大叶藻胚的石蜡切片制作方法

研究固定方法、脱水及浸蜡时间、染色方式对大叶藻胚石蜡切片制作效果的影响。结果表明,采用标准固定液（FAA）固定48 h以上,脱水每级梯度时间2 h,分3次浸蜡（每次30 m in）,苏木精-伊红染色,可制作出染色清晰、组织结构完整的大叶藻胚切片。     

乌饭树茎段组织的石蜡切片制作技术研究

以乌饭树(Vaccinium bracteatum)嫩枝插条为试验材料,对其取材、FAA及PFA固定液的不同固定、乙二胺及甘油乙醇溶液的不同软化处理、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色等程序进行了试验探究。结果表明,2种固定液均适宜作为乌饭树插条的固定液,乙二胺软化效果较好,染色15~20s为宜。通过试验掌握了乌饭树茎段的石蜡切片制作方法,得出了乌饭树茎段石蜡切片制作过程中的关键技术。     

毛花猕猴桃花芽石蜡切片制作方法的改良

为摸索适合毛花猕猴桃花芽的石蜡切片方法,以毛花猕猴桃"赣猕6号"花芽为试材,在传统石蜡切片方法的基础上,结合毛花猕猴桃花芽多茸毛的特点,对石蜡切片制作过程中样品处理、脱水、透明与渗蜡、包埋与切片及染色方式进行改良。研究结果表明,FAA固定液固定后利用解剖针剔除花芽上的茸毛,不易造成切片组织错位、破碎,切出完整的组织切片效率更高。延长脱水及渗蜡等步骤的时间及提高温度后,切片染色效果均匀,图片清晰,细胞轮廓明显。本研究通过改良传统石蜡切片方法,获得了适合毛花猕猴桃花芽形态结构观察的石蜡切片方法,为后期花芽分化观察奠定了研究基础。     

山药食用部分石蜡切片的制作方法和鉴定研究

通过设置不同处理,对山药地下食用部分进行脱水、透明、浸蜡等主要影响因素进行试验,得到适合的石蜡切片制作方法。结果表明,合适的脱水时间为每阶段2h,透明时间为每阶段8h,浸蜡时间为每阶段10h。对材料显微结构的观察表明其维管束排列方式、维管束内部结构及分化特征均符合单子叶植物茎的一般特征,判定山药地下食用部分其本质是茎而不是根。     

用改进石蜡切片法观察大鳞副泥鳅皮肤虹彩细胞

以大鳞副泥鳅为研究对象,针对常规石蜡切片无法观察到鱼类皮肤虹彩细胞的不足,固定液改用10%中性福尔马林,脱水前使用1.5%琼脂糖对组织进行预处理,染色使用3%伊红。结果发现:大鳞副泥鳅新鲜皮肤组织选用10%中性福尔马林进行固定,在梯度脱水前用1.5%琼脂糖对组织进行预处理,并用3%伊红进行染色,即可以得到组织结构完整、虹彩细胞清晰的皮肤组织切片。表明改进后的石蜡切片法可以用于鱼类皮肤虹彩细胞观察。     

槲树不同发育时期胚珠石蜡切片制备体系的优化

【目的】建立并优化适宜槲树子房或胚珠石蜡切片的制作体系,为后续槲树胚胎发育学研究提供技术支撑。【方法】以不同发育时期的槲树雌花为试验材料,将材料以60 d为界分为60 d前和60 d后两部分,对材料处理方式(授粉60 d前后的材料分别进行仅保留子房与胚珠处理)、浸蜡时间（18,24,36 h）与浸蜡条件（60 ℃烘箱内抽真空处理0,6,8,12 h）、切片厚度（6,8,10 μm）进行优化;在此基础上,以授粉70 d样品切片为材料,对染色方法（染色液分别为5 g/L苏木精、1 g/L甲苯胺蓝和10 g/L番红 固绿）及染色时间（1,2,5,10,15 min）进行优化,建立适合槲树胚珠的石蜡切片制备体系。【结果】授粉60 d前的样品仅保留子房部分,授粉60 d后的样品仅保留胚珠,两者在50 ℃烘箱经甘油乙醇浸泡48 h的软化处理后,所得切片效果最佳,可避免蜡带破裂等不良现象出现。将浸蜡时间延长至36 h,并于第1次浸纯蜡过程中在60 ℃烘箱内先进行12 h抽真空处理,可保证发育后期体积较大材料的充分浸蜡;脱蜡前将玻片进行3 h抽真空处理,可明显降低脱片率;授粉60 d前样品的切片厚度以8 μm为宜,授粉60 d及以后的样品以10 μm最佳。槲树胚株石蜡切片制备时,采用5 g/L苏木精染色5 min时的制片效果最好。【结论】建立并优化了槲树不同发育时期子房或胚珠石蜡切片的制备体系,采用该优化体系可获得蜡带连续、结构完整、染色均匀、背景清晰的槲树子房或胚珠切片。     

西瓜果皮显微结构比较研究

以薄皮西瓜和厚皮果皮为材料,通过比较不同的脱水时间和浸蜡时间对石蜡切片效果的影响,得到西瓜果皮石蜡切片观察方法,以为研究不同西瓜果皮显微结构提供技术支持.同时,比较薄厚皮西瓜果皮显微结构的异同,为研究西瓜果皮结构与裂果的关系奠定基础.结果表明:西瓜果皮组织块在各级乙醇中的脱水时间均需约2h;大小不同的果皮组织块脱水时间可以通过西瓜果皮绿色部分的淡化程度来确认,绿色完全消失表明脱水完全;组织块透明时间在各级透明液中也需要约2h,当组织块下沉到底部且呈完全透明状时表明透明完全;浸纯蜡的时间可控制为6h.薄厚皮西瓜果皮结构比较表明:厚皮西瓜果皮细胞较薄皮的圆润;薄皮西瓜角质层上的细胞偏纵向生长,厚皮西瓜则偏横向生长;薄皮西瓜外果皮中的木质部(被染成红色的部分)类似于断带状,厚皮西瓜则是连续的直带状;薄皮西瓜石细胞团较厚皮西瓜的小一些;厚皮西瓜中果皮中的细胞要比薄皮西瓜的圆润且大.     

四倍体刺槐茎段组织石蜡切片的制作方法

以传统石蜡切片方法为基础,针对林木茎段木质化程度高、硬度和脆性大的特点对固定、软化、脱水、透明、染色等具体步骤进行了改进,并成功应用于四倍体刺槐生根过程插穗基部解剖学研究。结果表明:较传统方法切片时组织不易碎,切片结构完整,减少了脱水时间,缩短了制片周期;获得了厚度为8 μm且染色清晰、细胞结构完整的林木茎段横切面切片;四倍体刺槐插穗石蜡切片可清晰的观察大量能够反映生根各时期发育特征。该方法为进一步从解剖学上研究林木茎段组织生长机制提供基础,为探究其组织形态变化提供了新的技术方法。     

小鱼眼球视网膜组织石蜡切片的制作方法

目的观察小鱼眼球(直径在0.3cm左右)视网膜组织石蜡切片的制作方法。方法鲻鱼和罗非鱼各5条,采得眼球20个,用体积分数(下同)95%乙醇85mL 10%中性甲醛10mL 冰醋酸5mL混合而成的FAA固定液进行固定;脱水前先用医用7号针头刺破眼球后再进行脱水、透明、石蜡包埋、切片和HE染色,最后在光镜下观察结果。结果20个眼球的视网膜组织结构和层次均基本保持完整,细胞形态清晰。结论0.3 cm左右直径的鱼类小眼球用FAA固定液固定和针刺破眼球后脱水法制作石蜡切片方法是可行的。     

石蜡切片制作方法的改良

创立了一种时间短、质量高的石蜡切片制作方法。针对动植物材料结构特点不同,在脱水、透明、透蜡、包埋、染色和封固等环节进行了一系列改良,获得了染色清晰、组织结构完整的切片。该文以小蜡树为例,详细介绍了改良后的石蜡切片制作方法。实验结果表明,相比传统制作方法,改良后的制作方法减少了切片制作时间,缩短了实验周期。同时,有效地提高了批量制备石蜡切片标本的整体质量,有利于实验教学和组织学、病理学等领域的研究工作。     

微波快速石蜡切片法观察水稻叶片组织

 石蜡切片是植物解剖学和病理学观察的重要手段。该方法从取样到切片完成约需一周的时间,操作周期较长。本试验对水稻品种丽江新团黑谷的叶片分别进行了微波石蜡和传统石蜡的切片并用苯胺蓝染色对结果进行比较。在微波石蜡切片中通过对固定、脱水和浸蜡等操作的改进使得该方法只需约3h即可完成切片。微波石蜡切片组织的完整性和染色的效果与传统石蜡切片相近,叶片的表皮、叶肉细胞和维管束等不同叶片结构均可清楚地进行显微观察和拍照。结果显示,可利用微波石蜡方法对水稻叶片进行制片且可较大幅度缩短处理的时间,提高工作效率。     

绵羊卵丘-卵母细胞复合体石蜡切片技术的改良

【目的】在绵羊有腔卵泡发育过程中,多层卵丘细胞紧密包绕着卵母细胞形成卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complex,COCs)特殊结构,存在于卵泡腔内。卵泡成熟后,绵羊COC从卵泡内排出,进入输卵管,等待受精。现有的卵丘-卵母细胞复合体蛋白鉴定技术,或者将包含各级卵泡的卵巢组织直接进行切片处理,或者将COCs从卵泡内分离,在完整卵丘-卵母细胞复合体水平上进行免疫染色。但这两种方法在检测绵羊有腔卵泡COCs中目的蛋白表达时,存在显著缺陷。研究旨在对常规石蜡组织切片技术进行改进,以期满足绵羊COCs蛋白鉴定需求。【方法】首先采用抽吸法从绵羊有腔卵泡内获得COCs,以石蜡包埋方式人为构建了一种可以进行切片处理的"包含多枚绵羊卵丘-卵母细胞复合体的仿组织结构"。然后以该特殊结构与健康绵羊卵巢组织为研究对象,分别采用改良与传统的石蜡组织免疫化学技术流程,检测了目的蛋白,尿激酶型纤溶酶原激活剂(urokinase-type plasminogen activator,uPA)与其受体(urokinase-type plasminogen activator recepter,uPAR),在绵羊COCs中的表达情况,比较了两种技术的免疫染色效果与染色流程差异。【结果】将所构建的绵羊COCs仿组织结构与正常绵羊卵泡组织,进行石蜡组织切片处理,经切片、贴片与脱蜡等步骤,分别形成了散在分布于载玻片上的COCs薄片与包含卵泡的卵巢组织薄层(厚度5μm)。经间接免疫染色处理后,结果显示:①目的蛋白在两种结构COCs中的表达是一致的,即uPAR在绵羊卵丘与卵母细胞上都有表达,而uPA只存在于绵羊卵丘细胞中;②在绵羊COCs薄片结构中,COCs整体形态完好,卵母细胞与外围卵丘细胞层次清晰,蛋白定位清楚,染色效果良好;在卵巢薄层结构中,绵羊卵泡内壁颗粒细胞与COCs等形态结构相对完整,卵母细胞蛋白定位清楚,但是卵丘细胞层次与蛋白表达较不清晰;③与绵羊卵巢组织石蜡切片技术相比较,绵羊COCs仿组织结构石蜡切片技术,在固定、脱水、透明、浸蜡以及脱蜡等步骤的处理时间都大大缩短,例如固定处理由24h缩短为2h;由逐级脱水的10h缩短为两级脱水的1h;透明由30min缩短为10min;软蜡与硬腊浸入由原来的6h缩短为1h;由逐级脱蜡的25min缩短为两级脱蜡的10min等。【结论】改进后的COCs仿组织石蜡切片染色技术,显示更优质的免疫定位与染色效果,不仅具有COCs获得率高、卵母与卵丘细胞形态层次清晰等优点,而且显著缩短了操作时间,简化了操作流程。该技术在保留COCs结构完整的基础上,有效检测了目的蛋白在绵羊卵丘-卵母细胞复合体中的表达模式,对于探明绵羊卵泡发育与卵母细胞成熟机制,具有重要意义。     

含羞草石蜡切片的制作

通过对含羞草进行取材、固定、脱水、透明、浸蜡、切片、脱蜡、染色、透明等一系列过程的试验研究,掌握了含羞草石蜡切片的制作方法,总结出了含羞草石蜡切片制作过程中的关键技术,并通过显微观察分析,从解剖学上为研究含羞草的运动机理提供了理论基础。     

石榴花芽石蜡切片制作方法的改良

[目的]摸索适合石榴花芽及胚珠结构观察的石蜡切片方法。[方法]以"突尼斯软籽"石榴花芽及胚珠为试材,在传统石蜡切片方法的基础上,结合石榴花芽鳞片厚、子房多室的特点,对样品处理、软化、透明、浸蜡、染色等重要制片环节进行研究。[结果]不同样品处理方式对比发现,将子房纵切4瓣进行固定,切片效果较好。软化结果表明,纱布包裹花芽浸入水中加热至沸腾30 min,有助于提高制片效果。不同染色方式对比发现,爱氏苏木精染色法更适合石榴胚珠切片观察。[结论]通过优化常规石蜡切片方法,得到了适合石榴花芽及胚珠结构观察的石蜡切片方法,该方法同样适用于与石榴花芽及胚珠结构类似的其他结构。     

玉米成熟期茎秆石蜡切片方法的研究

[目的]建立一种适合玉米成熟期茎秆木质化、纤维化程度高,材料硬度大等结构特点的石蜡制片方法。[方法]以成熟期玉米基部茎秆节间的部分组织为材料,在传统石蜡切片方法的基础上,结合玉米成熟期茎秆的结构特点,对脱水、透明、透蜡、包埋、染色等重要制片环节进行了一系列的研究,得到了适合玉米成熟期茎秆的石蜡制片方法。[结果]玉米茎秆石蜡制片方法较传统方法整体上缩短了制片周期,结合玉米成熟期茎秆水分含量低减少脱水时间、采用蜡屑逐级透入弥补了传统透蜡不能使皮层致密的厚壁细胞组成的机械组织透蜡完全的缺点,并根据玉米成熟期茎秆木质化程度高的结构特点缩短染色周期,获得了厚度为10μm且染色清晰、组织结构完整的玉米成熟期茎秆横切切片。[结论]该方法进一步从解剖学上观察和研究玉米的生长机制和品种鉴定提供基础,同时为成熟期单子叶禾本科植物茎秆的石蜡切片技术提供借鉴。     

小鼠部分组织器官石蜡切片制作方法的改良

为了克服小鼠组织器官传统石蜡切片制作方法存在组织易碎、结构不完整的缺点,对传统石蜡切片制作进行了改良.将浸蜡前的透明步骤改为异硬脂醇与石蜡混合液处理,替代苯类透明剂制作空肠、脾脏2种器官的石蜡切片,并以切片机切片时蜡带质量和HE染色后镜下质量为切片制作效果的评定指标.结果表明,2种器官在切片机上均能切出完整、较长的蜡带,组织块无硬化、不碎裂,展片平整;HE染色过程中不掉片,染色后光镜下细胞质与细胞核染色对比清晰,器官组织结构完整.就脾脏和空肠而言,应用异硬脂醇与石蜡混合液替代苯类透明剂能制作出优良的石蜡切片.     

不同发育时期的梨果肉组织石蜡切片制备

为探讨不同时期梨果肉组织石蜡切片的制作方法,观察其果肉中石细胞发育过程的微观结构变化。将不同长势的梨果肉组织(14 d、60 d、120 d)经固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片和番红-固绿对染等一系列过程,获得其纵切片。结果表明,处于发育幼嫩时期的果肉的细胞染色较深,随着发育时间的增长,石细胞次生壁显色也愈加明显,在果实成熟期石细胞团以成簇形式分布于果肉当中。本研究结果可为深入观察梨石细胞解剖结构及发育的分子生物学研究提供参考。     

微波快速石蜡制片的实例运用

以美洲商陆为试验材料,借鉴传统石蜡制片技术流程,应用微波技术,对固定、脱水、透明、浸蜡等步骤进行改进,使试验周期缩短为两天以内。结果表明:采用微波快速石蜡制片法获得了染色清晰、组织完整的解剖结构,与传统石蜡制片法的效果相同。     

动物组织HE染色石蜡切片技术的改进

组织切片方法是教学、科研、病理检验工作中广泛应用的一种实验技术.近年来对传统的组织切片方法进行了全面地改进试验研究,使组织固定完全,脱水彻底,透明适度,浸蜡充分,切片较薄,染色良好;不仅缩短时间,简化程序,节省药液,而且提高了组织切片的质量.     

动物胃平滑肌组织石蜡切片制作技术研究

为解决动物胃平滑肌组织石蜡切片的制作过程中肌束出现严重分离的问题,设定3组不同的试验方案,分别改变组织脱水、透明和浸蜡时间,制作兔胃和狗胃的石蜡切片,HE染色,光镜观察.结果表明,组织经过50%乙醇180min、70%乙醇180min、80%乙醇660min、95%乙醇(Ⅰ)50min、95%乙醇(Ⅱ)50min、100%乙醇(Ⅰ)50min、100%乙醇(Ⅱ)50min的脱水效果最好;经过二甲苯乙醇(二甲苯:乙醇=1:1)20min、二甲苯5min、二甲苯石蜡(二甲苯:石蜡=1:1)40min的透明效果最好;经过石蜡Ⅰ(52～54℃)60min、石蜡Ⅱ(54～56℃)60min和石蜡Ⅲ(56～58℃)50min的浸蜡效果最好;在42℃水中展片,将水分晾干后,放置在52～54℃的摊片机上40 min的展片效果较好.以上方案均可有效改善动物胃平滑肌组织肌束分离的现象.