鲤肠道对L-甲硫氨酸和L-苯丙氨酸的离体吸收动力学

采用离体灌注试验系统和茚三酮对氨基酸显色的试验方法,定量分析了鲤鱼肠道壁对氨基酸吸收和跨壁运输量,在相同的实验环境下,分别研究鲤鱼肠道对对L-甲硫氨酸和L-苯丙氨酸的吸收转运量。结果表明,在60 min内草鲤鱼道可对灌流液的氨基酸进行持续的吸收转运,并在肠道外积累;当肠道内灌流氨基酸浓度逐渐增加时,肠道外培养液中氨基酸的浓度与其起始浓度呈正相关变化,并未出高浓度氨基酸对吸收转运的“抑制”效应;通过对吸收转运量达到最大值时试验氨基酸的浓度与吸收转运量的比较,以及在氨基酸吸收转运量随时间的变化规律等的比较分析表明,鱼肠道对L-甲硫氨酸和L-苯丙氨酸的吸收。结果表明,鲤鱼肠道能有效地吸收、运输L-甲硫氨酸和L-苯丙氨酸。鲤鱼肠道对L-甲硫氨酸和L-苯丙氨酸的吸收曲线符合Michaelis-Menten方程。两种氨基酸的吸收动力学方程分别为：1/V =0.1251×1/[S] + 0.0524（R2=0.9781,P<0.05）和1/V=0.1887×1/[S]+0.0288（R2=0.9762,P<0.05）,动力学参数为：L-甲硫氨酸：Vmax=19.08µmol/g•min,Kmax=2.39mmol/L;L-苯丙氨酸：Vmax=34.72µmol/g•min,Kmax=6.55mmol/L。吸收动力学特征分析表明：鲤鱼肠道对两种氨基酸的吸收是一种逆浓度、需要转运载体的主动吸收方式,且对不同的氨基酸有不同的吸收、运输特异性,鲤鱼肠道对L-甲硫氨酸的吸收率和跨壁运输能力均强于L-苯丙氨酸（P<0.05)。     

草鱼肠道对10种必需氨基酸的跨壁运输量

采用离体灌注实验系统和茚三酮对氨基酸显色的实验方法，对跨过草鱼肠道壁的氨基酸进行定量分析，在相同的实验环境下，分别研究草鱼肠道对lO种必需氨基酸的吸收转运量。结果表明，在60min内草鱼肠道可对灌流的氨基酸进行持续的吸收转运，并在肠道外积累；当肠道内灌流氨基酸浓度逐渐增加时，肠道外只有苏氨酸的浓度与其起始浓度呈正相关变化，其他9种氨基酸在高浓度(10．0mmol／L)时的吸收转运量均显著下降，表现出高浓度氨基酸对吸收转运的“抑制”效应；通过对吸收转运量达到最大值时实验氨基酸的浓度与吸收转运量的比较，以及在氨基酸吸收转运量随时间的变化规律等的比较分析表明，l0种氨基酸在肠道吸收、转运量的变化行为特征有一些共性，也有氨基酸种类特异性。总体表现为，草鱼肠道对苏氨酸、异亮氨酸和亮氨酸等具有很高的吸收转运能力。而对精氨酸、苯丙氨酸、组氨酸等的吸收、转运能力较差。     

鲇离体肠道对亮氨酸和苯丙氨酸的吸收

采用外翻肠囊和茚三酮显色法研究了鲇离体肠道对L-亮氨酸(leu)和L-苯丙氨酸(phe)的吸收转运量。结果表明,在一定的氨基酸浓度范围内,鲇离体肠道对L-亮氨酸(leu)和L-苯丙氨酸(phe)的吸收量随着其浓度的升高而增加;鲇对L-亮氨酸(leu)的吸收量高于L-苯丙氨酸(phe)。     

溴化钠对鲤生长、甲状腺激素的影响及其在体内的蓄积

水体中添加不同浓度的溴化钠(NaBr)对鲤进行试验,分别在15、30和45d进行生长速度测定和组织蓄积研究,并在45d对甲状腺激素进行测定。研究发现,NaBr对鲤生长有促进作用,其中浓度为15mg·L-1的NaBr试验组促进作用最显著(P<0.05);NaBr影响甲状腺激素水平,浓度为15mg·L-1的NaBr试验组含量最高(P<0.01);鲤各组织中肝和皮的溴蓄积量较高,而肾在各浓度试验组均保持较高水平,浓度为25mg·L-1NaBr时肌肉中溴蓄积量为72.40mg·L-1;添加NaCl对鲤组织的溴蓄积量影响显著(P<0.01)。水体中NaBr含量低于25mg·L-1时,对淡水水生生物是安全的,所养殖生物中溴蓄积量符合食品卫生标准。     

盐碱环境下青海湖裸鲤肠道HCO-3分泌相关基因表达差异

以青海湖裸鲤(Gymnocypris przewalskii)为研究对象,采用半定量和定量PCR法研究HCO-3分泌相关基因SLC4(solute carrier family 4)和SLC26(solute carrier family 26)家族slc4a1、slc4a2、slc4a4和slc26a6基因组织分布情况,并对不同盐碱环境下肠道中SLC基因家族的表达情况进行定量分析,揭示青海湖裸鲤适应盐碱环境的肠道调节机制。结果表明,slc4a1、slc4a2、slc4a4和slc26a6基因在青海湖祼鲤鳃、肝脏、肾脏和肠道等多个组织中均有表达,且在肠道中的表达量较高,其中slc26a6在肠道中高表达,而在鳃中表达量极低,表现出组织特异性;在碱度组[盐度1.31±0.02,碳酸盐碱度(30.66±0.08)mmol·L-1]、盐度组[盐度15.02±0.02,碳酸盐碱度(2.12±0.05)mmol·L-1]和湖水组[盐度14.84±0.03,碳酸盐碱度(29.57±0.11)mmol·L-1]青海湖裸鲤肠slc4a1、slc4a2、slc4a4和slc26a6基因的表达量在胁迫4 d过程中均呈现出先升高后回落的现象,其中湖水组裸鲤肠SLC4、SLC26家族基因表达量上调最为明显,尤其是slc26a6基因表达量最高上升为对照组的4.9倍,同时,湖水组裸鲤直肠排泄HCO-3浓度也最高,说明盐碱环境下青海湖裸鲤通过肠道Cl–/HCO-3交换子(slc4a1、slc4a2、slc26a6)、Na+–HCO-3联合转运子(slc4a4)分泌和排泄机体内积累的碱,这一调节途径有助于青海湖裸鲤补偿因水环境中盐碱度升高而造成的渗透及酸碱失衡。     

鲤肠道sglt1基因的表达与抗体制备

钠/葡萄糖共转运载体1(sodium/glucose cotransporter 1,Sglt1)是协助葡萄糖吸收的主要蛋白。实验首先采用RT-PCR获取sglt1基因全长,克隆至PGME-T载体进行序列及免疫原性分析,选择长度为92个氨基酸(544～637)的多肽作为目的片段(sglt1-P)),扩增sglt1-P,引入双酶切位点EcoRⅠ和HindⅢ后,连接至pET-32a(+)上,构建表达载体pET-32a(+)-sglt1-P,转化至E.coli Rosetta中,获得重组基因工程菌,通过IPTG诱导表达,获得目标多肽,并以此为抗原制备Sglt1特异性抗体。SDS-PAGE电泳分析表明,目标多肽分子量约为30 ku。采用耳缘静脉结合皮下注射,免疫新西兰长耳兔,免疫总时长为38 d。制备了鲤Sglt1抗体,ELISA测得效价为1∶105;免疫组化结果表明,抗体具有较高亲和力和特异性,可以应用于鲤Sglt1的表达定位研究。该抗体的获得为鲤肠道Sglt1表达及转运活性的系统研究奠定了基础,同时,获取的Sglt1抗体亦可用于其它鱼类Sglt1转运蛋白表达定位和定量研究。     

L-肉碱对固始鸡雏鸡饲养效果的影响

从购进的3000只1日龄固始鸡鸡苗中人工挑选大小均匀、健康无病的鸡苗300只,随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ3个组,每组均以玉米—豆粕型饲料为基础日粮。Ⅲ组为对照组,Ⅰ、Ⅱ组为试验组,分别在基础日粮中添加L-肉碱0.2%和0.5%;3个组均分前期0～5周和后期6～10周进行试验,探讨L-肉碱对固始鸡雏鸡饲养效果的影响。试验结果表明:饲料中不同L-肉碱水平对固始鸡的成活率和健康水平影响不大,前后期Ⅰ、Ⅱ组日增重分别比对照组Ⅲ组提高3.9%、5.6%,差异不显著P>0.05;饲料报酬分别提高3.60%、5.83%前期和4.10%、5.46%后期。该结果说明在饲料中添加L-肉碱对提高固始鸡日增重和饲料报酬均有一定效果。     

环丙沙星在鲤体内吸收、代谢和生物利用度

为评价环丙沙星在水生动物疾病防治上的应用,按10mg·kg~(-1)的剂量分别给鲤静注乳酸环丙沙星水溶液、口服乳酸环丙沙星水溶液、口服乳酸环丙沙星饲料糊。用高效液相色谱测定血浆中药物浓度,用MCPKP药代动力学程序处理药时数据,口服乳酸环丙沙星水溶液和口服乳酸环丙沙星饲料糊的生物利用度分别为10.25％和6.22％。静注给药的药时数据符合无吸收三室开放模型,主要药物代谢动力学的参数如下:t_(1/2α)=0.16h、t_(1/2)π=0.86h、t_(1/2β)=16.47h、V_1=0.10 L·kg~(-1)、Vb=3.03 L·kg~(-1)、Cl_B=0.12 L·kg~(-1)·h~(-1),环丙沙星在鲤体内分布广泛,排泄较慢;口服乳酸环丙沙星水溶液、口服乳酸环丙沙星饲料糊的药时数据均符合具有一个滞后时间的一级吸收二室开放模型;口服乳酸环丙沙星水溶液的主要药物代谢动力学的参数为:t_(1/2α)=0.31h、t_(1/2β)=6.47h、C_(max)=2.14μg·mL~(-1)、T_(max)=0.44h;口服乳酸环丙沙星饲料糊的主要药物代谢动力学的参数为:t_(1/2α)=0.53h、t_(1/2β)=14.47h、C_(max)=0.70μg·mL~(-1)、T_(max)=1.10h,说明鲤口服乳酸环丙沙星水溶液后吸收该药的速度比口服乳酸环丙沙星饲料糊快。从该药的生物利用度结果看,由于环丙沙星在鲤体内的吸收利用程度较低,所以应用该药治疗鲤     

企鹅珍珠贝GLUT1基因全长cDNA克隆及其对葡萄糖的表达响应

葡萄糖转运蛋白(GLUTs)是能量代谢的关键因子,为了探索GLUT1(glucose transporter type1)在企鹅珍珠贝(Pteria penguin)中的功能,开展了企鹅珍珠贝GLUT1基因的克隆与功能研究。利用RACE技术克隆出企鹅珍珠贝GLUT1基因,并命名为Pp GLUT1。该基因c DNA全长为2 068 bp,编码522个氨基酸,有2个跨膜螺旋区,N端和C端都在胞质侧,分子量为57.226 4 k D,理论等电点为5.17。不同组织荧光定量结果表明,在肠和外套膜中表达量最高,闭壳肌中的表达量显著低于其他组织。0.5 g·m L-1的高质量浓度葡萄糖注射实验表明,在注射后30 min内,肠Pp GLUT1表达量升高,在30 min之后表达量逐渐降低,注射后第2小时表达量最低。不同浓度葡萄糖注射实验表明,当葡萄糖质量浓度为0.1~0.4 g·m L-1时,Pp GLUT1表达量逐渐上升;质量浓度为0.4g·m L-1时,Pp GLUT1表达量最高;大于0.4 g·m L-1之后,表达量逐渐降低。上述结果表明,企鹅珍珠贝Pp GLUT1主要在肠和外套膜表达,并对葡萄糖注射有表达响应,可能在上述组织的葡萄糖转运过程中发挥作用。     

L-苹果酸对吉富罗非鱼肠道结构功能及肝脏TCA循环效率的影响

实验选取体质量为(37.94±0.09)g吉富罗非鱼幼鱼420尾,随机分为7个处理(每个处理3个重复,每个重复20尾鱼),分别饲喂添加0(对照)、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0和32.0 g/kg L-苹果酸的饲料,进行为期154 d的生长实验,研究L-苹果酸对罗非鱼肠道组织结构和功能及肝脏TCA循环效率的影响。结果发现,随着L-苹果酸水平的增加,前肠和中肠绒毛高度、密度、肌层厚度均在16.0 g/kg组达到最大值且显著高于对照组(P0.05);后肠绒毛高度、密度和肌层厚度逐渐降低(P0.05)。肠道淀粉酶和脂肪酶活性均在1.0 g/kg组达到最大值且显著高于对照组(P0.05);肠道蛋白酶、肝脏ATP含量随着L-苹果酸水平的增加逐渐升高(P0.05);肠Na+-K+-ATP酶活力、肠表皮生长因子(EGF)和肠表皮生长因子受体(EGFR)含量在16.0 g/kg组达到最高值;肝脏柠檬酸合酶活力在8.0 g/kg到达最大值。研究表明吉富罗非鱼饲料中适量添加L-苹果酸(1.0~8.0 g/kg),能改善罗非鱼前肠和中肠的形态结构,促进肠粘膜上皮细胞的增殖,提高肠消化和吸收能力,同时提高肝脏TCA循环效率。     

Estimation of variation of virulence of Renibacterium salmoninarum by survival analysis of experimental infection of salmonid fish

The variation of virulence of Renibacterium salmoninarum , the causative agent of bacterial kidney disease (BKD) in salmonid fish, was studied by infecting rainbow trout, Oncorhynchus mykiss (Walbaum), with two isolates (strains 325 and 932) from diseased Atlantic salmon, Salmo salar L., and one isolate (strain 4366) from an apparently healthy Atlantic salmon. Coho salmon, Oncorhynchus kisutch (Walbaum), were injected with the strain 932 to estimate difference in fish species resistance. Fish were removed by random sampling for other study purposes, a study design possible with analysis of lifetime distributions incorporating both sampling-, death- and survival-times. At the end of the experiment, the rainbow trout infected with strains 325, 932 and 4366 had a survival probability of 33%, 51% and 72%, respectively. The coho salmon infected with strain 932 had a 26% survival probability. The strain differences were significant according to the log-rank test, and the risk ratio between the strains ranged from 1·8 to 5·4. The strain from the apparently healthy fish was least virulent. The survival of the fish species was different over time. Rainbow trout were more likely to die early in the time course, but high numbers of coho died later, resulting in an overall risk of mortality of 1·4 in favour of rainbow trout. Differences in virulence may reflect changed selective pressure on R. salmoninarum when introduced from feral stocks into the environment of fish farms.     

水硬度对七彩神仙鱼幼鱼发育的影响

采用不同硬度的水对七彩神仙鱼幼鱼进行饲养。6周龄幼鱼在硬度为7.94°dH±0.30°dH时饲养84d后,比在硬度为14.71°dH±0.23°dH水中的幼鱼个体大,生长速度快。表明较高硬度的水有利于七彩神仙鱼幼鱼的生长发育。     

Characterization of protease inhibitors of seminal plasma of cyprinids

Anti-proteinase activity was demonstrated in the seminal plasma of cyprinid fish species (bream, chub, ide, dace, asp, goldfish, roach, common carp) using electrophoretic techniques combined with a detection method based on inhibition of bovine trypsin. We found species-specific protease inhibitors in the seminal plasma of cyprinids. At least three bands of protease inhibitors with different migration rates could be identified by native PAGE. Higher variability was characterized for bands with slower migration rates. Visualization of inhibitors after SDS-PAGE under non-reducing conditions allowed estimation of their molecular weights. Apparent molecular weights were within the range of 51–59 and 47–54 kDa for the bands with slower and moderate migration rates, respectively. The molecular weight of fast migration bands for roach and common carp were estimated to 23 and 30 kDa, respectively. Inhibitors of common carp seminal plasma differed in their affinity toward serine proteases. Three inhibitors in common carp seminal plasma could be visualized using cod and bovine trypsin, but only two inhibitors (of high molecular weight) were recognized with chymotrypsin. There were differences in anti-proteinase activity and seminal plasma protein concentration in relation to the origin of common carp seminal plasma (breeding lines) and time of milt collection (spawning vs. post-spawning season).     

浅谈船舶干舷的作用

近几年．在唐山沿海发生的渔船海难、海损事故经统计表明呈增多趋势。这与出海作业渔民的安全意识不强有很大关系．渔民为了挣取更多的效益,在海上,超抗风浪等级作业且人为地增加船的不规范载荷．造成船的储备浮力损失,酿成恶果。笔者认为．在渔船设计建造中,留取的干舷对渔船作业的安全性起相当重要的作用,必不可少。 一、储备浮力的重要性 所谓储备浮力就是自船舶设计水线至水密甲板的水密部分体积,其大小与干舷相关．于舷大则储备浮力大,干舷的重要性就在于能够使船在海中保持正常的浮性和安全。再者,在设计建造渔船时,为了改善…     

牙鲆刺激隐核虫病的防治

2005年七、八月份,乐亭、滦南一带多家工厂化牙鲆养殖场发生刺激隐核虫病,此种病虫害发病急、传染快、死亡率高。发生过该病的养殖场牙鲆死亡率一般都在50％～80％之间,这种病害给牙鲆养殖业带来很大损失。     

斑节对虾虾苗活力检测方法

该研究通过肉眼观察、镜检,进行干露、饥饿、盐度突降、福尔马林等抗性试验,并采用病毒检测等方法,以期建立评估斑节对虾（Penaeus monodon）虾苗活力和质量标准。结果表明,斑节对虾健康虾苗具有趋光性、集群性,体表光洁,肌肉透亮,肠胃食物充盈等特性。测试虾苗干露时间以15min为宜,健康虾苗干露后能立即恢复活力,而病弱虾苗多出现死亡、昏迷现象;虾苗的成活率随饥饿时间的延长而降低,随福尔马林浓度升高和时间延长而降低,随盐度突降幅度增加而降低。健康虾苗能忍受100～200μL·L^-1福尔马林溶液30min,成活率近100％;在盐度20～30下虾苗的成活情况较好,而其在淡水中仅能存活1h。对虾苗进行病毒检测,可以避免养殖中因虾苗携带病毒而可能导致的病毒性疾病的暴发。     

金鳟、虹鳟苗种长途运输实例

鳟鱼发眼卵和旨种运输是养鳟生产的重要环节。发眼卵多在冬季和早春运输,苗种多在晚春和夏季运输。苗种运输大多以鱼篓充氧进行短距离汽车运输,长途运输冷水性鱼苗种的实例很少。本文总结了金鳟和虹鳟苗种长途运输方法,以期与养鳟业界共同交流提高。一、包装材料和方法内包装材料是苗种运输专用塑料袋,规格54×104cm,外包装是泡沫塑料箱,规格63.5×45.5×30．5cm,纸箱规格64×46×32．5cm。塑料袋采取双层式,内装苗种和水共12.5kg,其中苗种0.5-1．3kg,100－2000尾。起运前苗种停食1－2天。运鱼用水水温调至6℃,鱼、水入袋后袋内…     

合浦珠母贝选育家系的遗传多样性分析

该研究选取具有多态性的6对微卫星引物对构建的2批合浦珠母贝(Pinctada fucata)完全双列杂交家系的遗传多样性进行了分析。6个微卫星标记在9个家系360个个体中共检测到32个等位基因,有效等位基因(Ne)为1.758 7~3.586 5,观测杂合度(Ho)为0.144 4~0.488 9,期望杂合度(He)为0.432 0~0.722 2,Shannon指数(I)为0.691 9~1.507 4。9个家系都有单态位点,平均Ho为0.129 2~0.466 7,平均He为0.155 0~0.439 6,平均I为0.248 5~0.712 2。有19个位点(占35.19%)极显著地偏离Hardy-Weinberg平衡。各家系之间的遗传距离为0.109 0~1.137 2,遗传相似性系数为0.320 7~0.896 8。家系L4B46与L4B48的遗传距离最大,与D3D313的遗传距离最小。UPGMA法聚类分析显示,9个家系分为3支,L4B48单独成一支,B4D426、B4D427与D4B445聚成一支,其余家系聚成一支。该研究结果为合浦珠母贝家系选择育种的亲本选择与交配设计提供了科学依据。     

同工酶(Isozyme)分析技术及其在紫菜(Porphyra)研究中的应用

同工酶是基因表达的直接产物,反映了编码蛋白质的DNA序列信息。利用同工酶分析技术不仅能区分紫菜叶状体的不同同工酶特征,而且能表现微型孢子体（丝状体）同工酶特征,利用不同种类和不同品系的紫菜丝状体的同工酶谱进行遗传多样性分析,对紫菜种质鉴定、遗传图谱的构建、寻找紫菜遗传多样性中心地区、筛选优良品种、进行种质改良研究都具有特别重要的意义。     

母猪胎衣不下的病因与防治要点

猪的胎盘属于弥散型胎盘,这种胎盘的结构特点和饲养管理的不当,常常导致母猪胎衣不下发生,给生猪的生产繁殖带来极大损失。本文针对母猪胎衣不下发生病因、综合防治进行详细阐述,旨在对预防和治疗胎衣不下能有所帮助。