柑桔原生质体融合再生出叶肉亲本类型植株

粗柠檬(Citrus jambhiri Lush)叶肉原生质体与哈姆林甜橙(C.sinensis Osbeck)悬浮细胞系原生质经聚乙二醇(PEG)诱导融合、再生的植株中,除体细胞杂种外,发现两棵为二倍体,与其亲本一样,2n=2x=18。这两棵植株叶片形态似粗柠檬。GOT、SOD及POX 3种同工酶分析结果显示,其酶带与粗柠檬基本相同,但个别带纹有差异。本文就这类植株的来源问题作了讨论。     

柑橘种间六倍体体细胞杂种开花及其花粉育性

 二倍体锦橙+种间四倍体体细胞杂种HR (哈姆林甜橙+ 粗柠檬) 的种间六倍体体细胞杂种植株移入温室7年后(即2004年) , 有1株六倍体首次开花, 花粉染色活力40.8% , 花粉萌发率3.7%;2006年该植株再次开花, 花粉染色活力为20.3%。由于自然界中没有柑橘六倍体, 本研究是人工的方法创造出可育的柑橘六倍体体细胞杂种植株的首例报道。     

柑桔体细胞杂种的花粉育性及其遗传稳定性

对原生质体融合产生的５个已开花的体细胞杂种的花粉育性观察表明，它们的花粉染色活力在０－９０．１８％之间，其中４个体细胞杂种的花粉育性介于双亲之间，偏向亲值亲本，种间异源四倍体体细胞杂种产生７．１８％￣１８．５９％的小花粉，这类花粉只有正常花粉粒的１／３左右大小、内空，脐橙与结桔的体细胞杂种不产生花粉，墨西哥来檬与伏令夏橙的体细胞杂种花粉育性稳定，年份间无显著差异，粗柠檬与哈姆林甜橙的体细胞杂种无性     

柑桔体细胞杂种的花粉育性及其遗传稳定性

对原生质体融合产生的５个已开花的体细胞杂种的花粉育性观察表明，它们的花粉染色活力在０－９０．１８％之间。其中４个体细胞杂种的花粉育性介于双亲之间，偏向高值亲本；种间异源四倍体体细胞杂种产生７．１８％－１８．５９％的小花粉，这类花粉只有正常花粉粒的１／３左右大小、内空。脐橙与红桔的体细胞杂种不产生花粉。墨西哥来檬与伏令夏橙的体细胞杂种花粉育性稳定，年份间无显著差异；粗柠檬与哈姆林甜橙的体细胞杂种无性繁殖后代之间，花粉育性无显著差异。     

柑橘种间体细胞杂种植株遗传变异研究

对6年生哈姆体甜橙 粗柠檬和4年生伏令夏橙 宜昌橙种间体细胞杂种遗传变异进行了研究。体细胞杂种气孔较大,密度较小,染色体数为四倍体（2n=4x=36)。POX、PPO、GOT和SOD4种同工酶图谱上,体细胞杂种为双亲酶带之和,RAPD分析显示,体细胞杂种含有双亲的谱带,同一融合组合不同单株在叶形指数、气孔特征、染色体数目,同工酶和RAPD图谱上表现一致。     

柑桔的多倍体育种

前言 高等植物有一半以上的物种是多倍体,而柑桔及其有关属几乎都是二倍体,体细胞染色体数为2n=2x=18。1925年,Longley首先发观香港山金柑(Fortunella hindsii Swing.)是四倍体(2n=4x=36)。此后,在柑桔、金柑、枳壳等属不少品种中都发现有多倍体植株存在。但在栽培品种中,只有塔希提(Tahiti)来檬是三倍体(2n=3x=27)。     

甲基胺草磷诱导大蒜多倍体的研究

以通过生理休眠的紫皮大蒜Z-006-10鳞茎茎尖为试材,利用固体培养基中添加甲基胺草磷的离体诱导方法,研究甲基胺草磷不同处理浓度和时间对紫皮大蒜体细胞染色体的诱导效果,并利用形态观察、根尖细胞染色体计数及流式细胞仪分析等方法对得到的再生植株进行倍性鉴定。试验结果表明：10 μmol?L-1甲基胺草磷处理6 d,四倍体诱导率最高,达32.87%。形态观察结果表明,得到的四倍体植株多倍体形态特征明显,与二倍体植株差异明显。根尖染色体压片观察表明,四倍体染色体数为2n=4x=32,对照为2n=2x=16。流式细胞仪倍性分析表明,四倍体体细胞DNA的相对含量是二倍体的2倍,其结果与染色体计数法鉴定结果一致。     

应用原生质体融合技术获得茄子种间体细胞杂种

 应用原生质体电融合技术, 获得了茄子近缘野生种Solanum torvum、S. aethiopicum 与栽培种S.melongena (六叶茄, Dourga) 的种间体细胞融合四倍体再生植株。染色体检测表明该植株为四倍体(2n =4x = 48) , 荧光免疫检测证明为种间体细胞杂种, 青枯病抗性鉴定表明带有抗病基因, 田间生长表现为倾向野生亲本的中间类型。     

大白菜与结球甘蓝杂交获得异源三倍体及其生殖特性的研究

 为创制大白菜—结球甘蓝异附加系、异代换系、易位系, 利用四倍体大白菜(AAAA, 2n =4x= 40) 为母本与二倍体结球甘蓝(CC, 2n = 2x = 18) 杂交, 采用蕾期去雄授粉、子房培养结合胚珠培养的方法, 获得了异源三倍体(2n =3x = 29, AAC) 杂交后代。该杂交种总体形态偏近于大白菜, 但生长势极强, 株高(开花期) 2 m; 花粉整齐度、花粉生活力都明显低于二倍体大白菜; 减数分裂行为复杂, 终变期除二价体和单价体外, 还有三价体等联会形式; 与二倍体大白菜回交的平均结籽率为3.19%。     

柑橘体细胞杂种有性后代花粉母细胞减数分裂的观察

柑橘体细胞杂种后代为三亲来源,采用酸解压片法对柑橘体细胞杂种[哈姆林甜橙(Citrus sinensis Osbeck)+粗柠檬(C.jambhiri Luss)]与单胚二倍体植株宜本杂4号[华农本地早橘(C.reticulata Blanco)×宜昌橙(C.ichangensis Swingle)]的有性杂种后代进行减数分裂观察,以明晰柑橘体细胞杂种有性后代减数分裂行为。结果表明,有性后代二倍体后代减数分裂行为与二亲杂种后代相似;三倍体后代减数分裂过程异常现象较二亲杂种后代复杂,中期Ⅰ出现56.9%的不配对染色体以及各种多价体,中期Ⅰ和中期Ⅱ观察到游离在赤道板外的染色单体,变幅为1～3个,平均比例分别为51.2%和38.68%;后期Ⅰ和后期Ⅱ观察到染色体桥及染色体断片、落后染色体;四分体时期含微核等。同时对后代植株花蕾直径与花粉母细胞减数分裂各个时期之间的关系进行了分析。     

柑桔体细胞融合再生9个组合的二倍体叶肉亲本类型植株

电场诱导９个柑桔种间及体内体细胞融合,各组合均再生叶肉原生质体亲本类型植株。这些植株经形态学和细胞学检查证明为二倍体（２ｎ＝２ｘ＝１８）。对其中５个组合进行ＲＡＰＤ分析表明,４个组合植株的谱带在所分析的引物上均表现为与叶肉细胞亲本谱带一致,另１个组合,即Ｐａｇｅ柑柚＋粗柠檬,个别植株除含有叶肉亲本的所有谱带外,还扩增出了悬浮系亲本的部分特征带,为杂种类型。探讨了这类植株的产生原因及潜在价值。     

柑桔体细胞杂种扦插繁殖及其有关性状研究

对３个由原生质体融合产生的柑桔体细胞杂种繁殖特性的研究表明，金柑与甜橙属间体细胞杂种扦插生根成活率较低。甜橙＋宜昌橙以及甜橙＋粗柠檬种间体细胞杂种扦插萌发和生根能力与权及粗柠檬没有显著差异；插条发根平均为２．０条和１．８条，一年生植株根系总长分别为１２２．２ｃｍ和８０．７ｃｍ，与积和粗柠檬均无显著差异；粗柠檬＋甜橙杂种的须根数为３９条，株－１，与权（５４．５条·株－１）差异显著，而宜昌橙＋甜橙种间杂种（４７．７条·株－１）与积差异不显著；体细胞杂种的抗寒性有介于双亲之间的趋势     

Molecular analysis revealed autotetraploid,diploid and tetraploid cybrid plants regenerated from an interspecific somatic fusion in Citrus

More than 150 plants were regenerated from our previous somatic hybridization between embryogenic callus line of Page tangelo (Citrus reticulata Blanco × C. paradisi Macf) and mesophyll protoplasts of rough lemon (C. jambhiri Lush) mediated by electrofusion. Preliminary screening showed that 78% of these plants were tetraploids while the rest were diploids morphologically resembling the leaf parent (rough lemon). Herein, eight plants (six tetraploids and two diploids) were selected and further analyzed by flow cytometry, simple sequence repeat (SSR), mitochondria (mt) RFLP and chloroplast (cp) SSR techniques. The results showed that four of these six tetraploids were somatic hybrids, one tetraploid was autotetraploid of Page tangelo, and the remaining one tetraploid was cybrid with nuclear and cpDNA from rough lemon and mtDNA from Page tangelo; the two diploids were verified being cybrids with nuclear DNA from rough lemon and mtDNA from Page tangelo, cpDNA was randomly inherited. The regeneration mechanism of these novel cybrids was discussed.     

柑桔体细胞杂种植物学性状、生长特性及其扦插繁殖研究

采用宜昌橙和伏令夏橙、金柑和伏令夏橙、哈姆林和粗柠檬融合的3个体细胞杂种,进行高接和扦插繁殖,并以亲本或枳作比较。试验结果表明：体细胞杂种之间的生长量存在显著差异,并均受亲本影响;杂种的叶子植物学性状,与亲本相比,叶形指数变小;杂种的刺生长并不与两亲本均值成正相关;杂种扦插成活率偏向高值亲本,其中两个杂种具有与枳扦插应用一样的潜力。即使两亲本的扦插成活率均为0,而杂种仍有部分扦插成活。     

以柑橘多胚性二倍体母本倍性杂交培育三倍体

2009-2012年,以柑橘8个多胚性二倍体品种为母本与近年始花的5个异源四倍体体细胞杂种和1个同源四倍体分别杂交,培育三倍体新种质。连续4年共配置15个杂交组合,授粉4 442朵花,坐果1 484个,平均坐果率33.4%;用于幼胚挽救的果实1 075个,共培养幼嫩种子12 578颗,经生芽、生根诱导获得再生植株2 832个;以流式细胞仪对所有再生植株倍性检测,15个组合共获得三倍体401个,四倍体121个;移栽成活三倍体349个,四倍体98个。对W. 默科特 × NH组合89个株系的三倍体的SSR分子鉴定表明,所有三倍体后代均为双亲的有性杂种。