洋葱内表皮原生质体分离和纯化研究

通过酶解法降解洋葱细胞壁释放出原生质体,利用离心从粗提取液中纯化出原生质体,并通过血球计数板计数来比较制备洋葱内表皮原生质体的效果.结果表明:酶解时间、pH值、渗透压稳定剂(甘露醇)及酶的种类是影响原生质体制备的重要因素.酶解时间2 h,pH值5.0～6.0之间,甘露醇0.5～0.7 mol/L,纤维素酶含量1.5%、果胶酶含量0.1%和0.1%牛血清蛋白组合时原生质体的分离效果最佳.     

苹果原生质体培养再生愈伤组织

以苹果试管苗叶片为原生质体分离材料,对影响原生质体分离和培养的因素进行了研究.结果表明适合叶片酶解的酶液组成是Cellulase-Onzuka R-10 0.8%+Pectinase 0.5%+PVP 1%+甘露醇0.65 mol/L+MES0.1%;以改良MT+BA 1.0 mg/L+2,4-D 0.2 mg/L+甘露醇0.65 mol/L+Vc 5.0 mg/L+Glu 500 mg/L+CH 100 mg/L+ME 500 mg/L+Arg 50 mg/L为培养基对原生质体进行培养,固液双层培养效果较好,最适培养密度为1×105个/ml,培养1～2天原生质体变形,3～4天第一次分裂,2周分裂3～5次.平邑甜茶原生质体一个月后形成微细胞团,两个半月形成肉眼可见的微愈伤组织.鲁加5号和M7均只形成7～10个细胞的细胞团,嘎拉未见细胞分裂.     

烟草原生质体分离纯化条件的优化

为提高烟草原生质体的产量和活力,对影响烟草原生质体分离纯化的酶解液组合、酶解时间、酶解渗透压、离心转速、基因型等因素进行了优化。结果表明:以1%纤维素酶+0.5%果胶酶+0.6mol/L甘露醇+0.1%MES的酶解液组合经6h酶解,700r/min离心5min得到的原生质体产量和活力相对较高;生理状态相近的不同烟草材料在产生原生质体的能力上存在一定差异。     

毛葡萄原生质体分离与纯化研究

以毛萄萄愈伤组织、悬浮培养细胞,无菌苗幼叶为材料,研究了毛葡萄原生质体的分离纯化方法及影响因素.结果表明,毛葡萄原生质体分离材料以悬浮细胞和愈伤组织最好.毛葡萄愈伤组织在0.5 mol/L甘露醇中预处理90 min,CPW+13%甘露醇+2%纤维素酶+0.25%果胶酶+0.5%离析酶的酶液中酶解10 h,其原生质体产量最高可达6.24×106个/g,活力为86.83%.     

花椒原生质体分离与培养研究

以花椒试管苗叶片、愈伤组织和悬浮细胞为试验材料,通过单因素试验研究酶液浓度、渗透压调节剂浓度对花椒原生质体分离的影响,并以花椒试管苗叶片分离出的原生质体为试验材料,研究培养基种类、培养密度、不同激素配比对花椒原生质体培养的影响。结果表明,酶液浓度、渗透压调节剂浓度对花椒原生质体分离有显著影响。在适宜条件下,用甘露醇作花椒原生质体分离的渗透压调节剂,浓度在0.6~0.7 mol·L^-1时分离效果最佳。以花椒叶片为原生质体分离材料的最佳酶液组成为CPW-0.7 mol·L^-1甘露醇+1.0%(w/v)纤维素酶R-10+1.5%(w/v)果胶酶,酶解时间为10 h,纯化后的原生质体产量和活力分别可达82.36×10⁵ 个·g^-1和72.74%。以愈伤组织和悬浮细胞为分离材料的最佳酶液组成均为CPW-0.6 mol·L^-1甘露醇+2.0%(w/v)纤维素酶R-10+0.5%(w/v)果胶酶,酶解12~14 h,纯化后的原生质体产量及活力分别为31.26×10⁵ 个·g^-1、59.15%和53.87×10⁵ 个·g^-1、63.92%。以花椒试管苗叶片为原生质体分离材料,分离纯化后的花椒原生质体在无激素的WPM培养基中,培养密度为1×10⁵个·mL^-1,培养第3天原生质体第1次分裂,2周分裂3~5次,原生质体28 d后形成微细胞团,培养60 d后可形成2 mm左右的愈伤组织。     

枣树原生质体分离条件的研究

枣树原生质体分离研究是其原生质体培养与融合、外源遗传物质转化等研究的基础工作。用胚性悬浮培养细胞、细粒状胚性愈伤组织、未细切愈伤组织和已细切愈伤组织等４种材料进行原生质体分离。结果表明,枣树胚性悬浮培养细胞是最佳起邕材料,用浓度为１０ｇ／Ｌ纤维素酶＋１ｇ／Ｌ离析酶＋ＣＰＷ盐（１３２０ｍｇ／Ｌ ＣａＣｌ２·２Ｈ２Ｏ和１００ｍｇ／Ｌ ＫＨ２ＰＯ４·Ｈ２Ｏ组成的混合液）＋０．７ｍｏｌ／Ｌ甘露醇组成的混合     

‘白天堂’百合原生质体的分离纯化与培养

【目的】探究百合原生质体分离纯化和培养条件,为百合原生质体融合、再生体系建立、转基因育种等研究奠定基础。【方法】以‘白天堂’百合无菌苗叶片为材料,采用纤维素酶、果胶酶和离析酶组合分离原生质体,采取单因素试验法,对影响原生质体的制备及再生条件的主要因素即渗透压、酶解组合、细胞筛和酶解时间进行筛选与优化。【结果】以百合无菌苗叶片在1.0%纤维素酶+0.5%离析酶+0.1%果胶酶+0.6 mol/L甘露醇+10.0 mmol/L CaCl₂·2H₂O+20.0 mmol/L MES+20.0 mmol/L KCl混合酶解液为最优条件,25℃,25 r/min, pH为5.6黑暗酶解6 h;孔径75μm细胞筛过滤,600 r/min离心5 min收集细胞,原生质体产量可达6.4×10⁵个/mL,原生质体活力为78.0%;将纯化后密度为1×10⁵个/mL的原生质体溶液接种在葡萄糖作为唯一碳源的培养基中可以存活,并生长产生细胞壁,但没有启动细胞分裂和诱导形成愈伤组织。【结论】初步建立‘白天堂’百合的高效原生质体...     

黑果腺肋花楸原生质体分离研究

为建立有效的原生质体分离体系,研究了黑果腺肋花楸(Aronia melanocarpa)原生质体酶解分离纯化条件。结果表明:黑果腺肋花楸愈伤组织在20g/L纤维素酶+0.5g/L果胶酶+13%甘露醇+5mmol/LMES酶解液中黑暗静置酶解10h,可获得高产量高活力的原生质体;采用500r/min离心8min分离纯化效果最好;愈伤组织比组培苗叶片分离获得的原生质体产量与活力更高。     

蜗牛酶高效制备白色念珠菌原生质体的研究

为了寻求以蜗牛酶经济高效的白色念珠菌原生质体的制备方法,以白色念珠菌为材料,研究了菌龄、预处理剂、酶浓度、作用时间、高渗稳定剂等因素对原生质体制备率和再生率的影响。结果表明,以蜗牛酶制备白色念珠菌原生质体的最佳菌龄是培养10～14 h的菌体,最佳预处理剂配方为50 mmol/L Tris(pH8.0)、50 mmol/L EDTA和5%巯基乙醇,1%蜗牛酶在37℃酶解1 h原生质体制备率可达90%以上,此原生质体采用夹层平板培养法在0.7 mol/L NaCl高渗培养基中培养,再生率最高可达95%。本研究表明单独用蜗牛酶高效制备高质量的白色念珠菌原生质是可行的。     

不同温度下TMV侵染枯斑三生烟的LncRNA差异表达

【目的】筛选不同温度下烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)侵染后枯斑三生烟(Nicotiana tabacum var. Samsun NN)差异表达的长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA),研究lncRNA在枯斑三生烟抗性反应中的作用。【方法】N基因的温度敏感性使枯斑三生烟在25℃时具备对TMV的抗性、在31℃抗性丧失,在这两个温度条件下对枯斑三生烟接种TMV和磷酸盐缓冲盐水(phosphate buffered saline,PBS),48 h后提取系统叶总RNA,构建链特异性文库后进行深度测序。对测序结果进行过滤后利用HTSeq将有效数据与近缘品种TN90(N. tabacum var. TN90)基因组比对,筛选得到lncRNA后利用FPKM法估计lncRNA的表达水平。通过edgeR筛选差异表达lncRNA(differentially expressed lncRNA,DElncRNA),并利用qRT-PCR技术对这一结果进行验证。通过共定位及共表达分析预测DElncRNA的靶基因,通过参考基因组注释、GO和KE...     

芦荟原生质体的分离

[目的]为进一步的离体培养快速繁殖奠定基础,同时也为原生质体的融合(体细胞杂交)提供条件。[方法]采用酶解的方法以芦荟的叶片为材料进行原生质体分离。[结果]用芦荟的叶肉细胞可成功分离出原生质体,而且活力较高,可达90%以上。[结论]芦荟原生质体的成功分离主要取决于材料的来源、酶液的组成。另外还受酶解液的渗透压、温度和pH值影响。     

云烟116高产配套栽培技术的筛选

为筛选出烤烟新品种云烟116(Nicotiana tabacum L.cv.Yunyan 116)的高产配套栽培技术,采用L_(27)(3~(13))正交试验设计,比较施氮量、株距、留叶数、打顶时期各因素及其交互作用等对产量、产值的影响。结果表明,试验田土壤养分状况变异程度较小,且符合正态分布,满足统计学需求;留叶数对云烟116的农艺性状影响最大,其中与株高的关联系数达0.822 6。方差分析表明,株距和施氮量×打顶时期对产量的影响达显著水平,株距对产值的影响达显著水平,该品种配套栽培技术的最大产量组合为株距0.60 m、初花打顶,产值最高的处理为株距0.60 m,2个模型分别能解释47.8%和37.9%的因变量变化情况。     

烤烟新品种湘烟2号的选育及其特征特性

湘烟2号(原HC9511)系选用中烟90为母本、云烟315为父本,通过杂交获得的烤烟杂交新组合,2009年6月通过全国烟草品种审定委员会审定.湘烟2号株型筒型,叶形椭圆形,叶脉较细到中等,茎叶角度适中,田间生长势强,前期早生快发,性状稳定,分层落黄明显,耐成熟,易烘烤.并且抗黑胫病,中抗青枯病,中感赤星病、普通花叶病毒病、黄瓜花叶病毒病、马铃薯Y病毒病、根结线虫病,适合我国东南烟区种植.湘烟2号抗病性、外观质量、化学成分与对照品种K326相当,经济性状和感官质量优于K326.     

芦荟原生质体融合的研究

以芦荟叶片为试材,采用酶解方法进行原生质体分离,并在此基础上对斑纹芦荟和不夜城芦荟进行原生质体融合。结果表明,以芦荟的叶肉细胞为试材,可成功分离出原生质体,而且活力较高,达90%以上。聚乙二醇（PEG）融合的结果可获得部分融合体。芦荟原生质体的成功分离主要取决于材料的来源、酶液的组成,另外还受酶解液的渗透压、温度和pH值等影响。融合的效率主要受融合剂的浓度、原生质体的生理状态及处理的时间等影响。     

广元烟草壮苗培育措施研究

[目的]探讨广元市烟叶(Nicotiana tabacum L.)壮苗培育措施。[方法]在育苗初期采用集中催芽、浅放池水、水体加热、苗床底部增温、补充光照的方式进行育苗。[结果]集中催芽出苗的时间最短为18 d,相对于对照提前出苗15 d左右;补充光照处理的烟株最高,平均达到10.2 cm,比对照要高出2.8 cm,在根长度方面补充光照茎径为3.49 mm,明显优于对照。[结论]采用前期集中催芽,出苗后进入大棚进行补充光照,这样生长出来的烟苗能满足壮苗的要求。     

烟草漂浮育苗不同光环境下炼苗效果比较

[目的]研究不同光环境条件下炼苗后烟草(Nicotiana tabacum L.)幼苗植物学性状和生理指标,比较不同光环境条件下漂浮育苗的炼苗效果。[方法]供试烤烟品种为云烟85。烟苗生长60 d后炼苗10 d。设4个炼苗处理,处理1:B棚(光强约为自然光的75%)育成的苗在自然光下炼苗,处理2:B棚育成的苗到A棚(A棚光强约为自然光的50%)里炼苗,处理3:A棚育成的苗到自然光下炼苗,处理4:A棚育成的苗在A棚(50%自然光)里炼苗。[结果]在自然光下炼苗后的烟苗鲜重和茎叶重比都比在较低光强条件下炼苗的烟苗小,但干鲜比、根冠比和根重比是自然光下炼苗的成苗较高;在自然光环境下炼苗后的烟苗叶片转换酶活性高于较弱光环境下炼苗的烟苗,烟苗叶片叶绿素a、叶绿素b、叶绿素总量、类胡萝卜素含量和根系活力以自然光环境条件下炼苗的烟苗较高。弱光环境条件下炼苗效果差。[结论]该研究可为烟草培育壮苗育苗提供理论指导。     

药用植物青天葵叶片原生质体的制备与纯化

[目的]研究青天葵原生质体的制备与纯化方法。[方法]以青天葵新鲜叶片为试验材料,以青天葵叶片原生质体产量及原生质体存活率为考察指标,研究了预处理、酶解方式、酶解温度、离心转速、光照、筛网目数等因素对青天葵原生质体分离纯化效果的影响。[结果]适宜青天葵叶片原生质体游离的条件是用浓度13%甘露醇溶液预处理叶片1 h、酶解温度（25±1）℃、黑暗、静置;原生质体纯化采用离心沉淀法,以200目筛网过滤后离心8 min（800 r/min）,操作2次,可得到大量完整清晰、细胞碎片少的原生质体。[结论]该方法获得了制备青天葵原生质体的理想条件与参数,为建立青天葵原生质体再生体系提供了依据。     

中微肥对烟叶组织结构影响初报

 报道了镁、锰、硼、锌以及复合元素对烟叶解剖结构的影响.结果表明:镁、锰、硼能改善烟叶内部结构,提高烟叶品质,但是锌只能提高烟叶的外观品质.     

烟草未授粉子房单倍体诱导及影响因素的研究

研究结果表明,诱导出的烟草单倍体植株起源于大孢子或卵细胞,并以胚状体的方式出苗;不同基因型的烟草品种产生胚状体的能力有很大差异;当蔗糖的质量浓度为２０,４０ｇ·Ｌ－１时,胚状体诱导率较高;活性炭能促进胚状体的生长;椰胚乳只能促进子房本身的膨大;当光照强度为３０μｍｏｌ·ｍ－２·ｓ－１时能促进胚状体的形成