马铃薯X、Y病毒的复合RT-PCR检测体系的建立

马铃薯Y病毒（PVY）、马铃薯X病毒（PVX）是侵染马铃薯的两种主要病毒,这两种病毒一般都是同时侵染马铃薯,导致减产60-80%以上。本文应用多重PCR技术建立了同时检测这两种病毒的复合RT-PCR技术体系。结果发现：当以Oligod(T)18引物反转录合成的cDNA经PCR扩增后,未扩出PVX带,究其原因是由于cDNA的特异性低造成的。为了提高cDNA的特异性,在反转录时加入PVX、PVY的3'端引物,合成的cDNA经PCR扩增后出现了两条特异性带,这两条带恰与PVX、PVY带位置相当。这说明在本实验的复合RT-PCR中,应用3'端引物进行反转录,可同时检测出PVX与PVY两种病毒。     

马铃薯卷叶病毒RT-LAMP检测方法的建立

为建立一种快速准确检测马铃薯卷叶病毒(potato leafroll virus,PLRV)的方法,本研究以PLRV CP(coat protein,CP)基因ORF3保守序列为靶标,建立了PLRV反转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测体系,并对建立的RT-LAMP检测体系的特异性、灵敏度、实际应用效果进行评估。结果表明,建立的PLRV RT-LAMP检测方法,在62℃恒温下扩增50 min,扩增产物中加入双链嵌合荧光染色(SYBR Green Ⅰ),阳性样品颜色变为绿色,阴性样品颜色仍为褐色,可直接目测判断待检测样品是否感染PLRV。该方法只特异性检测PLRV,不与马铃薯X病毒(PVX)、马铃薯Y病毒(PVY)、马铃薯S病毒(PVS)、马铃薯A病毒(PVA)和马铃薯M病毒(PVM)等其他5种马铃薯主要病毒发生交叉反应。此外,建立的PLRV RT-LAMP检测方法的灵敏度较反转录PCR(RT-PCR)方法高100倍。田间样品检测验证,该方法与标准RT-PCR方法符合率达100%。本研究建立的以SYBR Green Ι为颜色指示的PLRV可视化检测RT-LAMP方法,特异、灵敏、便捷,成本低,可满足科研、基层单位对该病毒快速诊断和检测的需要。     

玉米矮花叶病毒原北京分离物的分子鉴定

玉米矮花叶病自1968年在河南新乡等地发生以来，在全国各玉米产区相继有不同程度的发生。该病近年在华北各地流行，导致玉米大面积减产、品质降低，造成了严重的经济损失。近20年有关病原生物学及血清学的研究结果表明，我国至少存在着3种相关的病原可导致玉米矮花叶病：玉米矮花叶病毒（MDMV）B株系（MDMV-B），MDMV-G（或白草花叶病毒）以及甘蔗花叶病毒（SCMV）。它们均属于马铃属Y病毒属（Potyvirus）中侵染禾本科植物的甘蔗花叶病毒亚组（SCMV Subgroup）。虽然MDMV-B并不侵染甘蔗，但是由于其外壳蛋白基因的核苷酸序列与SCMV的同源性高于MDMV的其它株系，已被重新归类为SCMV-MDB株系。为了明确我国曾鉴定为MDMV-B的玉米矮花叶病毒原的分类地位及其分子生物学特征，以利于探索针对该病毒的有效控制措施，测定其基因组RNA全序列是很必要的。     

马铃薯Y病毒属病毒的致病机理及植物抗性机制研究进展

马铃薯Y病毒属病毒是世界范围内影响范围广、危害严重并造成重大经济损失的病毒属之一,侵染的物种主要有茄科、豆科、藜科等农作物和经济作物.本研究综述了近年来关于马铃薯Y病毒属病毒的致病机理和植物对抗此类病毒的抗性机制,为更好的理解和防控马铃薯Y病毒属病毒提供理论参考.     

马铃薯Y病毒小鼠中和抗体轻链基因的克隆及序列分析

从大量繁殖的Ｄ７３杂交瘤细胞中，提取制备其基因ｍＲＮＡ，并以此为模版，经反转录途径获得基因组ｃＤＮＡ，随后将其插入到λｇｔｌｌ中，构建了马铃薯Ｙ病毒小鼠单克隆抗体ｃＤＮＡ基因文库。通过免疫原位杂交，从该基因文库中筛选出含有抗体轻链基因的阳性克隆，进一步将其插入到ｐＧＥＭ－７Ｚｆ（＋）质粒中，经酶谱和ＤＮＡ序列分析确定，完整的轻链基因被获得。该基因含有９５６个核苷酸碱基［不包括Ｐｏｌｙ（Ａ）尾巴］，     

马铃薯X病毒完整基因组上微卫星分布

本文利用自编计算机程序提取并展示马铃薯X病毒完整基因组（NC_011620.1）上微卫星分布特性。借助MATLAB软件和借用最优完全子图算法,分析NCBI数据库中该基因组（NC_011620.1）微卫星分布特性。结果表明,计算出所有各种N-碱基组（N取1至6）在完整基因组序列上重复出现次数和出现位置,展示它们的分布规律（指数函数）,马铃薯X病毒完整基因组（NC_011620.1）上各种N-碱基组最大的重复出现次数随N按指数函数数减少;且呈现出重复出现次数由少到多排序,重复出现次数随序号增加;本文使用的方法,可以系统地应用到其它病毒完整基因组序列微卫星分布特性分析,从而为有效利用微卫星分布特性研究完整基因组的结构和功能、遗传和变异规律提供完整的数据支撑。     

兔出血症病毒RT-PCR检测方法的建立及应用

摘要:按照GenBank上公布的兔出血症病毒（RHDV）基因序列设计一对引物，以RHDV发病兔的新鲜肝为材料，提取总RNA，进行cDNA的合成和PCR扩增，结果能扩增出与预期的269bp大小一致的片段，该产物序列与公布的RHDV基因序列有95.8%～98.5%的同源性，表明已成功建立了RHDV RT-PCR检测方法。用该方法和血凝实验（HA）对兔出血症发病兔各组织脏器进行检测，结果表明，发病死亡兔各脏器中，HA检测阳性的病料为肝脏、肾脏、脾脏、血液、肺；RT-PCR检测除粪便外，其它均为阳性，其敏感性是HA的4×104倍。RT-PCR方法检测RHDV敏感度高、特异性强、重复性好，不仅可用于RHD临床诊断和流行病学调查，而且在兔肉等兔类产品的检疫方面具有很好的应用前景。     

稻瘟病菌突变菌株的分子鉴定

摘要：利用Rep-PCR的两对引物Pot2-1/Pot2-2和PMC1-2/PMC1-3、 177条RAPD引物和MGR586为探针的3种RFLP 分子技术对温室的9个和自然病圃上的5个致病性突变菌株进行分析。3种技术鉴定了温室9个菌株与其起始菌株的DNA指纹基本一致，检测到7个菌株DNA条带缺失1~3条，2个菌株没有变化；分析了病圃上的侵染携带抗病基因Pi-1和Pi-2的5个突变株的起源，依据DNA指纹和致病类型证明后者起源于具有无毒基因Avr-1的菌株，排除了外来菌株的漂移作用，证实了突变是稻瘟病菌(Magnaporthe grisea )进化的主要动力。     

品种纯度和真伪的DNA分子标记鉴定及其应用

本文阐述了品种纯度和真伪的ＤＮＡ分子标记鉴定的原理,优点及其应用研究概况,认为利用ＲＦＬＰ、ＲＡＰＤ和ＡＦＬＰ等ＤＮＡ分子标记可通过鉴定种子ＤＮＡ水平上的差异来鉴定品种纯度和真伪,具有准确可靠、成本较低、不受环境因素影响、便于实现鉴定自动化,且可鉴定表型上难于鉴别的品种等优点;已初步应用于多种作物的品种纯度和真伪鉴定,有些已实现商业化;本文还认为,利用ＤＮＡ分子标记鉴定品种纯度和真伪是品种鉴定的发     

3种大蒜中洋葱黄矮病毒的RT-PCR分子鉴定

洋葱黄矮病毒（Onion yellow dwarf virus,OYDV）是危害大蒜产量和品质的主要病毒之一。快速有效的病毒检测方法可为大蒜病毒病的研究和有效防御提供理论与技术资料。本研究利用反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）技术对甘肃＂成县迟蒜＂和山东＂鲁蒜王2号＂中OYDV外壳蛋白基因进行特异性扩增,并克隆到载体PMD18-TEasy Vector上进行核苷酸序列测定及分析。成功分离得到OYDV的两个DNA片段——GSCCS和SDLSW2,与GenBank中已报道的AB000837.1、AB000838.1和AJ409311.1等22个OYDV DNA片段的核苷酸相似性分别为81%～98%和81%～84%,氨基酸相似性分别为85%～99%和89%～94%,二者之间核苷酸相似性为84%,氨基酸相似性为89%。系统进化树显示不同DNA片段可聚为3个组群,GSCCS与中国山东金乡OYDV DNA片段同属一组,SDLSW2与其它16个OYDV DNA片段同属一组,表明OYDV在甘肃＂成县迟蒜＂和山东＂鲁蒜王2号＂中均存在,但具有一定差异。本实验确定了OYDV的基因变异程度,为进一步研究病毒进化和变异提供了有利条件。     

丹顶鹤（Grusjaponensis）性别鉴定的分子标记方法

丹顶鹤(Grus japonensis)是我国一级保护动物,为单态性鸟,很难通过外观和形态来进行性别鉴定,给配对和人工繁殖造成了很大的困难.实验利用非伤害性取样方法,成功地从丹顶鹤羽毛中提取了基因组DNA,并筛选出3对引物组合对丹顶鹤EE0.6序列的相关片段进行了特异性扩增.结果显示,这3对引物组合从雄鹤中扩增出1条片段,从雌鹤中扩增出2条片段,均可以对丹顶鹤的性别作出了准确鉴定,解决了丹顶鹤人工繁育中的关键问题.     

利用流体细胞测量法测定烟草花叶病毒的初步研究

描述用流体细胞测量法检测烟草花叶病毒（TMV）。测试的病毒先用乳胶微粒（直径3μm）吸附,后与TMV抗体和标有荧光色素的抗体结合,最后用流体细胞测量仪检测。试验结果表明,用本法可以测出10ng／mL的病毒,而用酶联免疫吸附法（ELISA）只能测出100ng／mL的病毒。     

一种简单有效的提取马铃薯块茎总RNA方法

对于块根、块茎和果实等富含淀粉、多糖的特殊材料,应用常规方法提取RNA,存在产量低、淀粉和多糖污染严重等问题（Logemann et al.,1987）.本研究采用马铃薯块茎为材料,通过改进变性液和抑制多酚氧化等环节,建立了一个改良的RNA抽提方法,有效的解决了在马铃薯块茎总RNA抽提过程中多糖污染和酚氧化等问题.……     

马铃薯（SolanumtuberosumL．）全基因组水平上LTR-逆转座子的鉴定与进化分析

LTR-逆转座子是构成基因组特别是植物基因组的重要组分。它们在寄主基因组的进化过程中起到重要作用。马铃薯是重要的经济作物和粮食作物,其全基因组序列的公布为进一步研究其遗传组成和演化提供了基础。本文以马铃薯全基因组序列为材料,用结构分析和同源比对的方法分离得到9318个完整的LTR_逆转座子,7281个非完整（trtmcated）LTR-逆转座子元件和3657个soloLTR元件。进一步研究表明,gypsy类转座子在距今两百万年（millionyearsago,MYA）时转座活性被抑制,而copia类元件活跃至今。马铃薯和番茄比较基因组学的研究表明,LTR-逆转座子序列变异率为18．73％,远高于基因序列的7．37％和CDS序列的5．01％。     

果树脱毒及病毒检测技术的研究进展

果树病毒的扩散性很强 ,严重威胁果树的生长发育和果业生产。简述了果树病毒对生产的危害 ,总结了果树病毒脱除技术和检测技术的研究进展情况 ,论述了病毒检测与脱毒之间的关系 ,并对这些技术进行了评述     

一种新型的基于多种方法的Rootkit检测方案

由于Rootkit使用深层隐藏技巧,传统的基于文件系统过滤实现的反病毒检测软件已经很难检测其存在性,Rootkit已成为威胁信息系统安全的最棘手的问题。此外,由于商业机密、开发难度等原因,关于Rootkit检测技术的资料和有效工具还比较匮乏。在分析Rootkit检测系统结构的基础上,设计了一种针对Rootkit检测的总体技术方案,测试结果表明,依据该方案设计的软件比其他Rootkit检测软件更有效。     

茶菊病毒检测与脱除技术研究

为了检测茶用菊品种病毒感染情况,并研究产业面积较大的福白菊的脱毒技术。本试验采用巢式PCR方法对24个茶用菊品种进行菊花常见8种(类)病毒的检测,比较了5种不同浓度6-苄基腺嘌呤(6-BA)和萘乙酸(NAA)组合的MS培养基对福白菊茎尖的诱导效果,并用筛选出的激素配比结合4℃低温和利巴韦林处理对福白菊进行脱毒;采用SRAP分子标记技术检测福白菊的脱毒株与非脱毒株,并检测植株生长指标、花朵产量以及花朵总黄酮、绿原酸、木樨草苷、异绿原酸A含量,比较脱毒苗与非脱毒苗的差异。结果表明,24个茶用菊品种中感染较为普遍的有两种病毒(CVB、TAV)和两种类病毒(CSVd和CChMVd),其中,感染率最高的为CSVd,高达100%,其次是TAV(91.67%)、CVB(87.50%),而CChMVd的感染率为66.67%。福白菊单株则感染了CVB和CSVd,福白菊茎尖在1 mg·L^-1 6-BA和0.1 mg·L^-1 NAA的MS培养基中生长健壮且出愈率最高。脱毒后的福白菊保持了遗传稳定性,采用脱除病毒的福白菊母本扦插繁育的种苗生产较源自非脱毒种源生产的花朵产量、品质等指标都有显著提高。综上所述,茶用菊品种普遍感染各种病毒,利用茎尖培养可以对福白菊为代表的茶用菊脱毒,脱毒之后福白菊花朵产量和品质均明显提高。本研究结果为茶用菊的脱毒和种源复壮提供了有效方法。