鹅源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定与药物敏感性分析

为了鉴定引起雏鹅死亡病原,无菌采集肝、心、肺等病料组织进行细菌分离培养,通过分离培养、培养特性鉴定、形态学观察、生化试验、16 S rRNA PCR等方法进行鉴定。结果显示:分离菌株16 S rRNA基因序列与GenBank中公布的12株多杀性巴氏杆菌参考株的同源性在98%~100%之间,分离菌株为多杀性巴氏杆菌;动物回归试验结果表明,该菌具有致病性,且致病较强,对雏鹅的LD_(50)为3.16×10~6cfu/mL;PCR检测结果表明,分离菌株属于多杀性巴氏杆菌荚膜型A型,同时携带18个毒力基因;药敏试验结果显示,分离菌对恩诺沙星、丁胺卡那霉素、头孢曲松等11种药物高敏,对其他药物存在不同程度的敏感性。     

禽霍乱病原菌的鉴定与主要特性分析

从河北某养鸡场80日龄左右鸡群所发生的禽霍乱病死鸡中，分离到了相应病原菌多杀巴斯德氏菌（pasteurella multocida）。对分离获得的16株菌（HPs-1至HPs-16）进行了形态特征、培养特性、理化特性等方面的鉴定，同时选取代表菌株（HPs-1）进行了16SrRNA基因的分子鉴定，测定了16SrRNA序列，构建了系统发育树。结果表明分离鉴定的16株细菌均为多杀巴斯德氏菌败血亚种（P．multocida subsp．septica），所测代表菌株的16SrRNA基因长度142bp，在GenBank登录号为AY999017，该菌株与检索出的22株巴斯德氏菌属（Pasteurella Trevisan，1887）细菌16SrRNA基因序列同源性均在98％～100％。另外，药敏试验结果显示分离株对供试的青霉素G等33种抗菌药物高敏、对克林霉素敏感、对苯唑青霉素等3种耐药。     

猪链球菌的分离、16SrRNA鉴定及药敏实验

从湖南娄底某猪场病猪组织中分离出6株细菌,通过培养特性、细菌染色镜检、16sRNA基因扩增及序列BLAST分析等系统鉴定,确定为猪链球菌。并对分离菌与GenBank中收录的17株猪链球菌的16SrRNA基因序列的进行同源性比对,结果显示,6株分离菌的16SrRNA基因序列与收录菌株同源性为99%以上。药物敏感试验表明,分离细菌对头孢类、β内酰胺类药物高度敏感、对磺胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类、四环素类药物产生耐药。而6株分离细菌对氯霉素类药物的敏感,但敏感性有差异。     

鹿源多杀性巴氏杆菌的鉴定、分型及生物学特性分析

为了对新疆南疆某鹿场疑似感染多杀性巴氏杆菌的死亡马鹿肺脏样本中的分离菌株进行鉴定、分型及生物学特性分析,试验首先采用染色法和生化鉴定初步判定分离菌株的种类,然后通过PCR扩增分离菌株的16S rRNA基因、Kmt1基因、荚膜血清分型基因和LPS基因,进一步对分离菌株进行鉴定和分型,最后对分离菌株进行遗传进化分析和药敏试验。结果表明：分离菌株为荚膜血清D型、LPS基因L3型多杀性巴氏杆菌;该分离株的16S rRNA基因序列与多杀性巴氏杆菌参考株DY120818、GDZQ201401、PM-LK、PM-R1601、4085、FUP12、PM30、PM75、Tabriz31、Tabriz61的核苷酸序列相似性在99.9%～100%之间,Kmt1基因序列与多杀性巴氏杆菌参考株CSWRI-AH-PmAg16、HaiNGoosePm2012、Jhakhrana、M14、OND Duck、PMI030、PMUEL 1-BR-11、SichuanPm2014、VRI-Pm2的核苷酸序列相似性在94.9%～99.5%之间,荚膜血清分型基因与同为荚膜血清D型的多杀性巴氏杆菌参考株CSWRI-AH-PmD1...     

一株鹅巴氏杆菌的分离及鉴定

从病死鹅心脏、肝脏、脾脏中分离并纯化细菌,根据其形态特征、培养特性、生化鉴定、16SrDNA基因序列分析和小白鼠攻毒试验等进行鉴定,确定是巴氏杆菌引起的急性传染病。药敏试验结果显示,该分离菌株对头孢曲松钠和头孢氨噻肟敏感,对大多数抗生素耐药。重庆某鹅场通过针对性用药,病情已得到控制,为鹅巴氏杆菌病的诊断与防治提供了科学的依据。     

猪源多杀性巴氏杆菌分离鉴定与药敏试验

2013年3月,迁安市某猪场2月龄仔猪发生一起以呼吸困难为主要临床表现的疾病,无菌采集病猪肺脏、心血等组织进行病原分离培养,经形态特征、培养特性、生化特性鉴定初步确定为多杀性巴氏杆菌,经对多杀性巴氏杆菌种特异性KMT基因的PCR检测,测序结果运用BLAST软件比对,与多杀性巴氏杆菌同源性为100%。动物致病性试验表明分离菌株有致病性。药敏试验显示分离菌株对复方新诺明、庆大霉素、卡那霉素耐药,对氟哌酸、土霉素中度敏感,对头孢噻呋、氟苯尼考、环丙沙星、恩诺沙星、阿莫西林抗菌药物敏感。     

一株牛源A型多杀性巴氏杆菌的分离与鉴定

对重庆市某牛场运输后的牛的鼻拭子进行病原分离,对其进行培养形态及染色、动物致病性情况观察及16SrRNA序列分析,初步鉴定为牛多杀性巴氏杆菌(PM)。利用PM种特异性引物及荚膜血清特异性引物进行PCR扩增,均得到目的基因条带。由此确定分离菌株为牛荚膜A型巴氏杆菌。     

阴道加德纳氏菌的分离鉴定及流行病学调查

为了解貉、狐、貂阴道加德纳氏菌感染情况,试验采用虎红平板凝集试验进行了血清学调查,并无菌采集母貉的阴道分泌物及死亡胎儿的肝脏、肾脏等组织,进行病原的分离培养、主要生物学特性观察及16S rRNA基因序列比对,同时还进行了药敏试验。结果表明:河北省6个地区狐、貉、貂阴道加德纳氏菌广泛存在,其中狐阳性率为7.05%(31/440),貉阳性率为4.50%(9/200),貂阳性率为4.80%(10/208);经病原的分离培养、主要生物学特性观察及16S rRNA基因序列证实,分离菌株为阴道加德纳氏菌;药敏试验结果显示,该分离菌对头孢呋辛酯、氧氟沙星敏感,而对卡那霉素、氨苄西林、头孢他啶等药物耐药。     

肉雏鹅源多杀性巴氏杆菌分离鉴定与致病性试验

为了鉴定引起肉雏鹅死亡的病原,无菌采集病死肉雏鹅心血、肺脏、肝脏等病料组织中分离到1株病原菌,通过细菌培养特性、形态学观察、生化试验、Kmt2基因序列测序等方法进行鉴定,分离菌株被鉴定为多杀性巴氏杆菌。采用PCR方法、人工感染致病性试验、K-B药敏纸片法分别对分离菌株进行血清型鉴定、致病性检测及耐药性分析。结果显示,多杀性巴氏杆菌血清型为A型,对14日龄肉雏鹅具有很强的致病性,半数致死量(LD_(50))为5.86×10~6 CFU/mL;分离菌株对对头孢曲松、头孢噻呋、恩诺沙星等6种药物高度敏感;对其他药物有不同的程度耐药性。     

新疆石河子规模化牛场多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及药敏试验

为了确定石河子地区某规模化牛场出现呼吸困难、咳嗽、病牛消瘦甚至死亡的病因,本研究以病牛病变组织为研究对象,采用常规细菌分离鉴定和细菌16SrRNA序列分析来鉴定菌种,以及多杀性巴氏杆菌种特异性基因Kmt-1和各个荚膜血清型特异性基因(hyaD-hyaC、bcbD、dcbF、ecbJ、fcbD)PCR扩增来确定细菌的血清型,同时应用纸片扩散法对分离细菌进行药物敏感性试验和小鼠感染试验。结果表明,从病变的肺组织中分离到1株菌落为灰白色、露珠状、不溶血,染色为革兰阴性球杆状细菌,生化鉴定结果符合巴氏杆菌特征,同时16SrRNA序列分析与NCBI上已公布的多杀性巴氏杆菌16SrRNA序列同源性在99%以上;对多杀性巴氏杆菌特异性基因Kmt-1以及各血清型特异性基因PCR扩增只扩增到Kmt-1和hyaD-hyaC特异性基因片段;分离菌株对链霉素、庆大霉素、卡那霉素耐药,对其他30种药物敏感,同时感染小鼠全部死亡。结果显示从病牛体内分离到1株毒力较强的血清A型多杀性巴氏杆菌。