烟草青枯病拮抗真菌烟曲霉发酵条件的优化

烟曲霉(Aspergillus fumigatus)对烟草青枯病菌(Ralstonia solanacearum)有稳定的拮抗作用,在验证其发酵液对烟苗生长无害的前提下,利用四因素(发酵温度、发酵时间、接种量、装液量)三水平三重复正交试验,测定该真菌的最佳发酵条件.结果表明,烟曲霉的最佳发酵条件为:发酵温度28℃、发醇...     

烟草废弃物腐熟发酵生物有机肥效果试验

选择目前我国数量多且有严重危害的烟草废弃物为主要原料,通过加入复合微生物菌剂进行高温好氧发酵,分析发酵过程中感官及剪切拉力、温度、含水率、ph及发芽指数等指标,判断其是否腐熟;并对腐熟物中有效活菌数、有机质、无害化指标及五项重金属等指标进行检测,判定其是否符合生物有机肥标准。试验表明,添加复合微生物菌剂对堆肥发酵有明显的促进作用,有利于堆肥的腐熟及无害化,并增加微生物的活动强度;产品呈黑褐色,具有土腥味,各项指标均优于NY884-2012生物有机肥标准。     

抗阿尔茨海默病的牡蛎内生真菌分离筛选及发酵条件优化

以青岛海域野生牡蛎为原料,采用菌丝尖端切割法分离获得内生真菌,采用形态学和18S rDNA对其进行鉴定,并对其进行种属分类。结果表明从牡蛎中共分离得到13株真菌,经鉴定这13株真菌全部属于子囊菌门(Ascomycetes),其中7株为枝孢霉属(Cladosporium),是牡蛎内生真菌的优势菌属,占分离真菌总数的53%,另外青霉属(Penicillium)两株,节菱孢霉(Arthrinium)、蜡蚧菌属(Lecanicillium)、链格孢霉属(Alternaria)和黑团孢属(Periconia)的菌株各1株。对分离得到的牡蛎内生真菌进行体外抗阿尔茨海默病活性筛选,其中5株真菌发酵产物兼具抑制乙酰胆碱酯酶(AChE)和抑制β-淀粉样蛋白(Aβ_1-42)聚集的活性。为进一步开发利用,采用单因素结合响应面方法对活性菌株ML3发酵条件进行了优化。结果表明：最佳发酵条件为发酵温度28℃,发酵时间12天,种子液接种量10%。在此条件下,次生代谢产物AChE抑制率和Aβ_1-42相对抑制率分别为57.65%和52.43%,比未优化前分别提高了9.35%和...     

芒果废弃物降解菌的筛选及香菇混菌发酵条件优化

【目的】为提高我国芒果加工产品利用率,同时为农业发展提供新原料,使芒果废弃物得到资源化利用。【方法】利用选择培养基从芒果废弃物中筛选出一株具有高效降解纤维素能力的菌株L-1,以纤维素降解率、糖化率为响应值,通过单因素和正交试验对其与木质素降解菌(MF687854)混菌发酵条件进行优化,并对发酵产物中蛋白质含量和氨基酸成分进行分析。【结果】通过形态学及分子生物学鉴定该菌为里氏木霉(MK257811),且最优发酵条件为混菌(纤维素降解菌:木质素降解菌)比例3∶2,接种量12.5 g/100 g、含水量70%、初始pH值6.0,最适温度为26℃。【结论】混菌发酵具有极高的可行性及降解能力,两种菌在共同作用时,可显著提高芒果废弃物降解能力。     

烟草黑胫病生防菌的筛选鉴定及发酵条件优化

从山东烟田土壤中筛选对山东烟草黑胫病(Phytophthora parasitica var.nicotianae)具有较强拮抗作用的生防菌株。通过稀释涂布法初筛后,用平板对峙法复筛到拮抗效果较好的菌株YCG-2,根据菌株形态与培养特征、ITS序列分析进行鉴定,该菌株与哈茨木霉(Trichoderma harzianum)的亲缘关系较近,且形态与培养特征与哈茨木霉基本相符,因此鉴定为哈茨木霉。通过单因素试验和正交试验优化培养基组分及发酵条件,最优发酵条件为每500 m L瓶20 g菇渣,料水比为1 g∶3.0 m L,种子液接种量1×10~7CFU/g,p H值7.0,最适温度28℃,恒温恒湿培养箱中培养6 d。     

烟草废弃物腐熟发酵生物有机肥在烟草种植上的应用效果研究

[目的]为验证烟草废弃物经无害化处理后,进行肥料化利用还田,实现废弃物资源化利用,达到节约资源、循环利用、减少烟田病害的目的。[方法]在陕县张茅乡西坡垴村设计2个处理,对烟株各个生育时期的长势长相、生长发育、抗病性、产值和经济性状4个部分的测试。[结果]证明在有机无机生物肥应用的基础上施用烟草废弃物经无害化处理制作成的生物有机肥可以促进烟株生长发育,改善烟叶成熟度和外观质量,提高烟株的抗病性,提高烟叶产量和经济性状。[结论]实现了废弃物资源化利用,达到节约资源、循环利用、减少烟田病害的目的。     

烟草黑胫病拮抗细菌的筛选及其发酵条件优化

为获得对烟草黑胫病有较强生防效果的拮抗细菌,从四川省凉山州5个县(市)烟草种植田地采集10份土壤样品,通过稀释平板法分离得到112株细菌。采用平板对峙法获得39株对烟草黑胫病病原菌(Phytophthora parasitica var.nicotianae)拮抗效果较好的细菌。选取拮抗效果最好的GC-38菌株进行进一步研究,结果显示,菌株GC-38对烟草黑胫病病菌抑制率为81.81%,经鉴定菌株GC-38为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliauefaciens)。优化后得到其最佳发酵条件:碳源为葡萄糖,氮源为蛋白胨,pH值为9.0,温度在30~35℃范围内。可见,GC-38菌株对烟草黑胫病有明显的拮抗作用,是具有较大开发潜能的生防菌株。     

一株降解木聚糖真菌的筛选及其发酵条件优化

[目的]从自然界中筛选出具有木聚糖酶活力的菌株,为今后降解农作物秸秆提供材料。[方法]以木聚糖为唯一碳源,从土壤中筛选能够降解木聚糖的菌株,并对其进行鉴定和发酵条件优化。[结果]从土壤中筛选出一株能够降解木聚糖的菌株,综合菌落、菌体形态特征和18S rRNA序列分析,初步鉴定该菌株为土曲霉(Aspergillus terreus thom.)GY-1。单因素试验研究表明,菌株GY-1最佳碳源为蔗糖,Mg2+能提高其木聚糖酶活力,最佳氮源为硝酸铵,最适温度为30℃,最适pH为6.0,该菌在培养52 h时木聚糖酶活力最高,为880.11 U/ml。L16(45)正交试验结果表明,GY-1的接种量以及培养基中蔗糖、Mg2+和硝酸铵的添加量对其木聚糖酶活力均有显著影响,GY-1菌株的最优发酵条件为:50 ml基础发酵培养基中,接种量2%,蔗糖1 g,硝酸铵0.03 g,Mg2+0.004 mol。[结论]该研究首次报道了土曲霉具有木聚糖酶活力,为研究土曲霉降解木聚糖提供了一定的试验依据。     

生防外生菌根真菌的筛选及其生长和发酵条件优化

为了筛选具有广谱拮抗活性的外生菌根真菌,采用平板对峙法(初筛)和生长速率法(复筛)测定了6种外生菌根真菌对5种常见植物病原真菌的抑制活性,通过单因素试验对抑制效果较好的生防菌进行生长及发酵条件优化。结果表明,彩色豆马勃Pt01在初筛试验中对植物病原真菌的抑菌率为40.1%~49.7%,在复筛试验中抑菌率为78.5%~91.8%,抑菌作用整体高于其他外生菌根真菌。条件优化后发现,Pt01在28℃、p H值为7.0、碳源为乳糖、氮源为硝酸钾时生长最好;其最佳发酵条件:温度为30℃,初始p H值为6.0,碳源为乳糖,氮源为酵母膏,时间为5 d,转速对不同病原真菌抑菌率各有不同影响,需要单独考虑最佳转速。彩色豆马勃菌株Pt01对5种受试病原真菌均有明显的抑制作用,优化其生长和发酵条件为其在植物病害防治上的应用提供了理论依据。     

烟草赤星病高效生防内生细菌的分离筛选及发酵培养条件优化

为提高烟叶安全,探索曲靖烟区烟草赤星病生物防控技术,研究烟草内生菌株对烟草赤星病的防控作用。以曲靖烟区分离得到的烟草赤星病病原菌为靶标,采用平板对峙培养法从健康烟株体内分离筛选出生防内生细菌,并应用Design-Expert软件,采用响应面法对其进行发酵培养基的优化。结果表明,从曲靖烟区健康烟株体内分离筛选出15株对烟草赤星病病原真菌链格孢菌具有拮抗作用的菌株,其中编号为YWF-19-0004、YWF-19-0065、YWF-19-0068、YWF-19-0070、YWF-19-0071的5株内生细菌抑菌带宽≥10 mm、抑菌率≥50%;采用响应面法获得YWF-19-0068菌株的优化培养基配方：大豆粉浓度14 g/L,蛋白胨浓度2 g/L,鱼粉浓度2 g/L,蔗糖浓度11 g/L,玉米粉浓度为7 g/L,碳酸钙浓度5 g/L,氯化钠浓度0.3 g/L,磷酸二氢钾浓度0.3 g/L,磷酸氢二钾浓度0.3 g/L,硫酸锰浓度0.2 g/L,硫酸镁浓度0.3 g/L,硫酸铵浓度0.5 g/L,利用优化培养基进行发酵,YWF-19-0068菌株的菌量是基础培养基发酵所得菌量的4.47倍,说明...     

一株产多糖真菌的筛选、鉴定与发酵条件优化

以马铃薯汁（PDA）培养基为筛选培养基,从自然界枯枝腐木中筛选产多糖真菌,经平板初筛、摇瓶复筛获得最优菌株TL-8,胞外多糖产量达1.1 g/L。经形态观察和分子生物学鉴定,TL-8菌株鉴定为白囊耙齿菌（Irpex lacteus）。在发酵基本培养基初始条件下,分别以培养条件（如温度、摇床转速、pH值、发酵时间等）和培养基成分（如氮源、碳源）作单因素优化,并根据单因素优化结果筛选影响较大的因素进行正交试验优化,以确定白囊耙齿菌TL-8产胞外多糖的最优发酵条件。结果表明：在发酵基本培养基的基础上,采用乳糖（12 g/L）和葡萄糖（28 g/L）作复合碳源,采用酵母膏（6.0 g/L）和豆渣粉（9.0 g/L）作复合氮源,pH值6.0,摇床转速160 r/min,装液量为100 mL/250 mL,培养温度30℃的条件下培养8 d,白囊耙齿菌TL-8的生物量达15.78 g/L,胞外多糖产量达5.49 g/L。     

盐碱地中溶磷真菌的筛选及培养条件优化

为缓解板结土壤中由于不溶性磷酸盐的积累过多对土壤造成的板结问题,从东北长期板结土壤中筛选出多株具有溶磷能力的溶磷真菌。通过解磷圈测量及钼蓝比色法对分别以磷酸钙、磷酸铝及磷酸铁为主的培养物中可溶性磷含量进行测定,获得了1株溶磷能力较大的菌株P10,其对磷酸钙、磷酸铝及磷酸铁的分解能力分别为250,13,31μg/m L,经分子生物学鉴定,该菌株为具疣蓝状菌(Vorte plave gljivice)。该菌的最佳碳源、氮源、p H及底物磷酸钙用量分别为蔗糖、大豆粉、p H 6.0及10 g/kg,优化后,可溶性磷含量达378μg/m L。     

产脂肪酶真菌的筛选及产酶条件优化

[目的]从富含油脂的土壤中寻找高产脂肪酶的真菌,以期为扩大脂肪酶的菌源提供材料。[方法]从上海市、河北省唐山、江苏省兴化、安徽省合肥地区土样中,经富集培养、平板筛选得到22株脂肪酶产生菌株,通过复筛得到1株脂肪酶活力较高真菌。根据《常见与常用真菌》对菌株进行鉴定,并研究不同条件对菌株产酶的影响。[结果]从富含油脂土壤中分离得到1株产脂肪酶能力较高菌株,根据菌落群体及个体形态,查阅相关鉴定手册,初步确定该菌株为黑曲霉。菌株产酶条件研究表明：其最适产酶条件为温度30℃,初始pH 7,装液量20%,最适碳源与氮源分别为淀粉和蛋白胨。[结论]为脂肪酶产生菌以及脂肪酶的工业化生产与应用奠定了基础。     

钩丝孢属真菌高产蛋白酶菌株的筛选及其发酵条件优化

【目的】筛选钩丝孢属真菌高产蛋白酶菌株,并优化其产酶培养基和发酵条件,为寄生线虫病的生物防治提供优良菌种。【方法】以15株钩丝孢属真菌为材料,在28℃、180 r/min振荡培养10 d后,采用福林酚法测定其蛋白酶活性,筛选高产蛋白酶菌株,测定其产酶周期,并利用全齿复活线虫测定该菌株发酵液的杀线虫率。通过单因素试验和正交试验对高产蛋白酶菌株的产酶培养基及发酵条件进行优化,并对优化条件进行验证。【结果】从15株钩丝孢属真菌中筛选出1株高产蛋白酶菌株H6,其蛋白酶活性在发酵5 d最高。最佳产酶培养基成分为葡萄糖8 g/L、明胶8 g/L、蛋白胨8 g/L、酵母提取物4 g/L。最佳发酵条件为pH 7.0、20℃、260 r/min、接种2块直径5 mm的菌块。在此优化条件下,菌株H6蛋白酶活性为216.42 U/mL,比优化前(67.84 U/mL)提高了2.19倍。【结论】筛选出1株钩丝孢属高产蛋白酶菌株H6,获得了其优化产酶培养基和发酵条件。     

产葡萄糖氧化酶工程菌培养基筛选及发酵条件优化

利用单因素试验和4因素3水平的正交试验L9(34)对1株产葡萄糖氧化酶毕赤酵母工程菌HL-69进行了研究,确定了该菌株的适宜廉价生长培养基和诱导培养基。生长培养基:葡萄糖1.5%、豆粕粉3.0%、磷酸二氢钾0.2%、硫酸镁0.03%;诱导培养基:甲醇1.5%、氨水3.5%、磷酸二氢钾0.5%、硫酸镁0.03%。培养条件为:接种龄18h,接种量2%,培养基装液量为50mL/300mL,生长初始pH为5.0,诱导初始pH为6.0;在此条件下发酵,葡萄糖氧化酶酶活力达6.516U/mL,是发酵条件优化前酶活力的7.50倍。     

糖厂废弃物发酵生产生物有机肥研究

自从20世纪80年代糖厂建立以来,废弃物酒精废液和滤泥一直作为农业废弃物污染着附近的环境。根据滤泥和酒精废液的特点,筛选出EM水剂微生物菌剂作为发酵剂,研制出双轴搅拌生产工艺,探索出堆沤场地建设标准,以此为原料生产出的生物有机肥获得农业部的生物有机肥登记证,并初步摸索出广西主要作物的施肥量和施肥方法。     

果胶酶高产菌的筛选及发酵条件的优化

采用平板分离法从腐烂的大枣中筛选出果胶酶的高产菌株,通过L16(45)正交试验对该菌种的深层液体发酵条件进行优化.结果表明:该菌种深层液体发酵最适的发酵条件为葡萄糖添加量1%,蛋白胨0.5%,吐温-60添加量0.03%,发酵培养基初始pH值4.5,发酵温度40℃,在此条件下菌株的产酶能力可以达到10758U·mL-1.     

浒苔降解菌的筛选及发酵条件优化

本文以具有腐烂病状的浒苔为样品,从中筛选分离得到产浒苔降解酶的海洋微生物菌株X-5,同时对菌株X 5生长特性、最适发酵条件进行了研究.通过单因素实验确定菌株X 5产浒苔降解酶的最适发酵条件为:浒苔浓度为2.5％;氯化铵浓度为0.8％;NaCl浓度为3％;在接种量7％,26℃下恒温培养时间60 h,获得菌株酶活力最高.     

亚硝酸还原酶高产菌株的筛选及发酵条件优化

通过紫外线对巨大芽孢杆菌MPF-906进行了诱变处理,提高了产酶能力,变异株Z85酶活达到28.76 U/mL。进一步对其发酵条件进行研究,优化了培养基和培养条件。优化的培养基为：葡萄糖1.5%,牛肉膏0.2%,硫酸铵0.1%,K₂HPO₄ 0.135%,KH₂PO₄ 0.07%,NaCl 0.1%;无机盐溶液10 mL/L（即MgSO₄·7H₂O 0.04%、MnSO₄·H₂O 0.001%、CaCl₂·2H₂O 0.002%）。发酵条件为：摇床转速160 rpm,接种量4%,初始pH 6.5,30 ℃发酵20 h。在此最优化条件下,亚硝酸还原酶的酶活达到45.94 U/mL。