.3mm和16.4mm。结果表明,L1、L2可作为抗性乳酸菌活菌制剂的候选菌株。     

牛瘤胃乳酸菌的分离与鉴定

为分离筛选用于牛活菌制剂的乳酸菌菌株,试验采用API 50CHL对从牛瘤胃中分离的60株乳酸菌进行生化鉴定,对鉴定出的菌株进行耐酸耐碱、生长温度、耐氧、耐药和抑菌性测定。结果显示,经生化鉴定出的3株菌分别为嗜酸乳杆菌（L.acidophilus）、发酵乳杆菌（L.fermentum）和乳明串珠菌（L.holzapfelii）,分别命名为L1、L2和L3。其中,L1耐酸性最强,L2耐碱性最强,L1在37～40 ℃之间均生长良好且兼性厌氧;L1、L2、L3耐药率为60%～100%;3株乳酸菌对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有不同程度的抑制作用,其中L1抑菌效果最好,抑菌圈直径分别为18.30和16.40 mm。提示,L1、L2可作为抗性乳酸菌活菌制剂的候选菌株。     

牛瘤胃耐酸乳酸杆菌的分离与鉴定

利用乳酸细菌分离培养基瘤胃耐酸乳酸杆菌进行分离,革兰氏染色、生化鉴定、形态学观察初步鉴定,16 Sr-RNA进行最终鉴定.结果表明,分离鉴定8株乳酸杆菌,其中2株为瘤胃内首次分离鉴定的乳酸杆菌新菌株--粘膜乳杆菌.并且其中1株能够在pH3.24生长,具有很强的耐酸性.旨在为克隆耐酸基因、研制瘤胃微生态制剂打下基础.     

犬肠道乳酸有益菌的分离鉴定及生物学特性研究

为了鉴定10株犬肠道产乳酸有益菌并探索其生物学特性,试验观察了其形态,进行了基因序列分析和16S r DNA基因同源性比较,以耐受性和急性毒性试验分析了菌株的耐受性和毒性。结果表明:10株分离菌分别为粪肠球菌、屎肠球菌、植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌;4种菌在p H值为2~10、温度为37~50℃和胆盐浓度为0.2%~0.6%中耐受力较强,且为无毒菌株。     

陕北白绒山羊瘤胃乳酸杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

无菌采集陕北白绒山羊瘤胃内容物,梯度稀释后涂布CaCO3-MRS培养基,厌氧培养分离乳酸杆菌,并对分离菌株的生长、发酵液pH、酸耐受性、胆盐耐受性、抑菌性及有无内源质粒等生物学特性进行了比较研究。结果显示:从陕北白绒山羊瘤胃液中共分离出11株乳酸杆菌,经16S rDNA比对鉴定,分别是植物乳酸杆菌(Lactobacillus plantarum)4株(ZW-4、ZW-8、ZW-10、ZW-11),干酪乳酸杆菌(Lactobacillus casei)2株(GL-1、GL-5),罗伊乳酸杆菌(Lactobacillus reuteri)2株(LY-6、LY-7),短乳杆菌(Lactobacillus brevis)1株(DR-9),棒状乳酸杆菌(Lactobacillus coryniformis)1株(BZ-2)及弯曲乳酸杆菌(Lactobacillus curvatus)1株(WQ-3)。在相同培养条件下,植物乳酸杆菌ZW-4和干酪乳酸杆菌GL-1生长、产酸以及抑菌能力较强,同时植物乳酸杆菌ZW-4对胆盐和酸的耐受能力强于其他菌株;在上述菌株中,仅罗伊乳酸杆菌LY-7没检测到内源质粒,而植物乳酸杆菌ZW-4有6个内源质粒,明显多于其他几株乳酸杆菌。结果表明,分离自陕北白绒山羊瘤胃的植物乳酸杆菌ZW-4和干酪乳酸杆菌GL-1具有优良生物学特性,初步具备了作为益生菌使用的基本条件。     

奶牛瘤胃埃氏巨型球菌的分离鉴定及对乳酸发酵的影响

采取健康奶牛瘤胃液,通过韦荣球菌科的特异性培养基分离得到了瘤胃厌氧菌株.该菌株是革兰氏阴性球菌,不能发酵大多数的碳水化合物和多元醇,但能发酵葡萄糖和果糖,不液化明胶,亦不能从硝酸盐生成亚硝酸盐,但能从半胱氨酸产生H2S,经形态学和生化反应特性分析初步鉴定为埃氏巨型球菌.通过细菌遗传学鉴定法16SrDNA PCR法,获得了527 bp的基因片段,测序分析证明与已报道的埃氏巨型球菌16S rDNA核苷酸序列的同源性可达98%;进一步确定所分离到的菌株为埃氏巨型球菌.同时观测了埃氏巨型球菌在体内、体外环境下对乳酸降解和挥发性脂肪酸生成的影响,结果表明,其能显著降低瘤胃液内乳酸的浓度,同时提高乙酸、丙酸、丁酸的浓度,且在一定时间范围内降低了乙酸与丙酸的物质的量比.上述结果为进一步研究瘤胃乳酸发酵调控提供了理论和实验基础.     

羊瘤胃源乳酸菌的分离鉴定及其生物学特性分析

本研究旨在探寻益生特性优良、可作为抗生素替代品的乳酸菌,并为后续应用于畜禽养殖提供理论依据.本试验以青海黑藏羊和西藏白绒山羊瘤胃内容物为菌株分离来源,采用含有碳酸钙的MRS固体培养基分离纯化乳酸菌,经生理生化和16S rRNA测序鉴定及产酸产气试验分离得到22株同型发酵乳酸菌,测定并评价其生长速率、产酸能力、耐酸和耐胆...     

奶牛瘤胃中粪肠球菌的分离鉴定

粪肠球菌(Enterococcus faecalis)属于链球菌科(Streptococcaceae)肠球菌属(Enterococcus),为兼性厌氧的革兰阳性球菌,可分解葡萄糖,主要产物为乳酸.试验从健康奶牛瘤胃中分离出1株粪肠球菌,为以后进一步研究其在瘤胃发酵中的作用、构建基因工程菌、研制微生态制剂奠定基础.     

奶牛瘤胃中小韦荣球菌的分离鉴定

采取健康奶牛瘤胃液,用小韦荣球菌特异性培养基从瘤胃液中初步分离小韦荣球菌,再用微量生化反应管和16S rDNA技术对分离菌株的生化特性和遗传特性进行鉴定,结合形态学观察结果判定所分离到的菌株为小韦荣球菌。     

牛源溶酪大球菌的分离鉴定及生物学特性分析

大球菌与发酵食品的香气和风味有关,鉴于该类细菌报道较少及间接对人类健康可能造成的影响,本文对牛源溶酪大球菌开展了相关研究。无菌采集新鲜牛肉组织样本,对其进行细菌分离培养,结合细菌形态学观察、生理生化试验、16S rRNA基因分析进行鉴定,采用纸片扩散法对菌株进行耐药性分析。结果显示,获得的一株革兰氏阴性菌经16S rRNA基因测序分析,其核苷酸同源性与溶酪大球菌参考株可达99%以上;生化试验鉴定,该分离株可分解α-葡萄糖苷酶、D-核糖和D-海藻糖,分解L-乳酸盐产碱和6.5%NaCl生长等;药敏试验结果显示该分离株对氯霉素、头孢曲松和庆大霉素等耐药,对四环素、新霉素等高度敏感;细菌耐药基因检测发现该菌含有头孢菌素类TEM、喹诺酮类gyrA和parC、外排泵类AcrAB等4种耐药基因。     

犊牛瘤胃内黏膜乳杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

利用厌氧菌分离技术从犊牛瘤胃中分离出1株细菌,通过对其形态、生理生化特性、16S rRNA基因序列测定与同源性分析,表明分离株为黏膜乳杆菌(Lactobacillus mucosae),是瘤胃内分离到的1株新菌种,并对其进行了高温耐受试验、耐酸性试验、安全性检测、抑菌试验等生物学特性研究。黏膜乳杆菌的分离鉴定及生物学特性研究为以后克隆耐酸基因,研制瘤胃微生态制剂及调控瘤胃微生物发酵奠定了基础。     

健康奶牛生殖道乳酸茵的分离鉴定及生物学特性

通过MRS琼脂培养基厌氧培养技术,从产后7 d~60 d健康母牛子宫分泌物中分离得到7株乳酸菌,经生化试验鉴定2株为短乳杆菌,3株为海氏肠球菌,2株棉子糖肠球菌。生长曲线及产酸性能测定结果显示,所分离到的乳酸菌在培养2 h~4 h进入对数生长期,6 h~16 h进入生长稳定期;乳酸菌培养液在24 h内的pH由5.96~6.24下降为3.71~4.10。试验结果表明,所分离到的乳酸菌生长性能好、菌体密度高、产酸性能强,是一种有潜质的有益菌菌株。     

牦牛源牛链球菌的分离鉴定及部分生物学特性研究

本研究旨在从腹泻牦牛粪便中分离鉴定牛链球菌,并分析其溶血性、对小鼠的致病性及对抗菌药物的敏感性。将川西北阿坝州45份腹泻牦牛粪便于血平板上划线,37℃、5% CO₂培养24 h分离细菌,经16S rRNA序列扩增测序和系统发育分析鉴定出14株牛链球菌,其中8株巴黎链球菌,6株解没食子酸链球菌巴氏亚种;9株呈α溶血,5株呈β溶血。分离鉴定的牦牛源巴黎链球菌和解没食子酸链球菌巴氏亚种能引起试验小鼠的轻度腹泻;药敏试验结果显示分离菌株对青霉素、头孢噻肟、万古霉素、乙酰螺旋霉素、环丙沙星、利福平、替考拉宁、氨苄西林和庆大霉素共9种抗生素高度敏感,对链霉素、卡那霉素、林可霉素、红霉素、四环素和克林霉素耐药率较高。本研究阐明了牦牛源链球菌的部分生物学特性,为该病的防控奠定了基础。     

3株乳酸片球菌的鉴定及其耐酸耐盐特性和抑菌作用研究

为了探索从日本处理有机废弃物样品中分离的乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)耐酸耐盐特性和抑菌作用,采用浸注培养法从处理有机废弃物样品中进行菌株分离,并对分离菌株R-4、B-7、D-13进行生理生化及16S rDNA鉴定;分别将其接种于pH4的MRS肉汤培养基和50 mg/mL NaCl的MRS肉汤培养基中37℃培养48 h,观察其生长情况;通过牛津杯法测其培养液对大肠埃希菌K88、枯草芽胞杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门菌的抑菌作用。结果从日本处理有机废弃物样品中分离得到13株乳酸球菌,其中菌株R-4、B-7、D-13经鉴定均为乳酸片球菌;并在50 mg/mL NaCl和pH4的MRS肉汤培养基中生长良好且呈现较好的耐酸耐盐特性;3株乳酸片球菌的培养液对4种指示菌均呈现抑制作用,其中菌株B-7的培养液对金黄色葡萄球菌的抑菌作用最强,抑菌圈直径达17.02 mm±0.33 mm,但其培养液中酸性产物及H_2O_2产物排除结果说明,对金黄色葡萄球菌的抑菌作用可能与其在生长过程中产生的酸有关。研究结果为乳酸片球菌特性及其应用的进一步研究提供了科学依据,为筛选出处理有机废弃物的微生物发酵菌奠定了基础。