一种简易快速提取洋葱线粒体DNA 的方法

以哈尔滨长日圆葱研究所提供的洋葱细胞质雄性不育系A为试材 ,取其块茎 50g剪碎 ,加入 10 0mL预冷的缓冲液A〔30mmol/L甘露醇 ,50mmol/LTris HCl,3mmol/LEDTA ,0 1%BSA ,10mmol/Lβ-巯基乙醇 (pH 8 0 )〕 (按 1∶2比例 ) ,捣碎后 ,4层无菌纱布过滤 ,滤液 150 0g离心 10min ,弃沉淀 ,上清液 12 0 0 0g离心 15min,弃上清 ,加入 10mL缓冲液A悬浮沉淀 ,150 0g离心 10min ,弃沉淀。上清液加入 1mol/LMgCl2 终浓度 10mmol/L ,DNaseⅠ至 10 0 μg/mL ,冰上放置 1h,然后加入 3倍体积的缓冲液B〔1 2 5mol/LNaCl,50mmol/LTris HCl,2 0m…     

平菇菌丝体中SOD提取方法初探

以平菇菌丝体为材料,采用直接法、甲苯法及乙醇-氯仿法进行SOD提取,检测酶活性。结果表明,3种提取方法均能获得SOD,通过比较确定乙醇-氯仿法提取效果最佳。提取条件为:1 g平菇菌丝体加入8 ml 0.2 mol/L的Na HCO3溶液、6 ml乙醇-氯仿(体积比5/3)溶液,搅拌2 h,4 000 r/min离心30 min。此法提取得到的粗酶液比活力最高,为1.345 U/mg;纯化后的比活力为1.521 U/mg;纯化倍数为1.720;回收率为91.7%。     

平菇液体菌种的应用

近年来,平菇生产发展很快,为适应平菇生产发展的需要,我们进行了液体菌种制备原种、栽培种的试验,并应用于生产.(一)供试材料菌株为紫孢平菇.培养基配方为玉米粉30g,麸皮50g,蛋白胨1g,磷酸二氢钾3g,硫酸镁1.5g,水1000ml,pH自然.先将玉米粉、麸皮加水煮沸5分钟,用两层纱布过滤,再加入其它成份溶     

食用菌斜面菌种的纯化

食用菌斜面菌种在分离、培养过程中,有时会受到杂菌的污染。因此,要及时进行纯化培养。下面介绍几种简易的纯化方法。利用寄主组织或子实体进行组织分离,在分离培养基内加入链霉素(30单位/毫升)可抑制细菌生长;加入灰黄霉素(20单位/毫升)、制霉素(30单位/毫升)可抑制真菌生长。斜面受到细菌污染,可酌情采用下列方     

杏树皮可溶性总蛋白的提取与浓缩方法探讨

为从杏树皮组织中获取高质量的可溶性总蛋白,选择经过冬季自然低温驯化的1 a生杏树新梢为试材,比较分析提取缓冲液中分别添加2%SDS,不同浓度的Tween 20,以及高浓度PVPP对可溶性总蛋白提取浓度和质量的影响.结果表明:提取杏树皮可溶性总蛋白的最佳缓冲液体系为:5 mL 50 mmol/L的Tris-HCl缓冲液(其中含2 mM EDTA-Na2,10 mmol/L抗坏血酸,0.5 mmol/L DTT,0.1 mmol/L PMSF,1%(w/v)PVPP,pH 8.0)和0.5% Tween20.丙酮浓缩方法中加入蛋白粗提液2倍体积的冷丙酮是最理想的.经过提取和浓缩的蛋白浓度可达0.773 μg/μL,电泳分析中的条带多而清晰,可用于后续的目的蛋白纯化试验及功能分析.     

百合鳞茎淀粉磷酸化酶分离纯化及酶学性质研究

 从兰州百合（Lilium davidii var. unicolor）鳞茎中分离纯化淀粉磷酸化酶（Starch Phosphorylase,SP）并研究其酶学性质。结果表明：选用30% ~ 60%硫酸铵分级沉淀,SP 纯化倍数为14.78,回收率为23%,纯化的SP 亚基分子量约62.5 kD;SP 的最适反应体系缓冲液为pH 5.0 的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液,最适反应温度为30 ℃,且体系中不适合加入酚类抑制剂聚乙烯吡咯烷酮（PVP）;SP 不耐强酸,在中性和弱碱性条件下活性稳定,pH < 5 时活性较弱;在合成方向上,SP 对葡萄糖–1–磷酸（G-1-P）的Km值为2.84 mmol · L-1;1 mmol · L-1 Mg2+、Ca2+对SP 活性有极显著的促进作用,K+、Zn2+也有一定的促进作用;大部分离子在高浓度（> 10 mmol · L-1）下抑制SP 活性,但Na+随着浓度的升高,对SP 活性的促进作用增强;10 mmol · L-1 的抗坏血酸可将SP 活性提高30%。     

平菇液体菌种的制备与试用

近年来,我省平菇生产发展很快,但目前使用的平菇菌种多为固体方式制作,周期较长,耗能较多。为此,我们进行了液体原种制备的研究。材料和方法 (一)供试材料:菌种为佛罗里达侧耳(Pleurotus florid)7号。培养基配方为玉米粉30g、KH_2PO_4 3g、MgSO_4 1.5g蔗糖10g、水1000ml,pH自然。先将玉米粉加水煮沸5分钟,过滤,再加其它成份,最终体积为1000ml,装入容量为250ml的三角瓶,每瓶装50ml,灭菌。     

培养料的石灰含量对平菇产量的影响

平菇(Pleurotus ostreatus),别名侧耳,属担子菌纲伞菌目白蘑科侧耳属。每100g平菇干品含蛋白质20～30g,是鸡蛋的2.6倍、猪肉的4倍,更高于一般蔬菜。平菇对人体多种疾病有治疗和预防作用,特别对癌细胞和病毒有强烈的抑杀作用。平菇产品十分受人欢迎,已成为各地菜篮子工程重要发展对象,同时也是农村脱贫致富的一条重要途径。平菇同其它木腐真菌一样,喜生在偏酸性的培养料上,pH值在5.8～6.2范围内,菌丝生长最好。通     

枣花柱头荧光染色方法的优化

以‘冷白玉’枣柱头为供试材料,优化荧光染色的方法。结果表明:枣花在2 mol/L NaOH溶液中浸泡并文火水煮30min,软化效果表现为花柱结构保持完整且花粉管清晰,优于其他处理;当缓冲液pH值为7.0时,观察花粉萌发及花粉管伸长情况,效果最佳;0.1 g水溶性苯胺蓝加入0.7 g K₃PO₄,蒸馏水定容至100 mL,染液pH值为8.0,染色5min即可,花粉管结构清晰,染色效果好。枣花荧光染色方法的优化,优于联苯胺-过氧化氢(MTT)的传统方法,使用简便、省时、高效。     

大蒜提取液对平菇菌丝及其杂菌的抑菌效果研究

以平菇菌种上分离的细菌、真菌为研究对象,制备不同质液比的大蒜、乙酸乙酯提取液,采用抑菌圈法研究了大蒜提取液对平菇生产中的竞争性杂菌的抑制作用,采用菌丝生长速度法测定了大蒜提取液对平菇菌丝生长的影响。结果表明:以质液比1∶2提取48h的大蒜提取液对竞争性杂菌的抑制效果明显,在加入1%(质液比1∶2)提取液pH 8~9培养基上既不影响平菇菌丝生长,又能较好地抑制各类杂菌。     

土壤放线菌分离杂菌抑制方法研究

采用平板涂布法研究了土样不同预处理方法、杂菌抑制剂种类对土壤放线菌分离效果的影响。结果表明:风干处理(7~10d)土样,放线菌的分离效果优于热处理(120℃×1h),所分离到的放线菌数量和种类较多,且易于纯化,杂菌(细菌、真菌)明显减少,而供试土样经120℃热处理1h几乎未分离出放线菌,细菌数量仍较多,真菌全部被杀死;通过对4种杂菌抑制剂及其组合反复试验,选择出了土壤放线菌分离与纯化适宜的杂菌抑制剂种类(S+Q)和最佳用量,山梨酸钾(S)、氨苄西林钠(Q)在GA中的最佳使用剂量分别为30、3mg/L,而重铬酸钾(Z)及其组合Z+Q对土壤细菌、真菌也有一定的抑制作用,但抑菌效果比S+Q差,且放线菌的分离数量也较低。因此,进行风干处理土样和向放线菌分离培养基(GA)中加入杂菌抑制剂S+Q双重处理,可得到土壤放线菌分离与纯化较佳的效果。     

花椰菜最适ISSR反应体系的建立及优化

以花椰菜9901A×9908杂交种为材料,用高盐低pH值法提取的基因组DNA为模板,对ISSR-PCR反应体系中的镁离子浓度、dNTP浓度、Taq DNA聚合酶量、引物用量以及最适退火温度等影响因子进行了优化和筛选,建立了适合花椰菜的ISSR反应体系:20 μL PCR反应体系,含10×PCR反应缓冲液2 μL,2.0 mmol/L MgCl2,4×dNTP混合物0.2 mmol/L,引物0.5 μmol/L,Taq酶1.5 U,基因组DNA约30 ng,最适退火温度为52.8℃.     

平菇基因组文库的构建

结果1.高分子量平菇总 DNA的提取(1)每升培养物恒温摇培(25℃,125 rpm)5天,得平菇菌丝体12g,采用原生质体裂解法得平菇总DNA100mg 左右。(2)平菇菌丝体经Lywallzyme 酶解破壁和裂解缓冲液作用后,用 SS一酚/氯仿/异戊酵抽提(至少3次)去除蛋白质等杂质,经酒精沉淀后得总 DNA。抽提过程中避免剧烈振荡,可使总 DNA 的分子量大于50kb。     

蘑菇酚氧化酶的硫酸铵沉淀

以硫酸铵沉淀法来提取蘑菇酚氧化酶,是对酶进行纯化的第一步,许多人在研究中采用了这个方法,但关于这个方法的提取率乞今尚未见报道,本实验就这一问题进行了一些研究,结果报道如下。材料与方法(一)粗酶提取蘑菇子实体(本所标准化课题提供)在0.01MpH 7.0的磷酸盐缓冲液中研磨,15000rpm 离心15分钟,弃去沉淀,上清液即为粗酶液。     

微型结球白菜原生质体游离与纯化研究

以微型结球白菜无菌苗子叶为材料,探讨酶液浓度、酶解时间、酶液渗透压、离心转数对其原生质体分离效果的影响以及蔗糖浓度对纯化结果的影响。结果表明:以1.0%CellulaseR-10,0.08%Pectinase,0.4 mol/L甘露醇,酶解6 h,第1次离心转速1 200 r/min,24%蔗糖的条件组合最佳,原生质体产量为2.10×107个/g(FW),活力达91.20%。     

平菇和香菇代料栽培中污染真菌的研究

从 2 0 0 2年 3月到 2 0 0 3年 2月 ,在四川省雅安市代料栽培平菇和香菇的种植户中采集被真菌污染的培养料 ,进行真菌分离和鉴定。研究结果表明 ,粘帚霉(Gliocladiumspp .)是平菇代料栽培中最主要的污染真菌 ;哈茨木霉 (Trichodermaharzianum)是香菇代料栽培中最主要的污染真菌。     

紫外线诱变对平菇菌丝的影响

紫外线诱变育种已成为食用菌育种的有效方法之一,但对诱变机理方面的研究甚少。本试验旨在研究紫外线诱变对平菇菌丝长速、生长势和细胞内含物变化的影响,为食用菌紫外线诱变育种提供参考和依据。 一、材料与方法 (一)供试材料 菌株为无孢5号,本校分离。平板培养基为综合马铃薯汁培养基:去皮马铃薯200g,葡萄糖20g,琼脂20g,磷酸二氢钾38,硫酸镁1.5g,维生素B_1 1片,水1000ml,pH值自然。接种后将平板置恒温箱25℃下培养。 (二)照射剂量与方法 试验设1′30″、2′、3′、5′和对照5个处理,每处理重复3次,每重复用18×90mm培养皿平板培养菌丝,每个平板中央接入8mm的菌丝     

耐高温平菇菌株的筛选初报

平菇特别适合城市栽培,但在推广中遇到的主要问题是高温季节一些厂家因无冷冻降温设备而停产。为了推动食用菌的发展,笔者对自己分离和搜集保藏的部分平菇品种,做了夏季出菇(25～30℃)比较试验。材料与方法菌种75322(Pleurotus ostreatus),78010(Pleurotus sp)和75531(Pleurotus citrinopileatus)系笔者分离;5.39(Pleurotus sapidus)和5.185(Pleurotus sajor-caju)系引自中国科学院北京微生物所;8101(pleurotus sp)系黄廷芳同志赠送。采用室内瓶栽,常规培养方法。固体培养料系硬杂木屑78％、麦麸20％、葡萄糖1％、CaCO_31％,自然pH,含     

平菇液体菌种制作技术及栽培试验

平菇栽培中,采用液体菌种有以下优点:菌丝生长快、长势旺盛,菌龄整齐,省工节能,接种方便,提早出菇,产量较高。现将我们的研究结果报告如下: 一、液体菌种的制备 (一)材料和方法①供试菌种:平菇P10,由广东省微生物研究所菌种厂提供。②固体培养基:PDA培养基。③液体培养基,玉米粉2%,葡萄糖1％,磷酸二氢钾0.2%。酵母片少量。pH6.2,1.5kg/cm~2高压灭菌30分钟。④制备方法:试管母种接种后,在28℃±1℃     

用小米大米玉米制平菇母种

平菇母种通常采用PDA培养基,但琼脂价格昂贵,购买困难,为此我们用小米、大米、玉米(米查)制作平菇母种,收到了较好的效果.现把制作方法介绍如下:(一)培养基的制作①小米100g;②大米100g;③玉米楂100g.各配方中再另加白糖、石膏各1g,先把干小米、大米分别放入纱布袋内,待水烧开后放入锅中煮,小米煮2分钟,大米煮7分钟后,取出置冷水中冲冼,然后摊在报纸上晾干表面水分.将玉米(米查)直接倒入开水锅中煮30分钟到半熟程度,只剩下一个硬心,捞