影响西农萨能奶山羊产奶性状的非遗传因素分析

本试验旨在探究母羊出生年度、季节、胎次、泌乳阶段4个固定效应对西农萨能奶山羊产奶性状的影响。以西北农林科技大学萨能羊原种场2006-2018年的645只泌乳母羊为研究对象,每月采集乳样1次,采样日早、晚各采集1次,将两次乳样等比例混合后,采用乳成分分析仪测定乳脂率、乳蛋白率、乳糖率、总脂固形物、非脂固形物、密度、冰点和酸度共8个指标,结合羊场产奶量记录,采用固定效应模型,通过SAS 9.4软件进行表型的描述性统计分析,再采用GLM模型进行固定效应对产奶性状的影响分析。结果表明,西农萨能奶山羊平均300 d产奶量为507.67 kg,乳脂率为3.58%,乳蛋白率为3.20%,乳糖率为4.19%;总固形物含量为12.21%,非脂固形物含量为8.46%;出生年度、胎次对产奶量影响极显著（P<0.01）,出生季节对产奶量影响不显著（P>0.05）;泌乳阶段、出生年度对乳脂率等8个乳成分性状均有极显著影响（P<0.01）,胎次对除乳蛋白率和总固形物的其他6个乳成分指标均存在极显著影响（P<0.01）。综合以上试验结果,胎次及泌乳阶段是影响西农萨能奶山羊产奶性状的两种主要非遗传因素,第3、4胎母羊产奶性能最佳,泌乳早期的乳品质更优,揭示了对种群进行良种选育工作和羊饲养管理的重要性,也为后期进行奶山羊经济性状遗传评估和群体遗传改良提供理论基础。     

宝鸡西农莎能奶山羊现状及产业化发展对策

本文就莎能奶山羊在关中西部的种质资源特性和产业发展现状进行了专题调研,分析评价了宝鸡市发展莎能奶山羊的有利条件、不利因素与存在主要问题,提出今后发展莎能奶山羊产业的前景、对策和建议。     

宝鸡西农莎能奶山羊现状及产业化发展对策

本文就莎能奶山羊在关中西部的种质资源特性和产业发展现状进行了专题调研, 分析评价了宝鸡市发展莎能奶山羊的有利条件、不利因素与存在主要问题,提出今后发展莎能 奶山羊产业的前景、对策和建议。     

萨能奶山羊胎儿成纤维细胞miRNA文库的构建及生物信息学分析

本试验旨在丰富山羊miRNA文库,并探讨miRNAs在胎儿成纤维细胞生长调控中的作用。试验以萨能奶山羊胎儿成纤维细胞为研究对象,运用Illumina高通量测序和生物信息学技术分析山羊胎儿成纤维细胞miRNAs表达。成功构建了萨能奶山羊胎儿成纤维细胞miRNAs的cDNA文库,获得16 395 039 total reads,去除冗余数据后获得16 150 181条clean reads,其中unique sRNAs 205 857条。生物信息学分析获得候选新miRNAs 247条,候选miRNAs靶基因8 401个,靶基因位点数10 832个;同时分析发现候选miRNAs首位碱基对U和A具有偏向性。GO注释表明,69.6%的基因与细胞和细胞组分相关,超过54.1%的基因参与了细胞器相关活动,多达65.0%的基因与细胞及细胞过程相关联。KEGG通路分析显示,约10.5%的基因与代谢通路有关,是占比最多的一条通路,数据显示miRNAs对胎儿成纤维细胞具有重要调控作用。试验结果为胎儿成纤维细胞的生长调控及奶山羊乳腺生物反应器中供核体细胞miRNAs深入研究提供参考。     

Construction of miRNA Library and Bioinformatics Analysis About Fetal Fibroblasts of Saanen Dairy Goat

The purpose of this experiment was to enrich miRNA library of goat and explore the role of miRNAs in the regulation of cell growth.The expression of Saanen dairy goat fetal fibroblast miRNAs was analyzed by Illumina high-throughput sequencing and bioinformatics technology.Total miRNAs cDNA library from fibroblasts of Saanen dairy goat was successfully constructed,16 395 039 total reads and 16 150 181 clean reads had been obtained and among them were 205 857 unique sRNAs.From those clean reads,247 novel miRNAs were identified and 8 401 target genes were predicted with 10 832 target sites.Meanwhile,the first base pairs of candidate miRNAs were biased for U and A.GO analysis revealed that more than 69.6% of the genes were related to cells and cellular components,more than 54.1% of the genes were involved in organelle related activity,and approximately 65.0% of the genes were related with cells and cellular processes.KEGG pathway analysis showed that approximately 10.5% of the genes were related to a metabolic pathway,and that it was the pathway that accounts for the most.In conclusion,the data showed that miRNAs played an important regulatory role in fetal fibroblasts.The results provided a basis for further research on the growth regulation of fetal fibroblasts and miRNAs of donor cells in the breast bioreactor of dairy goats.     

西农萨能奶山羊随机微卫星扩增多态DNA(RMAPD)与经济性状的相关性

利用随机微卫星扩增多态DNA（RMAPD）技术分析69只西农萨能奶山羊基因组DNA的多态性与产奶性状（第1～5胎产奶量和平均产奶量）、产羔数（第1～5胎产羔数和平均产羔数）和体尺指标（初生重、成年体重、胸围、管围、体高、体斜长）的相关性.RMAPD与3个经济性状的相关性结果表明：66个标记条带分别对产奶量、产羔数及初生重、体重、体高等体尺指标有显著或极显著的标记效应（P〈0.05, P〈0.01）.其中,23个标记条带（14个正向效应标记和9个负向效应标记）与产奶量有关, HEL1r＋F09的C、D、J、K和L带对第3～5胎及平均产奶量有显著的标记效应,尤其是J带对第5胎产奶量有极显著的正向标记效应; 23个标记条带（11个正向效应标记和12个负向效应标记）与产羔数有关,HEL1r＋F09的J带、MFW20f＋P4的H带、HEL1f＋F09的E带和MFW20f＋F09的A、D带对产羔数有极显著的标记效应;20个标记条带（9个正向效应标记和11个负向效应标记）与体尺指标有关,HEL1f＋F09的G带、HEL1r＋F09的E带对初生重有极显著的标记效应,HEL1r＋OPW19的M带对胸围有极显著的标记效应 （P〈0.01）.     

生产单一性别羔羊的奶山羊卵巢组织差异表达microRNAs筛选

运用Solexa/Illumina高通量测序技术分析生产单一性别羔羊的奶山羊卵巢miRNAs表达情况,探讨miRNAs在繁殖调控中的作用。采集4~6岁始终生产单一性别羔羊的奶山羊母羊双侧卵巢,提取总RNA,建立cDNA文库,并进行克隆、测序及生物信息学分析。结果表明,在单一产公羔奶山羊(ASGO1)卵巢中有744 782个reads,包含127 205条miRNAs。单一产母羔奶山羊(ASGO2)中有1 602 751个reads,包含454 911条miRNAs,ASGO1和ASGO2差异表达的miRNA有630种,有143种仅在单一产母羔奶山羊卵巢组织中表达,有70种在单一产公羔奶山羊中高表达,其中新miRNA有31种,且都是单一产母羔奶山羊的表达量明显高于单一产公羔奶山羊,单一产母羔奶山羊中有2个miRNA(ssc-miR-451_R-1和bta-miR-486_R-1)与单一产公羔奶山羊相比差异极显著,bta-miR-486_R-1差异最大,达到了800 000个拷贝数的高表达量水平。结果提示,ssc-miR-451_R-1和bta-miR-486_R-1可能是影响奶山羊选择性授精的重要miRNA。     

Effects of Concentrate Protein Levels on Growth and Development of Xinong Saanen Dairy Goat Lambs

The objective of this study was to investigate the effects of different crude protein (CP) levels of concentrate on the growth and development of Xinong Sannen dairy goat lambs.60 lambs(40 male and 20 female) with good similarity in age (5 days) and birth weight were selected and randomly allocated to 4 groups. The groups M16 and M20 were males with 20 lambs per group,groups F16 and F20 were females with 10 lambs per group. The groups M16 and F16 were fed supplementary concentrate with 16% CP,the others were fed supplementary concentrate with 20% CP. The test lasted for 18 weeks,and the weight and body size indexes of the lambs were measured every 2 weeks,and the blood samples were collected and the biochemical indexes were analyzed. The results showed that the weight of lambs in 20% CP group had an increaseing trend than that in 16% CP group,and that was more apparent in male lamb. The body height,rump height,rump length,body length,chest depth and chest circumference of lambs in 20% CP group were greater than that of the 16% CP group.Male lambs seemed to have a faster tendency than female lambs in growth and development during the trial period.There was no significant effect on most of blood biochemical indexes among different CP levels groups (P >0.05).High CP level diet could easily trigger diarrhea.So,the feeding amount with high CP level concentrate should be controlled during lamb cultivation.Compared with 16% CP in concentrate,the 20% CP was more beneficial to grow and develop to the lambs.     

精料粗蛋白质水平对西农萨能奶山羊羔羊生长发育的影响

试验通过研究补饲不同粗蛋白质（CP）水平精料对西农萨能奶山羊羔羊生长发育的影响,旨在筛选出羔羊培育阶段适宜的补饲精料CP水平。选取日龄、体重相近,同质性好的健康西农萨能奶山羊羔羊60只（公羔40只、母羔20只）,按性别随机分为4组,M16、M20组为公羔,每组20只,F16、F20组为母羔,每组10只。M16、F16组饲喂CP水平为16%的粉料,M20、F20组饲喂CP水平为20%的粉料。试验期18周,每2周测定羔羊的体重、体尺指标,定期采集血液样品测定血液生化指标。结果显示,20% CP组羔羊体重有大于16% CP组羔羊的趋势,公羔更为明显,18周龄时,20% CP组羔羊的体高、尻高、尻长、体斜长、胸深、胸围均高于16% CP组羔羊,性别因素对羔羊的生长发育有一定影响,公羔表现出较快的生长趋势。补饲不同CP水平的粉料对大部分血液生化指标无显著影响（P＞0.05）。但高CP水平日粮易引发羔羊腹泻,因此在羔羊培育时要严格控制给料量。与16% CP的精料相比,20% CP的精料作为羔羊补饲料更有利于羔羊的生长发育。     

“诱乳素”诱导非繁殖季节的空怀萨能奶山羊泌乳的研究

试验选择空怀萨能奶山羊采用"诱乳素"进行诱导泌乳.结果表明;经过短期处理,母羊达到产奶的高峰,但母羊之间有差异(P<0.05).综合比较,经诱导泌乳产奶后,乳汁品质正常,与正常产羔的奶山羊奶汁没有区别.采用相同处理程序对德国内用美利奴绵羊进行处理.结果睥明;虽然母羊开始出现泌乳的时间不同,但达到正常产奶量的时间和达到本品种母羊最高泌乳量的产量无明显差异(P>0.05).采用"诱乳素"处理,萨能奶山羊于处理后13d,德国肉用美利奴母羊于15d出现发情症状,经第二个发情期统一人工授精,已妊娠.实验观察了诱导泌乳生产的山羊奶与普通牛奶对初生的羔羊哺乳补奶的效果.结果表明:给初生羔羊哺乳牛奶,羔羊表现拉稀、生长发育缓慢,羔羊成活率低(P<0.01);使用奶山羊奶哺乳和自然哺乳绵羊奶的羔羊,未出现拉稀,羔羊的成活率达到100%(P<0.01).利用奶山羊诱导泌乳.而后为绵羊羔羊充当保姆,可以大幅度提高羔羊的成活率.实验结果证实,此模式可以应用于生产实践.     

波尔山羊、萨能山羊和本地山羊三元杂交试验

通过对波尔山羊、萨能山羊和本地山羊的三元杂交试验分析．发现三元杂交山羊在其外貌特征上表现出与波尔山羊相似的体质结实、背腰平直等肉用形特征．在适应性上表现出能适应采食各种青粗饲料的能力．在繁殖性能上仍保持繁殖率高的特点，在生长发育上从初生到12月龄体重及各生长阶段的体尺测量都比崇明白山羊有大幅度的提高。试验表明可解决崇明白山羊生长速度慢．农民养羊效益低的矛盾。值得推广。     

不同电融合条件对莎能奶山羊转基因(GFP)核移植胚胎发育的影响

以莎能奶山羊（Saanen dairy goat）转基因（GFP）成纤维细胞为核供体细胞，以普通山羊卵母细胞为受体细胞进行了核移植，试验中对转基因核移植胚胎的电融合条件进行了优化，发现对于莎能奶山羊转基因（GFP）重构胚胎的处理，电融合时方案B（1．5kV／cm、3μs／次、间隔1s）电融合参数最适合用于莎能奶羊的转基因（GFP）核移植胚胎，其重构卵电融合率为89．4％，重构胚分裂率为68．0%。     

Identification and Characterization of Pig Embryo MicroRNAs by Solexa Sequencing

MicroRNAs (miRNAs) are a class of small, non‐coding RNAs of approximately 22 nucleotides in length that regulate gene expression by binding to the 3′‐untranslated regions of target mRNAs. It is now clear that miRNAs are involved in many biological processes, including proliferation, differentiation and regulation of gene expression during early embryonic development. The miRBase 16.0 (2010) shows that there are 175, 673, 408 and 1048 annotated miRNAs for Caenorhabditis elegans, Mus musculus, Rattus norvegicus and Homo sapiens, respectively. However, there are only 211 miRNAs described for Sus scrofa. In particular, the full set of miRNAs and their expression patterns are still poorly understood in the embryo. Therefore, we combined Solexa sequencing with computational techniques to analyse the sequences and relative expression levels of S. scrofa miRNAs at embryonic day 33 (E33). Of the distinct miRNAs identified, 76 previously known miRNAs and 194 candidate miRNAs were identified in head, and 77 known miRNAs and 130 predicted candidate miRNAs were identified in organ region. Furthermore, we performed additional investigation for identifying the potential target mRNAs using PicTar and TargetScan. Concurrent function analysis suggested that highly expressed miRNAs are mostly involved in the development of nerves, cerebrum, muscle and organs. Our results provide useful information for the investigation into embryonic miRNAs of pig and provide a valuable resource for investigators interested in the regulation of embryonic development in pigs and other animals.     

西农萨能奶山羊泌乳中期和后期乳腺组织差异基因的筛选

旨在利用抑制性削减杂交(SSH)技术筛选西农萨能奶山羊泌乳中期和后期的差异表达基因,并用实时定量PCR(Q-PCR)分析差异基因的表达丰度,探讨奶山羊不同泌乳阶段乳腺组织的基因表达规律。本研究以西农萨能奶山羊泌乳中期和后期乳腺组织的mRNA互为检测子(Tester)和驱动子(Driver)构建cDNA消减文库(M-L和L-M),随机挑选克隆测序,进行序列比对分析,并检测部分差异基因在乳腺组织中的表达丰度。结果,成功构建了泌乳中期和后期的cDNA文库,随机挑选30个克隆测序,得到M-L和L-M文库中与细胞凋亡、抗氧化、脂类代谢、能量代谢等生理过程相关的差异基因,对其中的6个基因进行实时定量分析,发现5个均为阳性克隆,表达水平增加了1.3~5.5倍不等。结果表明,利用SSH技术成功构建了泌乳中期和后期乳腺组织正反向消减cDNA文库,筛选出24个差异基因,为进一步研究奶山羊乳腺组织基因调控机理奠定了基础。     

不同蛋白质水平日粮对不同性别西农萨能羊羔羊生长发育的影响

试验旨在研究不同性别和蛋白质水平对1～100日龄西农萨能羊羔羊生长发育的影响。选取同质性较好的新生公、母羔羊各80只,分别随机分到4个组中,每组40只羊,其中试验1、2组为母羊,试验3、4组为公羊,试验1、3组饲喂低蛋白质水平(17%)的颗粒料,试验2、4组饲喂高蛋白质水平(21%)的颗粒料。定期测量羔羊的体重和体尺指标并统计腹泻率,在试验结束当天采集血液进行生化指标分析,以确定适合西农萨能羊羔羊生长发育的颗粒饲料蛋白质水平。结果表明,在试验前中期,蛋白质水平对羔羊生长发育影响不显著(P>0.05),在此阶段可饲喂低蛋白质水平颗粒料以降低饲喂成本;而在试验中后期,高蛋白质水平可显著促进羔羊生长发育(P<0.05),在此阶段可饲喂高蛋白质水平颗粒料以保证羔羊良好的生长状况;体尺指标受日粮蛋白质水平影响较小,而高蛋白质水平日粮易引发羔羊腹泻,且在试验期内公羔羊较母羔羊表现出更快的生长发育趋势。因此,在羔羊培育中应控制高蛋白质水平饲料的饲喂量。     

PRLR基因外显子10多态性与西农萨能奶山羊产奶性能的相关分析

设计4对引物,采用PCR—SSCP技术检测催乳素受体（PRLR）基因外显子10在西农萨能奶山羊群上的单核苷酸多态性,同时研究该基因对其产奶性能的影响。结果表明：引物P2、P3与P4扩增片段具有多态性,P1的扩增片段不存在多态性。应用P2扩增片段,在西农萨能奶山羊中仅检测到AA和AB基因型,纯化测序表明AA与AB基因型相比有2处突变,C27T的突变没有导致氨基酸变化,第189处的碱基缺失导致氨基酸由组氨酸变为酪氨酸和苏氨酸。AA和AB基因型之间产奶量的最小二乘均值差异显著（P〈0．05）,AA基因型在各胎次产奶量和平均产奶量等指标上均高于AB基因型,其中第3胎的产奶量达到显著水平（P〈0．05）;应用R扩增片段,在西农萨能奶山羊中检测到3种基因型（CC、CD、DD）,纯化测序表明CC与DD基因型相比有2处突变（C103A和T106C）,分别导致氨基酸由赖氨酸变为苏氨酸、苏氨酸变为异亮氨酸;3种基因型之间产奶量的最小二乘均值差异不显著（P〉0．05）。应用P。扩增片段,在西农萨能奶山羊中也只检测到EE和EF基因型,纯化测序表明EE与EF基因型相比有1处突变（A114G）,该突变导致氨基酸由蛋氨酸变为缬氨酸;EE和EF基因型之间产奶量差异显著（P〈0．05）。EE基因型的个体各胎次产奶量均比EF型高,其中在第3、4胎产奶量和前4胎平均产奶量3项指标上都达到显著水平（P〈0．05）。研究结果提示：PRLR基因对奶山羊产奶量有显著影响,因此认为PRLR基因外显子10位点可作为奶山羊高产奶量的标记辅助选择的有效分子标记。     

羊睾丸组织在小鼠皮下异种移植

将幼年羊的睾丸组织块移植到小鼠背部皮下，同时用环孢素A（CsA）抑制受体小鼠的免疫功能，在不同时间阶段观察了移植的睾丸组织的存活和发育状况。结果表明，添加CsA组与不添加组的移植试验结果无显著差异；移植入的羊睾丸组织块可在受体动物中存活，体积明显增大，但不能分化以实现精子发生。经组织块培养试验发现，移植3个月后的羊睾丸组织仍有存活的精原细胞，说明受体小鼠皮下环境能长期支持羊睾丸组织块的存活。     

呼和浩特地区萨能山羊乳生化成分的分析

对呼和浩特地区萨能山羊奶和牛奶生化组成进行了测定,并对两种乳生化特性进行比较研究.结果表明,山羊奶中总蛋白、脂肪、干物质含量均高于鲜牛奶中的含量,乳糖含量较牛奶低,从营养角度考虑萨能山羊乳是比较理想、健康的营养乳.     

深度测序鉴定绵羊microRNA转录组

本研究采集的Texel绵羊胎儿的背最长肌样品包括5个发育阶段:70、85、100、120和135 d。通过采用Solexa测序技术对混池样品进行了microRNA(miRNA)深度测序,获得了16532850条原始序列读数。使用ACGT101-miR v4.2分析软件对miRNA测序数据进行了深度发掘;通过与最新的哺乳动物成熟miRNA序列(miRNA数据库:miRBase v17.0)、miRNA前体序列、绵羊基因组序列(绵羊基因组数据库,2010年2月)的比对分析,对绵羊microRNA转录组数据库进行了大幅更新,pre-miRNA(miRNA前体)序列增至1529条,编码的miRNA成熟体序列增至1999条。通过实时荧光定量PCR技术对深度测序获得的5个miRNA在混池样品中进行了验证。绵羊miRNA的研究起步较晚,而miRNA的发现与鉴定将促进基因调控机制及miRNA功能的研究。     

西农萨能奶山羊CSN1S2基因多态与产奶量、体尺指标的相关分析

利用PCR2RFLP技术对69只西农萨能奶山羊的CSN1S2基因进行多态性分析。扩增产物为310bp的CSN1S2F基因片段,被Alw26I限制性内切酶消化后表现多态性。F等位基因为310bp,N等位基因为179和131bp,相应地,FF基因型为310bp,NF基因型为310,179和131bp,NN基因型为179和131bp。在该群体中,F等位基因频率为010870,N等位基因频率为019130,处于Hardy2Weinberg平衡状态。将西农萨能奶山羊CSN1S2F基因座不同基因型与平均产奶量进行相关分析,结果表明:CSN1S2的不同基因型对平均产奶量有显著影响,NN基因型个体产奶量最高,FF基因型个体产奶量最低,且FF基因型个体平均产奶量显著低于NN基因型个体(P<0105)。将西农萨能奶山羊CSN1S2F基因座不同基因型与体尺指标进行相关分析,结果表明:在初生重和体高指标上,NF基因型个体显著优于NN基因型个体(P<0105);在体斜长和管围指标上,NF基因型个体略优于NN基因型个体,但差异不显著(P>0105);在成年体重和胸围指标上,不同的基因型个体间无差异。