禽流感病毒的毒力及其变化

禽流感(avian influenza, AI)是一种由A型流感病毒引起的一种禽类感染和/或疾病综合征.由高致病力禽流感病毒(highly pathogenic avian influenza virus, HPAIV)引起的高致病性的禽流感(HPAI)常给家禽养殖业带来巨大经济损失.因此,HPAI被国际兽疫局(OIE)列为A类传染病,我国也把它定为一类动物疫病[1].     

H5N1 亚型禽流感病毒在 MDCK 细胞中增殖条件的研究

目的：探索H5N1亚型禽流感病毒在MDCK中增殖规律,确定最佳增殖条件。方法将H5N1亚型禽流感病毒接种到6孔板培养的MDCK细胞进行增殖试验,检测不同病毒感染量、不同浓度TPCK-胰酶,接毒后不同时间病毒的HA滴度。根据确定的最佳增殖条件将病毒接种到微载体培养的MDCK细胞中进行大规模增殖。结果：最佳病毒增殖条件接毒量MOI为5＆#215;10-4、TPCK-胰酶浓度为4μg/mL,在5 L生物反应器中重复验证,获得稳定的试验结果,病毒血凝价最高为8 log2。结论：本研究为禽流感疫苗的生物反应器规模化生产奠定了基础。     

H9N2亚型禽流感病毒在MDCK细胞中增殖最佳条件研究

为了探讨H9N2亚型禽流感病毒在MDCK细胞中增殖的最佳条件,将不同毒株、不同接种量的H9N2亚型禽流感病毒接种MDCK细胞单层,接毒后直接加入或吸附lh后加入含有10 μg/mL胰蛋白酶的DMEM维持液,每隔24 h观察细胞病变,并测定细胞上清液中HA滴度.结果表明,分离株HN04在MDCK细胞中增殖能力较其他2株强...     

MDCK细胞悬浮驯化及对H9亚型禽流感病毒敏感性的研究

为获得对H9亚型禽流感病毒敏感的纯悬浮MDCK细胞株,通过逐渐降低血清的方法对贴壁依赖的MDCK细胞进行了无血清纯悬浮驯化,最终获得了一株对H9亚型禽流感病毒敏感的纯悬浮细胞株MDCK-sus。通过测定表明,该细胞株能够迅速增殖,倍增时间为24h,使用H9亚型禽流感病毒BX13株感染该细胞,培养72h,培养液的病毒HA价可达到1∶512,每0.1mL病毒含量达到108.5EID50,为利用生物反应器大规模悬浮培养制备H9亚型禽流感病毒抗原奠定了基础。     

H9亚型禽流感病毒对MDCK细胞增殖及其培养基过氧化氢含量的影响

为了探讨H9亚型禽流感病毒对MDCK细胞增殖及其培养基过氧化氢含量的影响,将不同剂量的H9亚型禽流感病毒接种MDCK细胞单层,吸附1.5h后弃去再加入新的DMEM维持液,每隔12h取上清液测定HA滴度、乳酸脱氢酶(LDH)活力以及过氧化氢(H2O2)含量。同时,本试验采用MTT法测定不同剂量病毒接种对MDCK细胞增殖的影响。结果表明,以10-3EID50、10-4EID50病毒剂量接种细胞后,病毒HA滴度分别在36h和48h达到滴度最大值(9log2)以及LHD活力的最大值,上清液中H2O2含量在48h时显著(P<0.05)高于空白对照组和低剂量病毒接种组;接种病毒后36h以内对MDCK细胞生长具有显著地(P<0.05)促进作用,之后会显著(P<0.05)抑制细胞的增殖。综上所述,H9亚型禽流感病毒能在前期促进MDCK细胞的增殖,随着病毒增殖对细胞损伤加大,LDH漏出量增加,促凋亡因子H2O2参与介导了这一过程。     

H9亚型禽流感病毒感染引起MDCK细胞内抗氧化功能的变化

将传代MDCK细胞以8×10⁴/cm²的密度接种于6孔细胞培养板,H9亚型禽流感病毒以不同剂量0(对照组)、10^-3(高剂量组)、10^-4(中剂量组)、10^-5×EID₅₀(低剂量组)分别接种,检测H9亚型禽流感病毒对MDCK细胞内抗氧化功能的影响。结果表明,与对照组相比,高剂量H9亚型禽流感病毒接种MDCK细胞使细胞内过氧化氢(H₂O₂)和羟基自由基(·OH)含量均显著增加(P>0.05),细胞内超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力均显著下降(P>0.05),细胞内的丙二醛(MDA)含量显著增加(P>0.05)。说明H9亚型禽流感病毒可显著提高MDCK细胞内活性氧自由基(ROS)含量,并降低抗氧化酶活力,阻碍ROS在细胞内的清除机制,引起细胞脂质过氧化作用,从而损伤细胞。     

中药复方对H9N2亚型禽流感病毒在MDCK细胞增殖的作用

为了筛选对H9N2亚型禽流感病毒（Avian influenza virus,AIV）有独特防治效果的中药复方,本试验基于禽流感发病临床症状、结合中药复方用药基本原则,组方芩根提取液（Qingen extract,QG）,以奥司他韦（达菲,DF）为阳性对照药,通过研究药液对神经氨酸酶（neuraminidase,NA）的抑制作用,采用CCK-8法测定药液对犬肾上皮细胞（MDCK）毒性作用,并从病毒吸附、增殖和灭活3个方面做了药效评价。结果表明,QG对NA的抑制作用在一定浓度范围内呈浓度依赖性增高,半数抑制浓度（IC₅₀）约为1 130 μg/mL;QG和DF的最大安全浓度分别为2 500和500 μg/mL,H9N2 AIV的TCID₅₀为10^-4.36/100 μL;QG浓度为156.25~2 500 μg/mL范围内,对H9N2 AIV的病毒毒力有一定抑制作用,并在MDCK细胞上呈现出一定的抗吸附、抑制病毒复制作用。表明QG在对抗H9N2 AIV的NA活性、抑制H9N2 AIV吸附靶细胞和在细胞内复制有一定的作用。     

悬浮培养MDCK细胞制备的H9亚型禽流感灭活疫苗免疫剂量试验

为研究由悬浮培养的MDCK细胞制备的H9亚型AIV抗原所制备的灭活疫苗的免疫剂量,在生物反应器中悬浮培养MDCK细胞,接种H9亚型禽流感病毒WD98和HN04种毒,收获抗原液,以2种抗原液分别制备2个毒株的单价油佐剂灭活疫苗。每种疫苗均按照0.3、0.2、0.1、0.05mL/只(107.5 EID50/只~105.52 EID50/只)的剂量接种21日龄SPF鸡,免疫接种后3周采血测定AIV的HI抗体,采血后分别用与制苗株同源的H9亚型AIV种毒静脉注射攻毒,测定疫苗保护率。2种疫苗不同剂量免疫接种后21d的AIV HI抗体水平达到3.8log2~5.6log2,对照组鸡AIV HI抗体均为0log2。攻毒试验证实,以105.52 EID50/只~107.5 EID50/只剂量进行免疫接种,免疫鸡只获得了80%以上的保护。按照兽药典H9亚型禽流感疫苗攻毒保护率90%为合格的标准,悬浮培养MDCK细胞制备的H9亚型禽流感疫苗的最小免疫接种剂量为106.82 EID50/只。     

H9N2亚型禽流感病毒原位杂交检测方法的建立

根据已知禽流感病毒(Avian influenza virus，AIV)核蛋白(NP)基因序列，选取其中保守区域设计出1时引物。以RT-PR方法扩增出543bp的NP基因片段，采用地高辛标记制备探针。MDCK细胞人工感染H9N2亚型禽流感病毒后，不同时间取样制备细胞涂片，进行原位杂交，研究了禽流感病毒时MDCK细胞的感染。探讨了原位杂交的条件及其应用于检测AIV感染的可行性。结果显示，感染24h后，原位杂交可检测出细胞内的病毒RNA，并且杂交信号的强度与感染时间的长短有关。研究表明。原位杂交检测禽流感病毒，不但能很好地表现病毒和细胞的位置关系,而且具有较好的特异性和灵敏性，为禽流感病毒的组织原位杂交检测奠定了实验基础。     

重组禽流感病毒H5亚型Re-7株在MDCK细胞上增殖条件的研究

为了探索重组禽流感病毒H5亚型Re-7株在MDCK细胞上的增值规律,确定最适的接毒量与最佳收获时间。将重组禽流感病毒H5亚型Re-7株接种至100 L生物反应器全悬浮无血清培养的MDCK细胞进行增殖试验,检测不同病毒感染量,接种后不同时间病毒的HA、TCID50以及EID50。根据确定的最佳增值条件将病毒接种到MDCK细胞中进行大规模增殖培养。确定最适接毒量MOI为10~(-2),最佳收获时间为60 h。在100 L生物反应器中进行重复验证,获得稳定的试验结果,病毒HA达到1∶1024,每1 m L病毒含量达到107.33TCID50,每0.1 m L病毒含量达到106.83EID50。研究为重组禽流感病毒H5亚型Re-7株的全悬浮规模化生产提供了相对稳定的参数指标。     

稳定表达流感病毒PR8 HA蛋白MDCK细胞系的建立及鉴定

为建立稳定表达流感病毒(IV)HA蛋白的MDCK细胞系,本研究利用含有嘌呤霉素抗性基因的pMX载体,在启动子下游的AgeⅠ和NotⅠ两个限制性内切酶位点之间插入PR8株HA基因的开放阅读框,构建重组质粒pMX-PR8HA,将pMX-PR8 HA与3个分别表达VSVG、gag/pol和NF-KB的重组质粒共转染293T细胞,获得逆转录病毒样颗粒。用含有逆转录病毒样颗粒的细胞培养上清液感染MDCK细胞,利用嘌呤霉素进行筛选、纯化得到稳定表达PR8株HA蛋白的细胞系。连续传10代后,进行PCR、RT-PCR、IFA和western blot鉴定,结果表明,获得了能够稳定表达IV PR8株HA蛋白的MDCK细胞系。该细胞系的建立有望为IV表达外源基因提供可靠的培养细胞系。     

Cloning of cDNAs encoding multiple subtypes of feline interferon-alpha from the feline epitherial cell line

Mammalian interferon (IFN)-alpha consists of a 23-amino acid signal peptide and a 166-amino acid mature protein. Feline (Fe) IFN-alpha has an extra unique molecule consisting of a 171-amino acid mature protein with a 5-amino acid insertion. We cloned eight new subtypes of cDNA encoding FeIFN- alpha from a feline epithelial cell line. Among all the FeIFN-alpha subtypes, including six that have previously been reported, the variations were found to be far less than those of IFN-alphas of other animals.     

灌溉地不同人工牧草草地土壤水分及生长特征变化

对2003-2005年人工牧草草地不同深度不同时间灌水前后的水分变化特征进行研究,发现0-40 cm含水率变化大而且快称多变层;40-80 cm牧草水分利用层,80-100 cm稳定贮水层。分析美国大叶、德国大叶、沙打旺、红豆草生长状况,在相同气候和管理条件下美国大叶单株鲜重最大。用土壤水分平衡法估算美国大叶、沙打旺两种牧草的全年耗水量和土壤水分贡献系数,结果表明,在干旱缺水地区种植美国大叶是发展草产业的较好品种。     

不同处理对虫草菌生长效果的影响

冬虫夏草简称冬虫草,具有益肺肾,补精髓,止血化痰、抗菌、平喘、强心、降压等功能。其主要成分除脂肪、精蛋白、精纤维、碳水化合物和水分以外,尚含有虫草酸、冬虫草素和维生素B12等,营养和药用价很高。由于天然的冬虫草产量越来越少,人工培养冬虫夏草替代品已成为科研部门的热     

不同酸化剂对仔猪生产性能的影响

复合酸化剂由于添加量小、价格便宜、对适口性影响小等特点而被广泛应用。而在生产实际中,笔者发现不同的复合酸化剂的效果存在较大差异。随着仔猪消化生理研究的深入,研究者们发现酸化剂对胃酸、胃蛋白酶     

槲皮素对禽流感病毒感染试验鸡的防治作用

为验证槲皮素对禽流感人工感染鸡的防治效果,将中药槲皮素人工灌喂试验鸡,观察试验鸡的临床症状及死亡情况,并统计各组鸡的死亡率。第一次试验以盐酸金刚烷胺为药物对照,测试槲素I溶液、槲皮素II溶液及槲皮素复方溶液对禽流感人工感染鸡的药效。第二次试验再以第一次实验效果最好的槲皮素不同浓度溶液进行对照实验。结果表明：灌喂槲皮素后...     

不同培养条件对捕食性真菌Duddingtonia flagrans生长的影响

为了研究不同生长条件对捕食线虫性真菌Duddingtoniaflagrans生长的影响,本研究将带有D.flagrans菌丝的琼脂块分别接种于不同碳氮比及不同pH值(4.0~8.5)的CMA固体培养基中,在不同温度下(10℃~45℃)进行培养,每天定时观察菌株的发育情况,并测量菌丝生长长度。结果表明,D.flagrans生长最适pH值范围为6.5~7.0,其中以pH 7.0中生长最快;最适温度为35℃;最适碳氮比范围为5∶1~10∶1,其中在碳氮比为5∶1时,生长率最高。菌丝呈辐射状生长,纵横交错,无色,分隔,生长后期有缠绕圈和厚壁孢子的形成。上述结果为进一步研究D.flagrans的生长特性及捕食作用条件奠定了基础。     

不同地域长爪沙鼠群体间遗传状况分析

应用27个生化基因位点,分别对首都医科大学实验动物科学部和浙江省实验动物中心饲育的2个长爪沙鼠群体进行了遗传分析。结果显示,首都医科大学实验动物科学部长爪沙鼠群体遗传适应性、遗传多样性水平、遗传变异程度都明显高于浙江省实验动物中心沙鼠群体（P〈0.05）,并且这2个沙鼠群体间未出现较为明显的遗传分化（FST〉0.05）。     

3种胡枝子根系生长特性及根干重的研究

对3种胡枝子的根干重及根系生长特征的研究结果表明,尖叶胡枝子,达乌里胡枝子和二色胡枝子具有较大的根干重,在100cm的土层范围内分别达到3472．05,3060．07和8795．66kg／hm^2,根系以粗、中根为主;根干重主要集中在0～20cm的耕作层中,分别占总根量的77．73％,72．289／5和89．02oA;30～50cm的土层中细根占较大比例,分别达到42．91％～5．35％,86．09％～95．41％和71．91％～93．6％。