多叶苜蓿花药培养技术体系的建立

【目的】建立多叶苜蓿高效花药培养体系,获得再生植株,为苜蓿倍性、基因组学及分子生物学的研究提供基础材料。【方法】以淮阴苜蓿与多叶苜蓿品种飞马（Grandeur）杂交F1的花药为外植体,使用NB+2,4-D（0.5 mg•L-1）+NAA（0.3 mg•L-1）+6-BA（0.5 mg•L-1）+KT（3.0 mg•L-1）研究苜蓿现蕾后花药愈伤组织的诱导能力;利用正交设计L16（45）筛选适宜苜蓿花药愈伤组织分化的培养基;并用1/2B5和1/2MS添加不同浓度的NAA研究适宜的生根培养基。【结果】苜蓿现蕾后15—28 d愈伤组织诱导率达到最高,最高为82.79%。适宜苜蓿花药愈伤组织分化的培养基组合为BⅠ+ CH（200 mg•L-1）+2-IP（0.5 mg•L-1）+ NAA（0.2 mg•L-1）+ KT（1.0 mg•L-1）,分化率可达54.05%。不定芽在1/2 B5+NAA（0.3 mg•L-1）培养基上生根效果最好,生根率可达88.46%。【结论】成功建立了苜蓿高效花药培养体系,并获得再生植株。     

碳源和植物生长调节剂对辣椒花药培养效率的影响（摘要）

[目的]为进一步提高辣椒花药培养效率。[方法]采用MS培养基,以博辣娇红为试材,研究碳源种类与浓度对花药愈伤组织诱导的影响;以佳玉为试材,按L16（4^5）正交试验设计,研究植物生长调节剂种类与浓度对辣椒花药培养效率的影响。[结果]愈伤组织和胚状体诱导率各浓度处理的均值麦芽糖虽略高于蔗糖,但未达差异显著水平;麦芽糖或蔗糖作碳源,3%～6%的浓度有利于提高愈伤组织与胚状体的诱导频率,超过6%以后,愈伤组织和胚状体诱导率随糖浓度的增加而极显著下降。生长调节剂对愈伤组织诱导率的影响为2,4-D﹥ZT﹥NAA﹥KT﹥6-BA;对胚状体诱导率的影响为2,4-D﹥NAA﹥ZT﹥KT﹥6-BA;2,4-D、ZT、NAA和KT对愈伤组织与胚状体诱导率均有显著或极显著影响;生长调节剂的使用浓度,2,4-D和ZT以1.0mg/L、NAA和KT对0.5mg/L的效果最好,ZT对提高愈伤组织和胚状体诱导率的效果比KT和6-BA都好;2,4-D1.0mg/L﹢ZT1.0mg/L﹢KT0.5mg/L﹢6-BA0.5mg/L是佳玉花药愈伤组织和胚状体诱导培养适宜的生长调节剂组合。[结论]该研究为辣椒花药培养研究提供了依据。     

木薯花药愈伤组织诱导初步研究

为探讨不同激素、低温对木薯花药愈伤组织诱导和分化的效果,以木薯华南5号的花药为外植体,接种于含不同激素组合的MS固体培养基,分别进行愈伤组织诱导、继代培养和分化。结果表明,在MS培养基中,随着2,4-D浓度的增加,木薯花药愈伤组织的诱导率不断升高,但诱导时间延长;在培养基中添加6-BA3．0mg／L＋NAA0．2mg／L,木薯花药愈伤组织诱导率最高,达100％;在0～5d内,低温处理的时间越长,木薯花药愈伤组织诱导率越低,以不进行低温处理的诱导率最高;在分别含6-BA3．0＋NAA0．2的MS培养基中,花药愈伤组织继续增殖,但未分化出不定芽和不定根,而在添加NAA0．2mg／L＋KT0．5mg/L或2,4-D0．5mg／L＋KT0．5mg／L的培养基中,愈伤组织可分化形成2—5条不定根。今后需在材料基因型、绿苗分化培养基、培养条件等方面对木薯花药培养诱导单倍体做进一步的深入研究。     

柱花草花药离体培养研究

以热研2号柱花草花药为外植体,研究不同植物生长调节剂、培养基以及低温预处理等对柱花草花药培养的影响,以期建立柱花草花药培养体系,获得再生植株,为柱花草倍性、基因组学及分子生物学研究提供材料。结果表明:花药4℃低温预处理24 h诱导效果较好;N6培养基对愈伤组织的诱导效果比MS培养基好;最佳愈伤组织诱导培养基组合为N6+2,4-D 0.5 mg/L+KT1.0 mg/L;分化培养的最佳组合为MS+NAA 0.2 mg/L+6-BA 3.0 mg/L。     

不同基因型甜高粱愈伤组织与丛生芽诱导条件优化

【目的】探讨不同培养基类型和激素配比对不同基因型甜高粱的愈伤组织和丛生芽诱导的影响,为建立高效稳定的甜高粱遗传转化体系奠定基础。【方法】以不同基因型甜高粱辽甜三号和北甜三号的成熟种子为外植体,在MS培养基中添加不同浓度2,4-D及2,4-D与NAA、6-BA或KT配比组合,对愈伤组织和丛生芽进行诱导;分别在B5、N6、MS和1/2MS培养基中添加不同2,4-D、NAA、6-BA组合,对愈伤组织进行诱导。【结果】适宜北甜三号愈伤组织和胚性愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+2.0 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L NAA,辽甜三号为MS+2.0 mg/L 2,4-D+0.2 mg/L NAA,可获得质量较好的愈伤组织,愈伤组织块大且色泽鲜艳。适于两个基因型甜高粱丛生芽诱导的最佳基本培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+0.5 mg/L 2,4-D,但不同基因型的诱导率有明显差异,以辽甜三号的诱导效果较好。【结论】不同浓度2,4-D与其他激素配比对两个基因型甜高粱的愈伤组织诱导有明显影响,以对辽甜三号的诱导效果较好;在MS、B5、N6、1/2MS基本培养基中,MS可作为愈伤组织诱导的最佳基本培养基。     

不同激素组合对番茄温敏核不育系及其杂交组合花药愈伤组织诱导效应

【目的】研究不同激素组合与不同材料基因型互作对番茄温敏核不育系及其杂交组合花药愈伤组织诱导的效应。【方法】以番茄温敏核不育系大107、地D4及其杂交组合大107×牛番茄、地D4×红昆仑为材料,进行不同激素组合（CPPU、TDZ、KT与2,4-D＋6-BA）诱导花药愈伤组织诱导试验。【结果】以MS+1.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA为基本诱导培养基,分别与不同浓度CPPU、TDZ或KT组合,对不同基因型番茄花药愈伤组织诱导具有明显促进效果,CPPU、TDZ和KT的适宜浓度分别为0.4～0.6、0.03和1.5 mg/L。在相同激素条件下,番茄温敏核不育系的花药愈伤组织诱导效果明显优于其杂交组合,平均出愈率和平均愈伤组织直径大小均为:地D4＞大107＞地D4×红昆仑＞大107×牛番茄。【结论】不同基因型番茄花药对激素的敏感性不同;不同激素组合对番茄花药愈伤组织诱导的效应差异显著,以KT与2,4-D、6-BA配组对番茄温敏核不育系及其杂交组合花药愈伤组织的诱导具有显著调控作用。     

不同激素组合对番茄温敏核不育系及其杂交组合花药愈伤组织诱导效应

【目的】研究不同激素组合与不同材料基因型互作对番茄温敏核不育系及其杂交组合花药愈伤组织诱导的效应。【方法】以番茄温敏核不育系大107、地D4及其杂交组合大107x牛番茄、地D4x红昆仑为材料,进行不同激素组合（CPPU、TDZ、KT与2,4-D＋6-BA）诱导花药愈伤组织诱导试验。【结果】以MS＋1．0mg／L2,4-D＋0．5mg／L6-BA为基本诱导培养基,分别与不同浓度CPPU、TDZ或KT组合,对不同基因型番茄花药愈伤组织诱导具有明显促进效果,CPPU、TDZ和KT的适宜浓度分别为0．4—0．6、0．03和1．5mg／L。在相同激素条件下,番茄温敏核不育系的花药愈伤组织诱导效果明显优于其杂交组合,平均出愈率和平均愈伤组织直径大小均为：地D4〉大107〉地D4x红昆仑〉大107x牛番茄。【结论】不同基因型番茄花药对激素的敏感性不同;不同激素组合对番茄花药愈伤组织诱导的效应差异显著,以KT与2,4-D、6-BA配组对番茄温敏核不育系及其杂交组合花药愈伤组织的诱导具有显著调控作用。     

籼稻高效再生体系建立及其影响因子的研究

以籼稻成熟胚为材料,研究了不同因子对水稻愈伤组织诱导和分化的影响,建立了籼稻高效再生体系。结果表明,2,4-D可诱导愈伤组织产生,但博B在仅含2,4-D的诱导培养基中,愈伤组织诱导率极低;6-BA和2,4-D共同作用显著提高出愈率,在2mg.L-12,4-D+0.5mg.L-16-BA的条件下,253的出愈率最高可达到92.9%,博B出愈率可达到84.8%,2,4-D的最适浓度是1.0-2.0=mg.L-1,6-BA的最适浓度0.5-1.0mg.L-1。不同比例的KT、6-BA、NAA和IAA配合使用有利愈伤组织分化,分化率均达到100%,成苗率最高达63.3%。在诱导培养基中添加6-BA不仅对愈伤组织形成和质量有较好促进作用,而且有利于愈伤组织的分化。     

苏丹草幼穗离体培养植株的再生技术

以苏丹草幼穗为外植体材料,研究幼穗发育期以及配比的激素组合对愈伤组织诱导发生、生长状态及其绿苗分化能力的影响。结果表明:长度为1.5~5.0 cm的幼穗,在愈伤组织诱导培养基中添加3.0 mg/L 2,4-D和0.2 mg/L KT,诱导频率达80%~90%,继代培养基中仍添加3.0 mg/L 2,4-D 0.2 mg/L KT,愈伤组织增殖速度快,且保持植株再生的能力;在愈伤组织分化培养基中添加2.00 mg/L 6-BA 0.01 mg/L NAA或添加2.00 mg/LCPPU 0.01 mg/L NAA,经继代培养3~5代的愈伤组织绿苗分化率保持在50%以上;在继代培养中选择外表呈白色、干燥、紧密、颗粒状的愈伤组织,是提高其再生植株能力的有效方法。     

不同基因型甜高粱愈伤组织与丛生芽诱导条件优化

【目的】探讨不同培养基类型和激素配比对不同基因型甜高粱的愈伤组织和丛生芽诱导的影响,为建立高效稳定的甜高粱遗传转化体系奠定基础。【方法】以不同基因型甜高粱辽甜三号和北甜三号的成熟种子为外植体,在MS培养基中添加不同浓度2,4-D及2,4-D与NAA、6-BA或KT配比组合,对愈伤组织和丛生芽进行诱导;分别在B5、N6、MS和1/2MS培养基中添加不同2,4-D、NAA、6-BA组合,对愈伤组织进行诱导。【结果】适宜北甜三号愈伤组织和胚性愈伤组织诱导的最佳培养基为MS＋2.0mg/L2,4-D＋0.1mg/LNAA,辽甜三号为MS＋2.0mg/L2,4-D＋0.2mg/LNAA,可获得质量较好的愈伤组织,愈伤组织块大且色泽鲜艳。适于两个基因型甜高粱丛生芽诱导的最佳基本培养基为MS＋1.0mg/L6-BA＋0.2mg/LNAA＋0.5mg/L2,4-D,但不同基因型的诱导率有明显差异,以辽甜三号的诱导效果较好。【结论】不同浓度2,4-D与其他激素配比对两个基因型甜高粱的愈伤组织诱导有明显影响,以对辽甜三号的诱导效果较好;在MS、B5、N6、1/2MS基本培养基中,MS可作为愈伤组织诱导的最佳基本培养基。     

福建柏组织培养体系的建立及优化

【目的】探究福建柏不同外植体再生过程中最适激素配比,为建立福建柏组织培养体系提供技术支持。【方法】以福建柏鳞叶和茎段作为外植体,在饱和洗衣粉液浸泡20 min和体积分数75%酒精浸泡30 s条件下,研究体积分数0.1% HgCl₂浸泡不同时间(5,8,10,12,15 min)后的消毒效果;以福建柏鳞叶和茎段为材料,通过单因素试验,研究生长素（NAA和2,4-D）对不同外植体愈伤组织诱导的影响,再通过正交试验研究NAA、2,4-D、6-BA不同配比对外植体愈伤组织诱导的影响;以福建柏愈伤组织为材料,采用正交试验研究NAA、2,4-D、6-BA、KT对愈伤组织继代增殖的影响;以福建柏带芽茎段为材料,研究细胞分裂素6-BA对芽诱导和萌发的影响;以福建柏分化苗为材料,采用正交试验研究6-BA、2,4-D、KT对分化苗继代生长的影响;以福建柏无根苗为材料,研究无根苗扩增繁殖的效果。【结果】（1）福建柏鳞叶最适消毒配方为体积分数75%酒精30 s+体积分数0.1% HgCl₂ 10 min,污染率为16.67%;茎段为体积分数75%酒精30 s+体积分数0.1% HgCl₂ 15 min,污染率为23.33%。（2）鳞叶愈伤组织诱导最适配方为MS培养基+NAA 2.0 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L+6-BA 1.0 mg/L,诱导率为81.67%;诱导出的愈伤组织白色近透明,长势良好。而茎段为MS培养基+NAA 0.5 mg/L+2,4-D 0.5 mg/L,诱导率为78.33%,诱导出的愈伤组织淡绿色,长势良好。（3）愈伤组织最适增殖配方为MS基本培养基+2,4-D 1.0 mg/L+6-BA 2.0 mg/L+KT 0.5 mg/L,增殖质量为1.984 g,褐化率23.33%。（4）芽诱导萌发最适配方为MS基本培养基+6-BA 2.0 mg/L,平均诱导芽数2.05个,平均萌动数1.70个,分化率100%。（5）分化苗生长和扩繁的最适配方为1/2MS基本培养基+2,4-D 0.5 mg/L+KT 1.0 mg/L,平均生长长度为2.241 cm,无褐化,扩繁成活率为95.50%,扩繁系数为3.18。【结论】福建柏以带芽茎段作为芽增殖再生途径外植体,鳞叶作为愈伤组织再生途径的外植体进行组织培养效果最佳,长势好且稳定。     

西洋参花药愈伤组织诱导培养条件的优化

为了提高西洋参花药培养的愈伤组织诱导率,试验以吉林省集安西洋参花蕾为材料,初步研究不同浓度2,4-D、6-BA和蔗糖对花药愈伤组织诱导的影响,优化西洋参花药愈伤组织诱导培养条件。结果表明:在MS基本培养基附加2,4-D 2mg/L+6-BA 0.5mg/L+蔗糖60g/L+琼脂5.5g/L+水解乳蛋白0.5g/L的条件下,西洋参花药愈伤组织的诱导率可达37.53%。2,4-D对西洋参花药愈伤组织的诱导必不可少;2,4-D和6-BA的合理搭配能提高西洋参花药愈伤组织的诱导率;60g/L的蔗糖能有效促进西洋参花药愈伤组织的诱导。     

不同植物生长调节剂对大苞白山茶叶片愈伤组织诱导的影响

以大苞白山茶叶片为外植体,研究不同生长调节剂6-BA、TDZ、KT、2,4-D和NAA对其愈伤组织诱导的影响.结果表明:MS+3.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA愈伤诱导率最高,但以MS+2.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA愈伤组织分化最好;在6-BA 2.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L培养基中分别加入2,4-D (0.5～2.5 mg/L)、KT(0.5～2.5 mg/L)和TDZ(0.1～0.5 mg/L)后,2,4-D和TDZ均可提高愈伤组织的诱导率,最高可达100％和94.8％,KT的加入反而降低了愈伤组织的形成;适宜的分化培养基为MS+ 2.5 mg/L 6-BA+ 0.02 mg/LTDZ+ 0.05 mg/L NAA.     

辣木离体再生体系的建立

以辣木种子为外植体,诱导获得无菌苗,然后通过用无菌苗的嫩茎诱导愈伤组织分化不定芽,再将不定芽诱导生根,获得完整植株,建立辣木的离体再生体系。结果表明,适合辣木种子诱导无菌苗的培养基为MS_0,诱导率达95%;适合无菌苗茎段诱导愈伤组织的培养基为MS+2,4-D 0.8 mg/L+KT 0.2 mg/L,诱导率达87.03%;适合愈伤组织分化不定芽及不定芽增殖的培养基为改良MS+6-BA0.6 mg/L+IAA 0.2 mg/L,芽分化率达83.33%,芽增殖系数达4.2;适合不定芽生根的培养基为1/3MS+IBA0.5 mg/L+NAA0.2 mg/L,生根率达92.7%,平均根数达5.78。     

矮牵牛花药培养技术初探

研究矮牵牛花蕾灭菌时间、花蕾低温预处理和不同培养基组分对花药愈伤组织诱导及其分化的影响。结果表明,采用0.1%HgCl2灭菌10 min是矮牵牛花蕾较为理想的表面灭菌时间,红色矮牵牛品种易诱导愈伤组织,且Nitsch＋0.5 mg.L-1 6-BA＋0.2 mg.L-1 2,4-D＋0.5 mg.L-1 NAA花药愈伤组织诱导率最高,而蓝色为Nitsch＋1.0 mg.L-1 6-BA＋0.2 mg.L-1 2,4-D＋0.5 mg.L-1 NAA。花药愈伤组织分化结果表明,红色品种形成不定芽的能力较强,在附加1.0 mg.L-1 TDZ和0.1 mg.L-1 IBA,或1.0 mg.L-1 6-BA和0.5 mg.L-1IBA的培养基上均能获得较高的植株再生率,而蓝色分化率不高,仅能获得较少的再生植株。     

枸杞花药离体培养技术体系的建立

以宁杞1号为试验材料,探讨枸杞花药离体培养中不同激素组合、不同活性炭及蔗糖浓度、低温预处理或热激处理、不同光照培养条件对花药培养效果的影响.试验结果表明:最佳激素组合为2,4-D 1.0 mg/L+6-BA 2.0 mg/L,花药愈伤组织诱导率达11.7%;4 ℃低温预处理5 d和32 ℃高温预培养2 d,均可显著提高愈伤组织诱导率;添加活性炭能提高胚状体的诱导率;培养基中适宜的蔗糖浓度为3%;暗培养优于光照培养和弱光培养.愈伤组织转入分化培养基(MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L)分化出大量绿色小芽,分化芽转入生根培养基(MS+NAA 0.1 mg/L)中,20 d后得到完整植株.     

日本结缕草成熟种子愈伤组织诱导及植株再生的影响因子分析

 【目的】优化日本结缕草的组织培养体系，提高其植株再生率，建立高频植株再生体系。【方法】以日本结缕草的成熟种子为外植体，分析激素、基本培养基、培养条件、脯氨酸、Cu2+等因子对愈伤组织诱导及植株再生的影响。【结果】（1）培养基中添加脯氨酸能提高愈伤组织诱导率，而BA降低愈伤组织的诱导率，低浓度的NAA(0.1～0.2 mg·L-1)能促进愈伤组织的形成，愈伤组织诱导的最佳培养基为ND＋2,4-D 3.0 mg·L-1＋NAA 0.2 mg·L-1+L-Pro 500 mg·L-1，愈伤组织诱导率达57.3%；（2）愈伤组织继代的最佳培养基为MSD+ 2,4-D 1.0 mg·L-1；（3）愈伤组织分化的最佳培养基为MSD＋NAA 0.3 mg·L-1+KT 0.5 mg·L-1+BA 0.05 mg·L-1 + L-Pro 500 mg·L-1，分化率达36.7%。【结论】优化了日本结缕草的组织培养体系，初步找到了影响其成熟种子愈伤组织诱导及植株再生的主要因子。     

籼稻Kra Dang Ngah成熟胚愈伤组织诱导及植株再生的研究

为了建立籼稻Kra Dang Ngah的再生体系,以其成熟胚作为试验材料,研究不同种类植物激素及其浓度配比对诱导愈伤率、愈伤组织形态学特征、分化及植株再生的影响。结果表明:2,4-D可诱导愈伤组织产生,但愈伤组织诱导率极低;2,4-D和其他植物激素配合使用显著提高了诱导率,在2 mg/L 2,4-D、1 mg/L NAA、1.0 mg/L 6-BA和0.5 mg/L KN的条件下可获得较高的愈伤组织诱导率,为56.3%。继代培养基中添加激素浓度为诱导培养基中的一半可获得较好的增生的胚性愈伤组织,形态学特征为淡黄色,比较致密、较硬、呈颗粒状结构,没有褐化出现,表现出很强的分化能力。再生培养中,MS培养基中添加0.5 mg/L NAA、1.0 mg/L 6-BA和2 mg/L KN可获得较高的分化率(达到75.5%)和再生率(33.3%),表明6-BA和Kn的配合使用显著提高了分化率。     

黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)的组织培养快速繁殖

【目的】建立黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)的组织培养快速繁殖体系。【方法】以黄芩的幼茎、幼叶及叶柄为外植体,在MS培养基上添加不同质量浓度的6-BA、2,4-D与NAA诱导愈伤组织及再生芽;在1/2 MS培养基上添加IAA、IBA或NAA激素,单独或者组合使用,诱导黄芩试管苗生根。【结果】幼叶和叶柄容易褐化死亡,而幼茎显示很好的脱分化和再分化效果;BA与NAA组合可以诱导幼茎外植体脱分化与再分化,而BA与2,4-D组合只能诱导愈伤组织发生。IAA诱导生根率最高,但是茎基部会形成愈伤组织,后期无法驯化成活;IBA及NAA均可以诱导根的发生,但是以IBA效果为佳。【结论】幼茎为最佳外植体,MS+BA0.5mg/L+NAA 0.5mg/L为最佳的愈伤组织诱导及再生芽的分化培养基。1/2MS+IBA 0.1mg/L为最佳的试管苗生根培养基,生根率为70.3%。     

结缕草成熟胚愈伤组织的诱导及再生体系的研究

以结缕草的成熟胚为外植体,通过胚性愈伤组织诱导进行植株再生。结果表明在MS+2,4-D(2.0mg/L)+VB1(4mg/L)的培养基中,成熟胚可较高频率的诱导产生愈伤组织,诱导率为43.20%,但愈伤组织质量较差。将其在降低2,4-D浓度和添加6-BA,ABA的继代培养基中继代培养,可明显改善愈伤组织质量,增加胚性愈伤。筛选继代的胚性愈伤组织置于分化培养基MS+6-BA(1.0mg/L)+KT(2.0mg/L)+NAA(0.1mg/L)中,分化率45.6%。本研究建立了一套有效的以成熟胚为外植体结缕草组织培养再生体系。