苦参提取物抑制番茄灰霉病菌活性的研究

以苦参提取物做为抑菌剂,采用生长速率法和悬滴法,室内测试不同浓度(1,5,10,20g·L-1)苦参提取物对番茄灰霉病菌的抑菌活性。结果表明:不同苦参提取物浓度对番茄灰霉病菌菌丝均具有抑制作用,且作用强度随浓度增加而增强。接菌后4d,20g·L-1苦参提取物处理的菌丝抑制率达92.14%;苦参提取物对病菌孢子萌发抑制作用较强,且随着提取物浓度的增大,萌发抑制作用增强。20g·L-1苦参提取物处理的孢子萌发抑制率为97.46%,且均与对照差异达显著水平。不同温度、pH值、保存时间对苦参提取物抑菌的影响结果表明:在-20~100℃,随着处理温度升高,其抑菌活性下降显著,100℃处理时抑菌率降至62.43%;pH值5～9抑菌活性最高且变化较小,pH值为11时,抑菌率下降到71.07%;在4℃下保存5d与0d的抑菌率无差异,随着保存时间的延长,抑菌率逐渐降低,超过21d抑菌率显著下降。     

苍耳愈伤组织提取物对番茄灰霉病菌的抑菌活性

以野外采集苍耳和室外种植苍耳提取物为对照,利用生长速率法、孢子萌发法及显微观察,研究了苍耳愈伤组织提取物对番茄灰霉菌活性的影响。结果表明:苍耳愈伤组织提取物对番茄灰霉菌具有较强的抑制作用,其抑制菌丝生长的EC50为20.27 mg/mL,在30 mg/mL浓度下,对番茄灰霉菌孢子形成和孢子萌发的抑制率均达到70%以上,其对孢子形成和孢子萌发的EC50分别为9.06 mg/mL和15.21 mg/mL,其抑菌活性与野外采集苍耳和室外种植苍耳抑菌提取物相当.     

番茄灰霉病拮抗木霉菌的筛选及效果评价

利用57株木霉菌株对番茄灰霉菌(Botrytis cineren)进行室内抑菌效果测定和小区防病试验。结果表明:①木霉菌菌株对灰霉菌的作用机制主要表现在较强的重寄生作用,其释放的代谢产物消解灰霉菌菌丝。②其中有的木霉菌菌株的分生孢子释放的代谢产物能够抑制灰霉菌孢子萌发,有的能够刺激灰霉菌孢子萌发,说明各个木霉菌菌株的代谢产物不尽相同。③两年的小区防治番茄灰霉病试验,有4株木霉菌株的平均防治效果在60%以上,其菌株具有生长速度快、产孢早及产孢量大等特点。     

两种中药提取物对番茄灰霉病菌和番茄早疫病菌的抑制活性研究

[目的]研究白术和白头翁2种中药提取物的杀菌活性,为其在植物源农药上的开发利用奠定基础。[方法]采用菌丝生长速率法,研究了白术和白头翁2种植物提取物对番茄灰霉病菌和番茄早疫病菌的抗菌活性。[结果]供试2种中药提取物对番茄灰霉病菌和番茄早疫病菌均具有较好的抗菌活性,其中白头翁提取物的抗菌活性最好,72h白头翁正丁醇提取物对番茄灰霉病菌的抑制率达80.25%;白术石油醚提取物对番茄灰霉病菌的抗菌活性较好,EC50为5.31mg/ml,白头翁正丁醇提取物的抗菌活性较强,EC50为2.93mg/ml。[结论]白头翁提取物对番茄灰霉病菌和番茄早疫病菌的抑制活性较好,值得进一步研究。     

2种中药提取物对番茄灰霉病菌和番茄早疫病菌的抑制活性研究

[目的]研究白术和白头翁2种中药提取物的杀菌活性,为其在植物源农药上的开发利用奠定基础。[方法]采用菌丝生长速率法,研究了白术和白头翁2种植物提取物对番茄灰霉病菌和番茄早疫病菌的抗菌活性。[结果]供试2种中药提取物对番茄灰霉病菌和番茄早疫病菌均具有较好的抗菌活性,其中白头翁提取物的抗菌活性最好,在供试提取物质量吸度为10 mg/ml时,72 h白头翁正丁醇提取物对番茄灰霉病菌的抑制率达80.25%,白术石油醚提取物对番茄灰霉病菌的抗菌活性较好,抑制率为71.36%,且提取物的抗菌活性随着吸度的增大而增强,白头翁正丁醇提取物对番茄灰霉病菌的EC50为2.93 mg/ml,白术石油醚提取物对番茄灰霉病菌的EC50为5.31 mg/ml。[结论]白头翁提取物对番茄灰霉病菌和番茄早疫病菌的抑制活性较好,值得进一步研究。     

几种杀菌剂对番茄灰霉病菌的抑菌效果对比研究

采用番茄灰霉病防治中6种已登记杀菌剂和7种未登记杀菌剂对番茄灰霉病菌进行室内毒力测定,并通过EC50和病原菌的抗性水平进行抑菌效果对比。结果表明:在已登记的6种杀菌剂中,以25%啶菌恶唑EC的抑菌效果最好,EC50值为0.14 mg.L-1番茄灰霉病菌对其表现敏感;在未登记的5种杀菌剂(包括10%多抗霉素B)中,25%咪鲜胺EC的抑菌效果最好,EC50值为0.66 mg.L-1番茄灰霉病菌对其表现敏感;在2种未登记活体微生物杀菌剂中,抑菌效果最好的为2×108cfu.g-1绿色木霉菌WP,EC50值为0.001×108cfu.L-1。     

木霉菌制剂防治设施大棚番茄灰霉病效果研究

通过马铃薯葡萄糖培养基平皿对峙培养,筛选出对番茄灰霉菌(Botrytis cinerea)有拮抗活性的木霉(Tricheoderma spp.)菌株TR34、TR64、TR85和TR353。将这4株木霉菌分别制成含2×108个/g活孢子可湿性粉剂,用于室内生测试验。结果显示,经TR85可湿性粉剂处理的番茄植株病情指数(DS)显著低于(P≤0.05)经TR34、TR64、TR353和50%速克灵可湿性粉剂以及清水对照处理番茄植株。进一步将TR85可湿性粉剂用于2012年和2013年在上海金山地区的大棚番茄灰霉病防治药效试验。2年的试验结果基本一致,经TR85可湿性粉剂3 750、3 000 g/hm2处理的番茄植株的病情指数分别显著低于(P≤0.05),而防治效果分别显著高于(P≤0.05)经Tr85可湿性粉剂2 250 g/hm2和50%速克灵病情指数处理,且TR85 3 000、3 750 g/hm2处理之间的病情指数和防效无显著性差异。     

苍耳提取物对番茄灰霉病菌抑制机理的研究

以番茄灰霉病菌为供试材料,对苍耳提取物的抑菌机理进行了研究.结果表明:苍耳提取物对番茄灰霉菌的菌丝生长、分生孢子的形成和萌发都具有较强的抑制作用,当处理浓度为30 mg/mL时,苍耳提取物对番茄灰霉菌菌丝生长的抑制率达78.1%,对分生孢子形成和萌发的抑制率分别为85.1%和77.4%.苍耳提取物能引起番茄灰霉菌菌丝细胞膜透性发生变化,造成菌丝体内含物的渗漏,从而导致液体培养基电导率增加.用苍耳提取物处理番茄灰霉病菌后,可使菌丝体可溶性蛋白含量下降.     

番茄灰霉病菌拮抗稀有放线菌的分离及其抑菌物质分析

为筛选新型有效的番茄灰霉病菌天然抑制产物,采用平板对峙法和菌丝生长速率法从44株采自辽宁各地的放线菌中筛选植物病原真菌拮抗放线菌,通过孢子萌发生长法和系统发育树分析番茄灰霉病菌拮抗放线菌的抑菌活性和分类地位,测试高抑菌活性菌株无菌发酵液活性物质的稳定性,并以高分辨率飞行质谱扫描鉴定稀有放线菌发酵液的抑菌产物。结果表明,筛选到13株具有抑菌活性的放线菌,其中SA32、SA33、SA37、SA39、SA45、SA51这6株菌对番茄灰霉病菌的生长及其孢子萌发有抑制效果,SA37和SA45对番茄灰霉病菌菌丝生长的抑制率分别高达75.13%和79.27%,对番茄灰霉病菌孢子萌发的抑制率分别高达86.25%和93.43%。系统发育树分析表明,SA45聚类于稀有放线菌北里孢菌属,其余5株菌均聚类于链霉菌属。对比高活性菌株SA37和SA45发酵液在-20～120℃、pH值1～14和3种酶(蛋白酶K、胰蛋白酶和胃蛋白酶)处理条件下的抑菌稳定性表明,SA45发酵液的抑菌活性和稳定性均高于SA37。高分辨率质谱分析不同溶剂提取的SA45活性物质表明,SA45发酵液中不存在已报道的活性物质。综上所述,北里孢菌SA45发酵液对番茄灰霉病菌具有高效和稳定的抑菌活性,可能存在新型抑菌物质,其菌株及发酵液具有较高的应用价值和研究价值。     

红豆树异黄酮类成分抑制番茄灰霉病菌的活性研究

【目的】研究红豆树提取物及其异黄酮对番茄灰霉病菌的抑菌作用,为植物源抑菌剂的开发和红豆树提取物利用奠定基础。【方法】采用生长速率法筛选红豆树异黄酮对番茄灰霉病菌的抑制作用,进一步测定异黄酮鹰嘴豆芽素A对番茄灰霉病菌的菌丝干重、细胞膜、还原糖含量、过氧化氢酶、过氧化物酶和超氧化物歧化酶等保护酶活性的影响,探讨抑制植物病原真菌的生理生化的作用,评价单体在离体番茄上的抑菌效果。【结果】鹰嘴豆芽素A对番茄灰霉病菌具有好的抑制效果,EC50值为203.189μg·mL^-1。番茄灰霉病菌经鹰嘴豆芽素A处理后,菌丝干重减少,细胞膜的通透性增加,菌体内还原糖含量减少,保护酶含量增多,并且在离体番茄上菌丝生长防治效果较好。【结论】红豆树种子乙酸乙酯活性部位富含生物碱和黄酮类化学成分,其中异黄酮成分是关键的抑菌活性成分。异黄酮成分发挥抑菌活性的作用方式,可能与其干扰菌丝生长、使菌丝细胞膜正常功能受损以及降低菌丝体内保护酶活性等有关。     

The Herbicidal Activity of Mutant Isolates from Botrytis cinerea

Fifteen mutant isolates were obtained by ultraviolet mutation from parent isolate Botrytis cinerea BC-4. Among them three mutant isolates, BC4-1, BC4-2, and BC4-15, showed strong herbicidal activity. BC4-1 showed maximum herbicidal activity for inhibition of germination and growth of Digitaria sanguinalis L. and Arnaranthus retroflexus L. The results also showed that herbicidal activity was influenced by differing pH of PD media, with pH value of 4.0 being the optimum. The crude toxin was extracted using chloroform, petroleum ether, and ethyl acetate, respectively, and the ethyl acetate extracts showed the strongest inhibitory activity on the germination and growth of D. sanguinalis L. and A. retroflexus L. Using HPLC, one fraction with an absorption peak at 271 nm was separated from the crude toxin. This fraction could strongly inhibit the growth of D. sanguinalis L. at a concentration of 100 mg L^-1 and could completely inhibit the seed germination of D. sanguinalis L. and A. retroflexus L. at a concentration of 50 mg L^-1 .     

胡椒碱对番茄灰霉病菌抑制作用及其机理研究

为证明胡椒碱对番茄灰霉病菌的抑制作用并揭示胡椒碱对番茄灰霉病菌抑菌机理,观察不同质量浓度胡椒碱处理下番茄灰霉病菌的菌落直径、产孢量和孢子萌发率以及胡椒碱处理后对番茄灰霉病菌菌丝形态变化、番茄灰霉病菌可溶性蛋白含量、酶活性和细胞膜通透性的变化规律。结果表明：胡椒碱对番茄灰霉病菌有明显的抑制作用,当胡椒碱质量浓度为200mg/L时,抑菌率可达80.6%,对番茄灰霉病菌产孢率和孢子萌发抑制率分别达到88.5%和88.8%,对菌体内超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和过氧化物酶（POD）的抑制率分别为82.7%、69.1%和70.4%,对琥珀酸脱氢酶（SDH）和NAD-苹果酸脱氢酶（NAD-MDH）抑制率分别为89.5%和94.9%;胡椒碱处理后番茄灰霉病菌可溶性蛋白含量低于对照组,细胞膜透性增强,番茄灰霉病菌菌丝变细、节间拉长、干瘪并坍塌。综上,胡椒碱可以有效抑制番茄灰霉病菌的生长,研究结果为新型植物源农药开发及番茄灰霉病防治提供了理论基础。     

重寄生放线菌F46和PR对灰葡萄孢的抑制作用

测定了2株重寄生放线菌对灰葡萄孢的作用效果。结果表明,重寄生放线菌F46(Streptomycessp.)和PR(Streptomycessp.)对灰葡萄孢分生孢子萌发和芽管伸长都有一定的抑制作用,镜检可以观察到F46和PR在灰葡萄孢菌丝上产生附着胞、缠绕靶标菌丝,使靶标菌丝畸形等现象;诱发接种后2株重寄生放线菌对苹果、草莓、番茄采后灰霉病均有不同程度的控制作用,在低温下的防效优于高温,提前诱发接种的防效优于同时接种。     

Fusaricidins in Paenibacillus polymyxa A21 and their antagonistic activity against Botrytis cinerea on tomato

Four kinds of antifungal compounds from an extract of Paenibacillus polymyxa A21 with molecular masses of 883.56, 897.59, 947.55, and 961.58 Da were characterized as the members of fusaricidin-type of antibiotics according to LC-MS analysis. Fusaricidins isolated from culture filtrate displayed high antagonistic activity against several plant fungal pathogens, especially Botrytis cinerea, the causal agent of gray mold. The fusaricidins biosynthetic gene cluster (BGC) from A21 was cloned by PCR and comparative cluster analysis revealed that gene fusTE, the 3′ boundary of the fusaricidin BGC in strain PKB1, was not present in fusaricidin BGC of A21, indicating that fusTE is not necessary for fusaricidin synthesis. Fusaricidin extract from A21 significantly reduced gray mold disease incidence and severity on tomato. The mRNA levels for three patho-genesis-related proteins (PRs) revealed that treatment of tomato leaves with fusaricidin extract induced the expression of PR genes to different levels, suggesting that one reason for the reduction of gray mold infection by fusaricidin is induction of PR proteins, which lead to increased resistance to pathogens. This is the first report of the application of fusaricidins to control tomato gray mold and the comparative cluster analysis provides important molecular basis for research on fusaricidin biosynthesis.     

灰葡萄孢BC4菌株产生天然脱落酸的研究

用柱层析和制备HPLC法从灰葡萄孢BC4菌株的PD培养滤液中分离到一种白色固体。经HPLC-ESIMS,GC-MS,IR和1HNMR鉴定为脱落酸。生物活性测定结果表明,该脱落酸的活性是标准脱落酸的2.5倍以上;用0.7μmol/L该物质的丙酮溶液处理反枝苋催芽种子,2d内反枝苋种子幼芽和幼根均无生长,而对照的反枝苋种子幼芽和幼根总长度平均为2.3cm,抑制率达100%。     

大蒜鳞茎粗提物对番茄灰霉病的抑菌和防治效果

利用水提法提取大蒜鳞茎的粗提物,对番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)进行防治效果研究。结果表明,最低抑菌质量浓度(MIC)为60.00 mg/mL;质量浓度达到60.00 mg/mL时,对孢子萌发的抑制率达到98.15%;质量浓度达到120.00 mg/mL时,对菌丝生长的抑制率以及对番茄离体叶片的预防和治疗效果分别达到100.00%、92.77%和88.56%。大蒜鳞茎粗提物可有效抑杀番茄灰霉病菌。     

丙烷脒对番茄灰霉病菌超微结构的影响

    利用电子显微技术研究了丙烷脒(propamidine)对番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea Pers.)菌丝形态和细胞结构的影响.研究发现丙烷脒不仅影响菌丝的生长,而且引起菌丝形态和细胞结构一系列的变化.丙烷脒处理番茄灰霉病菌菌丝后,引起病菌菌丝形态和细胞结构的变化主要包括:菌丝分枝增多,并呈不规则的膨大和缢缩,细胞壁出现不规则的加厚,顶端加厚尤其严重,线粒体数目急剧增多且出现不规则的膨大现象,随着处理时间的延长,细胞出现空泡化和电子致密度增加现象.这些细胞学变化特征最终导致菌丝细胞解体死亡.     

香豆素对灰葡萄孢霉菌的生长代谢及保护酶活性的影响

为探究香豆素对灰葡萄孢霉菌作用机理的影响,通过酶活试验、丙二醛（MDA)含量、葡萄糖含量变化试验,来分析香豆素对灰葡萄孢霉菌体内保护酶（SOD、POD、PPO）活性的影响,探究灰葡萄孢霉菌细胞代谢活动的强弱和细胞膜损伤程度变化。运用菌丝处理对照前后菌丝干重变化的方法来进行抑菌活性测定,以及用试剂盒测定的方法来进行酶活测定、MDA含量测定、葡萄糖含量的测定。结果表明,在液体培养基中香豆素对灰葡萄孢霉菌的EC₅₀为101 μg·mL^-1;香豆素对灰葡萄孢霉菌孢内的过氧化物酶（POD）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）、多酚氧化酶（PPO）的最高抑制率分别为82.7%、66.67%、56.36%;经香豆素处理的菌丝体各时间点的丙二醛（MDA）含量明显>对照组,细胞膜透性显著增强,第72 h时,处理组MDA含量为16.53 nmol·mg^-1 prot,为对照组MDA含量的1.5倍;处理组葡萄糖含量始终<对照组,第36 h与对照组相比,处理组下降了45.63%。可见,香豆素可抑制灰葡萄孢霉菌的生长,致使细胞膜菌丝膜酯损伤,抑制灰葡萄孢霉菌酶的活性,降低细胞中葡萄糖的含量,影响细胞正常代谢生长,为灰霉病的防治提供一定的理论参考。     

木霉菌对灰葡萄孢菌的拮抗作用

对采自宁夏14个市县的170份土样及其它材料进行分离,得到96个木霉菌株,采用形态分类方法鉴定出9种木霉菌以及2种未知名菌种．它们分别为哈茨木霉（Trichoderma harzianum）、绿色木霉（T．viride）、长枝木霉（T．longibrachiatum）、康氏木霉（T．koningii）、拟康氏木霉（T．pseudokoningii）、项孢木霉（T．fertile）、黄绿木霉（T．aureoviride）、深绿木霉（T．atroviride）、钩状木霉（T．hamatum）以及T．sp1和T．sp2。拮抗作用和抑菌活性测定结果表明：11种木霉菌对葡萄、番茄和黄瓜灰霉病的致病菌——灰葡萄孢菌（Botrytis cinema Petssp．）均有不同程度的拮抗作用,其中哈茨木霉、绿色木霉、黄绿木霉、钩状木霉和T．sp1对病原菌的拮抗作用及抑菌活性显著,其生长速度比病原菌平均快1．1～3．0倍：在对峙培养中拮抗系数达Ⅰ级或Ⅱ级．其抑菌率高迭98．78％。     

Triggering the biocontrol of Botrytis cinerea by Trichoderma harzianum through inhibition of pathogenicity and virulence related proteins

This study reports a strain of Trichoderma harzianum CCTCC-SBW0162 with potential to enhance biocontrol activity against gray mold pathogen, Botrytis cinerea, and with a pivotal role in tomato (Solanum esculentum) plant growth enhancement. A total of 254 Trichoderma isolates were screened by in vitro antagonistic assay. Of these, 10 were selected for greenhouse experiments based on their greater inhibition of B. cinerea. The in vitro antagonistic assay and greenhouse experiments indicated that T. harzianum CCTCC-SBW0162 gave the highest inhibition rate (90.6%) and disease reduction (80.7%). Also, to study the possible mechanism associated with antifungal activity of CCTCC-SBW0162 against B. cinerea, molecular docking was used to assess the interactions between CCTCC-SBW0162-derived metabolites, and pathogencity and virulence related proteins of B. cinerea. The molecular docking results indicated that the combination of harzianopyridone, harzianolide and anthraquinone C derived from CCTCC-SBW0162 could synergistically improve antifungal activity against B. cinerea through the inhibition/modification of pathogenicity and virulence related proteins. However, this computerized modeling work emphasized the need for further study in the laboratory to confirm the effect T. harzianum-derived metabolites against the proteins of B. cinerea and their interactions.