马杜霉素在鸡组织中残留检测方法的研究 Ⅰ酶联免疫吸附测定(ELISA)

本文用混合酸酐法和活化酯法合成４种马杜霉素结合抗原。用其中一种作免疫原,免疫家兔产生抗体;用其余三种作包被原,探讨不同包被原用于ＥＬＩＳＡ检测马杜霉素残留时,对其灵敏度（Ｉ５０）和方法回收率的影响。试验结果表明,马杜霉素结合抗原免疫家兔制备的抗体对马杜霉素具有很高的特异性、亲合性和选择性。在间接竞争ＥＬＩＳＡ中,使用Ｍ－Ｃ６－ＯＶＡ（ＡＥ）、Ｍ－ＯＶＡ（ＭＡ）和Ｍ－ＯＶＡ（ＡＥ）作包被原时,马杜霉素标准工作曲线的Ｉ５０值分别为３２３、９７５和８８０ｎｇ／ｍｌ,这证明Ｍ－Ｃ６－ＯＶＡ（ＡＥ）作包被原能大大提高ＥＬＩＳＡ检测的灵敏度。添加回收率试验测得鸡各组织样本回收率为７７７％～１０４３％,变异系数为３８％～１８０％,检测极限为３０～８０μｇ／ｋｇ。     

提纯的马立克氏病肿瘤相关表面抗的在鸡体内的免疫应答

应用本瓜蛋白酶消化法，从马立克氏病病毒（ＭＤＶ）人工感染鸡的淋巴细胞瘤表面提取马立克氏病相关肿瘤表面抗原（ＭＡＴＳＡ）。所获得的抗原与从肿瘤细胞表面洗脱的抗ＭＡＴＳＡ抗体在ＥＬＩＳＡ中呈阳性反应。将这种抗原与白油佐剂乳化，给２０日龄鸡肌注免疫３次，应用间接ＥＬＩＳＡ对被免疫鸡的ＭＡＴＳＡ抗体进行了监测。结果表明，免疫前正常鸡的血清中无ＭＡＴＳＡ抗体存在，而用这种抗原免疫后１０天即可形成抗体应答，Ｅ     

单抗-ELISA一步法检测兔粪样中的轮状病毒

用单抗２Ｂ４包被ＥＬＩＳＡ微孔反应板，将处理后的粪样和酶标兔抗ＬａＲＶＩｇＧ同时加入包被孔内孵育，置微型振荡器上振摇，建立了检测粪样中兔轮状病毒（ＬａＲＶ）抗原的单抗－ＥＬＩＳＡ一步法快速诊断技术，与常规ＥＬＳＩＡ、病毒分离培养、电镜、荧光抗体等作了实验室和临床应用比较，结果证明单抗－ＥＬＩＳＡ一步法敏感、特异、快速、简便、适于基层临床推广应用     

Ab─ELISA和Ag─ELISA诊断骆驼伊氏锥虫感染的比较

采用四种方法：即①单克隆抗体检测抗原的酶联免疫吸附试验（Ａｇ－ＥＬＩＳＡ）②检测抗体的酶联免疫吸附试验（Ａｂ－ＥＵＳＡ）③表膜检查（ＢＣＥ）④小白鼠接种（ＭＩ），检查了肯尼亚１８３头骆驼锥虫的循环抗原，ＢＣＥ查出３７头阳性２０％），ＭＩ６０头阳性（３３％），Ａｇ－ＥＬＩＳＡ６３头阳性（３４％），Ａｂ－ＥＬＩＳＡ检出９０头阳性（４９％）。其中ＢＣＥ未能检出的２４头中，Ａｇ－ＥＬＩＳＡ检出１８头（７５％）。所有阳性头数中，Ａｇ－ＥＬＩＳＡ检出９３％，Ａｂ－ＥＬＩＳＡ９５％。根据５５头的结果，阳性与阴性之间Ａｇ－ＥＬＩＳＡＯＤ值差异极显著（Ｐ＜０．０００１），Ａｂ－ＥＬＩＳＡＯＤ值差异不显著。因此，用Ａｇ－ＥＬＩＳＡ或结合ＢＣＥ诊断伊氏锥虫感染比用ＡＢ－ＥＬＩＳＡ更理想。     

分泌抗赭曲霉素A单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用赭曲霉素Ａ（ＯＡ）－ＢＳＡ合成抗原免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，取免疫鼠脾细胞与ｓｐ２／０细胞融合，通过克隆和ＥＬＩＳＡ法筛选，建立三株泌抗ＯＡ单克隆抗体杂交瘤细胞株（３Ｃ１２，１Ｄ１２和２Ｇ７）。用间接ＥＬＩＳＡ法测定，细胞上清液抗体效价为１２８＾×（３Ｃ１２）和６４＾×（１Ｄ１２和２Ｇ７）腹水抗体效价为１０＾－７（３Ｃ１２，１Ｄ１２）和１０＾－６（２Ｇ７）。三株单抗（ＭｃＡｂ）均属ＩｇＧ类，分泌抗体     

ELISA检测兔巴氏杆菌病抗体的研究

应用ＥＤＴＡ处理和超声波裂解法提取多杀性巴氏杆菌的荚膜多糖和外膜蛋白抗原，包被酶标板，用ＨＲＰ－ＳＰＡ代替酶标抗体，建立了检测兔多杀性巴氏杆菌病抗体的间接法ＥＬＩＳＡ。试验确定抗原的包被浓度为６．０５μｇ／ｍｌ，ＨＲＰ－ＳＰＡ的适宜稀释度为１１００００，血清ＥＬＩＳＡ滴度在１４００以上判为阳性。测定了多杀性巴氏杆菌灭活菌苗免疫兔血清１０份，均呈阳性，抗体滴度在１１２８０～１４０９６０范围内呈正态分布；血清几何平均效价为１５１２０。重复４次测定１０份阳性血清，其ＯＤ值之标准差（ＳＤ）＜０．１０，变异系数（ＣＶ）＜１０．０％。本法与琼脂扩散沉淀试验相比，敏感度提高约１５７５倍。ＥＬＩＳＡ不仅敏感、特异、快速、简便，而且经济、易于重复，适于推广应用。     

牛组织中阿维菌素残留的ELISA研究

本文探讨了检测牛组织（血浆、肌肉和肝）中阿维菌素（ＡＶＭ）残留的间接竞争ＥＬＩＳＡ反应条件和样本前处理方法，并对添加样本进行了测定。竞争反应可耐受２０％（ｖ／ｖ）的甲醇。使用４″－Ｏ－（单）琥珀酰ＡＶＭ－ＯＶＡ和５－Ｏ－（单）琥珀酰ＡＶＭ－ＯＶＡ作包被原，ＡＶＭ标准液的Ｉ５０＝１．８￣４．０ｎｇ／ｍＬ，检测极限为０．０２￣０．２ｎｇ／ｍＬ。样本经甲醇一次提取和稀释后直接进行检测，各样本介质中ＡＶＭ     

快速检测鸡新城疫病毒的聚乙二醇单抗夹心ELISA试验的建立和应用

以抗鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）单抗夹心ＥＬＩＳＡ试验为基础，在６０００，建立了ＰＥＧ－ＥＬＩＳＡ法，使用此法检测临诊样品，与单抗夹心ＥＬＩＳＡ相比，时间缩短７０分钟且提高了ＯＤ４９０值，易于识别。结果表明，ＰＥＧ－ＥＬＩＳＡＩ法具有实际应用价值。ＰＥＧ能加强抗原－抗体反应的速率和强度，这种效应在固相夹心ＥＬＩＳＡ第二步表现尤其明显。ＰＥＧ的这种非特异性效应对于检测其它抗原或抗体的ＥＬＩＳＡ试验可能具有     

伊氏锥虫抗独特型抗体疫苗的研究Ⅱ．伊氏锥虫变异表面糖蛋白抗独特型抗体制备与检测

用纯化的伊氏锥虫变异表面糖蛋白（ＶＳＧ）免疫大白鼠制备出抗血清，经饱和硫酸铰盐析，ＤＥ－５２纤维素离子交换层析和Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析提取ＶＳＧ特异性多克隆ＩｇＧ抗体（Ａｂｌ）。用Ａｂｌ免疫大白鼠和家兔制备出抗独特型血清。ＥＬＩＳＡ抑制试验检测结果表明，８份大白鼠抗独特型血清的抑制率高于２５％。用正常大白鼠ＩｇＧ致敏的醛化绵羊红细胞吸收兔抗独特型血清除去异种抗体，采用Ａｂｌ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析，可从每毫升兔抗独特型血清中获得９７．４微克抗独特型抗体（Ａｂ２）。经ＥＬＩＳＡ抑制试验检测表明，提取的兔抗独特型抗体（Ａｂ２）对Ａｂｌ与ＶＳＧ的结合反应可产生明显的抑制效应，能识别Ａｂｌ的抗原结合部位，其配位的空间构型与ＶＳＧ表位具有相似性。     

禽流感病毒重组核蛋白ELISA诊断技术的研究

用表达禽流感病毒（ＡＩＶ）核蛋白基因的杆状病毒感染Ｓｆ９昆虫细胞。以其表达产物制备抗原,建立了以杆状病毒系统表达的ＡＩＶ核蛋白为抗原的禽流感间接酶联免疫吸附试验诊断技术（ｒＮＰ－ＥＬＩＳＡ）。其抗原最适包被量为０．６μｇ／孔,等检血清最适稀释度为１：２００,酶标抗体使用浓度为１：１０００。根据对１４０份ＳＰＦ鸡血清检测结果的统计分析,确定其判定标准为ＯＤ均为阴性;检测Ａ型ＡＩＶ１５个不同亚型（Ｈ１￣Ｈ１５）毒株的特异性血清均为阳性;对人工接种ＡＩＶ的ＳＰＦ鸡第３天即能检出抗体,到第１６２天试验结束时检测仍为阳性。其批内和批间重复试验的变异系数分别在２．９％￣７．２％和３．４％￣９．８％之间。对３１３８份鸡血清进行监测,ｒＮＰ－ＥＬＩＳＡ与全病毒间接ＥＬＩＳＡ与全病毒间接ＥＬＩＳＡ（ＡＩＶ－ＥＬＩＳＡ）、琼脂扩散     

现代诊断技术在兽医学上的应用及其进展

1　免疫酶技术 (ＥＩＡ)ＥＩＡ是根据抗原 -抗体结合的特异性 ,以酶作标记物 ,酶对底物具高效催化作用的原理而设计 ,既可用于抗原的检查 ,也常用于血清抗体的检测。1 .1　酶联免疫吸附试验 (ＥＬＩＳＡ)ＥＬＩＳＡ是应用最广泛的免疫酶技术 ,包括间接法、夹心法、竞争法等。自ＶＯＬＬＥＲ和ＢＩＤＷＥＬＬ(1 975 )首先报道了应用间接ＥＬＩＳＡ方法检测病毒特异性抗体以来 ,ＥＬＩＳＡ方法已普遍应用于传染病的流行病学普查、抗体水平的评价以及疫苗质量的监控和标化等 ,迄今为止大多数动物病原体均已发展或报道了ＥＬＩＳＡ方法的研究与…     

检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体ELISA方法的建立

本试验通过差速离心法和非线性蔗糖密度梯度离心法纯化猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）。经三氯－三氟乙烷处理后,作为ＥＬＩＳＡ试验的标准抗原,并建立了检测ＰＲＲＳＶ抗体ＥＬＩＳＡ方法。该方法与ＩＦＡ、ＩＰＭＡ和国外同类商品化试剂盒进行了对比试验,表明该方法具有敏感性高、特异性好的特点,是一种快速准确检测ＰＲＲＳＶ抗体的方法。间接ＥＬＩＳＡ方法在敏感性上要优于ＩＦＡ和ＩＰＭＡ》     

应用马立克氏病肿瘤细胞表面洗脱的抗体制备肿瘤表面抗原的内映像

从马立克氏病病毒（ＭＤＶ）人工感染鸡的淋巴细胞瘤表面洗脱抗马立克氏病相关肿瘤表面抗原（ＭＡＴＳＡ）的抗体。以此作为Ａｂ１免疫家兔，成功地制备了ＭＡＴＳＡ的内映像（Ａｂ２β）。将纯化的Ａｂ２β与白油佐剂乳化，给３０日龄鸡肌注免疫，应用间接ＥＬＩＳＡ对免疫鸡ＭＡＴＳＡ抗体的消长进行了监测。结果表明：正常鸡的血清中无ＭＡＴＳＡ抗体的存在，而用这种Ａｂ２β于第１次免疫后１０ｄ即可形成明显的抗体应答，ＥＬＩＳＡ的ＯＤ值（ｘ）为０．２０；至第３次免疫后１０ｄ，ＯＤ值（ｘ）为０．３３，达峰值，以后则呈下降趋势。研究结果表明，应用来自ＭＤＶ感染鸡肿瘤细胞表面的抗ＭＡＴＳＡ的抗体，可以用作肿瘤表面抗原内映像的制备，从而为抗肿瘤独特型疫苗的研究提供了一种新途径     

单抗—ELISA一步法检测兔粪样中的轮状病毒

用单抗２Ｂ４包被ＥＬＩＳＡ微孔反应板，将处理后的粪样和酶标兔抗ＬａＲＶＩｇＧ同时加入包被孔内孵育，置微型振荡器上振摇，建立了检测粪样中兔轮状病毒抗原的单抗－ＥＬＩＳＡ一步法快速诊断技术，与常规ＥＬＩＳＡ，病毒分离培养，电镜，荧光抗体等作了实验室和临床应用比较，结果证明单抗－ＥＬＩＳＡ－一步法第三特异，快速，简便１，适于基层临床推广应用。     

单抗介导的斑点ELISA检测鸡传染性支气管炎病毒的研究

用群特异性的单克隆抗体作第一抗体,用酶标兔抗体ＩＢＶＩｇＧ作第二抗体,建立夹心法Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ程序检测鸡传染性支气管炎病毒抗原。试验表明,本程序检测ＩＢＶ抗原高度敏感性和特异性。最低抗原检出量为０．５μｇ,约１００个气管环半数感染量（１００ＴＯＣＩＤ５０）,阳性检出率为９６％。     

检测禽白血病／肉瘤病毒ELISA双抗体法的研究

用差速离心和非线性蔗糖密度梯度离心法提纯了感染雏鸡血浆中禽成髓细胞性白血病病毒（ＡＭＶ），并用ＳＤＳＰＡＧＥ法提取了ＡＭＶ的结构蛋白Ｐ２７％ｇａｇ，以纯化的Ｐ２７＾ｇａｇ高免家兔，制备了兔抗Ｐ２７＾ｇａｇ的禽白血病／肉瘤病毒群特异性抗体。选用兔抗Ｐ２７＾ｇａｇＩｇＧ作为包被抗体。该抗体和辣根过氧化物酶的结合物作为酶标抗体，以聚苯乙烯微量板为固相载体，建立了监测禽白血病的ＥＬＩＳＡ双抗体法，经试验柱     

单克隆抗体捕捉法ELISA检测DHV抗体的研究

以ＤＨＶ单克隆抗体包被反应板，以粗提病毒作为抗原，建立了检测ＤＨＶ抗体的单抗捕捉法ＥＬＩＳＡ，经与间接ＥＬＩＳＡ作平行试验，二者检测符合率为１００％。     

单克隆抗体捕捉法ELISA检测DHV抗体的研究

以ＤＨＶ单克隆抗体包被反应板，以粗提病毒作为抗原，建立了检测ＤＨＶ抗体的单抗捕捉法ＥＬＩＳＡ，经与间接ＥＬＩＳＡ作平行试验，二者检测符合率为１００％。     

间接酶联免疫吸附试验检测禽流感抗体的最佳工作条件

禽流感病毒（ＡＩＶ）感染的鸡胚尿囊液经差速离心后,再经蔗糖密度梯度离心,提纯ＡＩＶ,纯化的ＡＩＶ经ＮＰ４０处理并反复冻融,即为ＡＩＥＬＩＳＡ抗原,用该抗原包被聚苯乙烯微量反应板。将健康鸡ＩｇＧ提纯后免疫兔,制备兔抗鸡ＩｇＧ,用过碘酸钠法制备辣根过氧化物酶标记的兔抗鸡ＩｇＧ。确立了间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测禽流感抗体的最适工作条件,即：抗原包被浓度１．９～３．８μｇ／ｍｌ,每孔１００μｌ,４℃冰箱过夜;用含０．５％牛血清白蛋白（ＢＳＡ）的磷酸盐缓冲液,３７℃封闭６０分钟;待检血清最佳稀释度为１８０～１６４０,作用６０分钟;酶标抗体作１２０００稀释,作用６０分钟。根据对５２份ＳＰＦ鸡血清的检测结果制定了判定标准。     

检测减蛋综合征抗体间接ELISA法的建立及应用

用蔗糖不连续梯度纯化的减蛋综合征＊（ＥＤＳ－７６）病毒包被ＥＬＩＳＡ板，建立了检测ＥＤＳ－７６抗体的间接ＥＬＩＳＡ法。经测定，抗原最适包被浓度为１μｇ／ｍＬ，待检血清最佳稀释度为１：２００，以ＯＤ４９０〉０．３，Ｐ／Ｎ〉２．１判为阳性结果。对４个鸡场的１２０份鸡血清进行检测，阳性率分别为０，４３．３３％，８０．００％和９３．３３％。