菠萝蜜蒂腐病病原菌分离与鉴定

对海南省菠萝蜜病害调查过程中,发现菠萝蜜发病严重,症状表现为果柄表皮呈水渍状腐烂但不脱落,有时能看到明显的白色霉层,后逐渐向果实部位蔓延,果蒂逐渐变褐色,在田间,常可发现感染该病的病果果蒂脱水干枯而悬挂于树枝上, 这与已经报道的可可球色单隔孢（Botryodiplodiatheobromae Pat）引起木菠萝球二孢叶斑病及果腐病有明显不同,故命名为蒂腐病。采用常规组织分离法从该病样中分离出菌株,经柯赫氏法则验证后,通过形态学鉴定和通过形态学鉴定、ITS、 GAPDH、ACT、CHS-1和TubG2序列分析。结果表明,引起菠萝蜜蒂腐病的病原菌为胶孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）类群中的Colletotrichum siamense,尚未见由Colletotrichum siamense胶孢炭疽菌引起菠萝蜜蒂腐病的系统报道。     

广西珍珠李叶枯病原鉴定

为了明确近年来广西省天峨县发生严重的珍珠李叶枯病原,采集天峨县珍珠李病叶,对病原进行分离和鉴定。本研究从病叶中分离到2种真菌,核糖体DNA内转录间隔区（internal transcribed spacer, ITS）序列分析表明2种真菌分离物分别与GenBank中胶孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）和拟盘多毛孢菌（Pestalotiopsis sp.）具有99%的相似性。离体致病性测定结果表明,分离菌株均能使健康叶片产生症状,并通过柯赫氏法则（Koch’ postulates）验证。结合真菌分离物的分离比率,将广西天峨县珍珠李叶枯病原初步鉴定为胶孢炭疽菌。     

13种杀菌剂对芒果炭疽病菌的室内毒力测定及田间防效

近年来芒果炭疽病在贵州芒果园发生普遍、危害极重,通过本研究掌握芒果胶孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides Penz）对不同杀菌剂的毒力及田间防治效果,将为芒果炭疽病的防治提供理论依据。采用生长速率法测定13种杀菌剂对芒果胶孢炭疽菌的毒力,结果表明：13种杀菌剂中450g/L咪鲜胺EW对胶孢炭疽菌抑菌效果最好,EC50小于0.01mg/l,250克/升吡唑醚菌酯EC、50%氟啶胺SC、50%多菌灵WP和12.5%氟环唑SC的EC50均小于1 mg/L,对胶孢炭疽菌具有较好抑菌效果。芒果幼果期进行田间防治,结果表明：450g/L咪鲜胺EW1500倍液、250克/升吡唑醚菌酯EC1250倍液、50%多菌灵WP1000倍液、12.5%氟环唑SC2000倍液、250g/L嘧菌酯SC1250倍液、50%氟啶胺SC1500倍液和70%甲基硫菌灵WP1000倍液等7种药剂可相对有效地控制芒果炭疽病的发生,防效为57.57%~65.57%。该研究将为贵州芒果炭疽病的防治提供理论依据及技术支撑。     

暹罗鳄鱼“皮肤红点病”的病原分离与鉴定

鳄是生态价值、科学价值和经济价值极高的野生动物。暹罗鳄(Siamesecro codile)隶属爬行纲、鳄鱼目、鳄科，为国家二级保护野生动物。它具有繁殖能力强、生长快、抗病力强、皮质优良等优点，是我国人工饲养最多的鳄鱼之一。驯养繁殖及合理开发利用暹罗鳄鱼已成为具有广阔发展前景的产业。但集约化、高密度养殖常容易引起传染病的发生。2004     

胶孢炭疽菌激活芒果防御酶基因的差异表达研究

本文通过实时荧光定量PCR的方法,运用相对定量方法发现,胶孢炭疽菌分生孢子侵入芒果嫩叶和成熟果过程中,不同程度地激活活性氧相关的3个基因（MiSOD,MiPOD和MiPPO）和抗病相关的4个基因（MiCHI,MiARE,MiPR1和MiPAL）等7个防御酶基因的活性。7个防御酶基因在接种成熟果皮12 h时达到活性的最大值,随后基因活性呈下降趋势,但仍显著高于0 h接种时期的活性;在接种嫩叶时,7个防御酶基因活性呈递增趋势,72 h达最大值,说明了寄主植物在抵御病原菌侵染的过程中不同器官、不同发育阶段,同一类基因的表达差异情况;揭示了寄主植物在受病原菌侵染时会激活自身抗病防御酶基因高效表达,提高酶的活性,从而抵抗病原菌的侵染,提高其抗病性。本文通过研究芒果抗病相关防御酶基因的表达为提高其抗病性奠定了基础。     

芒果炭疽病菌内切葡聚糖酶基因CgEg1B的克隆与敲除载体构建

芒果炭疽病（Colletotrichum gloeosporioides）是为害芒果的重要病害之一,为了明确内切葡聚糖酶CgEg1B与芒果炭疽病菌致病力的关系,本实验以芒果炭疽病菌DNA为模板,利用同源克隆技术扩增CgEg1B,对其序列特征、蛋白的保守结构域进行分析,并借助In-Fusion?HD Cloning Kit技术进行敲除载体构建。结果表明,该基因DNA和cDNA全长分别为1077 bp、1020bp,编码区有1个内含子（大小为57bp）,推测编码339个氨基酸,其分子量约为37.13 kDa,等电点PI为5.11。与NCBI网站中已公布的基因进行Blastp比对,发现该序列与鳄梨炭疽菌（C.gloeosporioides）（EQB54542.1）的内切葡聚糖酶基因相似性均为99%;该基因的敲除载体pCgEg1BGH-1构建成功。CgEg1B基因具备真菌内切葡聚糖酶基因家族的序列特征,推测CgEg1B基因可能与芒果炭疽病菌的侵入、定植和致病性有关。     

柑橘炭疽病研究进展

柑橘炭疽病是常见的柑橘病害,虽然该病被研究多年,取得显著成果,但对该病的探究仍需深入。本文以胶孢炭疽菌和尖孢炭疽菌为主要论述对象,综述了近年来国内外对这两种病原菌的研究状况,包括炭疽菌的种类及侵染循环、鉴定、致病机理和防治方法等。此外,本文还提出了未来该病研究需要解决的问题及发展方向。     

芒果炭疽菌株对台农1号的致病力分化

摘要：为了解芒果主产区炭疽菌株的致病力及分化情况。以台农1号为供试叶片,采用离体叶片针刺法,对2005-2013年采自海南、广西、广东、云南、四川以及美国夏威夷、泰国地区的112株芒果炭疽病菌进行致病力测定。结果表明,所有菌株均能引起台农1号叶片致病,采自不同地区、不同部位和不同品种来源的芒果炭疽菌致病性存在一定的差异。参照病菌致病性强弱分级标准,以接种5d的病斑平均直径作为标准,将供试菌株致病性划分为四类,其中强致病性菌株有30株,占26.78%;次强致病性菌株有27株,占24.11%;中致病性菌株有35株,占31.25%;弱致病性菌株有20株,占18.86%。     

贡柑黑腐病病原菌的分子鉴定

贡柑黑腐病是近年来在贡柑上发生的一种新型病害,该病害可导致嫩梢快速枯死,大量嫩叶脱落,严重影响树势和产量。本研究从病区采集发病枝叶,对贡柑黑腐病病原菌进行分离、纯化,并采用rDNA-ITS序列分析技术对其进行分子鉴定。结果表明,贡柑黑腐病病原菌为链格孢属（Alternaria Nees）真菌,rDNA-ITS序列与GenBank中芸薹链格孢菌(Alternaria brassicae (Berk.) Sacc.)和柑桔链格孢菌(Alternaria citri Ellis & Everhart)的ITS序列的同源性为99%。结合形态学特征,推断该病原菌为柑桔链格孢菌。     

桑叶穿孔病病叶表面的微生物分离鉴定和微型害虫调查

桑叶穿孔病是近年来新发现的桑树病害之一,目前尚未明确其病原物。2015年8月在四川省绵阳市三台县发生桑叶穿孔病的桑园观察桑树感病症状后,将采集的桑树病叶带回实验室分离、鉴定病叶上分布的微生物菌株以及微型害虫种类。采用细菌和真菌的常规分离方法,从病叶样本中分离并依据菌落特征初步鉴定的细菌有5种43株,基于细菌菌株的16S r DNA序列鉴定为成团泛菌(Pantoea agglomerans)23株、菠萝泛菌(Pantoea ananatis)10株、栖稻假单胞菌(Pseudomonas oryzihabitans)2株、Pseudomonas argentinensis 3株以及醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)5株;分离并依据菌落特征和菌株ITS r DNA序列初步鉴定的6种真菌分别是黑孢菌(Nigrospora sp.MF01)、稻黑孢菌(Nigrospora oryzae MF02)、球黑孢霉(Nigrospora sphaerica MF03)、白腐真菌(Phanerochaete sordida MF04)、拟茎点霉(Phomopsis sp.MF05)和黑附球菌(Epicoccum nigrum MF06)。另在显微镜下观察到病叶叶面有桑蓟马(Pseudodendrothrips mori)、桑粉虱(Pealius mori)、叶螨(Tetranychus sp.)和叶甲(Chrysomeloidea sp.)4种微型害虫,这些微型害虫危害桑叶的创伤可能有利于病原菌感染致病。上述结果为进一步探究桑叶穿孔病的发生机制及致病菌的鉴定积累了重要的基础信息。     

52个柑橘品种对胶孢炭疽菌的抗性评价

由胶孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）侵染引起的柑橘炭疽病是柑橘的主要真菌病害。为研究不同柑橘品种对炭疽病的抗性,本试验采用室内人工接种法,根据病情指数、平均直径、系统聚类分析3种不同抗性评价方法来探讨52个柑橘品种对胶孢炭疽菌的抗性。结果表明：参试的种质资源共分为高抗、抗病、中抗、感病四类,未发现免疫和高感种质,胡柚、晚棱脐橙等8个品种为高抗品种。本文讨论了不同柑橘品种间的抗性差异,为下一步的抗柑橘炭疽病育种提供了理论依据。     

苜蓿斑点病病原菌分离鉴定及紫花苜蓿品种的抗性筛选

本研究以田间病叶分离鉴定的交链格孢菌（Alternaria alternata）对紫花苜蓿（Medicago sativa）21个品种进行侵染,结合田间实验、室内离体叶片和水培枝条实验,利用模糊隶属函数法综合评价不同品种对苜蓿斑点病的抗性。结果表明,抗苜蓿斑点病强弱依次为‘英斯特’ > ‘MT4015’ > ‘北林201’ > ‘Tango’ > ‘威神’ > ‘皇冠’ > ‘巨能995’ > ‘SK3010’ > ‘Dryland’ > ‘斯贝德’ > MF‘4020’ > ‘巨能2’ > ‘巨能801’ > ‘巨能601’ > ‘巨能7-耐望’ > ‘维多利亚’ > ‘巨能7’ > ‘肇东’ > ‘耐盐之星’ > ‘准葛尔’ > ‘新疆大叶’,为抗病材料的快速筛选和优良品种的推广提供科学依据,也为生产中选择对苜蓿斑点病抗性强的苜蓿品种提供了参考。     

高尔夫果岭上草坪灰斑病病原菌的分离鉴定

2003-2005年从西安亚健国际高尔夫球场和郑州21世纪高尔夫练习场的果岭上采集到草坪灰斑病样品,按照柯赫氏法则对其进行了病原物的分离、纯化、致病性测定和菌株鉴定,并进行了温度和pH值对病原菌生长影响的初步研究。结果表明,病株分离物优势菌群为弯孢霉,分离频率为77.1%。致病性测定结果表明,回接后发病株率达80%以上,并产生与田间相类似的症状,病株上获得的其他分离物均不能导致灰斑病症状的出现,证实高尔夫果岭灰斑病是由弯孢霉侵染导致的一种病害。温度和pH值对病原菌生长影响的研究结果表明,该菌生长最适pH值和温度范围分别为6~8和25~30℃。     

葡萄炭疽病病原鉴定及防治药剂筛选

采用组织分离法对采自贵阳市花溪区葡萄基地的葡萄炭疽病病样进行分离,致病性测定,结合病原菌形态学特征、rDNA-ITS序列对菌株进行鉴定,并通过菌丝生长抑制法测定了该菌株对7种杀菌剂原药及2组混配药剂的敏感性。结果表明,结合形态学和分子生物学将该菌株鉴定为胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides);7种原药中丁香菌酯对该菌株生长抑制作用最强,EC50值为0.18 mg/L,其次为苯醚甲环唑和双苯菌胺,EC50值分别为1.18 mg/L和1.34 mg/L;混配组合中,吡唑醚菌酯与苯醚甲环唑8:1混配时,其共毒系数(CTC)为168.69,啶氧菌酯与苯醚甲环唑1:4和8:1混配时,CTC分别为197.21和192.69,协同增效效果显著。引起贵阳市花溪区葡萄基地葡萄炭疽病的致病菌为胶孢炭疽菌。     

宁夏地区玉米镰孢茎腐病病原菌的分离与鉴定

为明确宁夏地区玉米镰孢茎腐病病原菌的种类及优势病原菌,本研究于2020年采集宁夏地区玉米(Zea mays L.)茎腐病样品36份,对所采集样品进行组织学分离、纯化和单孢分离,参照Nelson等分类系统进行形态学鉴定,并结合镰孢菌特异性引物EF-1α进行序列分析.本研究共获得209株镰孢菌,包括禾谷镰孢复合种(Fusa...     

桑椹果腐病的病原菌鉴定

为探究桑椹果腐病的发病原因,采用常规组织分离法,从桑椹果腐病病果中分离得到一株真菌菌株,在PDA培养基上菌落呈圆形,可产生白色气生菌丝和紫色色素。根据显微观察结果,大型分生孢子较少,呈纺锤型或镰刀型,稍弯曲,向两端逐渐变尖,具有2～5个隔膜,大小(154～407)μm×(14～31)μm;小型分生孢子较多,一端尖细、一端钝圆,大小(33～95)μm×(20～38)μm,无隔膜或有1个隔膜。通过菌落形态和分生孢子形态观察,初步认为其为层出镰刀菌(Fusarium proliferatum)。利用真菌EF-1α基因和rDNA ITS通用引物进行PCR扩增,对扩增产物进行测序分析,进一步确认桑椹果腐病的病原菌是层出镰刀菌。根据柯赫氏法则鉴定病原菌,发现层出镰刀菌对桑椹具有较强的感染能力。     

美洲红点鲑嗜水气单胞菌的分离鉴定及药敏试验

为预防和治疗在美洲红点鲑中暴发嗜水气单胞菌病提供实验依据。从患病美洲红点鲑的鳃及肠等病灶部位分离到一株细菌,经回归试验均出现与自然病例相似的症状,并分离到革兰染色和生理生化特性结果与原菌株相同的细菌。结果表明,该菌为短杆状,两端钝圆的革兰阴性菌,与D-葡糖酸、丙二酸和葡萄糖等反应呈阳性,而与黏菌素、七叶苷和L-阿拉伯糖等反应呈阴性,结合16S rRNA基因序列分析结果,该菌与嗜水气单胞菌的亲缘关系最近,鉴定为嗜水气单胞菌。对其进行药敏试验,结果对氨苄西林、环丙沙星和头孢唑啉等药物表现出耐药,对阿米卡星和亚胺培南等药物敏感。本试验首次从美洲红点鲑中分离出嗜水气单胞菌,并得到16种高度敏感的药物,同时阐明了嗜水气单胞菌在美洲红点鲑中的发病症状。     

苯醚甲环唑对采后芒果2种真菌的毒力测定及防腐保鲜试验

通过室内生长速率法测定10%苯醚甲环唑水分散粒剂对芒果炭疽菌和蒂腐菌的毒力,结果为：苯醚甲环唑对2种病菌表现很高的毒力,对2株芒果炭疽菌（MC01和MC02）的EC50分别为0.425 和 3.917 mg/L;对2株蒂腐菌（MB01和MB02）的EC50分别为0.326 和 2.421 mg/L。防腐保鲜试验表明：200mg/L苯醚甲环唑能有效减少芒果果实的发病指数、增加好果率及减少失重率,室温（27－32℃）贮藏21d后好果率为68%,苯醚甲环唑具有延迟果实后熟及提高贮藏保鲜的效果。