BVD—MDV细胞毒的快速粗提

采用聚乙二醇（ＰＥＧ２００００）沉淀法提取了２批牛病毒性腹泻－粘膜病病毒（ＢＶＤ－ＭＤＶ）细胞毒，经毒价及ＯＤ值测定，浓缩病毒较之浓缩毒力明显增强，病毒含量及纯度均有较大提高，将其作为检测抗原及免疫抗原，应用以ＢＶＤ－ＭＤＶ单克隆抗体的研制中，效果均较理想，试验证明，该方法具有简便，省时，费用低，实用等优点，适合基层推广应用。     

免疫过氧化物酶法快速检测牛病毒性腹泻—粘膜病病毒抗原

用间接免疫过氧化物酶法（ＩＩＰ），对非细胞致病性牛病毒性腹泻－粘膜病（ＢＶＤ－ＭＤ）病毒持续感染的４２头牛血清经牛胎儿肌细胞培养检出了ＢＶＤ－ＭＤ病毒抗原，１００头外观健康牛的血清，经牛胎儿肌细胞培养未检出ＢＶＤ－ＭＤ病毒抗原，该结果与用干扰法获得的结果一致。而且用ＩＩＰ在血沉标黄层涂片中也检出了ＢＶＤ－ＭＤ病毒抗原，用亲和系－生物素过氧化物酶复合物方法在福尔马林固定的组织切片中也检出了ＢＶＤ－Ｍ     

牛病毒性腹泻病毒现地分离株与疫苗株的抗原差异

用单克隆抗体（ＭＡｂ）作酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）、免疫荧光试验（ＩＦＡ）、病毒中和（ＶＮ）试验及兔疫沉淀试验证明了牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）致细胞病变株８７－２５５２（现地分离）与ＮＡＤＬ和Ｓｉｎｇｅｒ（原型株）之间的抗原差异。两个抗ＢＶＤＶ８７－２５５２株的ＭＡｂ（Ｄ１１和Ｂ７）能强烈中和现地分离株，并对该病毒的４８－ＫＤａ糖蛋白呈特异性。这两个ＭＡｂ有不同的亚型，Ｄ１１为免疫球蛋白Ｇ１     

鸡马立克氏病（MD）与淋巴细胞糖皮质激素受体（GR）相关性研究：II.…

运用ＢＡ免疫组化技术与ＨＥ染色进行对比研究，探讨了实验性攻击马立克氏病病毒（ＭＤＶ）后鸡体内病毒抗原分布与病变特点之间的关系。结果表明，ＭＤＶ能引起胸腺髓质区、脾动脉周围淋巴鞘、法氏囊生发中心淋巴细胞坏死、网状细胞增生，开逐渐在全身各部位产生多发性淋巴样细胞增生灶。病毒抗原阳性反应与网状细胞增生明显相关。ＭＤＶ抗原阳性细胞主要包括网状细胞，浓缩碎裂的淋巴细胞及浸润的淋巴样细胞，这些细胞浆和胞核均哇     

检测牛病毒性腹泻－粘膜病病毒抗原试剂盒的研制及应用

本研究在双抗体夹心ＥＬＩＳＡ检测牛病毒性腹泻－粘膜病病毒（ＢＶＤ－ＭＤＶ）抗原的基础上，研制了检测ＢＶＤＭＤＶ抗原的试剂盒。经试验证明特异、敏感，４℃保存６个月检测结果稳定；与原方法比较，易于保存及运输，使用方便，为商品化推广应用提供了前提。     

鸡马立克氏病（MD）与淋巴细胞糖皮质激素受体（GR）相关性研究Ⅱ．病毒抗原定位与病变特点相关性研究

运用ＢＡ免疫组化技术与ＨＥ染色进行对比研究，探讨了实验性攻击马立克氏病病毒（ＭＤＶ）后鸡体内病毒抗原分布与病变特点之间的关系。结果表明，ＭＤＶ能引起胸腺髓质区、脾动脉周围淋巴鞘、法氏囊生发中心淋巴细胞坏死、网状细胞增生，并逐渐在全身各部位产生多发性淋巴样细胞增生灶。病毒抗原阳性反应与网状细胞增生明显相关。ＭＤＶ抗原阳性细胞主要包括网状细胞、浓缩碎裂的淋巴细胞及浸润的淋巴样细胞。这些细胞胞浆和胞核均呈强阳性着染。     

马立克氏病病毒囊膜糖蛋白B抗原Ⅰ型特异性和群共同性决定簇的单克隆抗体

用能表达马立克氏病病毒（ＭＤＶ）糖蛋白Ｂ（ｇＢ）的重组杆状病毒感染的Ｓｆ９细胞免疫小鼠，制备针对ＭＤＶｇＢ的单克隆抗体。以Ⅰ型马立克氏病病毒ＧＡ株感染的鸡胚成纤维细胞作为检测抗原，同时以免疫荧光试验（ＩＦＡ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）来筛选杂交瘤细胞，结果获得了ＩＦＡ和ＥＬＩＳＡ均为阳性的２株单克隆抗体细胞株，定名为ＢＡ４和ＢＤ８。在ＩＦＡ和免疫沉淀试验中，单抗ＢＤ８与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型ＭＤＶ均呈阳性反应；单抗ＢＡ４只对Ⅰ型ＭＤＶ（包括ＣＶＩ９８８疫苗株）呈阳性反应。免疫沉淀反应进一步确证２株单抗识别的是ＭＤＶ糖蛋白Ｂ抗原。     

鹿感染牛病毒性腹泻－粘膜病病毒的调查

应用双抗体夹心ＥＬＩＳＡ对吉林省某地区育成梅花鹿、育成马鹿及马鹿感染牛病毒性腹泻－粘膜病病毒（ＢＶＤ－ＭＤＶ）进行了调查．结果育成梅花鹿的带毒率为３４．１％（２８／８２）；育成马鹿的带毒率为１９，６％（１８／９２）；马鹿带毒率为４４．４％（８／１８）。应用电子显微镜对部分ＥＬＩＳＡ阳性及阴性样品进行负染观察、结果ＥＬＩＳＡ阳性样品中均见有ＢＶＤ－ＭＤＶ粒子．ＥＬＩＳＡ阴性样品中均未观察到ＳＶＤ－ＭＤＶ粒子．本试验结果表明，鹿也可感染ＢＶＤ－ＭＤＶ，其在流行病学中的意义有待于进一步研究。     

牦牛病毒性腹泻—粘膜病病毒的分离及鉴定

一九八三年从四川某地区一牦牛分离到牛病毒性腹泻－粘膜病（ＢＶＤ／ＭＤ）病毒，定名为牦牛Ⅰ号毒株。该病毒可在牛肾或牛睾丸原代细胞上繁殖继代，但均不产生可见病变（ＣＰＥ），用荧光抗体染色检查，可见到ＢＶＤ／ＭＤ特异性荧光，其滴度在１Ｏ￣（－３）－１０￣（－５）之间。用细胞培养第１５代病毒做系列试验表明，该病毒为ＲＮＡ病毒，对乙醚敏感，不耐酸，对胰蛋白酶有一定抗力；回归黄牛，血清中和抗体呈ＢＶＤ／ＭＤ阳性。     

用放射免疫沉淀试验比较不同IBDV毒株的中和表位

用单克隆抗体（ＭＡｂ）对传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）不同毒株中和表位的相关性进行了分析。ＭＡｂ Ｂ６９能中和同源病毒Ｄ７８株，但不中和ＭＤ及ＩＢＤＶ Ｄｅｌ－Ａ变异株。而ＭＡｂ ３３Ｅ８和Ｒ６３能中和Ｄ７８株和ＭＤ及Ｄｅｌ－Ａ变异株。在体外将Ｄｃｌ－Ａ株ＶＰ２基因和一个１０＾３ｂｐ片段的ｃＤＮＡ克隆进行翻译，得到６种多肽，它们代表了一个全长产物（３５．５ｋｄ）和５份切割片段。用ＭＡｂ Ｂ６９、３     

FMDV在BHK21细胞扩增后FMDV 140 S抗原的测定

本文报告了用蔗糖密度梯度离心和光密度分析相结合口蹄疫病毒（ＦＭＤＶ）在单层ＢＨＫ２１细胞中扩增后，其中ＦＭＤＶ １４０ Ｓ抗原浓度，并同时分析了经ＢＥＩ（二乙烯亚胺）灭活后，这种抗原含量的改变。结果表明，Ｏ型ＦＭＤＶ在单层ＢＨＫ２１细胞中增殖后，其ＦＭＤＶ １４０ Ｓ抗原浓度降至０．９μｇ／ｍｌ。     

PCR法检测血清I型马立克氏病病毒及其敏感性试验的研究

以人工合成的针对血清Ｉ号马立克氏病病毒（ＭＤＶ１）Ａ抗原基因（ｇＡ）部分序列的两端寡聚核苷酸为聚合酶链反应（ＰＣＲ）的引物，分别对马立克氏病病毒血清Ｉ型（京－１株，ＭＤ１１／７５Ｃ株）；２型（ＳＢ－１株）；３型（火鸡疱疹病毒的ＦＣ１２６株）毒株和ＧＡ株ＢａｍＨＩ Ｂ片段的ＰＡＣＹ１８４克隆重组质粒ＤＮＡ进行基因扩增反应及其敏感性试验。结果表明，该引物不仅对ＭＤＶ１具有较强的特异性，而且由此引物引导     

禽白血病／肉瘤病毒群特异性抗原P_（27）~（gag）的分离和纯化

本试验用差束离心和非线性蔗糖密度梯度离心法从感染雏鸡血浆中分离和提纯了禽成髓细胞性白血病病毒（ＡＭＶ）。并以ＳＤＳ法裂解病毒，用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析ＡＭＶ结构蛋白成分，最后选用（ＬＫＢ）水平板式电泳系统，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ比较大量地分离提纯了Ｐｇａｇ２７。用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和琼脂扩散试验检验其抗原活性，并且用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定其分子量和纯度。结果表明，提纯的病毒蛋白具有抗原活性，且达到电泳纯。     

马立克氏病病毒囊膜糖蛋白B抗原I型特异性和群共同性决定簇的…

用能表达马立克氏病病毒（ＭＤＶ）糖蛋白Ｂ（ｇＢ）的重组杆状病毒感染的Ｓｆ９细胞免疫小鼠，制备针对ＭＤＶｇＢ的单克隆抗体，以Ｉ型马立克氏病病毒ＧＡ株感染的鸡胚成纤维细胞作为检测抗原，同时以免疫荧光试验（ＩＦＡ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）来筛选杂交瘤细胞，结果获得了ＩＦＡ和ＥＬＩＳＡ均为阳性的１株单克隆抗体细胞株，定义名ＢＡ４和ＢＤ８。在ＩＦＡ和免疫沉淀试验中，单抗ＢＤ８与Ｉ，ⅡⅢ型ＭＤＶ均呈阳     

用单抗介导的荧光抗体技术检测鸡尿囊细胞内传染性支气管炎病毒的研究

用传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）Ｈ１２０、Ｈ５２、Ｍ４１、ＡＲＫ、澳大利亚Ｔ株、野外分离株ＲＳ、ＲＹ及鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）、鸡传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ），鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）、减蛋综合症病毒（ＥＤＳＶ）等分别接种９日龄ＳＰＦ鸡胚，３７℃孵育４８小时后，将其尿囊液离心，沉淀用ＰＢＳ悬浮，涂片，用抗ＩＢＶ单抗ＭＣ作一抗、进行间接荧光抗体检测。结果：Ｈ１２Ｏ、Ｈ５２、Ｍ４１“ＡＲＫ、Ｔ株及ＲＳ、ＲＹ均显阳性，而ＮＤＶ、ＩＢＤＶ、ＩＬＴＶ、ＥＤＳＶ均为阴性。结果表明、用此法检测鸡胚尿囊液中ＩＢＶ．具有快速、敏感、特异的优点。     

提高鸡传染性支气管炎病毒血凝抗原滴度途径及抗原灭活

将７株传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）标准株（Ｍ４１、Ｈ１２０、Ｈｏｌｔｅ、Ｇｒａｙ、Ｃｏｎｎｅｃｔｉｃｕｔ、Ｉｏｗａ６０９和Ｔ株）和６株分离株（ＮＩＢＶ、ＧＩＢＶ、Ｍ、ＳＨ、Ｊ和Ｈ株）分别接种于鸡胚，收获尿囊液，经浓缩后，用魏氏梭菌培养液处理，制备血凝抗原。其中，Ｈ１２０株血凝滴度最高，Ｔ、Ｍ、Ｊ和Ｈ株无血凝性。应用含有不同滴度ＩＢＶ母源抗体的鸡胚增殖病毒制备抗原，效价与用ＳＰＦ鸡胚增殖病毒制备的抗原效价一致。尿囊液经反复冻融后再制备抗原会使血凝价降低。抗原分别用甲醛、高碘酸钠、硼氢化钾和ＳＤＳ灭活，其中甲醛灭活效果最理想。抗原对氯仿敏感，对乙醚稳定。适宜浓度的Ｎａ＋、Ｍｇ２＋可显著提高抗原的血凝性     

光敏生物素标记EDSV—DNA探针检测鸡减蛋综合症（EDS）的研究

应用光敏生物素标记ＥＤＳＶ－ＤＮＡ与ｐＵＣ１９重组质粒ＤＮＡ做探针，检测人工发病减蛋综合症蛋鸡的粪便，蛋，输卵管样品，以新城疫病毒（ＮＤＶ），传染性病毒（ＩＢＤＶ），传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ），包涵体肝炎病毒（ＩＢＨＶ）作对照。实验结果显示：探针能特异地检出ＥＤＳ病鸡粪便，输卵管，蛋清样品中的病毒，与ＮＤＶ，ＩＢＤＶ，ＩＢＶ及ＩＢＨＶ均呈阴性反应。探针灵敏度达１０ｐｇＥＤＳＶ－ＤＮＡ。     

单抗免疫过氧化物酶技术检测鸡传染性支气管炎病毒

以抗鸡传染性支气管病毒（ＩＢＶ）核衣壳蛋白（Ｎ）的单抗株６ＤＨ８作为一抗,以辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠ＩｇＧ作为二抗,建立了检测石蜡切片中ＩＢＶ抗原的单抗免疫过氧化物酶技术（Ｍｃ－ＩＰ）,并对人工攻毒鸡及临床ＩＢＶ感染疑似鸡进行了检测。在ＩＢＶＭ４１株人工攻毒鸡,用该技术于１～１２ｄ从气管、２～７ｄ从肾脏可以检测到ＩＢＶ抗原,阳性染色集中于气管粘膜上皮细胞及肾小管上皮细胞胞浆;临床疑为ＩＢＶ感染的病鸡,以Ｍｃ－ＩＰ技术和单抗免疫荧光试验（Ｍｃ－ＩＦＡ）同时进行检测,结果阳性率分别为９０．３％及８３．９％。     

马立克氏病病毒（MDV）糖蛋白D基因的分离克隆,定序及其在大肠杆…

用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术，从马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ＧＡ株感染的鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）基因组ＤＮＡ中扩增出ＭＤＶ糖蛋白（ｇＤ）抗原基因１２０９ｂｐ编码序列。将该ＰＣＲ扩增产物于ＥｃｏＲＩ和ＫｐｎⅠ位点克隆进行ｐＵＣ１８质粒载体中。将ｇＤ重组ｐＵＣ１８质粒ＤＮＡ用Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ（Ｄｉｇ）标记后，在Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ中，该探针能识别ＭＤＶ基因组ＤＮＡ的Ｂａｍ ＨＩ－Ａ克隆中的Ａ     

用RT—PCR检测犬外周血液单核细胞中犬瘟热病毒核衣壳蛋…

为了迅捷地诊断犬瘟热病毒（ＣＤＶ）感染，本研究采用及转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术，检测犬外周血液核细胞（ＰＢＭＣ）中ＣＤＶ核衣壳蛋白（ＮＰ）基因。以两套引物针对ＣＤＶＯｎｄｅｒｓｔｅｐｏｏｒｔ毒株ＮＰ基因的两个片段。应用ＲＴ－ＰＣＲ〉以６株ＣＤＶ毒株感染Ｖｅｒｏ细胞，用ＣＤＶ人工感犬染的的ＰＢＭＣ，在这两处细胞的提的ＲＮＡ中，手增ＮＰ基因片段，取得了较好的结果。在３２例临床疑为ＣＤＶ感染