柑橘黄龙病菌浓度对琼中绿橙果实品质的影响

为了定量衡量黄龙病菌量对琼中绿橙果实品质的影响,本实验以采自海南琼中橘园中感染了柑橘黄龙病的琼中绿橙为实验材料,用实时荧光定量PCR相对定量的方法测定果实中柑橘黄龙病菌的浓度,同时对果实品质的8个外在指标（果实纵经、横径、果形指数、单果重、果皮率、残渣率、种子数量、种子重量）和5个内在指标（果汁率、可食率、可溶性固形物含量、可滴定酸含量、固酸比）进行测定,研究黄龙病菌浓度对琼中绿橙果实品质的影响。结果表明：随着琼中绿橙果实中柑橘黄龙病菌浓度的增大,果实外观品质变化明显的指标包括果实纵经、果形指数、单果重（p<0.05）,其中果实纵经呈现明显下降趋势,从64.97mm下降到57.44mm,相对较少11.59%;果形指数呈现明显上升趋势,从0.83上升到0.94,相对增多13.25%;单果重呈现下降趋势,从166.35g下降到109.66g,相对较少34.08%;果实横径、果皮率、残渣率、种子数量、种子重量等指标变化不明显。随着琼中绿橙果实中柑橘黄龙病菌浓度的增大,果实内在品质变化明显的指标为可溶性固形物含量,可溶性固形物含量呈现明显下降趋势（P<0.05）,从9.65%下降到8.19%,相对减少15.13%;果汁率、可食率、可滴定酸含量和TSS/TA没有明显变化。结论：在黄龙病菌浓度增加的情况下,琼中绿橙在果实外观、内在品质等多个指标呈现下降趋势。研究结果为定量评价黄龙病对柑橘果实的影响提供参考。     

江西省吉水县柑橘黄龙病菌检测

为了确切诊断江西省吉安市吉水县近年出现的疑似柑橘黄龙病,从该县6个果园共采集12份(株)病叶样品,采用PCR和序列测定技术对病样进行黄龙病菌检测,结果从6份样品中检测到柑橘黄龙病菌即亚洲韧皮部杆菌(Candidatus Liberibacter asiaticus, CLas),结果表明吉水县已有柑橘黄龙病发生。检测结果同时还表明,依据叶片不对称斑驳症状进行柑橘黄龙病田间诊断具有可靠性。     

定量分析柑橘黄龙病菌在沙糖橘中的分布

柑橘黄龙病是由难培养的革兰氏阴性菌“Candidatus Liberibacter asiaticus”引起的严重为害柑橘的系统性病害。本研究通过实时荧光PCR 检测黄龙病菌在沙糖橘上的分布情况,结果表明不同部位黄龙病病菌浓度存在较大差异。其中果实中橘络部位病菌含量最高,且病原菌在果实中呈现富集的状态。本研究结果可为病原菌在植株体内的转运规律提供参考。     

检测柑橘黄龙病的四对常规PCR引物特异性和灵敏度比较

柑橘黄龙病是目前危害柑橘产业的重要危险性病害,实验室中通过PCR技术检测柑橘黄龙病是最有效的方法,因此,确定一组特异性好、灵敏度高的引物至关重要。本文通过荧光定量PCR标定柑橘黄龙病菌核酸浓度的方法,对目前各实验室常规PCR应用比较广泛的4对引物（P400F/R、P535F/R、OI1/OI2,16SF/R）做了特异性和灵敏度的比较。结果发现4对引物均能排除其它来源核酸的干扰,表现出明显的特异性,但在灵敏度方面4对引物差别很大,灵敏度结果是依次为：16SF/R＞P400F/R ＞P535F/R=OI1/OI2,灵敏度最高的16SF/R引物检测柑橘黄龙病菌核酸含量约为1.87×10﹣2 ng/μl。本研究结果为实验室开展检测柑橘黄龙病研究提供了很好的理论与实践基础     

广东潮汕地区柑橘黄龙病菌及虫媒柑橘木虱的发生与种群研究

本文在柑橘黄龙病（Citrus Huanglongbing）及柑橘木虱起源地之一的潮汕地区,分别选择有针对虫媒的管理、无针对虫媒的管理和无管理3种防控水平的蕉柑果园。通过调查对比植株的感病率,不同虫态木虱的发生情况,黄龙病菌16SrDNA和前噬菌体的序列差异,以及柑橘木虱的种群类型。结果表明：（1）有针对虫媒管理的果园：植株发病率最低,发病等级为轻度,各虫态木虱数量最低且不带菌;无针对虫媒管理的果园中植株发病率显著提高,发病等级为轻度或中度,木虱卵和若虫的数量最多,虫媒成虫带菌率和带菌量均较低;无管理果园中植株发病率和发病等级最高,木虱成虫数量最多,虫媒带菌率和带菌量均最高;（2）植株和柑橘木虱样品中均携带黄龙病菌亚洲种Type 2原噬菌体类型,柑橘木虱均属于单一种群。     

两组探针和SYBR Green染料qPCR检测柑橘黄龙病的灵敏度研究

本研究把柑橘黄龙病（Citrus Huanglongbing,HLB）阳性核酸样品进行梯度稀释后,分别采用HLBp、CQULAP两组TaqMan水解探针法和以rpl基因为目的片段的SYBR Green染料法进行HLB实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR, qPCR)灵敏度检测研究,结果发现HLBp探针法可以从105倍稀释的阳性叶片核酸样品中检测到病原菌（病菌拷贝数约为60个）,高于CQULAP探针法和SYBR Green染料法;将三种qPCR检测体系用于赣州安远县、寻乌县和赣县送检的60份田间样品检测,结果HLBp探针阳性率为86.66%,CQULAP探针阳性率为60%,以rpl基因为目的片段的SYBR Green染料法检测阳性率为68.33%。     

室内条件下矿物油农药对柑橘木虱的驱避作用和获取黄龙病病菌的影响

本文采用Ｙ型嗅觉仪测定矿物油农药对柑橘木虱成虫的驱避作用,并研究喷洒矿物油农药1 h、1 d、4 d和7 d后对柑橘木虱成虫驱避作用的持效性;此外,本文还研究了矿物油农药对柑橘木虱成虫获取黄龙病病菌的抑制作用。结果表明,矿物油农药对柑橘木虱有明显的驱避作用,但是这种作用随着时间延长而降低,喷洒矿物油农药1 h后,驱避作用最强,达70.49%,处理7 d后,仍然表现出驱避作用,驱避率达38.54%;矿物油农药明显抑制柑橘木虱获取黄龙病病菌,处理1 h后抑制率高达86.67%,处理7 d仍然具有抑制效果,抑制率为7.60%。本次室内研究表明矿物油农药对柑橘木虱的驱避作用显著,并且可能通过驱避作用抑制柑橘木虱获取黄龙病病菌。     

热水处理对柠檬接穗中黄龙病菌脱除效果研究

采集感染黄龙病的尤力克柠檬接穗,分别用不同温度和不同时间长度的热水处理,结果显示预先用45℃温水预处理30min,然后用47℃温水处理20min,嫁接前接穗无褐化,且发芽率在96.67%以上。该方法处理后的接穗嫁接160天后,PCR检测为阴性,网室种植3年后也没有植株表现黄龙病症状。说明该处理可以有效消除柠檬接穗上的黄龙病菌。     

七类消毒剂对非洲猪瘟病毒荧光定量PCR检测结果的影响

为评价戊二醛、酚、含碘类等常用消毒剂消毒后对非洲猪瘟病毒荧光定量PCR检测结果的影响,基于畜禽栏舍、运载工具、器具消毒及皮肤黏膜消毒目的,按消毒剂说明书推荐选择不同工作浓度,分别与不同滴度的非洲猪瘟病毒培养物于20℃条件下作用30 min后,采用荧光定量PCR方法检测作用后产物。结果显示,与对应的阳性对照组相比,含氯类(二氯异氰尿酸钠)、过硫酸氢钾类、二氧化氯类消毒剂,消毒后对荧光定量PCR检测结果影响最显著,检测Ct值显著上升或检测不到;戊二醛类、含碘类(主要成分聚维酮碘)消毒剂,核酸降解能力相对较弱,检测Ct值稍有上升;酚类、季铵盐类、含碘类(主要成分碘、磷酸、硫酸)类消毒剂,检测Ct值基本无变化。本研究评价了7类常用消毒剂消毒对非洲猪瘟病毒荧光定量PCR检测结果的影响,可为防控实践中科学、客观评价分析消毒效果提供技术参考。     

10种杀菌剂对柑橘炭疽病菌的室内毒力测定

利用生长速率法,测定了10种杀菌剂对柑橘炭疽病病菌的室内毒力。结果表明：95%苯醚甲环唑抑菌效果最好,EC50为0.0026mg/L,95%咪酰胺次之,EC50为0.0075 mg/L;95%肟菌酯、95%醚菌酯、95%恶霉灵、96%戊唑醇、95%百菌清、 95%甲基硫菌灵、80%代森锰锌和10%多抗霉素毒力依次减弱,EC50分别为0.018124、0.058939、0.075695、5.8693、27.2789、50.3972、62.9007和169.0314 mg/L。     

Expression of the high mobility group A1 (HMGA1) and A2 (HMGA2) genes in canine lymphoma: analysis of 23 cases and comparison to control cases

Overexpression of high mobility group A (HMGA) genes was described as a prognostic marker in different human malignancies, but its role in canine haematopoietic malignancies was unknown so far. The objective of this study was to analyse HMGA1 and HMGA2 gene expression in lymph nodes of canine lymphoma patients. The expression of HMGA1 and HMGA2 was analysed in lymph node samples of 23 dogs with lymphoma and three control dogs using relative quantitative real‐time RT‐PCR. Relative quantity of HMGA1 was significantly higher in dogs with lymphoma compared with reference samples. HMGA2 expression did not differ between lymphoma and control dogs. With the exception of immunophenotype, comparison of disease parameters did not display any differences in HMGA1 and HMGA2 expression. The present findings indicate a role of HMGA genes in canine lymphoma. This study represents the basis for future veterinary and comparative studies dealing with their diagnostic, prognostic and therapeutic values.     

玻璃化冷冻对绵羊卵母细胞中母源基因mRNA表达量的影响

为详细了解玻璃化冷冻对绵羊卵母细胞中母源基因mRNA表达量的影响,分别玻璃化冷冻GV期和IVM 期(18、24 h)绵羊卵母细胞,解冻后进行体外培养.GV期和IVM期卵母细胞经过冷冻-解冻后,卵裂率(10.37％、23.17％、33.07％)均极显著低于对照组(82.96％,P＜0.01),且冷冻-解冻后的GV期卵母细胞卵裂率极显著低于冷冻-解冻后的IVM期卵母细胞(P＜0.01).本试验利用荧光实时定量PCR技术检测4种母源基因:Gdf9(生长分化因子-9)、Zar1(合子阻泄因子)、Mater(胚胎必要的母体抗原)、Dnmt1(DNA甲基化转移酶1)在不同处理后的绵羊卵母细胞中的mRNA含量.结果表明,4个基因的mRNA在GV期的表达量均高于IVM期的卵母细胞(P＜0.01);经玻璃化冷冻处理后,4个基因的mRNA表达量升高,其中GV期含量最高(P＜0.01).结果提示,绵羊GV或IVM期卵母细胞玻璃化冷冻导致母源基因mRNA表达量升高,可能会对胚胎发育产生负面影响.     

利用荧光定量PCR检测猪细小病毒在IBRS-2细胞增殖动态研究

为了解猪细小病毒（PPV）在IBRS-2细胞中的增殖规律,建立了基于TaqMan实时荧光定量PCR技术的PPV检测方法,并应用该方法研究PPV在IBRS-2细胞中的增殖动态。结果显示,该方法特异性较好且灵敏度高,可检测低至1.4?100拷贝/μL的病毒量。检测显示PPV接种IBRS-2细胞后12h开始大量增殖,60～72h增殖最为迅速,到72h病毒含量达到最高峰,之后逐渐下降。结果表明所建立的荧光定量PCR检测方法可用于PPV的快速定量检测,对病毒增殖规律的研究为该病毒疫苗的生产提供了科学依据。     

赣南脐橙产区应用有人直升机防治柑橘木虱 控制柑橘黄龙病初报

防治柑橘木虱是遏制柑橘黄龙病扩散的关键措施之一,应用有人直升机防治柑橘木虱目前还没有相关文献报道。本文介绍了赣南脐橙产区在嫩梢期应用有人直升机防治柑橘木虱的做法及成效。结果表明：有人直升机施药雾化性能较好,雾滴附着率高,雾滴分布较均匀,14个处理607个雾滴检测样本平均雾滴密度13.33 粒/cm2,雾滴密度符合农业航空植保技术作业要求;各处理对柑橘木虱均有很好的防治效果,药后7 天,防效都达90%以上。有人直升机具有作业效率高、突击能力强、不同地形地貌适应性好等特点,能在短时间内大面积施药作业,对失管果园、隔离带和杂草上的木虱也能同时防治,解决了一家一户防治时间不统一的问题,可以大面积减少虫口基数,是目前柑橘黄龙病发生区可以借鉴应用的重要技术措施。提出了加快农药产品的研发和登记、防范发生次生灾害、完善防治技术及轮换用药避免产生抗药性等建议。     

体外转录法制备新城疫病毒荧光定量RT-PCR标准阳性模板

本研究针对新城疫病毒M基因设计了1对荧光定量RT-PCR引物和Taqman探针,在上游引物的5′端引入T7启动子,采用RT-PCR方法获得了体外转录模板,并对转录产物RNA的浓度及D值进行了测定。线性试验和特异性试验结果表明,该模板具有良好的线性范围和特异性,模板稀释度为2.95×104～2.95×108拷贝/L时,相关系数为0.998。该模板稳定性好,-80℃保存30 d后无显著变化。浓度为2.95×104～2.95×108拷贝/μL的标准品的变异系数分别为0.20%、0.28%、1.00%、0.54%、0.52%,表明以此模板进行荧光定量PCR具有较好的重复性。     

UCP2基因在小尾寒羊内脏中的差异性表达研究

解偶联蛋白2（UCP2）是一种具有解偶联功能的蛋白质,普遍认为其与脂肪酸代谢、调节ATP生成有关。利用实时荧光定量PCR技术,对不同月龄（6、8、10月龄）小尾寒羊4种内脏（心脏、脾脏、肾脏、瘤胃）组织中UCP2基因的表达量进行了分析。结果表明,UCP2基因在6～10月龄小尾寒羊相同内脏中的表达量差异不显著（P＞0.05）,但在脾脏中的表达量显著（P〈0.05）高于心脏、肾脏和瘤胃,而后三者之间表达量差异不显著（P＞0.05）。试验证明了UCP2基因在小尾寒羊内脏组织中有广泛表达,为UCP2基因可能与免疫相关的观点提供了证据,并且说明在6～10月龄的月龄段内,UCP2基因在小尾寒羊内脏组织中的表达受月龄的影响较小。     

氟酰羟.苯甲唑等杀菌剂对草莓白粉病的防治效果比较

为筛选防治草莓白粉病的有效药剂,开展大田试验,选用3种复配药剂(200 g/L氟酰羟.苯甲唑SC、43%氟菌.肟菌酯SC、24%苯甲.烯肟SC)、1种生物药剂(0.4%蛇床子素SL)比较防治效果,同时,将200 g/L氟酰羟.苯甲唑SC分别与5% d-柠檬烯SL、80%代森锰锌WP混配,探索增效作用。结果表明,200 g/L氟酰羟.苯甲唑SC 750倍防治效果较好且安全,分别与5% d-柠檬烯SL 500倍、80%代森锰锌WP 500倍混用后,增效作用显著,但是,代森锰锌会在果面留下明显药斑,不适宜在结果期施用;43%氟菌.肟菌酯SC 1 500倍防治效果比200 g/L氟酰羟.苯甲唑SC 750倍低,差异极显著;24%苯甲.烯肟SC、0.4%蛇床子素SL防治效果较低,不适宜用作草莓白粉病防治药剂。     

CAPN3基因在草原红牛不同组织中的表达差异

钙激活中性蛋白酶（CAPN3）参与哺乳动物体内多种重要的生理生化过程,但是有关它的确切生理功能和作用机制研究较少。本研究采用实时荧光定量PCR技术检测CAPN3基因在草原红牛多种组织中的表达水平差异情况。试验结果表明,CAPN3基因在所检测草原红牛的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、十二指肠、瘤胃和背最长肌8种组织中均有表达,且在不同组织中的表达水平有所不同。草原红牛脾脏中的CAPN3基因表达量显著高于其他组织,十二指肠和瘤胃中的CAPN3基因表达量显著高于心脏、肝脏、肺脏、肾脏和背最长肌。本试验为肉牛肉质性状的改良提供了分子遗传学依据,并为深入研究草原红牛体内CAPN3基因的生物学作用及作用机制奠定了基础。     

海南番石榴园橘小实蝇种群动态与综合防治研究

2010～2012年采用甲基丁香酚灭雄和蛋白饵剂诱杀雄、雌两性成虫的方法,开展了海南番石榴园橘小实蝇 Bactrocera dordalis (Hendel) 种群动态监测与综合防治研究。结果显示,海南番石榴园6~9月橘小实蝇种群发生的2个高峰期分别在6月下旬～7月上旬、8月上旬;橘小实蝇种群密度(667m2/d诱杀橘小实蝇虫量)与番石榴果实被害率明显呈正相关;及时清园和处理虫、落果的番石榴园橘小实蝇种群发生密度比对照果园相对减少了110.72头667m2/d,二者相差约23倍;番石榴园园内与园外隔离带的橘小实蝇种群动态呈线性关系。 同时,应用诱杀技术与及时清园和处理虫、落果等农业措施相结合的方法综合防治番石榴园橘小实蝇的效果显著,在不套袋和不喷施农药的情况下3造番石榴的保果率达66.44%。     

Treatment and control by vaccination of erysipelas in farmed emus (Dromaius novo-hollandiae)

Objective To study erysipelas in farmed emus and the treatment and control of the disease by vaccination.
Design A retrospective study of field outbreaks in emus and challenge experiments in mice using field and vaccine strains of the organism.
Procedure Outbreaks of the disease were described. Field strains of the organism were identified and tested by challenge experiments in mice against commercial vaccine strains.
Results Erysipelas was characterised by sudden death in yearling emus. Deaths mainly occurred during the cold wet months. Mortalities of 6 to 10% were seen within the first 7 to 10 days of an outbreak. Clinical signs were uncommon but some birds exhibited lethargy and greenish diarrhoea. Necropsy findings included marked petechial haemorrhages on the serosal surface of the large intestine in particular, pericardial effusion and congestion and mottling of the liver. Treatment consisted of individual or mass medication with procaine penicillin, reduction of stress factors such as overcrowding, and spelling and rotation of paddocks. Isolates from two field outbreaks were identified as strain 21. Complete protection was provided by a commercial strain 2b vaccine against challenge by strain 21 field isolates in mice. Annual vaccination of birds at 4 weeks and again at 8 weeks of age appeared to control further outbreaks on farms where the disease had previously occurred and vaccination appeared to protect for at least 12 months.
Conclusion Treatment of birds with antibiotics may be feasible in the face of an outbreak. However, annual vaccination of birds with an appropriate vaccine is recommended.