人尿促性腺激素、雌二醇及表皮生长因子对牛卵母细胞体外成熟质量的影响

试验旨在研究不同激素配比及表皮生长因子(EGF)浓度对牛卵母细胞体外成熟及卵母细胞质量的影响。将随机分组的卵丘-卵母细胞复合体于添加FSH+LH、HMG、FSH+LH+E₂、HMG+E₂ 4种不同激素组合配比的成熟基础液中培养,对比其体外成熟率,比较了EGF对牛卵母细胞体外成熟率和孤雌胚胎体外发育的影响,并采用TUNEL法检测添加不同浓度EGF的牛孤雌激活囊胚细胞凋亡情况。结果表明,添加HMG的成熟试验结果稳定,E₂对牛卵母细胞成熟有一定的促进作用,HMG+E₂联合使用可以得到高效稳定的成熟结果;在此基础上,在成熟液中添加30 ng/mL EGF对牛卵母细胞的成熟质量、胚胎发育及降低胚胎细胞凋亡都有明显的促进作用。因此,在体外成熟培养液中添加0.075 IU/mL HMG、1 μg/mL E₂和30 ng/mL EGF对牛卵母细胞的成熟和质量较为有益。     

牛卵丘细胞对卵母细胞体外成熟与孤雌发育的影响

试验以牛卵泡内卵丘-卵母细胞复合体(COCs)为材料,探讨了牛卵丘细胞包裹程度对卵母细胞体外成熟(IVM)和孤雌胚胎(PAEs)发育的影响。试验1,将COCs随机分为2组,在开展IVM前,将其中一组COCs的卵丘细胞机械吹打去除成为机械裸卵(DOs),研究卵丘细胞层存在与否对卵母细胞体外核成熟(排出第一极体)和孤雌激活后发育能力的影响;试验2,根据COCs卵丘细胞包裹层数将COCs分为3组,即卵丘细胞层少(1～4层)的COCs为A组、卵丘细胞层多(5层以上)的COCs为B组及包裹5层以上卵丘细胞且附带卵泡壁颗粒细胞层(FSP)的COCs为C组,研究卵丘细胞层包裹程度对卵母细胞的体外核成熟和孤雌激活后胚胎发育能力的影响。结果表明:卵丘细胞的存在更有利于卵母细胞体外成熟和孤雌胚胎发育;COCs中卵丘细胞包裹层数对卵母细胞体外核成熟率没有显著影响,但包裹卵丘细胞层数多且附带FSP的卵母细胞,其PAEs的囊胚率显著高于包裹卵丘细胞少的卵母细胞PAEs。     

钙离子水平对猪卵母细胞体外成熟与早期胚胎发育的影响

维持细胞内钙离子(Ca²⁺)稳态对维护卵母细胞成熟及植入前胚胎正常发育至关重要。本实验旨在研究Ca²⁺水平变化对猪卵母细胞体外成熟发育的影响。收集的猪卵丘卵母细胞复合体(COCs)，随机分为3组，即对照组、100 nmol/L毒胡萝卜素(TG)组和100 nmol/L TG+300 nmol/L光溜海绵素C(XeC)组，体外培养，分别统计卵丘扩散情况、体外成熟率、胞内Ca²⁺水平，随后进行孤雌激活(PA)统计各组卵裂率、囊胚率及细胞总数。结果表明：添加XeC可显著改善由TG引起的猪卵丘细胞扩散不完全，卵母细胞体外成熟率、卵裂率和囊胚率降低，以及细胞数减少等现象，并显著降低由TG诱导的胞内Ca²⁺水平。综上，胞内Ca²⁺水平对猪卵母细胞体外成熟和早期胚胎发育具有重要的调控作用。     

CYP19A1调控内源性雌激素合成促进牦牛COCs细胞自噬和早期发育能力

旨在探索牦牛卵母细胞成熟过程中细胞色素P450芳香化酶(cytochrome P450arom, CYP19A1)对内源性雌激素(17β-estradiol, E₂)分泌、卵母细胞自噬和后续胚胎发育能力的影响。本研究在牦牛卵丘卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes, COCs)体外成熟过程中,分别用等体积生理盐水、最佳浓度E₂(10^-7 mol·L^-1)、CYP19A1诱导剂黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1, AFB1)、CYP19A1抑制剂双酚A(bisphenol A, BPA)处理,实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR, qRT-PCR)、Western blot和免疫荧光技术检测各组成熟COCs中CYP19A1表达水平,酶联免疫吸附方法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测诱导和抑制CYP19A1处理组牦牛成熟COCs培养液中E₂水平;分析不同处理组C...     

卵丘细胞对辽宁绒山羊卵母细胞体外成熟与孤雌发育的影响

为了进一步探索辽宁绒山羊卵母细胞体外成熟的方法,本试验以屠宰场绒山羊卵巢为材料,采用抽吸法收集直径大于2 mm卵泡的卵母细胞,研究卵丘细胞对卵母细胞体外成熟和孤雌发育的影响。试验1,将一部分COCs经机械吹打脱除卵丘细胞成为机械裸卵(DOs),然后以4种方式培养,即COCs单独培养、DOs与COCs共培养(DOs(COCs))、DOs与卵丘颗粒细胞共培养(DOs(CCs)),以及DOs单独培养。试验2,根据包裹卵母细胞的卵丘细胞的完整性分为3组,有3层卵丘细胞紧密包围的卵母细胞复合体COCs3,有1-3层卵丘细胞包围的卵母细胞COCs1-3,无卵丘细胞包围的裸露卵母细胞NOs,3组各自单独培养。结果表明:COCs组的成熟率、孤雌卵裂率和囊胚率最高,分别为83.25%、41.75%和29.25%,卵丘细胞的存在有利于卵母细胞体外成熟和随后的发育,COCs3组成熟率、孤雌卵裂率和囊胚率分别为83.25%、42.50%和29.75%,显著高于COCs1-3和NOs组,卵丘细胞的完整性也影响着卵母细胞的体外发育,自然裸卵已失去体外发育能力。     

生长激素对体外培养猪COCs影响的研究

研究了生长激素对猪COCs体外成熟过程中卵丘细胞扩展、卵丘细胞凋亡、卵母成熟及孤雌激活后卵裂的影响。结果表明:生长激素(STH)能够促进卵丘细胞扩展,抑制卵丘细胞凋亡,对卵母细胞的成熟和激活后卵裂呈现双重效应。在猪COCs培养液中添加0.15μg/mL STH成熟率(73.83%±1.80%)和卵裂率(64.76%±2.84%)显著高于对照组(mNCSU-23+PMSG(10IU/mL)+hCG(10 IU/mL))及添加0.01、0.05、0.1、2μg/mL STH组(P<0.05),在本实验中为猪卵母细胞体外成熟的最佳条件。     

卵丘细胞对猪卵母细胞成熟及发育的影响

本实验旨在研究有无卵丘细胞对卵母细胞成熟及其胚胎发育能力的影响。实验分别设裸卵组、卵丘细胞与卵母细胞共培养组、卵丘-卵母细胞复合体(COCs)组(对照组),检测猪成熟卵母细胞的存活率、极体率、孤雌激活后的卵裂率、囊胚率及各组卵母细胞的谷胱甘肽合成相关基因的表达。结果表明:COCs组卵母细胞经体外培养42 h后其存活率最高(95.76%),高于裸卵组(P<0.05)和共培养组(P>0.05);COCs组第一极体排出率为71.77%,高于共培养组和裸卵组(P<0.05);COCs组在后期发育中卵裂率与囊胚率高于共培养组和裸卵组(P<0.05),而共培养组的卵裂率及囊胚率高于裸卵组(P<0.05);与COCs组相比,裸卵组显著下调了GCLM、GCLC的表达(P<0.05),共培养组中GCLM的表达与COCs组无显著差异。研究结果显示,卵丘细胞对卵母细胞的成熟及发育均有显著影响,在卵母细胞成熟过程中,卵母细胞与卵丘细胞的缝隙连接受损会对卵母细胞的成熟效率产生影响,并且在卵母细胞后期发育中,缝隙连接的完整性与否会影响后期发育能力,并可推论出随着卵丘细胞的减少和缝隙连接的破坏,会造成谷胱甘肽合成基因表达降低,从而影响卵母细胞内的谷胱甘肽合成。     

促卵泡素和促黄体素对猪卵母细胞体外成熟的影响

本实验探讨了促性腺激素(FSH、LH)对猪卵母细胞体外成熟的影响,并最终找到了其合理的使用剂量.实验选取具有3层致密卵丘细胞层及均匀细胞质的猪卵丘-卵母细胞复合物(COCs)在体外进行成熟培养.体外成熟培养液为改良的TCM-199液,根据实验设计再添加不同浓度的FSH和LH.卵母细胞体外成熟培养条件为39 ℃、5%CO2与饱和湿度下,成熟培养48 h.培养结束后,以第1极体排出作为卵母细胞成熟的标准.在成熟液中添加LH浓度分别为1、5、10 IU/mL时,与没有添加FSH与LH的对照组(成熟率为15.9%)相比,成熟率有显著提高,前者成熟率分别为49.1%、30.0%、36.3%.LH浓度为1 IU/mL的实验组成熟率最高,显著高于对照组(P＜0.05);然后以成熟液中只添加浓度为1 IU/mL LH为对照组,实验组添加FSH浓度分别为1、5、10 IU/mL.结果表明,添加FSH浓度为5 IU/mL和10 IU/mL时其成熟率分别为40.1%、27.6%,低于对照组(49.0%).添加FSH浓度为1 IU/mL时其成熟率(49.1%)高于对照组(49.0%),但差异不显著(P＞0.05).试验表明,随着FSH与LH添加浓度逐渐增加,成熟率呈下降趋势.添加FSH与LH浓度均为1 IU/mL可得到最佳的成熟效果.     

磷酸二酯酶抑制剂对水牛卵母细胞减数分裂成熟的影响

本研究探讨了磷酸二酯酶抑制剂米力农(milrinone)对水牛卵母细胞体外自发成熟和促性腺激素诱导成熟的影响,以便提高卵母细胞体外成熟质量。试验对水牛卵丘卵母细胞复合体(COCs)培养不同时间或采取不同处理后,取出卵母细胞剥光后固定,然后用间苯二酚蓝染色,观察卵母细胞核成熟情况。结果表明:(1)Milrinone对水牛COCs的自发成熟具有抑制作用,且具有剂量依赖关系;(2)Milrinone对水牛卵母细胞体外自发成熟的抑制作用随培养时间的延长没有减弱,可作为水牛卵母细胞成熟过程中的核成熟抑制剂;(3)Milrinone能显著抑制促卵泡激素(FSH)诱导的水牛COCs体外成熟,但是随着时间的延长,这种抑制作用可以部分被FSH克服。     

猪卵母细胞体外成熟的研究

本试验主要探讨了促性腺激素(FSH LH)和17-β-雌二醇(E_2)对猪卵母细胞体外成熟的作用以及卵丘细胞群状态与卵核成熟之间的关系.结果表明:FSH LH对猪卵母细胞的卵丘扩展和核成熟有明显的促进作用,17-β-雌二醇不影响卵丘细胞群的扩展,但能促进卵母细胞的核成熟.卵丘扩展的A、B、C级卵母细胞,其核发育到中期Ⅱ的比例分别为93.75%、83.58%、63.64%,卵丘未扩展的卵母细胞,其核发育到中期Ⅱ阶段的比例极低.     

AY9944A-7和FSH对绵羊卵母细胞体外成熟的影响

本试验旨在研究FSH和AY9944 A-7在抑制剂阻滞的绵羊卵母细胞体外成熟过程中的诱导作用并探究二者的互作效应。分别以次黄嘌呤(Hx,4 mmol/L)、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX,0.25 mmol/L)或者二丁酰环磷酸腺苷(dhcAMP,0.3 mmol/L)抑制绵羊卵丘-卵母细胞复合体(COCs)中卵母细胞自发成熟,通过单独或同时添加FSH(10μg/mL)和AY9944 A-7(20μmol/L)诱导其恢复减数分裂。结果表明:FSH能克服一定浓度Hx,IBMX和dbcAMP对绵羊卵母细胞自发成熟的抑制作用,诱导绵羊卵母细胞生发泡破裂,排出第一极体;AY9944A-7能够克服一定浓度Hx和IBMX的抑制,诱导绵羊卵母细胞恢复减数分裂;FSH和AY9944 A-7在克服Hx对绵羊卵母细胞成熟的抑制时,存在显著的协同效应(P0.05)。     

2-氨基乙基联苯基硼酸酯对绵羊卵母细胞体外成熟及早期胚胎发育的影响

内质网是蛋白质合成、折叠、修饰的场所,同时作为钙储库,内质网调控钙的储存和释放,维持钙稳态平衡,对支持卵母细胞成熟和早期胚胎发育至关重要.本研究以绵羊卵丘-卵母细胞复合体(COCs)为研究对象,在COCs体外成熟(IVM)培养基中添加不同浓度的内质网钙通道抑制剂2-氨基乙基联苯基硼酸酯(0、1、10、100、1000μ...     

卵母细胞成熟相关激素和生长因子受体在马扩展型和紧凑型卵丘-卵母细胞复合体表达的研究

旨在比较一些与卵细胞成熟相关的激素和生长因子受体在两种卵丘-卵母细胞复合体(Ex-COC和Cp-COC)中的表达以探究两种类型的马卵母细胞成熟和发育能力差异的原因。本研究在屠宰场采集蒙古马离体卵巢带回实验室回收COCs,并根据卵丘细胞形态区分Ex-和Cp-COCs;通过qPCR和免疫荧光检测FSHR、LHR、IGF1R、IGF2R、ESR1、ESR2,BMP15和GDF9受体BMPR1B、BMPR2和ALK5在两种COCs中的表达模式;将雌二醇、IGF2、GDF9和BMP15分别添加进马IVM培养体系中检测其对马卵母细胞体外成熟率的影响。结果显示,这些受体基因的表达量在Ex-和Cp-COCs的卵丘细胞和卵母细胞中均有差异,在Cp-COCs中,卵丘细胞的大部分受体基因表达量高于卵母细胞;而在Ex-COCs中,卵母细胞与卵丘细胞的基因表达水平相似或高于卵丘细胞。相较于Cp-COCs的卵母细胞,大部分的受体基因在Ex-COCs的卵母细胞中表现出更高表达水平。体外成熟培养试验表明雌二醇和IGF2的添加可能有利于提高马的卵母细胞体外成熟率。马扩展型和紧凑型COCs中FSH、LH、IGF1、IGF...     

绵羊卵丘细胞对裸卵体外成熟及孤雌发育影响的研究

本研究探讨绵羊卵丘细胞对裸卵体外成熟和后期发育的影响。实验分为4组,对照组为卵丘-卵母细胞复合体(COCs);裸卵(DO)组;COCs与DO共培养组(CODO);卵丘细胞(CC)与DO共培养组(CCDO)。体外成熟培养18 h后,检测各组卵子成熟质量并进行孤雌发育研究。结果表明:CODO和CCDO组中裸卵活率显著高于DO组(P<0.05),但显著低于COCs组(P<0.05),且COCs组中卵子活率极显著高于DO组(P<0.01);在极体排出率方面,CODO、CCDO和DO3组差异不显著(P>0.05),但是它们都显著低于COCs组(P<0.05)。COCs、CODO、CCDO和DO 4组卵裂率差异均不显著(P>0.05)。然而,DO组的囊胚率显著低于CODO和CCDO组(P<0.05),极显著低于COCs组(P<0.01),但CODO和CCDO 2组中裸卵的囊胚率差异不显著(P>0.05)。总之,无论散在的卵丘细胞还是COCs均能提高裸卵体外成熟及后期发育潜力。     

绵羊卵母细胞体外成熟的研究

研究了FSH／LH浓度、年龄和采卵季节对绵羊卵母细胞体外成熟的影响。结果表明：①FSH／LH能促进绵羊卵母细胞体外成熟，适宜的添加浓度很重妻。本实验条件下，添加量以10μg／ml为宜。②成年绵羊卵母细胞成熟率高于性成熟前绵羊，但无显著差异。③发情季节绵羊卵母细胞较乏情季节易成熟。     

不同促性腺激素添加方式对猪卵母细胞生发泡染色质构型和卵母细胞成熟能力的影响

在卵母细胞体外成熟培养过程中,培养基中添加激素与否及其激素添加的先后顺序是影响猪卵母细胞核成熟和质成熟的一个重要因素.本试验将猪卵母细胞分别在FSH→不含激素、FSH→LH、FSH LH不含激素中培养48 h(培养第20～22 h后换液),并于成熟培养的第24 h(未换液)、48 h将卵母细胞进行荧光染色,观察其生发泡内染色质构型及卵母细胞核成熟情况.实验表明:(1)在IVM的前24 h,添加FSH LH组的GVIV期卵母细胞比例低于只添加FSH组,但差异不显著(8.99%比17.19%,P＞0.05);(2)在FSH存在的情况下,IVM的前期和后期添加LH能促进卵母细胞发生GVBD;(3)FSH LH培养24 h后转入不含激素培养基组,卵母细胞的核成熟比率显著高于添加FSH组和先添加FSH培养24 h后转入添加LH组(P＜0.05).     

影响小鼠卵母细胞体外成熟和体外受精效果的因素分析

研究卵母细胞发育程度和不同营养因子对小鼠卵母细胞体外成熟及体外受精率的影响。小鼠卵母细胞分别在含有FSH、BSA和胰岛素的培养液中体外成熟 ,在Whitten氏液中体外受精 ,比较体外成熟率、体外受精率。卵丘卵母细胞 (COC)较裸卵 (DO)的体外成熟率、体外受精率都低。FSH和胰岛素均能提高小鼠卵母细胞的体外成熟率、体外受精率。BSA可以降低小鼠卵母细胞体外受精率。GV期卵母细胞的体外受精率显著低于体外培养的排出第一极体的卵母细胞。 (P2 -cell <0 0 5 ,P受精 <0 0 5)。     

白藜芦醇对绵羊卵母细胞体外成熟的影响

本实验探究体外成熟(IVM)培养基中添加不同浓度白藜芦醇(0、0.5、2.0、5.0μmol/L RES)对绵羊卵母细胞核质成熟的影响。IVM 24 h后观察卵丘细胞扩展率和卵母细胞第一极体形成情况,并检测卵母细胞细胞质内活性氧(ROS)和谷胱甘肽(GSH)含量。结果表明:与对照组相比,0.5μmol/L RES组的卵丘细胞扩展率无显著差异,卵母细胞第一极体的形成显著提高,卵母细胞胞质中ROS显著降低,GSH含量显著提高;添加量增至5.0μmol/L卵丘扩展率、第一极体形成率、胞质内GSH含量显著下降。综上所述,在绵羊卵母细胞IVM液中添加0.5μmol/L RES通过降低胞质内ROS及提高GSH含量增强卵母细胞抗氧化能力,提高卵母细胞核成熟率及胞质质量,而促进卵母细胞体外成熟。     

牛卵母细胞体外成熟培养

本文着重探讨了牛卵母细胞的体外成熟培养，对卵子的发生、卵母细胞体外成熟的原理进行了阐述，叙述了从卵母细胞的回收、选择到成熟等步骤。本实验采用磷酸缓冲液(PBS)冲洗卵巢、吸卵，以含有FSH、LH、雌二醇等成分的成熟液对卵母细胞进行体外成熟培养，使卵丘细胞扩散，第一极体排出，卵母细胞达到成熟。     

添加外源激素FSH对绵羊卵丘颗粒细胞增殖的影响

为了分析外源激素促卵泡激素(FSH)对绵羊卵丘颗粒细胞增殖的影响,试验分离并体外培养了绵羊卵丘颗粒细胞,然后使用促卵泡激素受体(FSHR)免疫组织化学法鉴定了分离培养的细胞,进而分析了添加不同浓度FSH对细胞增殖速度的影响。结果表明:将卵丘颗粒细胞从卵丘颗粒细胞-卵母细胞复合体(COCs)上分离24 h之后,能够观察到部分卵丘颗粒细胞开始贴壁,传代之后细胞形态未发生明显变化。FSHR免疫组织化学法鉴定结果证明分离培养的绵羊卵丘颗粒细胞能够特异性地表达FSHR。培养基中添加FSH后,在培养前4 d,高浓度(100 ng/mL)和低浓度(10 ng/mL)的FSH均能促进卵丘颗粒细胞的增殖,但在培养6 d之后,高浓度的FSH对卵丘颗粒细胞的增殖存在抑制作用。说明外源激素FSH在不同浓度下对卵母颗粒细胞的增殖具有不同的影响。