球孢白僵菌与低剂量化学杀虫剂对小菜蛾的协同增效作用

本文联合应用球孢白僵菌Beauveria bassiana HFW-05与低剂量化学杀虫剂,评价其是否对小菜蛾防治具有协同增效作用,为小菜蛾的有效防控提供新的途径。结果表明,低剂量的化学杀虫剂对菌株HFW-05分生孢子的萌发率、菌丝生长和胞外蛋白酶活性没有影响,甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和氯虫苯甲酰胺的增效作用最明显。低剂量甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和氯虫苯甲酰胺与HFW-05混用均可明显提高对小菜蛾2龄幼虫的杀虫速度。氯虫苯甲酰胺最低设定浓度10×与HFW-05 3个浓度（1.0×10⁶、1.0×10⁷、4.0×10⁷孢子/mL）混用对小菜蛾的理论LT₅₀均低于1 d,显著低于单独使用HFW-05孢悬液。甲氨基阿维菌素苯甲酸盐4×与HFW-05 3个浓度（1.0×10⁶、1.0×10⁷、4.0×10⁷孢子/mL）混用对小菜蛾的LT₅₀分别为2.4、2.2和1.2 d,显著低于单独使用HFW-05孢悬液。甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和氯虫苯甲酰胺均没有影响HFW-05对小菜蛾的僵虫率。表明白僵菌HFW-05与低剂量甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和氯虫苯甲酰胺联合应用,在保证白僵菌侵染作用的同时,可有效提高对小菜蛾的致病力,是防治小菜蛾的一项新的有效措施。     

玫烟色棒束孢对多种刺吸式口器害虫防治潜力的室内评测

刺吸式口器昆虫常发生严重且抗药性强。本文室内测定了玫烟色棒束孢Isaria fumosorosea Ifu13a对梨冠网蝽、小绿叶蝉和温室白粉虱等多种刺吸式口器害虫的控制潜力。在1.0×10⁸、1.0×10⁷和1.0×10⁶孢子/mL接种浓度下,在处理后初始2 d保持RH（95±5）%,随后8 d保持RH（78±5）%的条件下,小绿叶蝉和温室白粉虱成虫的累积死亡率均达到100%,其致死中时LT₅₀分别为4.12、4.11、5.43和4.77、5.55、5.32 d,而梨冠网蝽的致死中时为7.32、8.22、9.79 d。在1.0×10⁸和1.0×10⁷孢子/mL浓度下,小绿叶蝉和温室白粉虱累计死亡率均在5 d内即达到100%,2种害虫的致死中浓度LC₅₀分别为3.90×10³和3.03×10⁴孢子/mL;而梨冠网蝽第10 d在2种浓度下的累计死亡率分别达到了81.25%、77.5%,其LC₅₀为6.88×10⁵孢子/mL。菌株Ifu13a显示出一定的寄主专化性,菌株Ifu13a显现了对多种刺吸式口器害虫的高控制潜力。     

烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus)牡丹分离物-TRV-Pa的研究

 牡丹受一种病毒为害后,叶片呈现黄色花叶同时伴有少量的花药败育现象。经系统鉴定,此病毒被确认为烟草脆裂病毒的牡丹分离物(TRV-Pa)。该病毒人工接种时可侵染7个科的21种植物;其TDP为80℃,DEP为10^-3-10-4,L则为40天以上。TRV-Pa具有两种长度的杆状粒子,其大小分别为35-80×25nm和125-200×25nm。A 260/280为1.13,RNA含量为5.0%。经PAGE分析粒子有两条谱带,其Rf分别为0.25及0.26-0.28。迁移率分别是-1.57——1.6×10^-3及-1.71——1.75×10^-3cm²·Sec^-1·V^-1(BYDV的迁移率为-1.43——1.45×10^-3cm²·See^-1·V^-1)。两种核酸的分子量分别为RNA₁=2.45×10⁶,RNA₂=0.65×10⁶(标准核酸为TMV和雀麦花叶病毒的核酸分子)。外壳蛋白亚基是单一的,其分子量是2.11×10⁴(标准蛋白分别是牛血清清蛋白、胃蛋白酶,胰蛋白酶和细胞色素C)。并含有较多的天冬氨酸、谷氨酸,苏氨酸和丝氨酸,未明显测到酪氨酸和苯丙氨酸,缺少胱氨酸。对牡丹花药进行病理解剖学和血清学研究时,在花粉粒子中检测到病毒,被病毒侵染的花粉约有80%为空瘪。在牡丹的繁育中,应选用无毒繁殖材料防止TRV通过无性繁殖过程在牡丹上传播。     

解淀粉芽胞杆菌PHODB35对小麦的促生作用及产量影响

解淀粉芽胞杆菌Bacillus amyloliquefaciens PHODB35是一株具有抑菌和促生作用的多功能菌株。为了明确其对小麦的促生作用,通过离体平皿法研究菌株PHODB35发酵液对小麦种子萌发和幼苗生长的影响。结果表明,菌株PHODB35发酵液对种子萌发和芽长生长存在不同程度影响,其中高浓度发酵液（10×10⁸和2×10⁸ CFU/mL）对上述指标具有抑制作用,低浓度发酵液（1×10⁸、1×10⁷、2×10⁶和1×10⁶ CFU/mL）对种子萌发不存在显著影响,但促进芽长的生长,其增长幅度为13.48%~20.22%,初步明确了菌株PHODB35适宜的接种浓度为1×10⁸ CFU/mL。温室盆栽试验表明,在该接种浓度处理后小麦的株高、鲜重、干重和基质有效磷含量均有不同程度的增加。同时以该菌株为活性成分研制的有机肥料（浓度为1×10⁸ CFU/g）的盆栽试验结果表明,随着PHODB35有机肥用量的增加,分别提高了基质有效磷和小麦植株全磷含量3.86和3.55倍,其促生作用优于普通有机肥。多地区的田间试验表明,PHODB35有机肥处理（T3）在产量方面高于化学肥料减施处理（T2）,增产率5.31%~9.06%。该研究结果为解淀粉芽胞杆菌PHODB35有机肥的进一步产业化开发和应用提供了科学依据。     

枯草芽胞杆菌HMB19198在番茄叶片上定殖能力的分子检测

枯草芽胞杆菌HMB19198能有效防治番茄灰霉病,为快速、准确检测HMB19198在叶面的定殖能力,本研究通过对HMB19198全基因组序列比对分析,获得该菌株102 bp功能未知的独有基因序列,设计出针对HMB19198的特异性引物和探针。荧光定量PCR结果表明,该引物和探针对HMB19198具有较高的特异性,在有番茄叶片DNA干扰下,体系检测阈值为10²拷贝/μL。利用荧光定量PCR技术和菌落计数法检测了HMB19198在叶片上定殖动态。叶片喷施1×10⁸ cfu/mL的菌体悬浮液,0 d后菌体数量分别为1.7×10⁸拷贝/g叶片和8.9×10⁷ cfu/g叶片,2、4、6和8 d后菌株HMB19198在叶面的定殖数量逐渐降低,8 d后定殖数量分别为1.0×10⁷拷贝/g叶片和1.2×10⁷cfu/g叶片。防效试验结果表明,喷施菌株HMB19198悬浮液2 d后防效在80%以上,8 d后防效降为37.9%。     

解淀粉芽胞杆菌PHODG36菌剂的研制及其对马铃薯黄萎病的防病增产效果

解淀粉芽胞杆菌Bacillus amyloliquefaciens PHODG36是一株具有抑菌和促生作用的多功能菌株。本研究以菌株PHODG36原粉为有效成分、滑石粉为填料研制了不同芽胞浓度的微生物菌剂，通过盆栽试验研究了菌剂拌种处理马铃薯种薯后对其出苗的影响，在冀北和冀南地区开展田间小区试验研究了该菌剂对马铃薯黄萎病的防治效果及对马铃薯产量的影响。结果表明，制备的PHODG36菌剂外观为浅黄色粉末，无团块。该菌剂平均粒径D₅₀为（38.25±0.46）μm，pH为（6.65±0.15），贮藏后未出现结块和发粘现象，浓度介于1.5×10⁹～2.0×10¹⁰ CFU/g。与空白对照和化学药剂相比，不同浓度菌剂拌种处理后校正出苗率之间差异不显著，而菌剂随着浓度的增加，校正出苗率呈下降趋势。不同地区的田间试验表明，PHODG36菌剂在1.5×10⁹～1.0×10¹⁰ CFU/g对感病品种黄萎病的病情指数防效为43.08%～58.46%，增产率为8.29%～30.37%；对抗病品种主要表现为增产作用，增产率介于1.85%～9.0%。综合分析表明，菌剂使用浓度为1.5×10⁹～1.0×10¹⁰ CFU/g能够有效降低黄萎病的发生，节约投入成本，且增产作用明显。研究结果为黄萎病的防控提供绿色产品，并为该菌剂进一步的大面积推广示范应用奠定了基础。     

水稻白叶枯病菌两类噬菌体性状的比较

 从感染白叶枯病的稻叶、种子和田水中先后分离到24株噬菌体,测定了它们在琼胶平板上形成噬菌斑的大小、血清学反应、热钝化温度、铁盐的钝化作用、寄主范围、一级生长曲线以及在电镜下观察它们的形态。根据测定结果,可将它们区分为两个类群。第一群称为XOP 1型,以OP-3为代表,其噬菌斑直径为3~5毫米,热钝化温度为58℃/10分钟,易为三价铁盐所钝化;寄主范围较窄;潜育期为40分钟,上升期30分钟,平均裂解量为35个。第二群称为XOP 2型,以OP-12为代表,噬菌斑小,热钝化温度68℃/10分钟,对三价铁盐不敏感,潜育期80分钟,上升期50分钟,平均裂解量为8个。它们都是蝌蚪形,但OP-3的尾部细长而不能收缩,OP-12的尾部短粗而能收缩。     

马铃薯块茎蛾幼虫致病黏质沙雷氏菌的分离鉴定及杀虫活性

从马铃薯田自然罹病马铃薯块茎蛾幼虫上,分离到1株对马铃薯块茎蛾幼虫具有较强致病作用的菌株ML-1,通过形态及16S rRNA序列测定分析,确定该菌株ML-1为黏质沙雷氏菌Serratia marcescens。采用饲喂法分别测定了该菌株ML-1菌悬液、发酵液及发酵上清液对马铃薯块茎蛾初孵3日龄幼虫的毒力。结果表明,用ML-1菌悬液、发酵液及发酵上清液饲喂后第7 d时,马铃薯块茎蛾3日龄幼虫的累积校正死亡率分别为63.16%、80.70%和49.12%,在3.0×10⁹ cfu/mL浓度下的LT₅₀分别为4.71、3.04和6.47 d,在发酵液处理后第3、5和7 d的LC₅₀分别为9.784×10¹⁰、1.855×10⁸和5.434×10⁵ cfu/mL。综上所述,黏质沙雷氏菌ML-1菌株对马铃薯块茎蛾幼虫有较强的毒力,在马铃薯块茎蛾绿色防控中具有一定的开发潜能。     

防治苹果树腐烂病杀菌剂的室内筛选

 The inhibitory effects of 10 fungicides on apple tree valsa canker were compared on dishes and twigs. The results showed that conidia germination and mycelial growth were inhibited by all fungicedes tested. The EC₅₀ value of Difenoconazole was 6. 1×10^-3μg·mL^-1, the lowest among tested fungicide in inhibiting conidia germination. Tebuconazole and Imazalil also showed obvious inhibition effect. Thiophanatemethyl was the least efficient with the EC₅₀ value 2.6×10¹ μg·mL^-1. Difenoconazole also showed the highest activity for inhibiting mycelial growth with ECho value of 2.3×10^-2 μg·mL^-1. Tebuconazole was better than other fungicide. Thiophanate-methyl and Propineb were the least efficient with quite high EC₅₀ value. Furthermore, the size of the lesion after inoculation on excised twigs also revealed that Difenoconazole was most efficient because it showed the smallest lesion of 394 mm² compared with other tested fungicides. So Difenoconazole and Tebuconazole could be used to control apple tree valsa canker in field to subsititute forbided fungicides such as asomate.     

球孢白僵菌对葱地种蝇成虫的毒力及繁殖力的影响

本文采用浸虫法测定了4株球孢白僵菌对1日龄葱地种蝇（本文称葱蝇）成虫的毒力,筛选出高致病力的菌株,描述了感染症状,测定了其亚致死剂量LC₂₀和LC₅₀对存活1日龄葱蝇成虫生物学参数和繁殖力的影响,并比较了5.8×10³和5.7×10⁵孢子/mL对1日龄和10日龄葱蝇成虫死亡率和单雌产卵量的差异。结果表明菌株Bb01对葱蝇成虫的致病力最强,其LC₅₀为1.76×10⁶孢子/mL,其次为菌株Bb03和Bb02,其LC₅₀分别为4.05×10⁶和1.86×10⁷孢子/mL。与对照相比,菌株Bb01亚致死剂量处理1日龄成虫后,明显延迟了葱蝇成虫的产卵前期,降低了单雌产卵量,LC₂₀浓度处理时单雌产卵量比对照下降了51.9%,LC₅₀处理下降92.2%,明显缩短了雌成虫寿命,但卵孵化率没有明显影响。虽然菌株Bb01对1日龄成虫造成的死亡率较高,但在5.7×10⁵孢子/mL下,10日龄成虫单雌产卵量比对照下降了82.5%,对种群控制效果仍较强。     

从新疆哈密瓜分离到的烟草坏死病毒及其理化性质的研究

 从自然感病的哈密瓜上分离到的烟草坏死病毒(TNV),其寄主范围较广,在藜科、苋科、豆科和茄科一些植物上呈局部坏死反应,并在葫芦科一些植物上呈局部坏死斑和系统花叶症状。病毒的热灭活点为90~95℃,稀释限点10-5~10-6,体外保毒期在10天以上。病毒颗粒呈六角形,直径约25毫微米。提纯病毒的紫外吸收,最高260毫微米,最低为245毫微米;沉降常数为94s。从病毒提取的核酸的紫外吸收,最高为260毫微米,最低234毫微米;经聚丙烯酰胺凝胶电泳测定,核酸分子量为1.4×10⁶;病毒蛋白的分子量为2.75×10⁴。经血清学试验,该病毒与烟草花叶病毒的A型和D型的抗血清发生沉淀反应,而与黄瓜坏死病毒的抗血清无沉淀反应。     

8种草地贪夜蛾化学防控药剂对夜蛾黑卵蜂的急性毒性及安全性评价

在实验室条件下,以草地贪夜蛾优势卵寄生蜂夜蛾黑卵蜂为研究对象,通过管测药膜法测定了农业农村部推荐草地贪夜蛾应急防控用药中的氯虫苯甲酰胺、氟苯虫酰胺、茚虫威、虱螨脲、四氯虫酰胺、虫螨腈、乙基多杀菌素和甲氨基阿维菌素苯甲酸盐等8种杀虫剂对夜蛾黑卵蜂的急性毒性,并评价了其安全性风险等级.结果表明,甲氨基阿维菌素苯甲酸盐、乙基...     

转座子Tn5诱导的水稻白叶枯病菌毒性基因突变体及其生化行为

 通过接合试验,将转座子Tn5从三个供体菌中引入水稻白叶枯病菌(Xanthomonas campestris pv.oryzae Dye)日本系统小种3菌株(JXOⅢ)的细胞内,接合频率分别为0.2×10^-6,0.4×10^-7和0.27×10^-6。随机挑选的接合子总DNA与³²P标记的含有Tn5的探针质粒(pJB4JI:Tn5)杂交,放射自显影显示出同源杂交带。在6000个JXOⅢ的Tn5诱变株中,发现13个菌株对8个供试水稻品种(早生爱国3号,IR26,IR20,IR8,cas209,南粳15,金南风和TN-1)都不致病,表现为不亲和反应。在含有酶解基质的平板上,比较了JXOⅢ和13个毒性基因突变体的胞外水解酶活性和多糖产量。结果发现所有突变体的蛋白酶活性和胞外多糖产量都增强;所有突变体的淀粉酶活性和大多数突变体的果胶酶活性都是从无到有;突变体纤维素酶活性基本不变;大多数突变体的酯酶活性有所降低。     

用A蛋白免疫电镜快速检测几种蔬菜作物的两种杆状病毒

 应用A蛋白免疫电镜技术对几种蔬菜作物的长叶车前草花叶病毒(RMV)、烟草花叶病毒(TMV)的检测比常规的电镜负染技术至少要灵敏近10,000倍,比普通的免疫电镜技术要灵敏10~100倍,抗血清浓度稀释至400,000倍,病毒粗提液稀释到1,000,000倍或病毒提纯液浓度为2.5×10^-7 mg/ml时均能观察到病毒粒子。同时由于抗体分子能特异性地结合到病毒粒子表面,能够很容易地区分不同的病毒种类。
应用此项技术作者检测了杭州地区几种常见的蔬菜病毒病,对大白菜(Brassica campestris L.),蕃茄(Lycopersicum esculentum Mill),榨菜(Brassica juncea var.tsatsai Mao),雪里(Brassicajuncea var.multiceps Tsen et Lee)等作物发病期的叶或果的浸提液用A蛋白免疫电镜进行快速检测,结果在大白菜,番茄等病株上检测到较多的病毒粒子,且大多能被RMV抗血清修饰,同时在番茄病株检测到的少量病毒粒子亦能被TMV抗血清修饰,而榨菜及雪里等病株上检测到的病毒粒子很少能被RMV及TMV抗血清所修饰,另外,病毒粒子的含量以番茄病果中为最高,要比其它几种蔬菜作物叶子中高约10~30倍。     

荧光猝灭法测定梨小食心虫性诱剂含量以及田间应用

β-环糊精（β-CD）与中性红（NR）在碱性缓冲溶液中形成包合物（β-CD-NR）,使中性红的荧光强度F增大,而加入梨小食心虫性诱剂主要成分顺-8-十二碳烯醇乙酸酯（Z8-12：Ac）后,β-CD-NR的荧光发生猝灭,以此建立了测定Z8-12：Ac含量的新方法：在含有1.0 mL 1.0×10^-3 mol/L中性红、5.0 mL 1.0×10^-2 mol/L的β-CD、7.0 mL 0.2 mol/L的NaH₂PO₄-Na₂HPO₄缓冲溶液（pH 7.4）的荧光体系中,加入Z8-12：Ac,以双蒸水定容至25.0 mL,超声反应20 min后,将其放置在4℃的环境下冷却,得待测液。在激发波长为460 nm、发射波长为580 nm的条件下测定待测液的荧光强度F和β-CD-NR体系的荧光强度F₀,计算荧光猝灭值ΔF（ΔF＝F₀—F）。比较分析不同浓度的Z8-12：Ac标准溶液与相应的荧光猝灭值ΔF的关系,结果表明：在Z8-12：Ac浓度为1.0×10^-4～4.0×10^-4 mol/L范围内,荧光猝灭值ΔF与Z8-12：Ac的浓度c呈现良好的线性关系,线性方程为：ΔF＝28.3 c—16.8,R²＝0.9978。对2.0×10^-4 mol/L的Z8-12：Ac溶液进行11次平行测定,得出方法检出限为1.25×10^-5 mol/L（S/N＝3）,RSD为±1.5%,方法灵敏度和精密度良好。加标回收率在98.0%～103.0%,说明方法准确度良好。利用新方法测定了田间梨小诱芯中Z8-12：Ac随时间的残留量,统计了不同残留量对应的诱虫量。结果表明,本方法可以成功测定不同天数下诱芯中Z8-12：Ac的残留量,掌握了诱芯中Z8-12：Ac的衰减趋势,而且与实际诱虫量变化趋势基本吻合。本方法可为确保田间虫情监测预报的精确性以及保持性诱芯的诱杀效果提供技术支撑。     

检测植物病毒ELISA异种动物抗体双夹心法的研究和应用

 制备南方菜豆叶花叶病毒、大豆花叶病毒、烟草花叶病毒、番茄不孕病毒、苜蓿花叶病毒的兔抗血清和鼠腹水抗体,组合成ELISA异种动物抗体双夹心试验。抗体球蛋白的适宜工作浓度为4微克/毫升;未经纯化的特异抗血清(抗体)的适宜工作浓度为10^-4(即1/10,000)稀释度。检测以上5种病毒的灵敏度:提纯抗原为10-0.64毫微克/毫升;病叶澄清液为1/10,000-1/100,000稀释度。本法灵敏度与ELISA双抗体夹心法相当或略高。一般8小时内可得出结果。适用于大量样品的检测。     

河北省赤豆花叶病毒分离物的鉴定

 从河北省赤豆实生苗上获得一个分离物,它系种传的,引起赤豆产生疱状花叶,易经汁液摩擦接种,桃蚜(Myzus persicae)、豆蚜(Aphis cracivara)以非持久性方式传播,其钝化温度为55-60℃(十分钟)稀释限点为10^-2-10^-3,体外存活期为1-2天。寄主范围狭窄,系统侵染大豆(Glycine max)、绿豆(Phaselous aureus)、豇豆(Vigna sinensis cv.花豇豆)、棉豆(Phaseolus lunatus)、赤豆(P.angularis)等豆科植物,局部侵染苋色藜(Chenopodium amaranticolor)、昆诺藜(C.quinoa)和番杏(Tetragonia expensa)。病毒粒体线条形,略弯曲,755×13nm.A₂₆₀/A₂₈₀比值为1.224。病组织超薄切片中有风轮状内含体。SDS-免疫双扩散试验表明它与黑眼豇豆花叶病毒(BICMV)血清学关系十分密切。综合以上特征,我们认为赤豆花叶病毒河北省分离物为BICMV。河北省赤豆种子携带该病毒百分率为3-5%,它是田间主要毒源之一。     

芜菁花叶病毒—崇明大白菜分离株的鉴定

 从崇明大白菜(Brassica pekinensis)上分离到一种病毒,经鉴别寄主测定,在青菜(B.chinensis)、芜菁(B.rapa)上为系统花叶,千红日(Gom-phrema globasa)、苋色藜(Chenopodium amaranticolor)上为局斑,不侵染心叶烟(Nicotiana glutinosa)、黄苗榆(N.tabacum)、黄瓜(Cucumis sa-tivus)。电镜下,病叶组织细胞内观察到风轮状内含体;病叶浸渍液和纯化的病毒制剂中都可见到均一的线状粒体,长660~740nm,宽12.5~15nm。对流兔疫电泳和琼脂扩散试验,病毒与其抗血清产生专一的沉淀线。温度钝化点为55~65℃,稀释终点10^-3,体外保毒期2~3天。经聚丙烯酰胺凝胶电泳和氨基酸自动分析仪分别测得该病毒的衣壳蛋白亚基分子量为25,000,氨基酸残基数226个。鉴定结果认为它为芜菁花叶病毒崇明分离株(TuMVc.M)。