猪博卡病毒病原学和检测方法研究进展

猪博卡病毒是2009年新发现的一种猪细小病毒,近几年来在我国感染率日益升高,且常常与其他病原混合感染,增加了疫病防控的难度。论文就猪博卡病毒病原学与检测方法做一综述,为提高我国猪博卡病毒的综合防控能力提供参考。     

猪伪狂犬病病毒和猪博卡病毒混合感染的检测

为了检测猪伪狂犬病病毒和猪博卡病毒混合感染的情况,研究建立了快速,简便,灵敏度高,特异性强的鉴别猪伪狂犬病病毒(PRV)和猪博卡病毒(PBoV)的双重检测方法。针对PRV gE基因和PBoV NS1基因的序列,分别设计了2对特异性引物,通过对引物浓度、模板加入量、退火温度等的优化,建立了快速鉴别PRV和PBoV的双重PCR检测方法,并进行了特异性和敏感性试验。特异性试验表明,该方法可以扩增出PRV gE长度为316 bp和PBoV NS1长度为996 bp的目的片段,对大肠杆菌、猪圆环病毒Ⅱ型、猪捷申病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒均无扩增;敏感性试验表明,PRV、PBoV的最低核酸检出量分别为6.44×10~2拷贝和9.51×10~3拷贝,与单一PCR敏感性相同。应用该方法对49份送检病料样品进行检测,其中PRV和PBoV的单纯感染检出率分别为34.69%和14.28%,混合感染检出率为8.16%,与单一PCR检测结果符合率为93.88%。     

猪博卡病毒流行病学研究

猪博卡病毒属于细小病毒科细小病毒亚科博卡病毒属单链线性DNA病毒,该病毒于2009年在瑞典发现.作为一种新型病毒,人们对其的研究仍处于初步探索阶段.本文从博卡病毒的由来、猪博卡病毒的发现、分类、基因组结构及流行病学等方面进行阐述,并根据GenBank收录的25条猪博卡病毒的部分基因和全基因序列,利用DNAStar分析软件,通过Jotun-Hein算法,分别从猪博卡病毒的NS、NP、VP以及全基因序列进行相似性临近排组分析,并建立了PBoV系统发育树.结果发现可将猪博卡病毒分为2个大支和若干遗传簇,但这些不同的遗传簇所包含的毒株在核苷酸序列上仍然存在着一定的差异.     

猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒和猪博卡病毒多重PCR检测方法的建立

根据GenBank登录的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因序列、猪流行性腹泻病毒(PEDV)M基因和猪博卡病毒(PBoV)NP1基因序列,设计合成3对引物。通过优化反应条件,对TGEV、PEDV RNA反转录获得的cDNA模板和PBoV的DNA模板进行多重PCR扩增,同时得到3条与试验设计相符的1 060bp(TGEV)、462bp(PEDV)及258bp(PBoV)特异性条带,建立了同时检测TGEV、PEDV和PBoV的多重PCR方法。结果表明,在同一PCR反应体系中,可以同时检测这3种病毒核酸片段,而对其他病毒的检测均为阴性;敏感性分析表明,该方法的最低检测限分别为35、20、10pg的核酸。采用该方法对60份临床样品进行检测,TEGV阳性率为1.6%,PEDV阳性率为6.7%,PBoV阳性率为21.7%,表明建立的方法可以应用于临床检测。     

猪博卡病毒的研究进展

2009年,在瑞典患断奶仔猪多系统衰竭综合征的猪体内首次检测出猪博卡病毒,引起世界各国科研人员的关注。在我国,各地发病猪场频频检出猪博卡病毒,可见其流行非常广泛,在掌握病毒的各方面信息后,防控工作也尤为重要。本文综合现阶段多方研究成果,对猪博卡病毒的发现、基因组结构、病毒的分类、疾病的症状、流行病学、诊断等方面进行了阐述。     

猪博卡病毒研究进展

 猪博卡病毒是近年来新发现的一种细小病毒。目前,在匈牙利、北爱尔兰、罗马尼亚、泰国、日本、韩国和中国的猪群（野猪）中均检测到了该病毒,并且发现该病毒在猪群中保持较高的感染率。流行病学调查研究发现,该病毒与猪群腹泻有一定的相关性,并且可能在猪腹泻中可能扮演了一个诱因的角色。通过基因序列分析和系统发育分析发现,该病毒存在多个谱系,呈现出遗传多样性的特点。     

猪博卡病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

根据GenBank公布的猪博卡病毒(PBoV)序列,通过VP1/2基因设计引物和Taq Man探针建立实时荧光定量PCR检测方法。建立的方法与PPV、PRRSV及PCV均无交叉反应,具有较高特异性,在107 copies/mL～101 copies/mL模板范围内具有良好的线性关系,所制作的标准曲线相关系数为0.997,最低可检测到101copies/mL的阳性质粒。说明所建立的PBoV实时荧光定量PCR检测方法具有灵敏度高、特异性好和精确性高等优点。     

猪博卡病毒PCR检测方法的建立及其初步流行病学调查

猪博卡病毒(PBoV)是一种新出现的病毒,可以导致仔猪急性腹泻。为建立该病毒的检测方法,本实验根据PBoV的NS1基因序列设计一对引物,建立了PCR检测方法。特异性试验结果表明,该方法能够从PBoV阳性样品中特异性的扩增出482 bp的片段,而对猪伪狂犬病毒、猪细小病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒、沙门氏菌、大肠杆菌、猪链球菌、副猪嗜血杆菌的核酸样品均无非特异性扩增反应。敏感性试验显示,该PCR方法对PBoV的最低检测量为213.6拷贝。此外,应用该方法对湖北、湖南、河南省的各大猪场进行了流行病学调查,在79个规模化猪场采集的248份病料样品中有172份样品为PBoV阳性。其中,对4个发生腹泻疫情的规模化猪场进行了分群抽样调查,结果显示PBoV在腹泻猪群中的阳性率达到73.95%,并显著高于非腹泻猪群(47.83%)。本研究调查结果显示PBoV在国内猪群中流行广泛而且感染率高。     

猪博卡病毒感染的研究进展

猪博卡病毒(Por cine Bocavirus,PBoV)是细小病毒科细小病毒亚科博卡病毒属成员,是2009年从瑞典表现断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的发病猪群中分离到的新病毒,目前世界上部分国家均报道了本病的发生.文章重点对猪博卡病毒在猪群中的感染状况进行了综述,表明无论临床表现正常的猪群或表现呼吸道病症的猪群均呈现较高的阳性率,说明该病毒在猪群中感染的普遍性,但其在猪呼吸道疾患中的致病作用、流行病学特征、传播机制等方面需要进一步的研究和探索.     

两株猪博卡病毒的检测及遗传演化分析

根据Gen Bank公布的猪博卡病毒序列,设计特异性引物,分别对猪博卡病毒(PBo V)的NS1基因、NP1基因、VP1/VP2全基因进行PCR方法测定,所得到的2个阳性样本分别命名为GD4和GD18。各基因遗传分析表明:GD4和GD18株各基因同源性较低,在34.9%⁵0.5%之间;猪博卡病毒主要分为3个大的分支,GD4和GD18分别处于不同的分支;分别与HQ223038和KF206167亲缘关系较近。     

猪博卡病毒感染的防控

随着我国畜牧养殖业的不断发展,生猪养殖业的发展规模也在不断的扩大,其养殖产量已成为我国畜牧业总产量的重要组成部分,同时,养殖生猪患病的概率也在不断提升,其中猪博卡病毒就是其中一种,其致病性与猪高热综合征类似,已经慢慢发展为严重的免疫抑制性疾病,严重影响我国生猪养殖业的健康发展.     

猪博卡病毒的研究进展

猪博卡病毒是近年来新发现的一种细小病毒。在欧洲、美洲、中国、韩国、日本均检测到了猪博卡病毒的存在,流行病学调查研究发现,该病毒与猪群腹泻和呼吸困难有一定的相关性。本文结合已发表的文献,对猪博卡病毒的流行病学、分类、基因组结构与致病性等方面进行了阐述,为科研人员对猪博卡病毒的研究提供理论依据。     

猪博卡病毒研究进展

猪博卡病毒是2009年发现的博卡病毒属病毒。临床上该病毒与其他病毒共感染现象十分严重,感染猪多呈现胃肠道与呼吸道疾病。目前猪博卡病毒尚未在体外细胞系中被成功分离纯化,其致病机制尚不明确,相关疫苗还在研发中。猪博卡病毒检出率逐年升高,对生猪养殖带来巨大影响,并可跨越物种屏障感染人类,对公共卫生带来了新挑战。本文将对猪博卡病毒的病原学、流行病学、致病机制、诊断与检测、防控手段5个方面进行综述,以期为猪博卡病毒感染防控及研究提供参考。     

猪博卡病毒的流行病学、发病机理和检测技术研究进展

猪博卡病毒是最近发现的一种感染猪的病毒,属于细小病毒科（familyparvoviridae）细小病毒亚科（subfamilyparvovirinae）博卡病毒属（bocavirusgenus）。博卡病毒基因组由线性单链DNA组成,并具有三个开放阅读框架,编码四种蛋白质：NS1、NP1、VP1和VP2。迄今为止,已经发现了7种以上的基因型,根据VP1序列可以将这些基因型分为三类。猪博卡病毒同时感染其他病原体在仔猪中十分普遍,可以使用PCR、环介导等温扩增、细胞培养、间接免疫荧光和其他分子技术检测该病毒。猪博卡病毒已在包括粪便、血清、淋巴结和扁桃体在内的各种样本中检测到。由于这种病毒近年来才被发现,因此仍有许多未解之谜需要进一步研究。     

猪博卡病毒PCR检测方法的建立及其应用

猪博卡病毒是最新发现的一种DNA病毒,于2009年首次在瑞典患仔猪断奶后多系统衰竭综合征的猪体内被鉴定。为了及时地评估其在我国的流行情况,本研究根据GenBank上递交的唯一一条猪博卡病毒核苷酸序列设计了一对特异性引物,并首次建立了猪博卡病毒的PCR检测方法。该方法特异性强,敏感度高,重复性好,对2009年我国部分省市猪场的191份临床样品进行检测,结果75份为猪博卡病毒阳性,这表明我国猪群中猪博卡病毒相当流行。本研究建立的PCR方法可以作为猪博卡病毒在临床上的一种诊断技术。     

猪博卡病毒的研究进展

猪博卡病毒属于细小病毒科细小病毒亚科博卡病毒属,单链线性DNA病毒。该病毒于2009年在瑞典患有仔猪断奶后多系统衰竭综合征的猪群中被发现。在我国,多省市发病猪场也相继检测出猪博卡病毒。猪博卡病毒作为一种新型病毒,人们对其的研究仍处于初步探索阶段。文章结合现有的文献资料及研究成果,分别从猪博卡病毒的发现、分子特征、流行病学、临床症状、诊断方法以及防治方法等方面进行了阐述,以期为有效防控规模化猪场猪博卡病毒的发生提供一定的理论依据。     

猪博卡病毒G1基因群和猪流行性腹泻病毒双重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用

为建立同时快速定量检测猪博卡病毒(PBoV)G1基因群和猪流行性腹泻病毒(PEDV)的方法,本研究参照GenBank登录的PBoV的NP1基因和PEDV的M基因保守序列,设计了引物和探针,经优化反应条件后,建立了能够同时检测PBoVG1基因群和PEDV的双重TaqMan荧光定量PCR方法。特异性试验结果显示该方法与PCV2、PRV、PDCoV、PRoV和TGEV无交叉反应,敏感性试验结果显示该方法对PBoV、PEDV的质粒标准品检测下限分别为21.8拷贝/μL和31.7拷贝/μL;且组内、组间变异系数均小于4%,重复性好。应用本实验建立的方法对2017年5月~2018年8月,河北省部分地区采集的142份仔猪腹泻样品检测结果显示,PBoVG1阳性率为18.3%(26/142),PEDV阳性率为62.7%(89/142),其中PBoVG1与PEDV共感染率为10.6%(15/142),该方法优于常规PCR方法。本研究建立的双重TaqMan荧光定量PCR方法对PBoV和PEDV的准确检测、病原监测、流行病学调查等均具有重要意义。     

猪博卡病毒(重庆株)NP1部分基因的克隆测序及生物信息学分析

通过设计特异性引物建立基于猪博卡病毒(Porcine Bocavivus,PBo V)NP1基因的特异性PCR方法,从重庆地区猪血液中扩增出PBo V-NP1的部分基因片段,进行基因测序,并与Gen Bank公布的PBo V、HBo V及PPV基因序列进行生物信息学分析。结果显示:本次试验克隆得到的PBo V重庆株NP1部分基因片段大小为257 bp,与已公布的PBo V-NP1基因的同源性为97.3%~100%;重庆株与PBo V瑞典株、PBo V中国株属同一进化分支,且PBo V重庆株NP1基因与PBo V瑞典株NP1基因亲缘性非常接近;PBo V重庆株NP1基因与Gen Bank公布的猪PBo V-NP1和1个人HBo V st1聚在博卡病毒一大分支,与PPV分属两大分支,而HBo V st1株又单独形成另一簇。这表明,PBo V重庆毒株与国外毒株的亲缘性非常接近,推测重庆地区猪群中感染的PBo V可能是通过引进或者进口国外动物性产品而传播感染猪群。     

国内猪群中博卡病毒的感染现状

猪博卡病毒是细小病毒科细小病毒亚科博卡病毒属的新成员。笔者查阅了截至2017年已发表的对国内猪博卡病毒(PBoV)感染调查的29篇文献,其中,从采用核酸检测方法的23篇文献中共收集到91条相关信息。采样地点涉及到25个省份,样品总体阳性率区间在0～88.98%,总体阳性率为24.39%(2 155/8 837);来自豫、沪、鄂等省份频次较高;调查者多关注外观健康猪群和发病猪群感染状态,组织或体液、肠道相关组织及粪便中PBoV的存在,猪群PBoV'、PBoV2的感染情况;2009年后国内猪群PBoV'感染呈明显上升趋势。国内系统调查猪群中PBoV感染率的文献尚少,本文旨在通过相关文献的综合分析,明确国内猪群中的PBoV感染状况,以对广大研究者有所帮助。     

健康屠宰猪中博卡病毒的检测及遗传演化分析

为了解我国健康猪群中猪博卡病毒(PBoV)的感染状况,从屠宰场内采集猪淋巴结、脾脏和扁桃体等组织,分别采用套式PCR进行猪博卡病毒1型和2型的检测。结果表明,28份样品中有2份样品用猪博卡病毒2型引物可扩增出439 bp的特异性条带;结构蛋白VP1基因序列分析表明,这2份样品均为猪博卡病毒2型感染,且其VP1序列与猪博卡病毒参考株HM053694的同源性最高,分别达93.8%和93.3%,同属PBoV1/PBoV2进化分支;而与另一个猪博卡病毒V6/V7进化分支的同源性仅为35.1%～39.2%,距离较远。