从长期继代培养的胡萝卜愈伤组织原生质体获得再生小植株

从继代3年以上的胡萝卜(Daucus carota var.sativa Dc.)非胚性愈伤组织酶解分离出大量成活的原生质体,在 DPD、V—KM 和 C81V 培养基中液体浅层培养,获得微愈伤组织后,在固体 N_6和 MS 培养基上分化培养,获得再生小植株。证明长期继代培养的胡萝卜愈伤组织仍具有再生植株的能力。     

草木樨状黄芪A4转化系原生质体培养研究

建立了草木樨状黄芪A4转化系原生质体再生植株的实验体系.以草木樨状黄芪发根农杆菌A4转化系再生植物幼叶为材料,通过酶解法,游离出大量有活力的原生质体,原生质体经培养持续分裂形成了愈伤组织,并分化出再生苗.比较了不同酶解时间、培养密度和培养基对原生质体分裂和再生植株的影响.结果表明,原生质体植板密度为3×105个/mL,采用液体浅层培养,在附加了2.0mg/L 2,4-D、0.5mg/L 6-BA、0.3mol/L甘露醇和2%蔗糖的DPD培养基中,可获得最高分裂频率,达32.4%.原生质体持续分裂形成愈伤组织可高频[(91.75±3.1)%]分化出再生苗.甘露碱纸电泳和PCR分析表明,外源基因T-DNA在原生质体来源的再生植株中仍然存在.     

丝瓜原生质体培养再生愈伤组织

以丝瓜(Luf fa cylindrica)绿色子叶为材料,经酶解分离出大量生活的原生质体。用浅层液体静止培养方法,经1个月时间在修改的 MS 培养基上获得原生质体来源的愈伤组织。     

美味猕猴桃原生质体培养及植株再生技术研究

以美味猕猴桃雄株茎段愈伤组织为材料,分离原生质体,并培养在ＫＭ８Ｐ附加０．４５ｍｏｌ／Ｌ葡萄糖和０．０５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖的培养基上,用低熔点琼脂糖包埋,６￣７ｄ发生第一次细胞分裂,培养２０ｄ的分裂率为１１．３％,在未添加新鲜培养液的情况下,原生质体再生的细胞可持续分裂至８０ｄ左右,并形成２￣３ｍｍ大小的愈伤组织,然后采用二步诱导分化法将原生质体来源的愈伤组织诱导分化出绿苗,再诱导生根,形成完整的小植     

一种简化有效的普通烟草原生质体培养方法

用不同方法进行普通烟草叶肉细胞原生质体培养,在低温（１０℃）预处理原生质体分离材料后,加厚双层培养基中的固相至固液相体积比为４：１～５：１时,有利于愈伤组织的快速形成和植株再生。     

新疆长绒棉胚性悬浮细胞原生质体的培养及再生

在进行新疆长绒棉胚性细胞原生质体培养期间，比较酶液中不同甘露醇浓度，悬浮细胞不同继代时间及不同培养方法，不同包埋培养基，不同滴加液对原生质体培养的影响。发现琼脂糖珠包埋培养最适宜其培养，获得了原生质体的再生，植板率为２９．８４％（以第八天计），进一步培养，获得再生愈伤组织，愈伤是胚性愈伤。     

枇杷原生质体培养形成愈伤组织

把茂木、尾早生、解放钟、长红等枇杷品种的心脏形至完全成熟的胚,离体培养于分别附加一定浓度植物生长调节剂的B_5,MS和改良MS(大量元素减半,简称mMS)的培养基中,诱导产生胚性愈伤组织.这种愈伤组织在添加低浓度的2,4-D的mMS培养基上产生体细胞胚.以初代和继代培养若干代的愈伤组织作为分离原生质体的材料来源.酶解液的主要成分为纤维素酶、离析酶和崩溃酶,附加0.6 mol/L的山梨醇作为渗透压稳定剂,原生质体的最高得率为1.65±0.6×10~7/g.原生质体经液体浅层培养或半固体培养4—5d后,观察到第1次细胞分裂,2周后形成小细胞团.培养2个月后,获得了愈伤组织.     

云南水稻品种原生质体培养研究

采用KPR和R2培养基进行水稻原生质体培养，日本晴、楚粳8号、云粳9号、大白谷和元江普通野生稻先后获得了原生质体培养的成功，除日本晴外，其余品种均为首次报道，品种间绿苗再生率有显著差异。日本晴最高，大白谷最低，同一品种不同的俞伤组织间，分化率有很大差异。有的愈伤组织极易分化出绿苗，有的不能再生出绿苗，说明分化前的预培养非常重要。N6分化培养基的再生绿苗率极显著地高于MS。配方为N6 葡萄糖20g/L 蔗糖30g/L IAA0.2mg/L 6-BA0.5mg/L Agarose-110g?L的培养基。分化率最高，按初次接种的愈伤组织块计，每块平均再生绿苗1.4苗,酶解原生质体量的多少,与愈伤组织在N6 1mg/L2,4-D的液体培养基中悬浮培养时间的长短有关,悬浮时间较长则易于获得较多的原生质体.日本晴的再生植株中,有两株多移栽到抽穗仅45d,有可能是极早良的变异株,有些植株的粒型和稃毛也有明显变异对鉴定和利用变异的植株具有现实意义.     

包心菜无菌苗子叶及叶片原生质体高频分裂和高频植株再生

以包心菜子叶和叶片原生质体为材料，经不同液体培养基（Ｂｐ１，Ｂｐ２，Ｂ１）浅层培养，再生细胞高频分裂并形成愈伤组织，愈伤组织经扩增后转移至分化培养基上诱导植株分化，从这两种原生质体获得了再生植株。在原生持培养过程中，原生质体及细胞团的褐化程度与培养基中的有要分的多少有关。原生质体的分化频率与培养基中植物激素种类关系基大。在植株分化时，谷氨酰胺和腺嘌呤对植株分化有很促进作用。另外，原生质体的来源...     

软枣猕猴桃原生质体培养与细胞团再生的初步研究

以软猕猴桃叶片、叶片愈伤组织为材料，研究了影响原生质体分离和培养的因素。结果表明，原生质体分离，酶液配方2优于配方1，成龄叶片优于幼龄叶片；培养方法以浅层培养法最好；改良MS液体培养基培养愈伤组织原生质体，5-7d出现第一次细胞分裂，14d出现第2次细胞分裂，30d形成多细胞团，55d形成肉眼可见的小愈伤组织。     

影响植物原生质体分裂的生理生化因素

以烟草试管苗幼叶,美味猕猴桃、毛花猕猴桃子叶愈伤组织和玉米幼叶为材料,进行了原生质体培养和一些生理生化指标的测定,结果表明,美味猕猴桃及毛花猕猴桃子叶愈伤组织原生质体在培养２０ｄ后,原生质体再生细胞分裂率为１７．８％和２０．５％,前者可继续分裂形成小细胞团,而后者仅分裂１～２次。对照材料烟草叶肉原生质体培养２周后,再生细胞分裂率高达７０．１％。玉米幼叶原生质体极难分裂。烟草叶中ＰＯＸ、ＳＯＤ活性以及可溶性蛋白质和氨基酸含量均高于其它３种材料。因此较低水平的ＰＯＸ、ＳＯＤ活性以及可溶性蛋白质和氨基酸含量是两种猕猴桃子叶愈伤组织原生质体分裂率低和玉米幼叶难以培养成功的影响因子。     

大豆原生质体愈伤组织的体细胞胚胎发生(英文)

在改良MS培养基上从5个大豆品种成熟种子来源的幼苗未展开叶片上诱导出愈伤组织,利用2个月月龄的这些愈伤组织在摇床上建立了细胞悬浮培养系,细胞悬浮培养系每1至2周转培1次,并用于原生质体分离,转培后3到5天的细胞经酶解后原生质体的产量最高,纯化后的原生质体用3种方法进行培养,即液体培养法、琼脂包埋法和琼脂底层法,在琼脂底层法中,培养皿底层先浇上无甘露醇的琼脂培养基,而原生质体则悬浮在2到4毫升含0.45 mol甘露醇的培养基中,3种方法以琼脂底层法最佳,原生质体在培养后2到3天内能见到第1次细胞分裂,在适当的条件下1周内高达80％的原生质体发生分裂,置板频率一般在40％到60％之间,5个供试品种中4个的原生质体愈伤组织在固体和液体培养中出现体细胞胚胎发生,在液体培养条件下得到了大量子叶和胚根发育良好的体细胞胚,但由于这些胚未进一步萌发,故未能得到完整的再生植株。     

西洋参叶肉原生质体的游离与培养

[目的]为了探讨西洋参叶肉原生质体游离和培养的最佳条件。[方法]以5年生西洋参为材料,研究了纤维素酶的种类,酶的浓度和渗透压对西洋参叶肉原生质体游离的影响,并探讨了西洋参叶肉原生质体在KM8P、MS基本培养基中的分裂情况。[结果]在混合酶液其他组分相同的情况下,日本产R-10纤维素酶的游离效果最好。酶浓度为4%时,3 h后大部分叶片都被解离成原生质体。幼嫩叶片的原生质体产量最高,为4.8×105个/g。KM8P培养基适合于西洋参叶肉原生质体的培养,较高的2,4-D浓度可以促进分裂。[结论]用混合酶系统处理,能够获得大量(4.8×105个/g)有活性的原生质体。游离原生质体的酶浓度以1%～2%为宜。KM8P+2,4-D(2.0 mg/L)+6-BA(2.0 mg/L)+KT(0.7 mg/L)培养基适宜培养西洋参叶肉原生质体。     

橡胶树热研8—79原生质体培养再生植株

【目的】优化橡胶树热研8-79原生质体分离和培养条件,建立橡胶树原生质体培养植株高效再生体系,为橡胶树体细胞杂交育种奠定基础。【方法】以橡胶树热研8-79花药愈伤组织建立的胚性细胞悬浮系为试验材料,设计不同酶组合、酶解时间和悬浮细胞继代时间进行原生质体分离,采用不同培养基、看护细胞浓度和接种密度进行原生质体培养,对原生质体分裂发育的小愈伤组织进行体细胞胚诱导及植株再生培养,统计原生质体的产量、分裂频率、体胚数及体胚萌发率。【结果】酶组合为纤维素酶1.50%＋果胶酶0.15%＋离析酶0.50%、酶解时间为12 h时,继代培养第5 d的胚性悬浮细胞达最高产量（3.6 ×107个/mL PCV）;用酶解细胞和看护细胞继代培养基分别作为原生质体液体培养基和看护培养基,比使用KPR培养基更有利于原生质体的分裂,当看护细胞浓度为5%、接种密度为5 ×105个/mL时原生质体的分裂频率最高,达54%。原生质体持续分裂形成肉眼可见的小愈伤组织增殖后经体胚发生途径发育成完整的小植株。【结论】通过优化橡胶树热研8-79胚性悬浮细胞原生质体分离的酶组合、酶解时间、继代培养时间及看护培养过程中培养基组成、看护细胞浓度和接种密度等影响因素,可以建立橡胶树原生质体培养植株高效再生体系。     

苹果原生质体培养再生愈伤组织

以苹果试管苗叶片为原生质体分离材料,对影响原生质体分离和培养的因素进行了研究.结果表明适合叶片酶解的酶液组成是Cellulase-Onzuka R-10 0.8%+Pectinase 0.5%+PVP 1%+甘露醇0.65 mol/L+MES0.1%;以改良MT+BA 1.0 mg/L+2,4-D 0.2 mg/L+甘露醇0.65 mol/L+Vc 5.0 mg/L+Glu 500 mg/L+CH 100 mg/L+ME 500 mg/L+Arg 50 mg/L为培养基对原生质体进行培养,固液双层培养效果较好,最适培养密度为1×105个/ml,培养1～2天原生质体变形,3～4天第一次分裂,2周分裂3～5次.平邑甜茶原生质体一个月后形成微细胞团,两个半月形成肉眼可见的微愈伤组织.鲁加5号和M7均只形成7～10个细胞的细胞团,嘎拉未见细胞分裂.     

马铃薯原生质体培养体系改良

试验以马铃薯试管苗叶片为原生质体来源，通过研究材料预处理方法对原生质体产量和质量的影响，培养方式及培养基中糖醇与细胞分裂的愈伤组织形成的关系，优化并建立了高效稳定的原生质体培养体系，获得了2个双单倍体系的叶肉原生质体再生植株。     

类番茄茄茎段原生质体再生成株的研究

利用类番茄茄 (SolamumlycopersicoidesDun .)无菌苗幼嫩茎段酶解获得大量原生质体 (个 ) (2× 10 6/g) ,将原生质体密度稀释至 1× 10 5/mL于HMA培养基中培养 ,则 10d左右出现小细胞团 ,38～ 40d形成肉眼可见的小愈伤组织 (1～ 1.5mm) ,转移至MC增殖培养基 2周后 ,再转移到 15 #分化培养基诱导出芽 ,切取芽体转入5 0P培养基诱发根原基 ,再转入 5 0 #发根培养基形成发达根系 ,成为再生植株 ,整个再生周期 80～ 90d ,再生植株移植至土壤中均能正常生长、开花     

紫菜种内原生质体的融合和融合体再生

利用酶解法分离出野生型叶状体和红色突变体的坛紫菜原生质体以及条斑紫菜野生型叶状体的原生质体，再用聚乙二醇（PEG）法进行种内原生质体融合，当加入原生质体液内的PEG被稀释除去百，原生质体发生融合并形成许多杂合体，种内原生质体融合率坛紫菜为9.7%-12.4%，条斑紫菜为10%-11.5%。PEG分子量在1540-6000之间，随着分子量的提高，原生质体融合率增高，原生质体融合体被挑出来进行单个培养，经过30天培养坛紫菜的一个杂合体（含一个红色原生质体和一个进驻生型原生质体）再生成一个呈红色和野生色的相嵌叶状体，鸸 个含两个红色原生质体的融合体再生成一个在基部和头部均长假根的叶状体，但来自这个再生体的原生质体只长成具有一个假根的叶状体，从原生质体融保体的再生体以及它们无性繁殖体的结果来看，坛紫菜的种内原生质体融合体可能只发生了细胞质融合，而真正的核融合并没有发生，培养15-20天，条斑紫菜的原生质体融合体先再生成细胞团，然后由细胞团释放出许胞子并萌发成正常野生型叶状体。     

紫菜种内原生质体的融合和融合体再生

利用酶解法分离出野生型叶状体和红色突变体的坛紫菜原生质体以及条斑紫菜野生型叶状体的原生质体，再用聚乙二醇（PEG）法进行种内原生质体融合，当加入原生质体液内的PEG被稀释除去百，原生质体发生融合并形成许多杂合体，种内原生质体融合率坛紫菜为9.7%-12.4%，条斑紫菜为10%-11.5%。PEG分子量在1540-6000之间，随着分子量的提高，原生质体融合率增高，原生质体融合体被挑出来进行单个培养，经过30天培养坛紫菜的一个杂合体（含一个红色原生质体和一个进驻生型原生质体）再生成一个呈红色和野生色的相嵌叶状体，鸸 个含两个红色原生质体的融合体再生成一个在基部和头部均长假根的叶状体，但来自这个再生体的原生质体只长成具有一个假根的叶状体，从原生质体融保体的再生体以及它们无性繁殖体的结果来看，坛紫菜的种内原生质体融合体可能只发生了细胞质融合，而真正的核融合并没有发生，培养15-20天，条斑紫菜的原生质体融合体先再生成细胞团，然后由细胞团释放出许胞子并萌发成正常野生型叶状体。