纳米银对原代培养海马神经细胞凋亡的研究

[目的]探讨纳米银对原代培养海马神经细胞的影响。[方法]用吖啶橙染色观察细胞形态及染色质的变化,用Fluo3荧光染料检测细胞内游离Ca2+浓度变化,并利用ELLSA试剂盒检测Caspase-3凋亡酶活性。[结果]与正常对照组相比,经50μg/ml纳米银处理36h后,海马神经细胞的凋亡率达到最高((48.3±0.33)%),凋亡酶活性增强,并且细胞内游离的Ca2+荧光强度达到41.70±18.78。结论50μg/ml纳米银作用36 h可导致海马神经元凋亡。     

硝普钠诱导体外培养的海马神经元凋亡的研究

目的：观察一氧化氮（NO）供体硝普钠（SNP）对体外培养的海马神经元凋亡的影响。方法：用终浓度分别为0、25、50、100、200、400、600μmol/L的SNP处理海马神经元24h，用MTT比色法分析细胞存活率，倒置显微镜、Hoechst 33258荧光染色观察凋亡的形态学改变，DNA琼脂糖凝胶分析凋亡的生化特征。结果：SNP可剂量依赖性的降低神经元的存活率，当SNP浓度为50μmol/L时，其存活率为56.2%；倒置显微镜观察可见神经元胞体固缩，突起断裂，网络消失；荧光显微镜可见染为高亮蓝色的典型凋亡小体，其细胞核明显固缩、凝聚和断裂，且随SNP剂量的增加，出现凋亡小体的细胞明显增多；50、100、200μmol/L SNP处理海马神经元，电泳图谱显示清晰的DNA梯度。结论：SNP可诱导培养的海马神经元凋亡。     

大鼠骨骼肌卫星细胞体外原代培养的试验研究

对大鼠骨骼肌卫星细胞体外原代培养方法进行研究,以得到高纯度的骨骼肌卫星细胞,为转基因等试验研究提供充足的试验材料。用0.1%Ⅱ型胶原酶消化法从18日龄SD大鼠后腿部肌肉分离出骨骼肌细胞并培养5日,再利用差速贴壁法分离得到高纯度的骨骼肌卫星细胞。研究结果表明,采用此方法分离得到纯度较高的骨骼肌卫星细胞,细胞增殖快,生长良好。     

高糖培养对乳鼠海马神经元存活及c-fos蛋白表达影响

目的探讨高糖培养对乳鼠海马神经元存活及c-fos蛋白表达影响。方法无血清体外培养方法获得新生SD乳鼠海马神经元,分为正常组和高糖6、12、18、24h共5组。分别用PI/Hoechest33342染色法、免疫荧光细胞化学法检测检测海马神经元存活率及c-fos蛋白表达。结果高糖24h组海马神经元存活率明显低于正常组及高糖6、12、18h组(P<0.01)。高糖处理后,c-fos蛋白表达在6h开始出现,12h达高峰,此后逐渐下降(P<0.01)。结论高糖培养导致的乳鼠海马神经元存活率下降与c-fos蛋白表达有关。     

洛美利嗪对喹啉酸致海马神经元损伤的保护作用

目的:利用洛美利嗪(LOM)研究钙离子拮抗剂对兴奋性氨基酸喹啉酸(QA)所致体外培养海马神经元损伤是否有保护作用。方法:原代海马神经元与QA共同培养建立兴奋毒损伤细胞模型,观察1.2×10-6m o l/L,1.2×1-0 7m o l/L,1.2×10-8m o l/L 3个剂量LOM对培养神经元的形态学、乳酸脱氢酶(LDH)、细胞存活率的影响。结果:LOM可提高QA损伤的海马神经元细胞存活率,减少LDH释放,与模型组比较差异有显著性(P<0.01),并能减轻神经元的病理形态学损伤。结论:LOM对QA所致的海马神经元损伤有明显的保护作用,而QA所引起的兴奋毒性可能与C a2 超载所造成的链式损伤有关。     

大鼠大脑皮质神经元的分离及培养

为了给更好地研究神经元病理变化提供物质材料,对新生大鼠大脑皮质神经元进行体外分离和培养。无菌操作取新生大鼠的大脑皮质,采用机械法和胰蛋白酶消化法相结合的方法分离细胞,制备单层细胞悬液接种培养板;5-氟脱氧尿嘧啶处理等方法纯化神经元,甲苯胺蓝染色法及抗NSE单克隆抗体对纯化后的神经元进行鉴定。结果表明,培养的神经元生长良好,形态正常,纯度高达90%以上。采用本方法培养的神经元可作为深入研究中枢系统疾病的细胞模型材料。     

2 种原代培养方法对新生大鼠大脑皮质神经元生物学特性的影响

为明确不同培养方法对新生大鼠大脑皮质神经元成熟时间、形态特征、纯度及活力等生物学特性的影响,采用DMEM培养基加Neurobasal无血清培养基法或Neurobasal无血清培养基法原代培养新生24h内SD大鼠大脑皮质神经元,倒置显微镜下观察细胞形态,MTT法检测细胞活力,免疫荧光细胞化学染色法检测神经元纯度及活性.结果显示,2种方法培养的神经元形态差异无统计学意义;但与DMEM培养基加Neurobasal无血清培养基法相比,Neurobasal无血清培养基法培养的神经元成熟更早,数目更多,纯度更高,活力更强(p0.05).结果提示,原代培养的大脑皮质神经元部分生物学特性受培养方法直接影响;Neurobasal无血清培养基法所得神经元纯度与活性较高,这为实验目的导向的神经元原代培养方法选择提供了借鉴.     

山茱萸提取物对认知障碍大鼠海马神经元的保护作用

[目的]明确山茱萸提取物对认知障碍大鼠海马神经元的保护作用及其机制,为开展中药治疗认知障碍的深入研究提供科学依据.[方法]以柠檬酸铝和亚硝酸钠联合腹腔注射60 d建立40只认知障碍大鼠模型,随机分为模型组及山茱萸提取物低、中、高剂量组,分别以4、8和12g/(kg·d)的山茱萸提取物连续灌胃4周后,利用Morris水迷宫检测各组大鼠的认知功能,采用尼氏染色法观察大鼠海马神经元存活状态,并以TUNEL法检测大鼠海马神经元的凋亡情况.[结果]与模型组相比,山茱萸提取物高、中剂量组大鼠爬上平台所需时间极显著缩短(P<0.01,下同),跨越平台次数极显著增加;山茱萸提取物低剂量组大鼠爬上平台所需时间与模型组间无显著差异(P>0.05),但跨越平台次数显著增加(P<0.05,下同).山茱萸提取物高、中、低剂量组大鼠海马CA1区神经元尼氏小体数目明显增加,着色加深,对应的平均光密度值分别为0.46±0.11、0.39±0.06和0.32±0.06,均显著高于模型组;山茱萸提取物低、中、高剂量组大鼠海马CA1区绿色荧光标记的神经元数量逐渐减少,凋亡指数逐渐降低,对应的凋亡指数分别为(24.20±3.45)%、(16.33±5.68)%和(9.56±2.80)%,显著或极显著低于模型组[(38.78±4.36)%].[结论]山茱萸提取物可有效改善认知障碍大鼠在Morris水迷宫中的游泳轨迹,其海马CA1区神经元尼氏小体数目增加、着色加深,绿色荧光标记的神经元逐渐减少,凋亡指数逐渐降低,即山茱萸提取物对大鼠认知功能的保护作用可能与海马CA1区神经元功能改善有关.     

组织块贴附法原代培养小鼠皮肤细胞方法的改进

试验研究一种简易的小鼠皮肤细胞组织块原代培养方法.从幼龄小鼠获得皮肤组织块,用D-Hanks缓冲液和DMEM培养液洗涤组织块,将其剪至1mm3左右大小,胶头滴管吸取组织块悬液1～2 ml,注入培养瓶,然后匀速而缓慢地翻转培养瓶,于CO2培养箱中培养24 h后,再翻转培养瓶继续培养.结果表明,该方法接种的组织块有15%能迁移牛长出细胞单层.并对细胞长期培养的行为进行了观察.     

奶牛乳腺上皮细胞的原代培养

1材料与方法 1．1材料 1．1．1乳腺组织。从屠宰场选取健康的泌乳期奶牛,无菌手术切取乳腺实质组织,置于DMEM／F12完全培养液（含10％胎牛血清、100IU／ml青霉素和链霉素）中,尽快运回实验室。     

神经干细胞定向诱导分化条件研究

通过模拟体内分化诱导条件,在体外对神经干细胞(NSCs)进行定向诱导.结果表明,由添加2% B27 100 pg·mL-1 IL-1 0.05 g·L-1 Vc 5 u·mL-1 EPO的DMEM/F12的诱导液A和1份含2% B27的DMEM/F12 1份纹状体提取液混合组成的诱导液B均可以将中脑和大脑皮质的NSCs诱导分化为多巴胺能神经元,TH阳性细胞表达率随诱导时间的增加而提高,中脑来源的NSCs的TH阳性细胞诱导率极显著地高于大脑皮质来源的NSCs,诱导液A的诱导效果优于诱导液B.     

牡丹容器育苗的初步研究

笔者探索了牡丹容器育苗的方法和解除牡丹种子上胚轴休眠的方法。实验结果表明,胚根伸长4cm以上的牡丹种子用GA处理24小时和低温(2～4℃)25天皆可解除上胚轴休眠。层积处理对胚根的生长有利。牡丹是深根性植物,对容器的深度要求较高。     

恒河猴卡耶哈岛一氧化氮合酶阳性神经元形态学观察

目的:研究恒河猴卡耶哈岛一氧化氮合酶阳性神经元的分布。方法:用尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸黄递酶(NADPH-d)组织化学和免疫组织化学法。结果:卡耶哈岛各部均分布有NADPH-d组化和nNOS免疫组化反应呈阳性的NOS神经元,胞体呈锥体形和卵圆形,突起阳性,中等大小,胞体直径13.6μm。结论:恒河猴卡耶哈岛内分布有形态和大小较一致的一氧化氮合酶阳性神经元。     

烟草疫霉分离及生长培养基的选择

采用不同的基本培养基添加抗生素组合对烟草疫霉(Phytophthora nicotianae)进行分离培养.结果表明,以V8培养基(100 mL/L Vs汁+0.02 g/L CaCO3+2 g/L洋菜)为基本培养基附加10 mg/mL氨苄青霉素+5 mg/mL制霉素+5 mg/mL多菌灵的选择培养基分离烟草疫霉的效果较好,分离成功率达100％,菌丝的生长状态也较好.菌丝分离后在V8基本培养基中培养,菌丝紧密、浓白、粗壮,菌落大、长势旺.     

鸡肠Remak神经元与过路节的电镜结构特征

 【目的】探究鸡肠Remak神经（intestinal nerve of Remak,INR）的神经元和过路节超微结构,为进一步阐明INR的生理功能提供理论基础。【方法】应用透射电镜技术观察鸡肠INR元与过路节的超微结构。【结果】INR有大量体积巨大的神经元和少量小强荧光细胞分布。神经元胞体周围有零散的卫星细胞围绕,但不能形成完整被囊,可见卫星细胞与神经元胞体之间形成突触样联系。神经元周围基膜不明显,神经元胞体表面常直接与周围细胞间质接触。细胞核圆而表面平滑,染色质松散清亮,核内可见棒状小体的特殊结构。核仁明显,结构和组成典型。胞质内分布着丰富的微管、发达的粗面内质网和高尔基复合体,粗面内质网池常有扩张膨大。可见中央有孔的致密颗粒分布于核周质,可能为肽类递质分泌颗粒。核糖体除了附着于粗面内质网表面外,还有大量游离核糖体分布于胞质中。线粒体形态多样,并有致密化现象。肠INR被膜下分布着少量成群的小强荧光细胞,其胞质和胞核的电子密度较高,细胞之间有不对称的突触联系。根据突触小泡的不同,INR内分布着4种过路节,它们与周围结构形成不同的突触联系。【结论】INR神经元具有旺盛合成和分泌功能的超微结构特征,而过路节的组成和联系显示出INR支配活动的多样化和复杂性。     

鸡嗉囊的副交感神经元定位

本文用１４只１．０～２．５ｋｇ重的成年鸡研究嗉囊的副交感神经元定位。将ＨＲＰ注入嗉囊，动物存活２～４天后心室固定。取迷走神经远神经节、岩神经节和颈静脉神经节及延髓，制成５０μｍ厚的冰冻切片，用Ｍｅｓｕｌａｍ氏ＴＭＢ法反应呈色，明视野观察，结果如下：１．被标记的嗉囊副交感节前神经元出现于迷走神经背侧运动核和中间核内。嗉囊的标记细胞在迷走神经背侧运动核内的分布有局部定位关系。２。被标记的嗉囊感觉神经元出现于远神经节、岩神经节和颈静脉神经节内。     

改性稻壳去除低浓度氨氮的研究

[目的]研究改性稻壳去除废水中低浓度氨氮。[方法]采用单因素试验确定制备改性稻壳吸附剂的条件,得出该吸附剂对氨氮处理的最佳条件。[结果]以10.0%H2O2作为改性剂,温度100℃、时间30min为稻壳改性的最佳条件;吸附时间120min,吸附温度23℃,pH值8.6,稻壳与水的质量体积比3.0g/30ml时的吸附效果好;同时,改性后的稻壳结构和化学键都发生了变化。[结论]改性稻壳可作为一种低浓度氨氮废水的吸附处理剂,具有一定的利用价值。     

不同无土固体基质对辣椒生长的影响

[目的]探索辣椒对无土固体基质栽培的适应性。[方法]选用烟草育苗专用基质、荞壳、河砂3种无土固体基质,对无土栽培辣椒的生长发育进行研究。[结果]采用烟草育苗专用基质的辣椒株高、生物产量和根重都优于荞壳和砂,说明烟草育苗专用基质更有利于辣椒生长。[结论]在无土固体基质栽培辣椒生产中,以选用烟草育苗专用基质为最佳。