昆虫寄生性真菌——棕色绿僵菌对草原革蜱杀灭作用的研究

为了研究昆虫寄生性真菌——棕色绿僵菌(Metarhizium brunneum)在家畜外寄生虫病防控中的应用，试验通过培养棕色绿僵菌获得分生孢子，稀释至浓度为1×10⁴个/mL后统计其萌发率，在棕色绿僵菌分生孢子悬液对草原革蜱幼蜱和成蜱的杀灭作用试验中分别设置1个对照组和5个浓度的试验组，即将草原革蜱幼蜱和成蜱分别放入5个不同浓度的棕色绿僵菌分生孢子悬液及0.5%孢子洗脱液中停留5 s,在25℃条件下每日定时观察幼蜱和成蜱的虫体死亡情况及作用时间。结果表明：棕色绿僵菌培养至第3天时所得的分生孢子萌发率可达到90.40%;对草原革蜱幼蜱杀灭作用明显，用试验所得的最佳作用浓度1×10⁶个/mL作用至第7天时草原革蜱幼蜱的死亡率高达100%,成蜱的死亡率为80.00%。说明昆虫寄生性真菌——棕色绿僵菌可以用于防治家畜外寄生虫病。     

鼠李糖乳杆菌GR-1缓解大肠杆菌诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞炎性反应

为明确鼠李糖乳杆菌GR-1(L.rhamnosus GR-1)在大肠杆菌感染原代奶牛子宫内膜上皮细胞(BEECs)过程中调节炎性反应的机制，本试验将BEECs分为4个组，分别是对照组(加入5 mL培养基)、E.coli攻菌组(加入5 mL浓度为1×10⁵ CFU/mL大肠杆菌)、L.rhamnosus GR-1单独处理组(提前3 h加入5 mL浓度为1×10⁷ CFU/mL L.rhamnosus GR-1)和L.rhamnosus GR-1保护组(加入5 mL浓度为1×10⁷ CFU/mL L.rhamnosus GR-1孵育3 h后去掉上清液，再加入5 mL浓度为1×10⁵ CFU/mL大肠杆菌);采用光学显微镜观察E.coli对BEECs形态的损害情况，实时荧光定量PCR检测相关基因的转录水平，Western blot检测TLR2和NF-κB2的蛋白表达。结果显示，E.coli攻菌6 h后，与E.coli攻菌组相比，L.rhamnosus GR-1保护组BEECs形态保持完整，且TLR2、TL...     

两株少孢节丛孢菌在不同培养基中的形态学差异及生长特性

为了观察捕食线虫性真菌少孢节丛孢菌不同分离株在不同培养基中的形态学特性及生长情况,将少孢节丛孢菌分离株DH 066和F 107接种于10g/L麸皮琼脂(WBA)培养基、10g/L玉米粉琼脂(CMA)培养基、20g/L葡萄糖离子琼脂(DIA)培养基和20g/L葡萄糖琼脂(DA)培养基中,置于25℃恒温箱培养,观察不同分离株在不同培养基中的形态学特性并测定其产孢量。对2个分离株在6种不同培养基中菌丝生长长度每天进行定时测量。结果表明,该菌在4种培养基中的特征为分生孢子梨形至倒卵形,1个分隔,偶见2个分隔,分生孢子梗无色,直立,分隔,偶见分枝,分生孢子在10g/L WBA产量最大。此外,对2个分离株在不同培养基中生长速度研究表明,该菌在10g/L麸皮自来水琼脂(WBWA)培养基和10g/L玉米粉自来水琼脂(CMWA)培养基中生长最快。     

甘肃省马铃薯坏疽病鉴定及其病原生物学特性研究

本试验研究了马铃薯坏疽病的症状及病原形态等。结果表明,该病害在块茎上形成圆形、椭圆形或不规则形的凹陷病斑,病斑呈土黄色至淡紫色,大小约1~3 cm,其中央有小黑点。从甘肃省采集到的马铃薯坏疽病26份标样中分离得到8个茎点霉属真菌分离物,经形态特征比对和致病性测定鉴定为同一种真菌分离物,且在症状特征、病原形态学、生化特征及ITS序列分析基础上鉴定该病原物为Phoma foveata;30%丙环唑·苯醚甲环唑、35%多菌灵磺酸盐、5%菌毒清、10%苯醚甲环唑、32.5%苯醚甲环唑·嘧菌酯等对马铃薯坏疽病菌抑菌能力较强,其EC₅₀值分别为2.43×10^-5, 1.77×10^-2, 7.40×10^-2, 1.31×10^-1和2.31×10^-1 μg/mL;该病原菌菌丝生长速率及分生孢子萌发率均在20℃最高;在不同培养基上菌落形态及生长速率有差异,但在PDA培养基上生长最快;其分生孢子在pH值为3~10时均可萌发,但pH为6时分生孢子萌发率最高;本研究为国内首次详细报道该病害,该结果为甘肃省有效控制马铃薯坏疽病害提供了依据。     

蝗虫微孢子虫和绿僵菌不同配方饵剂对短星翅蝗和宽须蚁蝗的室内生测研究

为了解蝗虫微孢子虫(Paranosema locustae)和绿僵菌(Metarhizium anisopliae‘acridum’)对蝗虫的防治情况,在农业部锡林郭勒草原有害生物科学观测实验站,对短星翅蝗(Calliptamus abbreviatus)和宽须蚁蝗(Myrmeleotettix palpalis)分别进行蝗虫微孢子虫、绿僵菌及两种药剂混合处理后,进行室内生测,记录28d的死虫数,并检测其感染情况。结果显示:单施蝗虫微孢子虫防治短星翅蝗,每头蝗虫的施用量为4.44×10⁵个孢子,防治效果达65.09%。单施蝗虫微孢子虫防治宽须蚁蝗,每头蝗虫的施用量为4.44×10⁴个孢子,防治效果达55.64%。混合施用蝗虫微孢子虫和绿僵菌防治草原蝗虫时,二者对每头蝗虫的施用量分别为4.44×10⁴和1.11×10⁶个,防效均可达到100%。与短星翅蝗相比,蝗虫微孢子虫对宽须蚁蝗的防效更好。     

多重PCR方法鉴定5类牛源致泻性大肠埃希菌

为建立鉴定5类牛源致泻性大肠埃希菌(DEC)多重PCR检测方法,对陕西关中奶牛场犊牛粪便中分离的大肠埃希菌进行检测。以EAEC(astA、aggR、pic)、EHEC(stx1、stx2)、EPEC(escV、bfpB)、EIEC(invE)和ETEC(lt、stp、sth)5类DEC中11种毒力基因为目标,uidA基因为阳性对照,建立两体系(体系Ⅰ和Ⅱ)多重PCR检测方法,通过改变引物浓度、退火温度等检测条件进行优化,并对其特异性和灵敏度进行检测。结果显示,体系Ⅰ检测EAEC、EHEC,体系Ⅱ检测EPEC、EIEC、ETEC,除astA引物浓度为0.5μmol/L,其余均为0.3～0.4μmol/L;退火温度以59℃最佳;ETEC的检测下限最低(1.09×10³ CFU/mL),其余依次为EHEC(1.27×10³ CFU/mL)、EIEC(2.43×10³ CFU/mL)、EPEC(5.71×10³ CFU/mL)、EAEC(7.98×10³ CFU/mL);经验证该方法只...     

鸭疫里氏杆菌二价灭活疫苗制备及免疫效力研究

【目的】根据鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)血清1型、2型贵州流行株制备二价灭活疫苗,为鸭疫里氏杆菌病的防控及疫苗研制提供研究资料。【方法】以血清1型RA(RA-G06株)、血清2型RA(RA-HS01株)地方流行株为菌种,通过涂板法测定菌株生长曲线,利用改良寇氏法计算菌株对鸭的半数致死量(median lethal dose, LD₅₀),将2株菌培养至终浓度为1×10¹⁰ CFU/mL后等比例混合,以卡波姆为佐剂制备二价灭活疫苗,经疫苗质量检验后进行雏鸭免疫试验;通过检测免疫鸭血清中特异性抗体水平和攻毒保护试验评价疫苗的保护率,对攻毒试验鸭心脏、肝脏、脾脏和脑组织进行组织病理学观察。【结果】RA-G06株和RA-HS01株均在培养12 h时到达峰值,活菌数分别为2.1×10¹¹和3.3×10¹¹ CFU/mL,LD₅₀分别为1.44×10¹⁰和2.63×10⁸ CFU/mL;制备的疫苗安全性良...     

蜡样芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌发酵条件的优化

研究旨在对动物饲料中添加的蜡样芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌的发酵条件进行优化。利用正交试验对两种杆菌的生长条件进行优化并验证。研究结果表明:蜡样芽孢杆菌培养的最佳条件为葡萄糖1.5%、蔗糖1.5%、淀粉0.5%、牛肉粉0.5%、蛋白胨1.5%、酵母粉1%、硫酸铵0.5%、培养时间18～20 h,活菌数可达1.3×10¹²CFU/mL,较优化之前的8×10¹¹CFU/mL提高了62.5%。嗜酸乳杆菌最佳生长条件为MRS液体培养基中添加1%大豆蛋白胨、2%葡萄糖、20%番茄汁、发酵时间22 h,最大活菌数达1.9×10¹¹CFU/mL,较优化之前的1.3×10¹¹CFU/mL提高了46.15%。使用优化的条件进行蜡样芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌进行发酵,可以极大地提高发酵水平和活菌数,有效降低生产成本。     

水栀子多糖提取物对感染猪圆环病毒2型的RAW264.7细胞氧化应激的调节作用研究

为了研究水栀子多糖提取物(Gardenia jasminoide var.radicans polysaccharide extract, GJPE)对猪圆环病毒2型(PCV-2)感染的RAW264.7细胞氧化应激的调节作用,试验采用ELISA法测定了GJPE对RAW264.7细胞的安全浓度;将RAW264.7细胞分为空白对照组、维生素C组、不同浓度(安全浓度范围)GJPE组,分别加入到96孔细胞培养板(1×10⁶ 个/mL)和24孔细胞培养板(2×10⁵ 个/mL)中,除空白对照组加基础培养基外,其他各组分别加入1×10³ TCID₅₀ PCV-2病毒液,并设置PCV-2组(只添加PCV-2病毒液)作为病毒对照组,100μL/孔(96孔细胞培养板)或500μL/孔(24孔细胞培养板),培养24 h;吸弃上清液,用PBS洗涤3遍,空白对照组和PCV-2组分别加入基础培养基,维生素C组加入200μmol/mL维生素C,不同浓度GJPE组分别加入相应浓度GJPE[100μL/孔(96孔细胞培养板)或50...     

禽用乳酸菌SR1发酵培养基优化

以一株禽用乳酸菌SR1为试验对象,对其发酵培养基进行优化,以提高发酵液中的活菌数。利用单因素和正交试验对乳酸菌 SR1的发酵培养基进行了优化研究。结果表明,SR1最佳发酵培养基为：葡萄糖35.0g/L,蛋白胨15.0g/L,牛肉膏7.0g/L,磷酸氢二钾2.3g/L,硫酸镁0.35g/L。在此最优工艺下,SR1发酵液的 OD_660nm值从1.179提高到 1.416,活菌数由2.5×10⁸ CFU/mL提高到3.0×10⁸ CFU/mL。与初始发酵培养基相比,发酵水平显著提高,为后期SR1在禽的养殖过程中应用奠定基础。     

日粮添加丁酸梭菌及其复合菌剂对蛋鸡夏季生产性能的影响

试验旨在探究日粮添加丁酸梭菌及其复合菌剂对蛋鸡夏季生产性能、蛋品质和血清生化指标的影响。随机选用380日龄京粉2号蛋鸡360只,随机分成4组,每组6个重复,每个重复15只鸡。对照组饲喂基础日粮,3个试验组分别在基础日粮中添加1×10⁵CFU/g丁酸梭菌(活菌数1×10⁹CFU/g)、2×10⁶CFU/g复合益生菌A(由丁酸梭菌和凝结芽孢杆菌组成,活菌数分别为4×10⁸ CFU/g和1.96×10¹⁰ CFU/g)、5×10⁶ CFU/g复合益生菌B(由丁酸梭菌和地衣芽孢杆菌组成,活菌数分别为1×10⁸CFU/g和9.9×10⁹CFU/g)。预试期1周,正试期12周。结果表明:与对照组相比,丁酸梭菌组和复合益生菌A组的料蛋比分别降低6.7%和6.3%(P<0.05),产蛋率提高3.0%和2.9%(P<0.05);与对照组相比,复合益生菌A组的蛋白高度、蛋黄重和蛋黄比例分别提高7.1%、6.3%和3.6%...     

野生桑黄菌固体培养基配方的优化试验

桑黄菌是一种具有重要开发价值的药用真菌。以菌丝日均生长速度为指标,比较野生桑黄菌在玉米粉综合培养基、马铃薯综合培养基、木生菌标准培养基上的生长情况,结果表明野生桑黄菌在玉米粉综合培养基上的日均生长速度最快。在选择葡萄糖为碳源,玉米粉+蛋白胨为氮源的基础上,通过L9(34)正交试验设计优化野生桑黄菌固体培养基的配方为:20g/L葡萄糖,20g/L玉米粉,1g/L蛋白胨,0.3g/L MgSO4,2g/L KH2PO4,20g/L琼脂。     

一株抗马铃薯坏疽病莫海威芽孢杆菌(Bacillusmojavensis ZA1)培养条件的优化

为了提高生防菌株莫海威芽孢杆菌(Bacillus mojavensis ZA1)液体发酵的生物量,利用单因素试验设计与响应曲面试验设计相结合的方法对ZA1摇瓶发酵条件进行了优化。结果表明,ZA1的最佳培养基配比为氯化铵14.25 g、玉米粉19 g、马铃薯237 g、水1000 mL,最佳发酵条件为pH 7.7、培养温度28℃、转速180 r/min及发酵时间36 h,ZA1优化后活菌数为4.12×10¹⁰ CFU/mL。通过中心组合试验设计确定ZA1在10 L发酵罐中的最佳溶氧量为60%和转速为180 r/min;最优条件下,发酵ZA1的放罐时间确定为36 h,活菌数达到1.59×10¹¹ CFU/mL。该结果为利用ZA1开发生防制剂奠定了基础。     

乳酸乳球菌L19对乌鳢生长、免疫功能及抗氧化能力的影响

试验旨在探讨乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)L19对乌鳢生长、免疫功能及抗氧化能力的影响。将540尾初始体质量为(8.68±0.22)g的乌鳢随机分为6组,每组3重复,在基础饲料中分别添加0(对照组)、1.0×10⁶(10⁶组)、1.0×10⁷(10⁷组)、1.0×10⁸(10⁸组)、1.0×10⁹(10⁹组)CFU/g及1.0×10¹⁰(10¹⁰组)CFU/g L.lactis L19,配制成6种等氮等脂的试验饲料,进行为期8周的饲养试验。饲养试验结束后,测定乌鳢生长性能、血清免疫指标及肝脏和肠道中抗氧化酶活性。结果表明:L.lactis L19添加量分别为1.0×10⁷、1.0×10⁸、1.0×10⁹CFU/g组和1.0×10¹⁰CFU/g组乌鳢的终末体质量(F...     

粘质沙雷氏菌对抗BmNPV家蚕品种皖·丰×润康的致病力测定

为了解细菌对抗核型多角体病毒(BmNPV)家蚕品种皖·丰×润康的致病力,以秋丰×白玉为对照家蚕品种,粘质沙雷氏菌为试验菌,设置1×10⁷、1×10⁶、1×10⁵ cfu/mL等3个浓度梯度的粘质沙雷氏菌悬液采用体壁穿刺法接种5龄起蚕,以接种无菌水的幼虫为对照。接种后正常桑叶饲养,1 h观察1次发病情况,连续观察24 h,调查半数致死时间(LT₅₀),以此衡量粘质沙雷氏菌对皖·丰×润康和秋丰×白玉的致病力。结果表明,粘质沙雷氏菌对皖·丰×润康和秋丰×白玉均具有较强的致病力,浓度越高致病力越强。粘质沙雷氏菌3个浓度梯度菌液对皖·丰×润康正反交的LT₅₀在14.4 h和16.9 h之间,对秋丰×白玉的LT₅₀在15.7 h和17.0 h之间,皖·丰×润康在相同粘质沙雷氏菌浓度下的LT₅₀均略短于秋丰×白玉,表明粘质沙雷氏菌对皖·丰×润康的致病力略大于秋丰×白玉。该研究结果为合理饲养抗BmNPV家蚕品种提供了科学依据。     

青海省囊谦县鼠疫分离菌株病原学研究

对青海省囊谦县分离的36株鼠疫菌进行糖醇酵解实验、毒力因子、质粒谱和鼠疫菌差异区段(DFR)分型研究,结果表明,其中33株为青藏高原型菌株,1株为祁连山型,其余2株与青海省疫源地生态型菌株均不相同。21株鼠疫菌均含有4个毒力因子,占58.3%(21/36)。63.89%(23/36)的受试菌株Pgm阳性,22.22%(8/36)的受试菌株Pgm阴性,Pgm混合型菌株为13.89%(5/36)。5型和36型为该地区主要基因组型。囊谦县36株鼠疫菌共携带3种质粒,均为规范化质粒,组成1种质粒谱：6×10⁶、45×10⁶、65×10⁶。     

全悬浮培养LMH细胞制备FAdV-4灭活疫苗的研究

通过对LMH细胞进行驯化,获得一株可全悬浮培养的LMH细胞,命名为LMH-S。此细胞可适应无血清、高密度悬浮培养,以初始细胞密度0.5×10⁶/mL～1×10⁶/mL接种,细胞密度最高达6×10⁶/mL。研究确定生物反应器悬浮培养LMH-S细胞制备FAdV-4抗原的最优参数为：接毒时细胞密度2×10⁶/mL～3×10⁶/mL、接毒量0.1MOI～1MOI、接毒后48 h～72 h收毒,所获抗原病毒含量不低于10^9.25TCID₅₀/mL。试验鸡分别免疫0.02 mL、0.05 mL、0.1 mL、0.3 mL疫苗,攻毒保护率分别为9/10、10/10、10/10、10/10,表明疫苗有效性良好。本试验成功建立了LMH全悬浮培养细胞株,确定了FAdV-4抗原的生物反应器悬浮培养工艺,验证了悬浮培养抗原的免疫原性,为高效FAdV-4灭活疫苗的研制奠定了基础。     

苜蓿轮枝菌的生物学特性及抗病种质材料筛选

在室内对苜蓿轮枝菌菌株Ms197和Ms198的最适生长温度、pH值、碳源、氮源、产毒能力及致病力进行测定,同时利用蘸根接种法对37份苜蓿材料的抗病水平进行评价。结果表明,苜蓿轮枝菌菌株Ms197和Ms198在温度5～35℃和pH值4～11范围内均能生长和产孢,具有较强的温度和酸碱度适应性,在温度5～35℃范围内菌落生长速率分别为0.20～4.14 mm/d和0.48～4.12 mm/d,产孢量分别为3.17×10⁵～4.12×10⁸和1.02×10⁶～4.27×10⁸。在pH值4～11范围内菌落生长速率分别为1.26～3.96 mm/d和1.39～3.97 mm/d,产孢量分别为5.5×10⁵～4.35×10⁸和7.67×10⁵～4.70×10⁸。最适菌落生长温度和pH值分别为25℃和6～9,最适产孢温度和pH值分别为20℃和9;可利用多种碳源和氮源生长,综合来看,碳、氮源分别为可溶性淀粉和牛肉膏的培养基最适于菌...     

1株植物内生菌解淀粉芽孢杆菌的安全性评价

试验旨在评价1株从杜仲中分离的解淀粉芽孢杆菌的安全性。试验从菌株溶血性、氨基酸脱羧和明胶液化试验、抗菌药物敏感性、腹腔注射、经口灌胃、抑菌活性等进行安全性综合评价。腹腔注射试验分为腹腔注射组(1.0×10¹⁰ CFU/0.3 mL)和生理盐水组,一次性注射,连续观察5 d。经口灌胃试验分为高剂量组(1.0×10¹⁰ CFU/0.2 mL)、中剂量组(1.0×10⁹ CFU/0.2 mL)、低剂量组(1.0×10⁸ CFU/0.2 mL)和生理盐水组,每天灌胃1次,连续灌胃28 d。结果显示,腹腔注射和经口灌胃小鼠均健康存活,未见临床变化,试验期间体重正常增加,各组小鼠血常规、血清生化指标和脏器指数差异均不显著(P>0.05),解淀粉芽孢杆菌DZ01未发生易位,氨基酸脱羧和明胶液化试验均为阴性。解淀粉芽孢杆菌DZ01对所测的8种抗菌药物均表现敏感。除粪肠球菌和铜绿假单胞菌外,解淀粉芽孢杆菌DZ01上清液对其余6株指示菌均具有抑菌活性。研究表明,解淀粉芽孢杆菌DZ01具有较好的安全性。     

致病性大肠杆菌诱导的小鼠子宫内膜炎模型建立

为探究致病性大肠杆菌(EPEC)诱导的子宫内膜炎的损伤机制,将24只8~10周龄、体重30~35 g的雌性小鼠随机分为4组,每组6只,3个炎症模型组分别使用留置针向小鼠子宫内灌注1×10⁶、1×10⁸、1×10¹⁰CFU/mL的大肠杆菌25μL,对照组向小鼠子宫内灌注等体积的生理盐水。24 h后进行剖检,通过观察组织病理学变化、ELISA检测细胞炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及炎症通路核因子κB(NF-κB)的水平。结果表明:1×10¹⁰CFU/mL大肠杆菌可使子宫内膜层与肌层无明显界限,中性粒细胞浸润情况增加(P<0.05),促进IL-6、IL-1β和TNF-α的表达(P<0.001),促进炎症通路NF-κB的激活(P<0.05)。综上,使用1×10¹⁰CFU/mL大肠杆菌灌注小鼠子宫24 h可成功建立子宫内膜炎模型,为进一步探究由大肠杆菌诱导的子宫内膜炎的损伤机制提供理论依据。