产脂肪酶蜡状芽孢杆菌菌株分离和鉴定

为筛选出产脂肪酶的菌株,从油茶枯饼发酵液中取样,用中性红油脂培养基进行初筛,改进铜皂—分光光度法测定酶活力进行复筛,获得1株产脂肪酶活性较强的菌株ck-01.结合形态学观察、生理生化试验、16S rDNA序列鉴定和系统发育分析等方法将其鉴定为蜡状芽孢杆菌.对菌株ck-01的酶学性质的研究结果表明,该菌株所产脂肪酶在35...     

耐镉蜡状芽孢杆菌SY的筛选鉴定及其培养条件优化

从沈阳张士灌区镉污染土壤中筛选出一株对镉吸附性强的耐镉细菌SY,经形态学观察、生理生化测定和16SrDNA序列分析,确定SY为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)。在Cd2+初始浓度为20mg/L条件下,通过改变培养温度、培养时间、pH值、渗透压(NaCl的含量)等条件研究细菌SY吸附镉的最优生长条件。结果表明,最优条件为培养温度40℃,培养时间27h,pH值7,NaCl含量0.5%。     

一株黄金鲫鱼源蜡状芽孢杆菌的筛选、鉴定及耐性研究

为筛选出适合制作水产微生态制剂的黄金鲫Carassius auratus鱼源益生菌,从黄金鲫肠道分离细菌,通过产酶能力测试、体外抑菌试验和抗生素敏感性试验进行筛选,筛选菌株经纯化培养后通过形态特征观察、生理生化及分子特征进行鉴定;采用紫外分光光度计和稀释涂布平板计数相结合的方法,建立细菌活菌数与OD值的线性曲线,测定细菌对高温、酸性、胃液、肠液、胆盐耐受能力;通过固定黄金鲫体外肠道黏液蛋白模型,结合荧光标记物Hoechst 3325标记细菌法,检测细菌对黄金鲫肠黏液蛋白的黏附能力,并通过急性毒性试验检测菌株的安全性。结果表明:从黄金鲫肠道中共分离出5株具有产酶能力的细菌,其中HJJ-1菌株具备较好的产酶特性,可有效抑制金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的生长,且对多种药物敏感;进一步对该菌株进行鉴定及益生效果评价,16S rRNA基因序列分析显示,HJJ-1株与蜡状芽孢杆菌Bacillus cereus的一致性达100%,结合形态观察和生理生化试验结果,最终鉴定HJJ-1菌株为蜡状芽孢杆菌;菌株OD_(600 nm)值(x)与活菌数(y)的回归方程式为y=5.493 3e^{(7.823 8)}(7.823 8)^x(Rx(R²=0.990 2),该菌株具有良好的耐高温、耐酸性、耐胃液、耐肠液、耐胆盐等特点,可黏附于黄金鲫肠道黏液蛋白,且安全性良好。研究表明,本试验中最终筛选出的黄金鲫鱼源蜡状芽孢杆菌性能优良且安全,具有潜在的益生特性。     

海水中蜡状芽孢杆菌的分离鉴定及其对水环境中氮磷的纠正效应

为开发具有改善养殖水体富营养化作用的有益菌,从江苏连云港滩涂海水池塘分离到1个菌株,命名为HYHB-4,对其进行形态学特征及生理生化特性鉴定,并分析其16S rRNA序列,结果表明,分离菌株为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)。研究了分离菌株对虾蟹混养围塘水环境中氮磷的纠正效应,结果显示,HYHB-4菌株中度嗜盐、嗜冷,最佳生长温度为25℃,超过35℃停止生长;在3%~5%Nacl中生长得率最高;菌株HYHB-4对虾蟹混养围塘水环境中的氮磷具有显著的利用转化和降解作用,其中亚硝态氮(NO2-N)下降幅度最大,施用HYHB-4制剂5 d后,氨态氮(NH4-N)、硝态氮(NO3-N)、NO2-N质量浓度比起始水平分别下降77.19%、52.95%、85.27%;总磷(TP)和磷酸盐(PO4-P)比起始水平分别下降84.40%、84.67%。综上,分离的蜡状芽孢杆菌HYHB菌株-4对虾蟹混养围塘水环境中的氮磷具有纠正效应。     

蜡状芽孢杆菌TS-02防治草莓白粉病研究

在室外条件下进行了蜡状芽孢杆菌TS-02防治草莓白粉病的药效试验,并在室内条件下探讨了其防病机理.结果表明:蜡状芽孢杆菌TS-02可以防治草莓白粉病,活菌数大于3×107CFU/ml可达到理想的效果.抑制作用是活菌和菌分泌的抑菌物质共同作用的结果.其中活菌的作用更强;蜡状芽孢杆菌可抑制白粉病菌的定殖,从而达到防治草莓白粉病的效果.     

蜡状芽孢杆菌深圳菌株754-1产磷酯酶C培养条件的优化研究

通过单因素试验和正交试验,以蜡状芽孢杆菌(Bacilus cereus)深圳菌株 754-1产磷酯酶C(PLC)在卵黄平板上形成的乳白色晕圈的直径大小作为考察指标,对影响754-1产PLC的各因素进行了初步研究.结果表明,754-1产PLC的最佳培养条件为:蛋白胨1.0%,牛肉膏0.3%,酵母膏0.2%,NaCl 0.5%,Zn2+0.1 mmol·L-1,卵黄5.0%,接种量0.5%,发酵温度32℃,培养时间12 h.     

苏云金芽孢杆菌的分离及快速鉴定

从土壤样品中分离出57株疑似苏云金芽孢杆菌的菌株，采用地高辛标记CryIAb基因5’端的726bp EcoR I片段灰探针，进行菌株质粒DNA斑点杂交，筛选出25株阳性菌株。其生理生化特征与伯杰氏细菌鉴定手册第八版的描述相符，确认为苏云金芽孢杆菌菌株。     

家畜血红蛋白降解菌分离筛选与鉴定

从多年被废弃畜禽血液浸染的土壤中，分离筛选出16株菌株．根据在酪蛋白／明胶平板上蛋白质水解圈比值大小初步确定8株菌株为被选菌株；并分别在Hb发酵培养液中发酵72h，测定蛋白酶活力、游离氨基酸含量、可溶性蛋白质含量、Hb降解率，最终确定一株菌株（编号为；Lact5．Ⅱ）为最佳菌株；经过菌落形态观察初步确定为细菌，进一步测定生理、生化反应指标，鉴定该菌株为蜡状芽孢杆菌B．cereus.     

马源蜡样芽孢杆菌的分离鉴定及毒力基因检测

为鉴定从内蒙古通辽市某马术俱乐部发病及死亡赛马体内分离出的一株病原菌,本研究对分离菌株进行革兰氏染色镜检、动物致病性试验、全自动微生物分析系统检测、16S rRNA基因扩增、系统进化树分析及部分毒力基因PCR检测。结果显示:分离株生化特性符合蜡样芽孢杆菌的特性;其对克林霉素、庆大霉素等药物敏感,对头孢西丁、环丙沙星等药物中度敏感,对氨曲南、头孢唑林等药物耐药;16S rRNA基因序列与GenBank中已登录的蜡样芽孢杆菌序列同源性为100%;系统进化树分析表明,分离株与蜡样芽孢杆菌等亲缘关系最近;毒力基因PCR检测结果显示,8种潜在的毒力基因entFM、cytK、hblA、hblC、hblD、nheA、nheB、nheC均呈阳性。试验结果表明,该分离菌株为具有严重致病性的蜡样芽孢杆菌。     

淀粉质食品中蜡样芽孢杆菌的分离鉴定

[目的]分离鉴定淀粉质食品中的蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus).[方法]以淀粉质食品(低温保藏的米饭)为原料,采用传统方法对米饭中蜡样芽孢杆菌进行分离鉴定,使用PCR技术做最终确定.[结果]对低温保藏米饭进行系列稀释后在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基平板上进行菌种分离,初步分离出菌株MF-2,表面光滑稍有光泽,呈现低凸起形,边缘呈现锯齿状,菌落形状可形成近似圆形、质地松软、无色素,菌落颜色为乳白色不透明;经革兰氏染色为阳性,镜检为杆状;经芽孢染色为有芽孢杆菌;MF-2号菌能利用葡萄糖、蔗糖和麦芽糖,并产酸,但不能分解D-甘露糖和α-乳糖,初步鉴定菌株MF-2为蜡样芽孢杆菌.由16S rRNA基因序列同源性分析,结合形态观察和生理生化鉴定,最终鉴定该菌株为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus).[结论]研究可为食品质量安全提供理论和实践依据.     

蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)XG1的分离、鉴定与除草活性研究

为筛选出具有较高除草活性的微生物菌株,并对其次级代谢产物中除草活性物质进行分离纯化,本试验从西瓜细菌性果腐病病叶上分离纯化微生物菌株,利用茎叶处理法测定了其次级代谢产物除草活性,利用16S rDNA序列和生理生化试验对除草活性最高的菌株进行了种属鉴定,进而利用硅胶柱层析结合高效液相色谱(HPLC)法对其次级代谢产物中的除草活性物质进行了分离纯化。结果表明:共分离得到4株具有除草活性的细菌,其中菌株XG1对马唐的除草活性最高,将其鉴定为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)。发酵液经液-液萃取,硅胶柱层析和HPLC分离纯化得到了保留时间为15.757 min的除草活性物质Ⅰ。本研究证明,菌株XG1具有开发成微生物源除草剂的潜力,并为今后分离纯化细菌次级代谢产物的除草活性物质和开发新型细菌除草剂奠定了基础。     

蜡样芽孢杆菌特征性蛋白的分离与纯化

蜡样芽孢杆菌是一种致病性病原菌,能引起胃肠感染和非胃肠感染。本研究从实验室分离的蜡样芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌1.026 0、巨大芽孢杆菌1.015 1、蕈状芽孢杆菌1.085 6和苏云金芽孢杆菌1.101 4这五株菌中提取蛋白,利用SDS-PAGE方法纯化,并测定出蜡样芽孢杆菌有3种分子量约为28.5、26.5和20.0 KDa的特征性蛋白,而苏云金芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和蕈状芽孢杆菌则没有此特征性蛋白。     

5株芽孢杆菌的分离鉴定、拮抗性试验与抑菌效价测定

通过对采集样品中细菌的分离与纯化,获得5株芽孢杆菌,经纯化培养后观察其个体和群体形态特征,并进行了16项生理生化特征鉴定。结果表明,L1为地衣芽孢杆菌、L2为蜡样芽孢杆菌、L3为短小芽孢杆菌、L4为蜡样芽孢杆菌、L5为蜡样芽孢杆菌;通过对5株指示菌的拮抗试验,确定了它们的抑菌图谱;从中挑选出拮抗性最强的两株菌,采用平板琼脂扩散法,测定了其发酵液的抑菌效价。在30℃,pH7.0,150r/min的条件下,恒温振荡培养24h,测其发酵液的抑菌效价:L1、L2菌株的发酵液对金黄色葡萄球菌的抑菌效价分别2000IU/ml、1000IU/ml;对枯草芽孢杆菌的抑菌效价分别1500IU/ml、1000IU/ml;对大肠杆菌的抑菌效价分别1500IU/ml、500IU/ml。     

荷斯坦成年奶牛枯草芽孢杆菌的分离与鉴定

从健康荷斯坦成年奶牛新鲜粪便中分离纯化出1株疑似芽孢杆菌属菌株,编号为K.对该菌株进行形态学观察、生化试验、16S rDNA序列测定等.试验结果表明,该菌菌体革兰氏染色阳性,芽孢染色为绿色,呈长杆状,芽孢中生,椭圆;能发酵糖醇,吲哚试验阳性,触媒试验阳性,能产生淀粉酶,并可以液化明胶,16S rDNA测序序列同源性比较结果表明菌K为枯草芽孢杆菌;本试验为获得反刍动物有益菌种及研制反刍动物微生态制剂奠定基础.     

纤维素降解菌的分离、鉴定及其产酶特性研究

从纤维素富集的环境中分离到3株能以羧甲基纤维素钠(CMC-Na)为唯一碳源的纤维素降解菌,采用纤维素-刚果红染色法进一步筛选,获得透明圈较大的菌株1株,命名为为B1。经菌落、菌体形态观察、生理生化实验及分子生物学鉴定,初步确定为蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus),该菌株表现出了较高的滤纸崩解能力和较高的纤维素酶活力。通过培养条件的优化,发现该菌株在起始p H值为5.0的培养基中,37℃培养36 h,其纤维素酶活力可达64.22 U/m L。     

1株益生蜡样芽孢杆菌发酵培养基优化研究

[目的]通过优化蜡样芽孢杆菌的发酵培养基,提高蜡样芽孢杆菌的生物量。[方法]在初始发酵培养基的基础上,通过单因素试验和正交试验确定蜡样芽孢杆菌发酵培养基的最适碳氮源和碳氮比。[结果]优化后的发酵培养基为:葡萄糖15.00 g/L,可溶性淀粉40.00 g/L,蛋白胨10.00 g/L,玉米浆干粉30.00 g/L,硫酸铵3.00 g/L,磷酸氢二钾5.00 g/L,磷酸二氢钠5.00 g/L,硫酸镁1.25 g/L,硫酸锰0.60 g/L,氯化钙2.00 g/L。优化后蜡样芽孢杆菌在50 L不锈钢发酵罐中的发酵液活菌数达1.6×1010cfu/m L,较优化前提高了1个数量级。[结论]优化后的蜡样芽孢杆菌发酵培养基大大提高了该菌的生物量,为工业化放大生产提供了参考。     

一株产黑色素芽孢杆菌的分离与鉴定

从人的头发样品中筛选出1株产黑色素芽孢杆菌ZH168.对该菌株形态、生理生化特征、16S rDNA基因序列及全细胞蛋白电泳研究结果表明,ZH168菌株为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis.该菌产生的胞外黑色素在可见-紫外光区均有吸收,紫外区光吸收强,随着波长的减小,吸收增强,在210 nm左右有1个吸收高峰;红外光谱与合成的多巴黑色素很相近,具有黑色素吲哚结构的吸收峰.电子自旋共振谱是轻微不对称的典型单线一次微商波谱.综合以上结果确定该菌所产生的色素为黑色素.