实验性急性非洲猪瘟肝组织损伤及相关机制的研究

为探讨非洲猪瘟病毒(ASFV)对肝的组织损伤及其病理机制,本试验人工接种ASFV(Pig/HLJ/18毒株,剂量为10² HAD₅₀/m L),复制急性非洲猪瘟病例,观察13头死亡猪肝脏的剖检变化和组织学变化,采用原位PCR方法,对肝内ASFV病毒VP73蛋白进行定位,以免疫组织化学方法对肝组织炎症因子TNF-α、IL-1β、IFN-γ和凋亡因子Bax、Bcl-2的表达进行检测。结果表明,ASFV可对肝的组织结构造成明显损伤,随病程的延长病变逐渐加重,剖检见肝脏淤血、出血,灰白色花斑状炎症灶,胆囊水肿,充血出血。组织学病变以出血和病毒性肝炎为主,肝细胞水肿、坏死和凋亡,淋巴细胞浸润;ASFV主要分布于肝窦、肝小叶汇管区、小叶间质的巨噬细胞;TNF-α、IL-1β、IFN-γ主要在巨噬细胞、肝细胞、血管内皮细胞和少量淋巴细胞中呈阳性表达,其表达强度随损伤程度加重而显著升高(P<0.01);Bax表达升高(P<0.01)的同时Bcl-2表达下降(P<0.01),诱导了细胞凋亡发生。本研究结果提示ASFV通过对肝内单核-巨噬细胞系...     

急性非洲猪瘟脑损伤及NF-κB介导脑水肿形成机制研究

【目的】 在试验条件下研究非洲猪瘟病毒（African swine fever virus，ASFV）所致急性脑损伤及核因子κB （NF-κB）介导脑水肿发生的相关病理机制。【方法】 18头健康长白猪随机分为2组，攻毒组（13头）和对照组（5头），攻毒组肌内注射剂量为10²HAD₅₀/mL （HAD₅₀：半数红细胞吸附量）的ASFV毒株Pig/HLJ/18，对照组注射等体积生理盐水，试验期为15 d。试验期间观察临床症状，剖检死亡猪并观察脑部病变；利用原位PCR检测进行病毒定位；HE染色及甲苯胺蓝染色观察脑组织病理变化；免疫组化染色法检测脑组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）、干扰素-γ（IFN-γ）、NF-κB、基质金属蛋白酶9（MMP-9）、水通道蛋白4（AQP-4）的表达。【结果】 攻毒组9头猪表现出临床神经症状，脑部剖检病变主要为脑膜充血和不同程度的脑实质水肿；ASFV主要位于脑部微血管中；病变早期主要为脑水肿，脑皮质区结构疏松、血管周围间隙增宽、神经元肿胀变圆、染色变淡，中后期除了表现脑水肿的特征外，还可见脑血管充血、多量微血栓形成及淋巴细胞浸润；免疫组化结果显示，攻毒组TNF-α、IL-1β、IFN-γ、NF-κB及MMP-9主要在神经元及胶质细胞中表达，AQP-4的阳性细胞主要是微血管周围的星形胶质细胞，与对照组相比，攻毒组上述6种因子的阳性表达率均极显著增高（P<0.01）。【结论】 急性非洲猪瘟脑损伤的主要表现为脑膜血管充血出血和脑实质水肿、组织学病变显示病毒性脑炎，ASFV感染脑部，促进炎性因子的异常高表达，通过激活NF-κB信号通路对TNF-α、IL-1β、IFN-γ的转录进行调控，使这几种炎性因子的产生和释放增多，扩大炎症反应，影响血脑屏障的通透性，还能上调MMP-9与AQP-4的表达，破坏血脑屏障，促进脑水肿的发生发展。     

非洲猪瘟病毒感染致胃肠道损伤的病理学观察

为了进一步研究非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)对猪胃肠道造成的损伤，试验选用体重为20 kg左右的长白猪18头，随机分为试验组(13头)和空白对照组(5头),试验组肌肉注射ASFV毒株Pig/HLJ/18,5 mL/头(病毒含量为1×10² HAD₅₀/mL),空白对照组注射等剂量的生理盐水。对试验期间死亡的猪全部进行病理学解剖和组织学观察，采集胃、十二指肠、空肠、回肠、肠系膜淋巴结等器官/组织，进行固定、包埋、制作石蜡切片、H.E.染色，对病变器官/组织进行病理学观察和组织学分析，按照各器官/组织的病变程度进行评分，建立病变评分标准。结果表明：ASFV对胃肠道造成的损伤主要以黏膜充血、水肿，以及黏膜下层大量浆细胞、淋巴细胞浸润和坏死为主，肠系膜淋巴结呈多灶性出血性坏死性淋巴结炎；按照各器官/组织病变程度总分值排序，从高到低依次为回肠>空肠>胃>十二指肠>肠系膜淋巴结，回肠病变最严重，肠系膜淋巴结病变相对较轻。说明ASFV感染后，猪胃肠道出现的病理损伤主要表现为浆膜的出血与...     

黄芩苷黄芩素小檗碱对LLC-PK1细胞炎症模型中TNF-α IL-1β及IL-6表达的影响

研究中药黄芩苷、黄芩素、小檗碱对细菌脂多糖(LPS)诱导的猪肾小管上皮细胞(LLC-PK1)中肿瘤坏死因子-α(TNG-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)及白细胞介素-6(IL-6)表达的影响。用噻唑蓝比色法(MTT法)筛选LPS、黄芩苷、黄芩素和小檗碱对细胞作用的最佳浓度,用RT-PCR检测TNF-α、IL-1βmRNA表达,以确定细胞炎症模型是否建立成功;炎症模型建立后,用最佳浓度的黄芩苷、黄芩素和小檗碱分别作用细胞24h,用qPCR检测TNF-α、IL-1β及IL-6mRNA的表达量。结果LPS刺激组细胞TNF-α、IL-1βmRNA表达量极显著高于正常对照组(P0.01),黄芩苷、黄芩素和小檗碱作用组细胞TNF-α、IL-1β及IL-6mRNA表达量比LPS刺激组显著降低(P0.05),与对照组无显著差异(P0.05)。上述结果表明,黄芩苷、黄芩素和小檗碱通过抑制炎症细胞TNF-α、IL-1β及IL-6 mRNA的表达,从而发挥抗炎作用。     

乳头灌注脂多糖对奶牛乳腺组织及机体免疫的影响

旨在通过乳头灌注脂多糖(LPS)体外模拟奶牛急性乳腺炎,研究奶牛乳腺组织及机体免疫活化状态。选用4头泌乳后期的荷斯坦奶牛16个乳区为研究对象,采用交叉试验设计,每期试验2 d,试验间隔10 d,试验组乳头管乳头灌注LPS 0. 1 mg,对照组乳头管灌注等量生理盐水。结果:试验组灌注LPS后,奶牛体温值和乳汁中体细胞数随时间变化而逐渐升高,而奶牛血液中白细胞数随时间变化而逐渐降低;乳腺组织的腺泡腔内充斥大量炎性细胞,部分腺泡组织萎缩甚至崩塌;试验组灌注LPS 12 h后奶牛血清中的髓过氧化物(MPO)活性极显著下降(P<0. 01),而乳腺组织中的MPO活性则极显著上升(P<0. 01);奶牛血清及乳清中炎症因子肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)的蛋白含量明显上升(P<0. 01);乳腺组织中Toll样受体4 (TLR4)、核因子NF-κB (p65)蛋白的表达量相比对照组极显著上升(P<0. 01)。研究表明,LPS能够诱导奶牛发生乳腺炎,使乳腺组织发生损伤,并激活机体的TLR4/NF-κB信号通路进而促进其下游炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的基因的表达,使机体发生免疫应答。     

LPS诱导的仔猪胸腺、淋巴结和空肠中lncRNA-44651和lncRNA-45208 mRNA的表达

为了探究脂多糖(LPS)刺激仔猪发生炎症时炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)、lncRNA-44651和lncRNA-45208在仔猪胸腺、淋巴结和空肠的表达差异,试验选取8头杜×长×大健康断奶仔猪并按照是否注射LPS随机分为对照组和LPS组,各组仔猪在饲喂基础饲粮14 d后,分别按体重100μg/kg腹腔注射生理盐水和LPS,4 h后屠宰仔猪并取胸腺、淋巴结和空肠样品置液氮中保存,采用基因表达测定的方法研究仔猪胸腺、淋巴结和空肠样品相关基因的表达情况。结果表明:LPS刺激4 h后,LPS组仔猪胸腺、淋巴结和空肠中炎性因子TNF-α的mRNA相对表达量均无显著变化(P0.05),IL-1β的mRNA相对表达量均极显著上调(P0.01);LPS组仔猪胸腺中lncRNA-44651的mRNA相对表达量极显著上调(P0.01),lncRNA-45208的mRNA相对表达量显著上调(P0.05);LPS组仔猪淋巴结中lncRNA-44651和lncRNA-45208的mRNA相对表达量均极显著上调(P0.01);LPS组仔猪空肠中lncRNA-44651的mRNA相对表达量极显著上调(P0.01),lncRNA-45208的mRNA相对表达量显著下调(P0.05)。说明lncRNA-44651和lncRNA-45208可能参与了机体的炎症反应,可为后续仔猪机体功能研究提供候选lncRNA。     

白屈菜碱对H2O2诱导的IPEC-J2细胞炎症损伤的预防作用

集约化养殖模式造成猪肠道炎症损伤日趋严重,致使小肠上皮屏障功能受损,影响猪群健康度。为研究白屈菜碱(chelidonine)对猪小肠上皮细胞炎症损伤的保护作用,本试验使用H₂O₂构建猪小肠上皮细胞系(IPEC-J2 cells)炎症损伤模型,采用MTT法筛选适宜的白屈菜碱浓度,采用ELISA法检测炎症因子(IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、TGF-β1)以及NO含量,采用qPCR法和Western blot检测上述炎症因子及iNOS的mRNA和蛋白表达水平。结果发现,在2.5～100.0 mg/L质量浓度范围内,白屈菜碱对IPEC-J2细胞无毒性;2.5、5.0、10.0 mg/L白屈菜碱可显著恢复H₂O₂诱导的IPEC-J2细胞存活率下降(P<0.05)。经H₂O₂造模后,NO含量极显著升高(P<0.01)、IL-10含量显著降低(P<0.05)、其余炎症因子含量显著升高(P<0.05),iNOS及上述炎症因...     

脂多糖刺激对断奶仔猪肌肉炎症和蛋白质降解相关基因表达的影响

本试验旨在研究脂多糖(LPS)刺激后不同时间断奶仔猪肌肉炎症和肌肉蛋白质降解相关基因表达的变化规律。选择42头(7.1±0.9)kg杜×长×大三元杂断奶仔猪,按注射LPS之前(0 h)和注射LPS后1、2、4、8、12、24 h随机分为7个处理,每个处理6头猪。预试14 d后,腹腔注射100μg/kg体重的LPS。按以上时间点将仔猪屠宰,取背最长肌样品待测。结果表明:背最长肌炎性细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6的mRNA表达量在注射LPS 1～2 h后达到峰值;Toll样受体4信号通路关键基因Toll样受体4(TLR4)、骨髓分化因子88(MyD88),核苷酸结合寡聚域信号通路关键基因核苷酸结合寡聚域2(NOD2)、受体互作蛋白激酶2(RIPK2)的mRNA表达量在注射LPS 2～4 h后达到峰值;肌肉蛋白质降解相关基因叉头转录因子-1(FOXO-1)、FOXO-4、肌肉环指蛋白1(MuRF1)、肌萎缩F-box(MAFbx)的mRNA表达量在注射LPS 12 h后达到峰值。可见,LPS刺激诱导肌肉释放大量炎性细胞因子,使TLR4和NOD炎症信号通路关键基因及肌肉蛋白质降解相关基因mRNA显著表达。     

非洲猪瘟病毒感染猪胃肝淋巴结病理组织学变化特征

为探究非洲猪瘟病毒(ASFV)感染猪胃肝淋巴结病理组织学变化特征,并分析不同病毒剂量感染猪的病变差异,通过注射10~3HAD_(50)(HAD_(50):半数红细胞吸附量)和10~4HAD_(50)剂量的ASFV HLJ/18株处理SPF猪后取其胃肝淋巴结,使用HE染色、网状纤维染色、透射电镜等技术观察病理组织学变化,并用统计学软件分析。结果显示:感染ASFV猪胃肝淋巴结正常结构被破坏,被膜下、小梁周围以及皮质区淋巴小结处淤血明显,出血、炎性细胞增多;高剂量感染猪相较低剂量感染猪淋巴结出血更明显,组织正常结构损伤更严重。与正常猪相比,感染猪淋巴结网状纤维变粗,纤维数量显著增加,高剂量感染猪网状纤维数量较低剂量感染猪增多;透射电镜下淋巴结中发现大量ASFV颗粒,主要分布于巨噬细胞和淋巴细胞内,病毒颗粒结构清晰完整,呈典型的正六边形,核呈致密圆形;胃肝淋巴结中巨噬细胞、淋巴细胞的胞核结构被破坏,核皱缩变形,染色质聚集浓缩,线粒体肿胀,甚至出现空泡化;有些细胞发生凋亡。研究结果为进一步阐明ASFV的免疫致病机制和非洲猪瘟(ASF)的防治提供了参考。     

血管紧张素转化酶2(ACE2)在保育猪肠道增生性炎症中的作用

选取49日龄慢性腹泻保育猪为试验对象,测定其血液中葡萄糖(GLU)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)、甘油三酯(TG)等生化指标;制作病理组织切片,观察胃、十二指肠、空肠、回肠、结肠等组织病理变化;检测保育猪十二指肠、回肠组织中ACE2、Mas受体mRNA的表达及AngⅡ、Ang1-7的含量;比较分析十二指肠、回肠组织中炎症相关因子TNF-α、IL-1β、IL-10 mRNA的表达变化。结果显示,腹泻猪血液中GLB、AST含量显著上调(P0.05),GLU、TG和ALP显著下调(P0.05);病理学观察发现,腹泻猪胃组织上皮损伤脱落;十二指肠肠粘膜脱落、肠腺细胞大量增生、肠隐窝增厚;空肠肠绒毛坏死,黏膜上皮细胞坏死脱落,肠腺上皮细胞增生;回肠、结肠肠腺细胞均明显增生;腹泻组与对照组猪相比,十二指肠中RAS系统相关成员ACE2、Mas受体mRNA表达显著下调(P0.05),Ang1-7含量显著下降(P0.05),但AngⅡ的含量显著升高(P0.05),并且其炎症相关因子TNF-α、IL-1βmRNA表达也显著上调(P0.05,P0.01),IL-10无显著变化。结果表明,腹泻猪表现明显增生性炎症,在此情况下,高水平的AngⅡ的促炎作用处于优势,ACE2及其介导的ACE2-Ang1-7-MAS受体轴的抗炎作用处于劣势。     

α-倒捻子素通过抑制TLR4/NF-κB信号通路缓解LPS诱导IEC-6细胞的炎症

旨在证明α-倒捻子素可以缓解脂多糖(LPS)诱导的IEC-6细胞的炎症并揭示其机制。笔者在体外培养的IEC-6细胞中构建LPS诱导的炎症模型,并通过流式细胞术、酶联免疫吸附测定(ELISA)、定量PCR(Q-PCR)、蛋白印迹(Western blot)的方法检测α-倒捻子素对LPS诱导的炎症是否有缓解作用。结果表明,5μmol·L-1的α-倒捻子素预处理可以显著降低LPS诱导的前列腺素E2(PGE2)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在IEC-6细胞中的分泌,以及环氧合酶2(COX-2)、IL-6、TNF-α、IL-1βmRNA的表达(P<0.05)。通过对炎症相关信号通路NF-κB的探究可见,α-倒捻子素能显著抑制Toll样受体4(TLR4)mRNA和NF-κB相关蛋白磷酸化IκBα(pIκBα)和磷酸化p65(pp65)的激活(P<0.05)。综上所述,α-倒捻子素可以通过TLR4/NF-κB信号通路来抑制LPS诱导的IEC-6细胞的炎症,并且可能是治疗炎症疾病的潜在选择。     

植物乳杆菌抑制产肠毒素型大肠杆菌诱发猪肠上皮细胞炎症反应的分子机制

本试验旨在研究植物乳杆菌抑制产肠毒素型大肠杆菌(ETEC)诱发猪肠上皮细胞炎症反应的分子机制。试验利用植物乳杆菌预处理猪肠上皮细胞IPEC-J2 3 h,ETEC刺激细胞1、3、6、12和24 h,收集细胞及其培养上清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-8(IL-8)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量,采用实时荧光定量PCR检测细胞中Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)以及NOD样受体3(NLRP3)和NOD样受体6(NLRP6)的表达,采用Western blot检测细胞中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)[p38和细胞外信号调节激酶(ERK)]和核转录因子-κB(NF-κB)p65的磷酸化水平以及紧密连接蛋白——闭合小环蛋白-1(zonula occludens-1,ZO-1)和闭锁蛋白(occludin)的表达。分别采用p38 MAPK抑制剂、ERK-MAPK抑制剂和NF-κB p65抑制剂处理IPEC-J2细胞1 h,再用植物乳杆菌预处理细胞3 h,最后用ETEC处理细胞24 h,收集细胞和培养上清,采用ELISA法检测IL-1β、IL-8和TNF-α含量以及乳酸脱氢酶(LDH)活性。结果表明:1)与ETEC处理相比,植物乳杆菌预处理能够极显著降低ETEC感染12～24 h细胞产生IL-1β、IL-8和TNF-α的含量(P0.01),显著或极显著提高ETEC感染3～12 h细胞中TLR2、TLR4、NLRP3和NLRP6的mRNA相对表达量(P0.05或P0.01),极显著降低ETEC感染24 h细胞中TLR2和NLRP3的mRNA相对表达量(P0.01),极显著降低ETEC感染3～6 h细胞中p38 MAPK和NF-κB p65的磷酸化水平(P0.01),显著或极显著提高ETEC感染6～24 h细胞中ZO-1和occludin的表达量(P0.05或P0.01)。2)与ETEC处理相比,抑制剂和植物乳杆菌共同作用能够极显著降低ETEC感染细胞产生IL-1β、IL-8、TNF-α的含量和LDH的活性(P0.01),植物乳杆菌单独作用也可以极显著降低ETEC感染细胞产生LDH的活性(P0.01),并且信号通路抑制剂对植物乳杆菌调控部分促炎性细胞因子的产生有协同作用。综上所述,植物乳杆菌可以通过致弱p38 MAPK磷酸化和阻断NF-κB信号通路的活化而降低炎症相关因子的产生,从而表现出提高猪肠上皮细胞完整性的潜力。     

α-乳白蛋白与β-酪蛋白预防炎症的协同作用研究

牛乳中酪蛋白比例高,而母乳中乳清蛋白含量高,α-乳白蛋白、β-酪蛋白作为母乳中主要的乳清蛋白和酪蛋白,以α-乳白蛋白和β-酪蛋白为研究对象,利用脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞炎症反应,探究不同比例的组合蛋白对细胞炎症的预防作用,探索乳清蛋白和酪蛋白的最佳配比,使婴配粉更贴合母乳。结果表明,添加α-乳白蛋白和β-酪蛋白单体能改变炎症因子mRNA和蛋白水平的表达,然而当混合比例为1:0.17时效果最佳,能显著降低白介素6(IL-6)、白介素10(IL-10)、髓样分化基因88(MyD88)、Toll样受体4(TLR4)在mRNA水平的表达,在蛋白水平降低IL-6 1.99倍、白介素1β(IL-1β)3.91倍、肿瘤坏死因子α(TNF-α)2.72倍。通过抑制非TLR4介导炎症信号通路关键蛋白NF-κB p65的磷酸化抑制炎症的发生。本研究明确了α-乳白蛋白和β-酪蛋白预防炎症发生的最佳比例,初步阐明了两者协同抗炎的作用机理,为其在婴幼儿配方奶粉中的精准添加提供理论支持和技术指导。     

猪圆环病毒2型感染引起的坏死性淋巴腺炎的研究

约2%患断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的猪出现了坏死性淋巴腺炎的病症,造成损伤的机理与猪圆环病毒2型(PCV2)引起的细胞凋亡有关。本研究为更深入地了解PCV2在患PMWS猪中由引起的淋巴坏死,通过三组动物进行研究:①患坏死性淋巴腺炎并患PMWS的猪(n=5);②没有患坏死性淋巴腺炎的PMWS病猪(n=5);③没有患PMWS的健康猪(n=5)。研究内容包括对截短的半胱氨酸蛋白酶(Caspase-3)和血管性血友病因子的免疫组织化学分析,对血纤维蛋白的马洛里染色及通过原位杂交检测PCV2的基因组。研究结果显示PMWS病猪的淋巴坏死可能与高内皮微静脉(HEVs)的肥大增生有关。高内皮微静脉(HEVs)发生肥大增生的机理还未被阐明,但是PMWS猪出现的坏死性淋巴腺炎会导致血栓形成损伤血管,继而产生滤泡坏死,细胞凋亡并没有发现与PMWS的淋巴细胞减少症或PMWS相关的坏死性淋巴腺炎有关。     

BALB/c和IFN-γ~(-/-)小鼠感染虎源弓形虫急性期组织损伤和抗原分布

以BALB/c小鼠和IFN-γ~(-/-)小鼠为研究对象,应用病理组织学方法,HE和IHC技术,观察研究TgTigerCHn2(Chinese1,ToxoDB#9)弓形虫感染后急性期死亡小鼠主要器官的组织细胞损伤和虫体分布特点。病理和组织学检查显示,10~6个TgTigerCHn2速殖子腹腔感染的BALB/c和IFN-γ~(-/-)小鼠平均生存时间分别约为9.8 DPI(days post infection)和7.7 DPI (P0.05)。BALB/c小鼠病理表现为脾脏和淋巴结淋巴细胞坏死,弓形虫虫体抗原弥散性分布;间质性肺炎;肝细胞空泡变性及坏死,淋巴细胞弥散性浸润;大脑可见严重的脑膜炎和血管袖套现象。IFN-γ~(-/-)小鼠主要表现为肝脏有坏死灶,脾脏和淋巴结实质细胞的坏死和减少。IHC显示,BALB/c小鼠大脑的虫体抗原显著多于IFN-γ~(-/-)小鼠(P0.01)。结果表明,TgTigerCHn2感染BALB/c小鼠后,虫体主要分布在大脑、肝脏、脾脏、淋巴结和肺脏,而IFN-γ~(-/-)小鼠各器官表现为炎症反应较轻的坏死性病变。     

TUNEL法检测PCV2感染仔猪的淋巴细胞凋亡

利用一种常规的细胞凋亡检测方法 TUNEL法检测感染PCV2(猪圆环病毒2型)的仔猪淋巴结淋巴细胞的凋亡变化情况,并从组织病理学的角度验证PCV2是否能引发仔猪淋巴结淋巴细胞凋亡。通过HE染色镜下可见仔猪皮质区淋巴结皮质部淋巴小结内坏死的淋巴细胞染色变深,胞核固缩,出现坏死,导致淋巴细胞稀疏,出现细小的细胞缺失区,有的还出现严重的淋巴细胞浸润或弥散性出血,严重者成团的淋巴细胞细胞质溶解以及核碎裂出现溶解坏死,多数淋巴细胞缺失区相连形成空洞,生发中心消失;通过TUNEL法检测可见淋巴小结内出现多量的细胞胞核固缩、凋亡,常堆集在一起呈多量散在分布,细胞凋亡后,在淋巴小结中可以明显地看到细胞凋亡形成的碎片,造成细胞密度疏松,严重者可见大量的细胞碎片,消失形成空洞。阴性对照组仔猪淋巴组织结构比例较正常,细胞形态清晰。通过HE染色和TUNEL法对比观察发现细胞的坏死和凋亡有重叠现象,从病理学的角度非常直观地证明了PCV2能够引起仔猪免疫系统淋巴细胞的凋亡,为阐明PCV2诱导猪的淋巴细胞发生凋亡这一现象奠定基础,并为探讨PCV2导致猪PMWS的致病机制提供基础资料。     

黄芪多糖对猪瘟疫苗体液免疫和细胞免疫的影响

为查明黄芪多糖对猪瘟疫苗体液免疫IgG抗体与猪白细胞介素-4(IL-4)、猪干扰素-γ(IFN-γ)、猪肿瘤坏死因子α(TNF-α)三种细胞免疫因子的影响,选用黄芪多糖注射液直接稀释高效猪瘟活疫苗(细胞源)的方法进行了免疫试验。证实了黄芪多糖直接稀释猪瘟活疫苗不但可以提高猪瘟疫苗IgG抗体水平,还可以提高猪干扰素-γ(IFN-γ)、猪肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度,降低猪白细胞介素-4(IL-4)浓度,证明在使用猪瘟疫苗免疫防控中添加黄芪多糖可增强猪群免疫力,为控制猪瘟流行提供了依据。     

N-乙酰-半胱氨酸对炎症反应中BV-2细胞的保护作用

为了明确N-乙酰-半胱氨酸(NAC)在LPS诱导的BV-2细胞炎症反应中的保护作用,本研究利用流式细胞术检测细胞活性氧(ROS)、超氧阴离子自由基(O_2~(·-))和线粒体超氧化物(MitoSOX)水平;ELISA和实时荧光定量PCR法检测IL-1β、IL-6和TNF-α表达;脂质氧化产物丙二醛(MDA)试剂盒检测细胞MDA含量;流式细胞术检测细胞凋亡水平。通过对细胞氧化应激、促炎因子表达、脂质损伤和细胞凋亡的检测,探讨NAC对BV-2细胞炎症反应的保护作用。结果显示,LPS可以使BV-2细胞总ROS、O_2~(·-)和MitoSOX的表达显著上升,加入NAC后ROS、O_2~(·-)和MitoSOX的水平又显著下降。LPS可使BV-2细胞IL-1β、IL-6和TNF-α的表达量显著升高,加入NAC后IL-1β、IL-6和TNF-α的表达量显著下降(P0.05)。LPS处理4 h后细胞MDA含量显著增加(P0.05),细胞凋亡水平升高,而加入NAC后MDA含量及细胞凋亡水平显著下降。结果表明,NAC可以抑制LPS引起的BV-2细胞氧化应激,使促炎因子表达减少,同时使BV-2细胞脂质损伤减弱和细胞凋亡水平下降,NAC可对细胞炎症反应中BV-2细胞起到很好的保护作用。     

α-硫辛酸对热应激绵羊生长性能、抗氧化及免疫的影响

本试验旨在研究α-硫辛酸(α-LA)对热应激绵羊生长性能、抗氧化及免疫的影响,以期阐述其抗热应激的机理。选择4～5月龄、体重35～40 kg的绵羊15只,随机分为对照组(CTL)、低剂量组(LA-L,添加600 mg/kgα-LA)、高剂量组(LA-H,添加900 mg/kgα-LA),在热应激条件下(7～8月)饲喂40 d。结果表明:1)与对照组相比,α-LA添加组平均日采食量增加,低剂量组和高剂量组分别比对照组增加了7. 3%和2. 7%(P> 0. 05);高剂量组血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、门冬氨酸转氨酶(AST)活性及α-LA添加组血浆中丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-8(IL-8)含量显著下降(P<0.05);α-LA添加组血浆中三碘甲腺原氨酸(T3)、热休克蛋白70(HSP70)、免疫球蛋白G(IgG)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性显著升高(P <0.05)。2)与对照组相比,α-LA添加组肝脏中炎性相关因子IL-1β、IL-8、核因子-κB(NF-κB) mRNA表达量显著下降(P <0.05),抗炎因子干扰素-γ(IFN-γ)mRNA表达量显著升高(P<0.05)。综上,α-LA显著增强热应激绵羊的抗氧化能力,减少炎症相关因子的表达,增强抗炎因子的表达,提高机体免疫机能,且与α-LA剂量有关。     

副猪嗜血杆菌血清5型岳阳株对昆明小鼠淋巴器官损伤的研究

为探讨副猪嗜血杆菌(HPS)对免疫器官的损伤,本实验将HPS血清5型岳阳株及其茵体裂解物分别接种昆明小鼠,结果显示:HPS血清5型岳阳株及其菌体裂解物,均能够引起昆明小鼠颈淋巴结细胞凋亡和坏死.组织病理学检测可见脾脏红髓扩张、白髓萎缩、淋巴细胞衰减;胸腺病变较轻,皮质部局灶性淋巴细胞坏死和散在性细胞凋亡.此外,免疫器官损伤与剂量相关,随菌量的增大病变更为明显.HPS血清5型岳阳株及其菌体裂解物对昆明小鼠淋巴器官有明显的损伤作用.