云南昭通蜜柑大实蝇和橘大实蝇的DNA条形码鉴定

蜜柑大实蝇(Bactrocera tsuneonis)和橘大实蝇(Bactrocera minax)属果实蝇属(Bactrocera)大实蝇亚属(Tetradacus),是为害柑橘类作物的两种检疫性实蝇。两种实蝇为近似种,仅成虫可通过形态特征进行鉴定,幼虫等非成虫虫态需采用分子生物学技术才能实现快速、准确的鉴定。本研究对采自云南省昭通市大关县、彝良县和永善县的大实蝇成虫及幼虫样品分别进行了形态鉴定和DNA条形码鉴定。结果表明,通过形态特征的对比以及DNA条形码序列的测定、比对和分析,采自大关县和彝良县的20头成虫样品分别为蜜柑大实蝇和橘大实蝇,采自彝良县和永善县的20头幼虫样品均为橘大实蝇。本研究实现了云南昭通地区两种大实蝇的DNA条形码鉴定,为我国植物检疫相关部门提供实用技术及决策支持。     

基于DNA条形码技术的泰国番石榴中实蝇幼虫分子鉴定研究

实蝇是世界重要的检疫性害虫之一,对果蔬生产及其国际贸易具有很大的影响。而以线粒体DNA细胞色素C氧化酶亚单位I(mtDNACOI)基因的部分序列作为实蝇的DNA条形码能减少对实蝇成虫形态特征的依赖,可检测其任何虫态的样品,有助于实蝇样品的快速鉴定。本研究采用DNA条形码技术,针对采自泰国四色菊市番石榴烂果中的5头实蝇幼虫进行COI扩增测序,与生命条形码数据库(BOLD)中的序列进行比对并利用PAUP4.0软件构建了其系统进化树。根据序列分析和系统进化关系分析的结果,将5头实蝇幼虫样品鉴定为番石榴实蝇(Bactrocera correctaBezzi),并将本研究获得的2条COI序列在GenBank中注册,GenBank的登录号为HM590450和HM590451。     

桃实蝇的DNA条形码鉴定

桃实蝇(Bactrocera zonata)严重危害桃、番石榴、番荔枝等经济作物,被我国列为进境植物检疫性有害生物。为明确桃实蝇各虫态的重要形态鉴定特征,并将DNA条形码技术应用于桃实蝇的鉴定,本研究针对采自于印度旁遮普邦的桃实蝇卵、幼虫、蛹和成虫样品进行了形态观察和分子鉴定。结果表明:桃实蝇成虫整体呈红褐色,头部具一对卵圆形黑色颜面斑。翅除前缘带和臀条外几乎透明,r_(2+3)室端部具"痣状"小褐斑,延伸至r_(4+5)室端部。实蝇成虫及蛹样品的COI条形码序列与GenBank中收录的桃实蝇序列相似度在99.24%～100%之间;基于COI条形码构建的系统发育树显示本研究所有样品和桃实蝇聚在一个分支上。本研究表明DNA条形码技术可有效应用于桃实蝇的准确鉴定。     

基于DNA条形码技术的河南省夏季重要实蝇害虫分子鉴定

以夏季采自河南省洛阳市、郑州市的实蝇幼虫、成虫为研究材料,采用DNA条形码技术,通过测定、比对线粒体DNA细胞色素氧化酶I(COI)基因片段序列,对其进行种类鉴定。结果表明,检测的实蝇样品种类为橘小实蝇(Bactrocera dorsalis)、具条实蝇(Zeugodacus scutellatus)和三点棍腹实蝇(Dacus trimacula),与相关种已知序列的相似度均在99.39%以上,其系统发育树明显与我国其他常见实蝇近缘种区分开。     

基于DNA条形码技术的湖南省柑橘主产区实蝇幼虫分子鉴定

为明确湖南省柑橘主产区的实蝇入侵为害现状,从该省7个市(自治州)22个地点收集柑橘蛆果中的幼虫,利用DNA条形码技术对其进行分子鉴定,并以DNA条形码序列作为分子标记探究橘大实蝇Bactrocera minax的20个中国地理种群(湖南省6个组群共16个种群、其它3省市4个种群)以及1个印度地理种群间的亲缘地理关系,分析橘大实蝇在我国的遗传进化关系。结果表明,仅采集自邵阳市城步苗族自治县柑橘蛆果中的5头幼虫被鉴定为蜜柑大实蝇B. tsuneonis,其余21个地点采集的595头幼虫均被鉴定为橘大实蝇。21个橘大实蝇地理种群的平均单倍型多样性为0.75,核苷酸多样性为0.0032,核苷酸差异数为2.13,中国所有地理种群均具有较高的遗传多样性;单倍型网络进化图显示湖南、重庆、贵州种群共享的单倍型H3为原始单倍型,表明其为比较原始的种群;AMOVA分析结果显示种群内个体间遗传变异占总体变异的59.04%,是遗传变异的主要来源;遗传分化结果表明湖南省6个组群间均出现了中度至高度的遗传分化,FST在0.0521～0.7795之间。表明DNA条形码技术可用于蜜柑大实蝇和橘大实蝇幼虫的分子鉴定及其种群遗传进化分析。     

4种实蝇线粒体DNA全序列测定

橘小实蝇(Bactrocera dorsalis)、木瓜实蝇(Bactrocera papayae)、杨桃实蝇(Bactrocera carambolae)和菲律宾实蝇(Bactrocera philippinensis)的成虫和幼虫的形态特征十分相近,难以区分.本文对4种实蝇的线粒体DNA全序列进行测定,序列在GenBank上登录(登录号分别为:DQ917577,DQ917578,EF014414,DQ995281),并对4个种的线粒体DNA全序列进行序列分析,为建立基于线粒体DNA序列分析的快速鉴定方法提供基础.     

海南三亚崖州湾科技城发现番石榴果实蝇

番石榴果实蝇Bactrocera correcta(Bezzi)严重为害番石榴、莲雾、芒果等果蔬植物,我国将果实蝇属Bactrocera (非中国种)列为进境植物检疫性有害生物。2021年10月至2022年6月,在海南省三亚市崖州湾科技城内连续9个月诱捕到疑似番石榴果实蝇成虫。本研究通过形态特征、DNA条形码和常规PCR等方法,对诱捕到的疑似样品进行了鉴定。鉴定结果表明,诱捕到的实蝇样品为番石榴果实蝇,相关植物检疫机构需进一步加强海南地区番石榴果实蝇的检疫、监测及防控。     

湖南辣椒上首次发现辣椒实蝇

为掌握湖南省为害辣椒的实蝇种类,我们对辣椒的虫果进行了调查。2021年9月,我们在湖南省长沙市采到虫害辣椒,待幼虫化蛹并羽化出成虫后,对其进行形态学及分子鉴定,确定本次采到的5头幼虫均为辣椒实蝇[Bactrocera latifrons (Hendel)]。这是辣椒实蝇在湖南省的首次记录。     

湖北口岸截获辣椒实蝇

2008年6月10日,武汉天河机场检疫人员从进境泰国旅客携带的行李中,发现泰国红辣椒近500g.样品送湖北检验检疫局技术中心检测,植检人员解剖发现有4只实蝇幼虫,经饲养羽化成虫后,复核鉴定为辣椒实蝇(Bactrocera latifrons).     

潮汕地区实蝇发生现状及种群结构分析

为探明重要害虫实蝇在潮汕地区的发生情况,本文于2019～2021年使用诱捕器对实蝇的发生动态进行监测。结果表明,3年共诱捕到实蝇8种404 613头,其中桔小实蝇(Bactrocera dorsalis)数量最多,且以每年超30%的速度增加,占3年总量的98.78%,其次为瓜实蝇(Bactrocera cucuribitae)、南瓜实蝇(Bactrocera tau)和具条实蝇(Bactrocera scutellata),占比分别为0.60%、0.49%和0.13%。桔小实蝇、瓜实蝇、南瓜实蝇、具条实蝇已成为当地的优势种,而桔小实蝇在数量上占绝对优势。     

Potential for identification of quarantine nematodes by PCR1

Quarantine nematodes often pose particular problems of precise identification. Restriction fragment length differences in some fragments of DNA can easily separate species and races of nematodes that are difficult to identify by morphometrics. Amplification of DNA sequences allows accurate identification using one individual or very few nematodes of any stage. The DNA amplification is simple, and the pattern of DNA restriction bands are easily read, without training in molecular biology. It is suggested that international cooperation is needed in order to build up banks of DNA restriction patterns characteristic of each quarantine nematode species.     

蓟马的分子鉴定和种群遗传学研究进展

蓟马是一类个体微小的昆虫,形态学特征观察困难,种内遗传多样性高,且部分害虫类蓟马寄主广泛,繁殖能力强,为害严重,已成为重要的农林类害虫。采用分子生物学手段对蓟马进行物种鉴定,可以解决传统形态学鉴定困难、局限性较大等问题,能提高物种鉴定的效率与准确性。目前,关于蓟马分子生物学鉴定的研究较多,其中,基于线粒体细胞色素氧化酶亚基（ I cytochrome oxidase I,COI）基因片段的DNA条形码技术被广泛用于蓟马的快速准确鉴定、属内近缘种的区分及不同品系或生物型的鉴别。此外,开展蓟马类害虫种群遗传学的研究不仅有利于全面了解其遗传分化、适应性、入侵来源和扩散路径,还可为制订合理有效的监测预报和综合防治策略提供理论依据。目前,多种蓟马的种群遗传学研究表明地理隔离、寄主植物和微生物等因素影响其种内和种间的遗传多样性和遗传分化。本文综述了国内外有关蓟马的DNA条形码鉴定与种群遗传学研究进展,对目前蓟马物种鉴定中存在的问题进行讨论,并对未来的发展趋势进行展望。     

DNA条形码在昆虫学中的应用

DNA条形码技术是通过对一段标准化基因DNA序列的分析来实现对生物物种准确、快速鉴定的技术。自2003年提出以来,DNA条形码技术便备受关注,不仅被广泛地应用于生物分类学研究,也为生态学等学科的发展带来了机遇。昆虫是动物界的最大类群,目前条形码数据库中超过65%的序列都来自昆虫纲,DNA条形码的发展无疑为昆虫学带来了勃勃生机。本文综述了DNA条形码的产生、发展、优势及局限,总结并展望了DNA条形码技术在昆虫学基础研究与实践方面的应用。     

应用流式细胞术测定植物DNAC-值的实验方法研究

物种的DNA C-值具有重要的生态意义,同时也具有种的特征,目前DNA C-值越来越广泛地应用于物种倍性和杂种鉴定、植物生态适应能力分析等。本文应用流式细胞术,以油菜(Brassica campes-tris)为材料,从标样、细胞核悬液、样品生长时期等方面研究了影响DNA C-值检测的实验因素,发现标样种类和样品的生长时期对实验结果没有明显影响;与Galbraith缓冲液和Otto缓冲液相比,应用Tris-MgCl2细胞核悬液能够得到稳定的实验结果。     

DNA条形码技术在小花蝽属昆虫分类鉴定中的应用

本研究利用DNA条形码技术对13种小花蝽属Orius Wolff昆虫进行了鉴定,进行了59条COI基因序列碱基组成及种内、种间遗传距离的分析,采用邻接法、最大简约法、贝叶斯推论法构建了系统发育树。结果表明,小花蝽属昆虫COI基因序列碱基组成与典型的昆虫线粒体DNA一致,A+T平均含量(66.4%)明显高于G+C含量,密码子的第3位A+T含量高达90.7%,碱基替换多为同义替换;13种小花蝽种内平均遗传距离为0.008,种间平均遗传距离为0.128,种内、种间遗传距离没有重叠区域。3种方法构建的系统发育树的聚类分析与形态学鉴定结果基本一致,除微小花蝽Orius minutus(Linnaeus)可能存在隐存种现象外,其他同一种群的不同个体单独聚为一支。利用DNA条形码技术对小花蝽属昆虫进行物种快速分子鉴定具有可行性。     

利用DNA条形码对10种苍耳属杂草的鉴定

使用ITS、ITS2、psbA-trnH、rbcL和matK等序列对截获的10种苍耳属(Xanthium)杂草进行扩增测序,比较各序列的扩增和测序效率,采用最近距离法和相似性搜索算法评价不同序列的鉴定效率。采用最佳鉴定序列计算种间K2P距离并构建系统进化树。结果表明,ITS、psbA-trnH2个序列的扩增效率和鉴定效率最高;ITS序列的种间变异最大,其次是psbA-trnH序列,matK序列的种间变异最小;ITS序列的NeighborJoining(NJ)树可明显地将不同苍耳属杂草种分开;psbA-trnH序列可明显地将国内苍耳种和检疫性苍耳种分开。说明利用DNA条形码能够准确地鉴别苍耳属杂草,ITS和psbA-trnH序列是鉴别苍耳属杂草较理想的条形码组合。该研究结果为苍耳属杂草的分子鉴别提供了科学依据与新的思路。     

植物线虫分子鉴定研究进展

植物线虫可危害农作物和林木,对它们的准确鉴定是防治植物线虫病害的基础。由于植物线虫很小,而且在形态上种间常有覆盖,而种内有较大的变异,仅依据形态特征很难鉴定。分子鉴定技术给植物线虫的检测和鉴定提供了快速、精确、可靠的方法。文章综述了植物线虫分子的DNA提取、分子鉴定靶标序列的选择及分子鉴定方法等方面的研究进展及现状,以促进对植物线虫分子鉴定更深入的研究。     

Molecular phylogenetic analysis of <Emphasis Type="Italic">Peronosclerospora</Emphasis> (Oomycetes) reveals cryptic species and genetically distinct species parasitic to maize

Downy mildews are amongst the most widespread and economically important pathogens of cultivated grasses in the tropics and subtropics. Despite their importance, molecular methods, particularly DNA sequence analysis, have rarely been applied to either species identification or to the determination of phylogenetic relationships between species. Here we report the presence of several cryptic species in the genus Peronosclerospora. Further we confirm that maize can be parasitised by several species of Peronosclerospora, including P. eriochloae, which has not been reported previously as a pathogen of maize. The presence of 14 distinct phylogenetic lineages, including three that are parasitic to maize, highlights the current fragmentary knowledge on the diversity and classification of species within Peronosclerospora. Species identification in Peronosclerospora has been traditionally based on the host genus and a set of variable morphological characteristics, which has meant that the identification of species is often unreliable. This situation is primed for the application of molecular techniques for the identification of species. One of the lineages parasitic to maize in Australia has not yet been formally described and its distribution is not known. Future investigation including a broad sampling of downy mildews from maize and other cultivated and native grasses on a world-wide basis is a prerequisite to a re-evaluation of quarantine regulations aimed at restricting or limiting their spread.     

7种长蠹科昆虫的线粒体DNA ND4基因序列比较分析

长蠹科昆虫严重危害林木和仓贮物品。该文应用非损伤性DNA测序技术测定了来自不同国家的长蠹科害虫的线粒体DNA ND4基因的部分序列。在获得的204bp的序列中，7种昆虫的序列变异丰富，多数变异发生在密码子的第3位点上。将实验结果与形态学特征比较分析，探讨7个种的形态差异与基因序列的差异；结果表明，7种昆虫不仅在外形特征上存在差异，而且在ND4基因序列上的差异程度也很显著，平均为21．94％。这为分类鉴定提供了充分的证据。     

DNA条形码技术在入侵植物刺萼龙葵检验检疫中的应用

刺萼龙葵(Solanum rostratum)是危害严重的外来入侵植物,基于种子形态的传统检疫方法有一定的局限性,不依赖于形态学特征的DNA条形码技术是基于DNA序列差异对物种进行鉴定的新方法,是传统形态学鉴定方法的有力补充。以刺萼龙葵及其8种龙葵亚属近缘植物为材料,从Gen Bank数据库中下载rbc L、mat K和内转录间隔区(ITS)序列,进行DNA条形码分析,结果显示ITS鉴定效果优于其他片段,可把刺萼龙葵从其近缘植物中鉴别出来。