BMP2对猪前体脂肪细胞差异表达miRNA1的影响

采用高通量测序技术构建经骨形态发生蛋白-2(BMP2)处理前后的猪前体脂肪细胞差异miRNA表达谱,以明确BMP2影响的功能性miRNA。结果显示:BMP2刺激猪前体脂肪细胞前后共有55个miRNAs存在较大的表达差异,包括30个上调表达的miRNAs和25个下调表达的miRNAs;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测表明,高通量测序数据结果正确可靠;经miRnada和RNAhybrid这2个软件对差异表达的miRNAs进行靶基因预测及靶基因进行GO和KEGG Pathway分析,发现靶基因主要富集在Notch信号通路、胰岛素信号通路、甘油磷酯代谢、MAPK信号通路、半乳糖代谢、类固醇激素的生物合成等通路。结果表明:BMP2作为前体脂肪细胞分化重要调控因子,可能通过介导miRNA及其调控的某些关键基因的表达,从而影响前体脂肪细胞外基质与受体的结合、胰岛素利用、脂类和糖的合成与代谢等生物学过程,最终作用于前体脂肪细胞的分化和脂质沉积。     

民猪肠道菌群特征分析

试验旨在解析不同月龄民猪的肠道菌群特征及粗纤维对民猪肠道微生物的影响。选择5头体重为(100±7.24)kg的10月龄成年母猪(成年组)和(50±4.31)kg的6月龄青年母猪(青年组),青年组又分为正常饲喂组(5头)和添加粗纤维组(4头),采集同一时间、新鲜的粪便样品,提取总DNA,利用带标签的通用引物扩增16S rRNA V4区,使用Illumina Hiseq 2000测序平台测序,通过计算Ace和Shannon多样性指数以及与已知数据库的比对,分析菌群多样性及结构特征。结果表明:3个处理组在菌群多样性方面无显著差异(P0.05);3组均以拟杆菌门、厚壁菌门和螺旋菌门所占的比例最高,总计可达91%~92%,粗纤维的添加明显改变了青年组肠道微生物的组成,大幅提升了拟杆菌门所占的比例,降低了厚壁菌门和螺旋菌门所占的比例,使其菌群分布比例更接近成年个体;同时,粗纤维的添加也促进了肠道微生物内纤维杆菌属的增加。     

冷处理对民猪皮下脂肪组织基因表达模式的影响

民猪具有不同于我国其他地方猪种的耐寒特性,但其具体耐寒机制未知。本研究构建了民猪15 d冷处理模型,检测了冷处理后的血液生化指标;RNA-seq技术测定了背部皮下脂肪的基因表达变化模式,qRTPCR技术检测了与脂肪代谢、细胞分化、应激、炎症和信号传递等相关基因的表达水平。结果发现,冷处理后民猪血液中的谷草转氨酶、乳酸脱氢酶、血皮质醇、白细胞总数和血小板总数显著升高,而超氧化物歧化酶和肌酸激酶显著下降。背脂的2 141个基因表达水平发生了1倍以上的变化,其中1 435个为上调表达,706个为下调表达,差异倍数多集中在1～3倍。差异基因显著富集于其他次生代谢产物的生物合成通路和折叠、分类和降解通路。差异最显著的ATP6V0A4、TAP2基因和NOX1基因在背脂、颈脂、腹股沟脂以及腹脂等部位高表达。背脂内C/EBPβ和TNF-α发生了极显著上调,CD137、Tbx1、HSPA6和CIRBP发生了显著上调;PPARα发生了极显著下调。     

猪脂肪细胞分化的研究进展

对20多年来猪脂肪细胞分化的研究动态；猪脂肪细胞分化的培养体系基质血管细胞的建立和分化标志的识别；激生长因子、细胞外基质和特异性分化转录因子等对其分化的调节及其机理作一综述，同时，对存在的问题作了探讨。     

TNF-α对猪脂肪细胞脂肪分解及其相关基因转录表达的影响

为探讨TNF-α对猪脂肪细胞脂肪分解的调控作用及其机制,用1、10、100 ng·m-1种剂量TNF-α作用体外培养的猪原代脂肪细胞24 h,及10 ng·mL-1TNF-α处理脂肪细胞1、6、12、24、48 h.使用甘油试剂盒,检测细胞甘油的释放量,RT-PCR检测ATGL、TGH-2、HSL、LPL、MGL和perilipinA表达量变化.结果表明,TNF-α以浓度和时间依赖性的方式促进猪原代脂肪细胞甘油的释放(P<0.05);同时下调ATGL、TGH-2、HSL、LPL、MGL和perilipin A mRNA表达量.说明:TNF-α主要通过下调perilipin A的表达,降低其对脂滴的保护作用,增加脂肪分解酶和脂滴的接触,促进了猪脂肪细胞的脂解作用.     

猪前脂肪细胞原代培养方法的建立

目的:摸索猪前脂肪细胞的原代培养方法,为研究猪脂肪发生的分子机制奠定基础.方法:取皮下脂肪,酶消化法分离细胞,用转铁蛋白、氢化可的松、胰岛素诱导分化,油红O染色鉴定.结果:在培养期间,细胞逐渐由梭形变为圆形,并逐渐增大,油红O染色为红色.结论:分离的细胞为未分化的前脂肪细胞,可用此方法培养的细胞进行脂肪发育过程中具体分...     

血清对猪前脂肪细胞分化过程中聚脂相关基因表达的影响

为了探讨血清对猪前脂肪细胞诱导分化的影响,筛选更优的诱导方法.采用胶原酶消化法分离猪皮下前脂肪细胞,用含50 nmol·L~(-1)胰岛素、100 nmol·L~(-1)地塞米松、0.25 mmol·L~(-1)3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、100nmol·L~1罗格列酮及添加(对照组)或不添加(试验组)10%FBS的分化培养液1和2对前脂肪细胞进行诱导分化,借助实时定量RT-PCR方法检测了细胞分化过程中聚脂相关基因PPARα、C/EBPα、FASN、ACOX1、GPAT和ENPP2的表达模式.结果显示:血清对PPARγ和FABP4两基因的表达有极显著的上调作用(P<＜0.01),而对其他6个基因的表达有极显著的下调作用(P＜0.01).试验组中FASN、GPAT和ACOX13个基因诱导分化各时间点的综合表达景均极显著高于对照组(P＜0.01),3基因表达量变化趋势间均达到极显著相关(P＜0.01).试验组中PPARα、PPARγ、C/EBPα和ACOX1 4个基因的基因表达最变化趋势间均达到显著或极显著正相关.研究表明:前脂肪细胞分化过程中,细胞内脂肪酸的生物合成和β氧化均在发生,细胞内脂肪含量积聚的快慢取决于2个途径力量的对比;PPARα、PPARγ、C/EBPα和ACOX14个基因间存在极强的协同表达现象;在细胞内脂肪积聚快慢上,含血清的分化培养液1要优于不含血清的分化培养液2.     

民猪生殖器官PRLR基因表达发育变化

试验以民猪为试验材料,长白猪为对照组,分别在1、2.5、4、6、8月龄时进行卵巢、输卵管和子宫取样,对促乳素受体（PRLR）基因表达的发育性变化规律进行研究。结果表明,生殖器官中PRLR的表达量与生殖器官的解剖指标存在正相关。PRLR在1、2.5、4、6和8月龄的民猪和长白猪的卵巢、输卵管和子宫中均有表达。民猪和长白猪卵巢PRLR mRNA表达水平从1月龄至8月龄呈现逐渐上升趋势,在8月龄达到最高水平,民猪卵巢PRLRmRNA表达水平显著高于长白猪（P〈0.05）。民猪和长白猪输卵管PRLR mRNA表达量随月龄增加呈上升趋势,在8月龄达到最高水平,品种间差异不显著。民猪子宫PRLR mRNA表达量随月龄增加而升高,在6月龄达到最高水平,8月龄显著下降（P〈0.05）,长白猪子宫PRLR mRNA表达量随月龄增加而升高,在8月龄达到最高水平,品种间在6月龄差异显著（P〈0.05）。     

猪脂肪细胞发育研究进展

概述了脂肪细胞的类型,脂肪组织发育的一般规律,脂肪细胞的增殖、分化、肥大过程。为更好地了解脂肪组织的发育,改变中国地方猪种生长速度缓慢、沉积脂肪过多等生产劣势寻找新的途径。     

猪脂肪细胞特异膜蛋白的分离鉴定

用蔗糖密度梯度离心制备脂肪细胞及其他组织细胞膜蛋白 ,通过 SDS- PAGE分离并用薄层扫描测定不同组织细胞膜蛋白的组成、相对分子质量及含量。结果表明 ,猪皮下脂肪细胞有 19种膜蛋白 ,心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉细胞及其他脂肪细胞有 13～ 2 4种膜蛋白 ,红细胞膜有 6种膜蛋白。经 Western- blot鉴定 ,猪皮下脂肪细胞有 8种特异性膜蛋白 ,分别为 110 770、10 3910、39970、3110 0、2 94 2 0、2 5 4 80、2 35 4 0和 2 2 0 0 0。结果显示 ,脂肪细胞与其他组织细胞膜蛋白组成及含量存在较大差异     

采食水平对东北民猪代谢热量的影响

以哈白猪为对照，研究２０℃条件下，低（Ｌ，７５０ｇ／ｄ），中（Ｍ１０５０ｇ／ｄ）高（Ｈ，１３００ｇ／ｄ）三种采食水平（饲料ＭＥ含量为１２．３７ＫＪ／ｋｇＣＰ：１６％）对体重２０～２５ｋｇ的民猪产热量的影响，研究结果表明，随采食水平提高，产热量有逐渐增加的趋势，但产不显著（Ｐ〉０．０５），三种采食水平下，民猪和哈白猪的产热量分别为３３．５，３４．５，３５．９和３１．９，３３．８，３４．９ＫＪ／ｋｇ＾     

白细胞介素-6对猪脂肪细胞脂肪分解的影响

为了研究白细胞介素(Interleukin,IL)-6对猪脂肪细胞脂肪分解的影响及其分子机制,分化的猪脂肪细胞用不同浓度的IL-6(0、25、50、75、100 ng·mL-1)处理24或48 h.通过测定培养液中的甘油浓度检测脂肪细胞的脂解率;采用形态学观察检测脂肪细胞中甘油三酯积聚量的变化;分别用RT-PCR和Western blot检测脂肪细胞中perilipin A、PPAR γ2(Peroxisome proliferato-activated receptor-gamma2)、HSL(Hormone-sensitive lipase)和AT-GL(Adipose triglyceride lipase)的mRNA及蛋白表达.结果显示,IL-6以剂量和时间依赖性的方式刺激猪脂肪细胞的脂肪分解,同时PPAR γ2和perilipin A的mRNA及蛋白表达被显著下调;HSL的mRNA表达达著上调,但其蛋白表达水平并未发生显著改变;ATGL的mRNA和蛋白表达均未发生显著改变.上述研究结果表明,IL-6通过抑制PPAR γ2及其靶基因perilipin A的表达直接刺激猪脂肪细胞的脂肪分解.     

濒临灭绝的东北民猪

东北民猪产于东北三省．原东北民猪分为大、中、小气型。大奶猪、三民猪和荷包猪。后来逐步选择．东北民猪主要以二民猪为主。     

海藻糖对民猪精液冷冻保存的影响

为研究海藻糖在民猪精液冷冻中的作用,获得最佳民猪精液冷冻液成分,本试验在BTS、Modena和Zorlesco 3种稀释液基础上添加0.15 mol/L海藻糖,及在Zorlesco稀释液中分别添加0 mol/L、0.1 mol/L、0.15 mol/L和0.2 mol/L的海藻糖,研究海藻糖在不同稀释液中及其不同浓度对冷冻的民猪精子活率、质膜完整率、顶体完整率和线粒体膜电位的影响。结果表明,在Zorlesco稀释液中添加0.15 mol/L海藻糖可明显提高民猪冷冻精子的质量,使精子活率、质膜完整性、顶体完整率和线粒体活性分别达到(44.0±2.4)%、(58.2±2.4)%、(53.2±2.1)%和(51.3±2.3)%,为各组最佳(P<0.05)。将0.15 mol/L海藻糖分别添加在BTS、Modena和Zorlesco3种稀释液中发现,其中在Zorlesco稀释液添加海藻糖效果优于其他两组(P<0.05)。但海藻糖对冷冻前精子的保护作用不明显(P>0.05)。因此,在Zorlesco稀释液中添加1.5 mol/L的海藻糖能够明显提高民猪精子冷冻后质量,是民猪冷冻保存的适宜保护液。     

莱芜猪前体脂肪细胞的原代培养及诱导分化研究

为了建立莱芜猪前体脂肪细胞的体外培养体系,探索猪脂肪组织增生的生物学特征。本研究采集1日龄莱芜猪仔猪颈、背部皮下脂肪组织,采用胶原酶与胰蛋白酶相结合的方法,分离原代前体脂肪细胞,进行前体脂肪细胞的原代和传代培养,以及前体脂肪细胞诱导分化的研究,并采用Real-time PCR方法检测前体脂肪细胞分化过程中关键基因PPARγ的表达。结果表明,分离的猪原代前体脂肪细胞约8h后开始贴壁,贴壁的细胞呈短梭形或不规则的三角形,第3天多数细胞进入指数生长期,呈成纤维细胞样形态,细胞生长曲线近似S形;诱导培养结果显示,少量细胞在第2天开始出现脂滴,大多数细胞在第3天出现脂滴,第7～8天小脂滴逐渐融合成大脂滴,在第12天左右融合成大脂滴,油红O染色呈橘红色。在前体脂肪细胞分化过程中PPARγ基因mRNA的表达量逐渐增加,在诱导后的48h表达量最高,随后其表达丰度逐渐下降。本试验成功建立了莱芜猪前体脂肪细胞培养体系和体外诱导分化模型,为进一步研究莱芜猪前体脂肪细胞增殖与分化机制和猪体脂肪的沉积奠定基础。     

民猪HB-EGF基因第4内含子的克隆与分析

为了研究民猪肝素结合EGF样生长因子(heparin-binding EGF-like growth factor,HB-ECF)第4内含子的序列及其突变位点,试验采用PCR鉴定及基因克隆测序的方法对民猪HB-EGF基因第4内合子序列进行克隆与分析.结果表明:在民猪的HB-EGF基因第4内含子序列中共发现3个点突变,即第27个碱基处插入1个T,78A→78G,101T→101C;第27个碱基处插入的T造成了NlaⅢ酶切位点的改变.     

民猪与大白猪肠道菌群的比较研究

民猪是我国一个著名的地方猪种,属于脂肪型猪种。而大白猪起源于欧洲,是瘦肉型猪种。通过比较这2个不同猪种间肠道微生物菌群的差异,分析它们在消化吸收上的异同点。首先针对16S r DNA V4区设计引物,对来自于5头大白猪和5头民猪的粪便基因组进行PCR扩增,利用Illumina Hiseq2000测序平台进行测序,数据经优化整理后,进行OTU聚类分析,并在门、纲、目、科和属共计5个水平上进行分类学统计。结果表明:共获得421~460 bp序列298 768条,占总数的99.98%。2组间共有OTU 885个,大白猪特有OTU 69个,民猪特有OTU 221个。共检测到25个门,其中拟杆菌门(Bacteroidetes)、厚壁菌门(Firmicutes)、螺旋菌门(Spirochaetae)和变形菌门(Proteobacteria)占优势,民猪和大白猪之间具有大致相同的门水平分布。在检测到的207个属中,普氏菌属(Prevotella)和密螺旋体属(Treponema)的相对丰度值在2个猪种内均较高。而大白猪的厌氧弧菌属(Anaerovibrio)和梭菌属(Clostridium)分别比民猪猪高出4.5倍和3.4倍,民猪的纤维杆菌属(Fibrobacter)、螺旋体属(Spirochaeta)和密螺旋体属(Treponema)比大白猪分别高出3.7倍、1.6倍和1.7倍。由此推测,民猪肠道内纤维杆菌属的高表达可能与其易消化粗纤维饲料有关。     

猪微小RNA-15b前体突变对其生物学加工过程及前体脂肪细胞分化的影响

基于在猪微小RNA-15b(miR-15b)前体（pre-miR-15b）基因位点第58位碱基上发现了1个C>T突变（+58C>T）,本试验旨在探究此突变对微小RNA(miRNA)生物学加工过程以及对猪前体脂肪细胞分化的影响。试验通过构建野生型（pmR-miR-15bW）和突变型（pmR-miR-15bM）miR-15b过表达载体,分别转染猪原代前体脂肪细胞进行miR-15b的过表达试验,然后利用实时荧光定量PCR对比2组细胞pre-miR-15b和miR-15b成熟体的表达量,在体外细胞水平明确+58C>T对miR-15b生物学加工过程的影响;随后,诱导转染了不同基因型miR-15b过表达载体（pmR-miR-15bW和pmR-miR-15bM）的猪前体脂肪细胞成脂分化,利用实时荧光定量PCR对比2组细胞miR-15b靶基因叉头框蛋白O1(FOXO1)（可抑制脂肪细胞分化）以及成脂分化相关基因的相对表达量,同时结合油红O染色,明确此突变对猪前体脂肪细胞分化的影响。结果表明：2组细胞miR-15b初级转录本（pri-miR-15b）的表达量没有显著差异（P>0....     

NR1H3基因调控猪前体脂肪细胞分化的研究

旨在探讨NR1H3基因在猪脂肪组织中的发育性表达规律及对猪前体脂肪细胞成脂分化的影响,以确定其在脂肪沉积过程中的主要功能。本研究采用qRT-PCR方法检测30、90、240日龄马身猪皮下脂肪组织中NR1H3的发育性表达规律;采集5日龄杜长大仔猪背部脂肪组织,分离猪前体脂肪细胞;通过细胞免疫荧光技术检测细胞中Adiponectin含量以鉴定细胞的纯度;构建猪NR1H3基因的过表达载体,设计NR1H3 siRNA序列,分别转染分离得到的猪前体脂肪细胞,采用qRT-PCR、Western blot和油红O染色等方法检测过表达和干扰效率及它们对成脂分化关键基因表达的影响。结果表明,马身猪皮下脂肪组织中NR1H3的表达量随日龄增加呈上升趋势,30日龄时表达量最低,240日龄时表达量最高,差异极显著(P<0.01)。与对照组相比,猪前体脂肪细胞中过表达NR1H3,脂肪细胞的脂滴数明显增多,下游靶标SREBP-1c和ChREBP的表达量极显著提高(P<0.01),且成脂关键基因FAS、C/EBPβ、PPARγ和FABP4的mRNA表达量极显著提高(P<0.01),促进成脂过程;相反,干扰NR1H3基因,脂滴数明显减少,下游靶标及成脂关键基因的mRNA表达量极显著下调(P<0.01),抑制成脂过程。本研究表明,NR1H3基因是猪前体脂肪细胞成脂分化的正调节剂,通过影响其下游靶标SREBP-1c和ChREBP的表达而影响成脂分化,研究结果对阐明猪脂肪沉积的分子机理、改善肉质品质有重要意义。