葡萄松散型愈伤组织的培养及其白藜芦醇含量的测定

【目的】获得葡萄(Vitisvini fera L.)松散型愈伤组织,并了解其白藜芦醇含量的变化。【方法】以葡萄的叶、叶柄和茎分别作为外植体,在不同激素组合(6-卞氨基嘌呤(6-BA)、激动素(KT)、吲哚丁酸(IBA)、2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D))的培养基(以B5培养基为基本培养基,含30g/L蔗糖和6g/L琼脂)上,进行愈伤组织的诱导和继代培养,并利用高效液相色谱法(HPLC)对不同来源愈伤组织中的白藜芦醇含量进行测定。【结果】以葡萄叶为外植体时,诱导的愈伤组织出愈率很低;以叶柄和茎为外植体时,愈伤组织的出愈率均较高。利用叶柄和茎获得松散愈伤组织时,其诱导培养基组成分别是:B5培养基+6-BA0.5mg/L+IBA0.1mg/L和B5培养基+6-BA1.0mg/L+IBA0.2mg/L,其继代培养基均为B5培养基+6-BA1.0mg/L+2,4-D0.1mg/L。在诱导培养基产生的愈伤组织中,白藜芦醇含量由高到低的顺序为叶柄>叶>茎。以叶、叶柄和茎为外植体诱导愈伤组织时,其白藜芦醇含量最高的培养基分别为B5培养基+6-BA0.5mg/L+IBA0.2mg/L、B5培养基+6-BA1.0mg/L+IBA0.2mg/L和B5培养基+6-BA0.5mg/L+IBA0.2mg/L。【结论】葡萄叶柄和茎易被诱导产生松散的愈伤组织,且经多次继代可以用于建立悬浮培养体系;葡萄愈伤组织中的白藜芦醇含量随外植体及培养基组成的不同而有所差异。     

NaCl胁迫对葡萄愈伤组织中白藜芦醇含量及细胞膜保护酶活性的影响

以‘黑比诺’葡萄试管苗叶片诱导并继代1a的愈伤组织作为试验材料,接种后分别添加0、0.1、0.2、0.3、0.4mol·L-1的NaCl溶液,研究不同浓度NaCl对愈伤组织中白藜芦醇含量及细胞膜保护酶活性的影响.结果表明:随着NaCl浓度的升高,葡萄愈伤组织中白藜芦醇的含量逐渐升高,当NaCl浓度为0.3mol·L-1时白藜芦醇含量最高,达到80.76μg·g-1,此时SOD活性也达到最高,为53.7320U·g-1·min-1;较低浓度的NaCl有助于PPO与CAT活性的升高.偏相关分析结果表明,不同浓度NaCl处理下葡萄愈伤组织中白藜芦醇的含量均与CAT活性呈显著正相关,与SOD、PPO活性呈显著负相关;不同程度NaCl胁迫下,细胞膜保护酶间的相关性也出现相应变化.     

LED不同光质对葡萄愈伤组织及白藜芦醇合成的影响

以"黑比诺"葡萄叶片诱导的愈伤组织为材料,研究不同LED光质处理对葡萄愈伤组织生长及白藜芦醇合成的动态影响.结果表明:绿光最有利于葡萄愈伤组织的生长,但抑制白藜芦醇的合成;蓝光对愈伤组织生长无明显影响,但能明显促进白藜芦醇含量和产量的提高;红光不利于白藜芦醇的积累.在30d的培养周期内,第24d是较理想的继代及收获时间.蓝光LED不同光周期处理中,8h·d-1处理对白藜芦醇合成具有显著的抑制作用,其余光同期处理间没有明显差异.     

葡萄不同组织部位白藜芦醇含量的比较

采用有机溶剂法提取不同品种葡萄的种籽、果皮、果梗、叶片、叶柄中的白藜芦醇,并对其含量进行了测定和比较.结果表明:不同葡萄品种间白藜芦醇含量差异较大,供试葡萄品种中以‘黑比诺’白藜芦醇含量相对较高;不同组织部位白藜芦醇含量差异也较大,其含量由高到低的顺序为果梗、叶片>果皮>种籽>叶柄.在所有测试品种中‘贵人香’果梗中白藜芦醇含量最高,达6 299.52×10-2μg.g-1.     

葡萄与葡萄酒中白藜芦醇的含量及其影响因素

综述了白藜芦醇在葡萄与葡萄酒中的含量及其影响因素，并对白藜芦醇的进一步研究进行了讨论。     

葡萄中白藜芦醇合成的影响因素

白藜芦醇是葡萄中一类重要的酚类化合物,在人类抗肿瘤、控制血糖疾病、预防心血管疾病、抗炎和保护神经系统等方面发挥着重要作用。其合成的主要影响因素包括内在因素和外在因素2种,其中,内在因素主要是基因控制、葡萄品种及其发育期,外在因素则包括紫外线辐射以及水杨酸、茉莉酸甲酯、多糖或寡聚糖类物质等诱导。在自然条件下葡萄中白藜芦醇的合成量很少,要想使得葡萄内白藜芦醇的合成量足够大并满足市场需求,就必须辅以外界的诱导因素,因此,研究葡萄生长发育过程中白藜芦醇合成的影响因素具有重要意义。     

硝酸银对冰糖橙胚性愈伤组织诱导的影响

为了诱导冰糖橙的愈伤组织和建立胚性细胞系，以冰糖橙成熟果实中未发育胚珠为外植体，将乙烯合成抑制剂AgNO3应用于冰糖橙胚性细胞系的建立，AgNO3设有5，10，12mg／L等3个处理，以未加AgNO3的MT培养基为对照。结果表明，在诱导培养基中添加AgNO3不能促进胚性愈伤组织的形成，反而抑制了胚状体的发生。然而在继代培养基中添加5mg／L的AgNO3有利于小而弱的胚状体基部形成胚性愈伤组织，胚性愈伤组织发生率达28％。经过5次继代处理建立了冰糖橙的胚性细胞系。     

葡萄愈伤组织中白藜芦醇含量的影响因素

以葡萄的叶片、叶柄及茎段诱导的愈伤组织为试验材料,考察紫外线照射、硝酸银处理和杂菌污染对其愈伤组织中白藜芦醇含量的影响。结果表明:经硝酸银处理的愈伤组织中白藜芦醇含量随处理浓度的提高呈现先增加后减少的变化趋势,在浓度为10 mg/L时,白藜芦醇含量达到最大;经紫外线照射的愈伤组织中白藜芦醇含量随照射时间的延长先增加后减少,茎段与叶片经紫外线照射3 min后白藜芦醇的含量最高,而叶柄经紫外处理5 min后白藜芦醇的含量最高。染菌的愈伤组织中白藜芦醇含量也明显高于对照。因此,在所试验的范围内提高葡萄愈伤组织中白藜芦醇含量,硝酸银的适宜浓度为10 mg/L,紫外线照射时间为3~5 min,另外杂菌感染也有助于葡萄愈伤组织中白藜芦醇含量的提高。     

肉桂酸和不同光质对葡萄愈伤组织增殖及白藜芦醇累积的效应

以葡萄品种"黑比诺"叶片诱导出的愈伤组织为材料,研究了不同浓度的肉桂酸和不同光质对葡萄愈伤组织增殖及对其中白藜芦醇合成的影响.结果表明:肉桂酸浓度为21mg·mL-1时,白光有最利于葡萄愈伤组织的增殖;在肉桂酸浓度为27mg·mL-1时,绿光最有利于葡萄愈伤组织的增殖;白藜芦醇含量在肉桂酸浓度为27mg·mL-1的白光下最高,但产量却在蓝光下最高;葡萄愈伤组织采收后经紫外强度8μmol.m-2.s-1处理10min可显著提高其中的白藜芦醇含量;而当肉桂酸与紫外两个因素共同作用时对白藜芦醇合成的促进作用不如两因素单独作用时的强.     

虎杖愈伤组织的诱导及其白藜芦醇形成初探

将虎杖Polygonum cuspidatum不同外植体经不同消毒时间处理后，接种在添加不同激素种类和水平的相同基本培养基上或相同激素种类和水平基本培养基上进行诱导实验，同时对根和根茎芽、叶、韧皮诱导的愈伤组织进行白藜芦醇含量的测定，结果表明，基本培养基以MS较好，外植体叶对激素种类较为敏感，其中适当浓度的NAA诱导愈伤组织比2，4-D的效果好，KT比BA好，添加KT的培养基上诱导愈伤组织比较紧密，有利于分化，在MS＋NAA2mg／L＋KT0．1mg／L培养基上诱导愈伤组织较好，根茎芽的诱导率最高，为73％；愈伤组织的生长趋势从接种的第3天开始生长，到21d时生长达到最高峰，干质量为0．4612g，以后生长速度减慢，对不同材料诱导的愈伤组织进行白藜芦醇含量的测定，其中根茎部芽的诱导的愈伤组织中白藜芦醇含量最高，其次是叶和根，最低的为韧皮。     

硝酸银在香蕉遗传转化上的作用

试验以天宝蕉茎尖横切薄片为材料,研究硝酸银在根癌农杆菌介导的香蕉遗传转化中的作用。试验表明,硝酸银对农杆菌菌株LBA4404有较强的抑制作用;在筛选培养基中添加2 mg.L-1硝酸银,褐变乃至死亡的薄片比未添加硝酸银少9.0%,抗性芽分化率增高5%,因此硝酸银对香蕉的遗传转化有促进作用。     

‘乍娜’葡萄试管苗水浸液对油菜的化感作用

取培养40d的乍娜葡萄试管苗,以油菜为受体材料,通过葡萄茎叶水浸液和根系水浸液2种方法收集化感物质,研究了不同质量浓度的化感物质对油菜的化感效应及其作用机理.结果表明:2种方法均延缓了油菜种子的萌发;在幼苗生长方面,随着水浸液质量浓度的增加,茎叶水浸液表现为高浓度抑制低浓度促进作用,根系水浸液表现为抑制作用;茎叶水浸液化感作用大于根系水浸液;2种方法使油菜根系活力和丙二醛含量降低,与油菜体内保护酶(如超氧化物歧化酶、过氧化物酶、过氧化氢酶)的变化也有密切关系.     

硝酸银对中国李原生质体分离和培养的影响

以种胚愈伤组织为试材,研究了硝酸银对中国李原生质体分离和培养效果的影响。结果表明,在酶解液中加入4～10mg/L质量浓度的硝酸银,可提高原生质体的活力,其中以8mg/L的效果最好,原生质体的活力比对照提高21.1%,但其对原生质体产量无明显作用。在培养基中加入4～8mg/L质量浓度的硝酸银,原生质体的分裂频率和植板率分别比对照增加19.85%～38.24%和9.23%～36.53%。硝酸银对愈伤组织不定芽的再生能力也具有明显的促进作用。     

设施葡萄不同生育期水分胁迫对产量和水分利用效率的影响

为探究水分胁迫对设施栽培葡萄耗水规律、产量和水分利用效率的影响,于2012—2014年在甘肃省张掖市节水灌溉试验中心开展为期3年的设施栽培葡萄水分胁迫试验,在葡萄萌芽、新梢生长、开花、果实膨大和着色成熟5个生育期各设轻度(土壤含水率下限为55%田间持水率,θ_f)和中度(下限为θ_f65%)2个水分胁迫水平,以下限θ_f75%为对照。研究不同生育期水分胁迫对葡萄日耗水强度、耗水量、耗水模数和水分利用效率的影响。结果表明:1)3个试验年度果实膨大期的平均日耗水强度为3.14mm/d、耗水量为220.55mm、耗水模系数为45.84%,均高于其余生育期的耗水指标;2)除开花期外,其余生育期施加中度水分胁迫均显著降低胁迫期葡萄耗水强度;且果实膨大期和着色成熟期轻度水分胁迫也会显著降低葡萄耗水强度;3)萌芽期中度胁迫对提高葡萄产量、水分生产效率(WUE)有利,其3个试验年度比CK平均增产16.2%、WUE提高20.5%。水分胁迫对设施葡萄产量和水分利用效率有重要影响,萌芽期亏水具有明显的节水增产效果;果实膨大期是葡萄需水临界期,该生育期应充分供水。     

硝酸银诱导的大豆子叶中大豆Kunitz胰蛋白酶抑制剂的研究

采用二维电泳技术对硝酸银诱导的大豆子叶微粒体膜蛋白进行分离,利用四极杆-飞行时间串联质谱,对仅存在于诱导样品而不存在于对照样品中的蛋白质点进行氨基酸序列测定和分析,以期研究硝酸银处理对大豆子叶微粒体蛋白质的影响。结果显示:硝酸银可以诱导大豆Kunitz胰蛋白酶抑制剂(SKTI)的产生,在诱导处理的子叶中大量存在其成熟形式,也存在其5 kDa小亚基,小亚基含有“GIGTIISSPER”和“FIAEGNPLR”氨基酸序列。该研究结果为SKTI的深入研究提供了实践依据,并为其分离纯化提供了简便途径,从而有利于对其更多性质的进一步研究。     

硝酸盐对肉牛甲烷产量和生长性能的影响

为研究硝酸盐对肉牛甲烷排放,瘤胃发酵和生长性能的影响,采用体内和体外试验。体外试验用单因素设计,分为对照组,1%硝酸盐组和2%硝酸盐组,试验重复进行3次;在体内试验中,选用8头草原红牛,采用单因素随机分组设计,分为对照组(体重(229.5±50.1)kg)和硝酸盐组((体重232.3±37.7)kg),每组4头。试验共56d,包括14d预饲期,39d生长期以及3d呼吸测热期。结果表明:在体外试验中,在1%和2%硝酸盐下甲烷量分别下降15.2%和46.2%,在体内试验中1%的硝酸盐可以抑制28.5%的甲烷产量,且饲喂后4h内抑制效果显著(P0.05),甲烷产量与干物质采食量之比以及甲烷能与总能比表示时分别下降31.8%,且对总挥发性脂肪酸产量有显著抑制效果(P0.05),但日增重、饲料转化率和营养消化率并未增加。硝酸盐可以持续有效地抑制甲烷,但未对生产性能产生促进作用。     

铜、银元素对水稻愈伤组织绿苗分化率的作用

铜、银元素对水稻愈伤组织绿苗分化率作用的研究结果表明 ,铜、银元素能明显提高水稻愈伤组织绿苗分化率 ,使用的浓度范围较广 ( 2～ 2 0 μmol/L) ,其中以铜元素 2 0 μmol/L、银元素 5 μmol/L效果最好 ;同工酶分析表明 ,经过 2～ 3d铜、银处理的水稻愈伤组织过氧化物酶 (POX)的活性增强 ,说明铜、银短时间处理能增强水稻愈伤组织过氧化物酶活性 ,从而诱导愈伤组织绿苗分化