大白菜根表结构与软腐欧氏杆菌吸附和侵入的关系

 用大白菜6个品种和软腐欧氏杆菌(Erwinia carotovora subsp.carotovora)致病力等性状不同的3个菌株测定表明,病菌对根毛吸附的菌量与对根系侵入的菌量间有正相关关系。吸附表现出可逆和不可逆两种状态,试验中用改进的方法对它们作了定量研究。可逆吸附发生和完成的最早时间分别是1~5和10~15分钟,此时用水洗法可使28~100%的菌体解吸附。不可逆吸附发生和完成的时间分别为15和30分钟,菌体以静止不动为特征,只能由解吸附剂处理而部分地解吸附。在接种后15分钟,可逆吸附逐渐向不可逆吸附转化,条件是病菌对根毛表面的种群压力必须保持在最初接种液含菌量的50%以上。病菌吸附还表现出根毛区段的差别,常以根毛顶端吸附菌量较高。     

不同种类的细菌对大白菜软腐欧氏杆菌根表吸附的竞争作用

用吸附竞争试验,测定了8种细菌共10个菌株对大白菜软腐欧氏杆菌(Erwinia carotovorasubsp.carotovora)菌株 RL4在大白菜根表吸附的竞争作用。竞争菌的吸附竞争作用与它们对大白菜根表的吸附能力相一致,在等量混合接种时,只有能对大白菜根表发生吸附的7个菌株表现出程度不同的吸附竞争能力,其中以菌株 BCE 4(RL 4是从它筛选出的抗利福平菌株)竞争最强,它也是对寄主根表吸附能力最强的菌株,其吸附竞争作用最高可达98%,不表现1∶1的数量关系。RL4和 BCE4的热杀死菌体不发生吸附竞争。发生吸附竞争的有效时间为竞争菌对根表预吸附15分钟以后,或病菌(RL4)吸附15分钟以前。     

马铃薯品种对软腐欧氏杆菌皮孔侵染的抗性机制

 抗病品种的薯块单位面积上皮孔数目少,表皮角质层厚,周皮细胞层数多,皮孔组织角质化程度高。抗性不同的10个马铃薯品种自然带菌的薯块在人工诱发时,抗病品种的腐烂率显著低于来自同一田块的感病品种。9个品种的薯块用皮孔浸渍法进行人工接种后,抗病品种皮孔内细菌数量迅速减少或缓慢增多,而感病品种内则迅速增多。扫描电镜观察表明,抗病品种Murlur的薯块皮孔内的细菌畸形,皮孔内有大量颗粒状或块状填充物质,感病品种晋薯二号薯块皮孔内的细菌形态正常,皮孔內无填充物质。     

软腐欧氏杆菌的蛋白酶与致病作用的关系

 胡罗卜软腐欧氏杆菌(Erwinia carotovora var.carotovora Dyc)在合成培养基MS中产生两种蛋白酶,但在无细胞滤液中测不到果胶裂解酶和果胶水解酶的活性。用等电聚焦电泳测得这两种蛋白酶都是碱性蛋白酶,等电点分别为8.3和8.9。变性温度为49-50℃,对酸或碱具有较高的稳定性。纯化的蛋白酶单独作用马铃薯块、能使其变软,切片观察表明细胞壁被明显降解。通过滤膜结合法,将供体菌1830/pJB4J1::Tn5的转座子转入到野生型StEcc-12中,从2000个接合子中获得了11个缺少产蛋白酶能力的突变体。这些突变体的分泌性蛋白质等电聚焦图谱与野生型菌株明显不同,其中一个变突体蛋白酶带完全缺失,另外一个则出现8条新的蛋白带,其他5个属部分缺失。这些突变体对马铃薯块组织离析、腐烂的能力都有不同程度的减弱。研究结果认为在由胡罗卜软腐欧氏杆菌引起的软腐病程中蛋白酶和果胶酶是协同作用的,果胶酶降解植物细胞间和胞壁中的果胶质,而蛋白酶则降解植物细胞壁和膜中的蛋白质。     

软腐欧氏杆菌在离体条件下产生胞外酶的比较研究

 3种软腐细菌在21,26和31℃下及6种培养液中的生长量和产生胞外酶的能力各不相同。Ecc在26℃生长最好,Eca为21℃,Ech在三种温度下的生长量差别不大。与其它2种细菌比较,Ech的生长及产生果胶裂解酶(PL)的能力总是最强的。随着温度的升高,各种细菌的PL活性都下降。果胶水解酶(PG)变化不大,但Ech在高温下产PG有减少趋势,且总没有另二种细菌的活性强。Eca以26℃时产PG最适宜。Ech在较高温度下蛋白酶活性大大下降,而Ecc,变化不大,Eca的蛋白酶活性则随温度升高而加强。培养液的无细胞滤液对马铃薯块茎组织的浸离力与其中PL的活性有密切关系,但没有或只有很低果胶酶活性,而蛋白酶活性正常的这种滤液也能使小薯碟浸离。Eca在31℃培养后果胶酶活性很低,蛋白酶活性很高,其无细胞滤液对马铃薯组织也表现较强浸离力。     

胡萝卜软腐欧氏杆菌胡萝卜亚种游动性突变体的筛选

 用转座子Tn5对胡萝卜软腐欧氏杆菌胡萝卜亚种(Erwinia carotovora subsp.carotovora,Ecc)进行诱变,获得9个游动性改变了的突变体。M432游动性变大;M143、M451和M574游动性完全丧失;M43、M49、M330、M725和M726游动性较野生型变小。这9个突变体在大白菜叶柄上的致病力均减弱。游动性变小或丧失的突变体鞭毛数目减少或未发现有鞭毛。     

软腐欧氏杆菌产细菌素菌株的筛选和细菌素类型的研究

采用Echandi方法,测定了从国内不同植物上分离,经鉴定的3个种和亚种的软腐欧氏杆菌(Erwiniacarotovora var.carotovora Dye,E.carotovora var.otroseptica Dye,E.chrysanthemi Burkholder.etal.)的224个菌株产生细菌素的能力。指示菌为代表3个不同种的菌株。测定结果表明:224个试验菌株中能产细菌素的有97个,占总数的43.3％。经测定产生细菌素的专化性有所不同,约各有1/3菌株分别对3种、2种、1种指示菌有抑制作用。有些广谱的细菌素甚至对其它属的植物病原细菌也有抑制作用。少数种内专化的产细菌素菌株可望用于软腐欧氏杆菌种鉴定的辅助手段。电镜观察初步表明,这些细菌素可能是分子大小不同的两种类型的细菌素:小分子细菌素在电镜下不可见,大分子细菌素具有短杆状结构,颇似无头壳的噬菌体的尾部。     

异源Harpin对软腐欧氏杆菌与植物互作关系的影响

 本文通过三亲交配将带有梨火疫欧文氏杆菌功能完整的hrp基因簇的重组粘粒pCPP430转移到了胡萝卜软腐欧氏杆菌(Erwinia carotovora) Se9R中。从接合子中提纯的质粒与pCPP430的大小、酶切图谱相同;以该质粒为模板,用针对hrpN序列的引物经PCR扩增得到与hrpN大小相同的片段;用地高辛标记的hrpN作为探针进行Southern blotting分析,在接合子中的质粒上得到预期的杂交带。接合子可以在烟草叶片上稳定地引起过敏反应。另外,接合子可以在寄主马铃薯叶片上引起过敏反应样枯斑,表明异源harpin的表达及功能不受软腐菌的抑制。该接合子在体外产生的果胶酸裂解酶活性与受体菌Se9R无明显差别。低浓度的接合子在马铃薯块茎上的软腐症状明显低于受体菌Se9R。外源harpin表达可能不改变软腐欧氏杆菌的致病力、而是通过诱导马铃薯抗性达到减轻发病的作用。     

细菌凝集素与菌体脂多糖在大白菜与软腐欧氏杆菌接触识别中的作用

 用3种试验方法测定了大白菜细菌凝集素(Agin-SD60)和软腐欧氏杆菌脂多精(LPS),在双方接触识别中的作用。在吸附抑制试验中,来自大白菜和马铃曾的Agin-SD60显示约98%的吸附抑制效应,另3种植物的Agin-SD60及大白菜外源凝集素(lectin)和细咆壁蛋白质(CWP)无明显作用;同时用不同种类的7个菌侏的LPS作测定,只有病菌的LPS吸附抑制作用明显(93.37%),其胞外多糖(EPS)也无作用。在菌体凝集试验中,也只有大白菜和马铃薯的Agin-SD60表现50%~100%的凝集活性。在琼脂双扩散试验中,寄主Agin-SD60可与病菌菌体及其LPS发生免疫沉淀。这些结果说明,Agin-SD60和菌体LPS在大白菜与软幅欧氏杆菌接触识别中分别作为植物识别子(cognor)和细菌识别子(cognon)起作用。     

一株对香蕉枯萎病菌具有良好拮抗作用的菊欧氏杆菌

在香蕉枯萎病重病园区,从生长正常香蕉假茎内分离获得一株细菌E353菌株。经对峙培养、孢子萌发抑制测定,E353对香蕉枯萎病菌菌丝生长、孢子萌发具有良好抑制效果。盆栽试验表明,E353活菌培养液（750ml／株）浸根处理,对香蕉枯萎病的防效为60．67％。经形态学、生理生化和16S rDNA序列比对,将E353鉴定为菊欧氏杆菌Erwinia chrysanthemi。     

钙和水分在大白菜抗软腐病中的作用

 软腐细菌Erwinia carotovora pv.carotovora在白菜上的发展决定于品种的抗病性,软腐细菌的数量、植株年龄以及白菜叶片的分布部位,不同的组织,甚至同一张叶片的不同部位抗性均有所不同。凡是水分含量多的部位软腐扩展迅速,水分少的软腐发展慢,含水量在大白菜抗软腐细菌的扩展中具有明显作用。钙素的增加与白菜的抗软腐能力成正相关,增加钙含量可显著减轻软腐病的为害与发展,控制水分,增施钙素可提高大白菜软腐病的抵抗性。     

胡萝卜软腐欧氏杆菌菌落变异型菌株在氯化三苯基四氮唑平板上的变色机理

 在含0.005%氯化三苯基四氮唑(TTC)的酪蛋白氨基酸-蛋白胨-葡萄糖(CPG)平板上,胡萝卜软腐欧氏杆菌苗落变异型菌株(简称EccM)生长差、菌落既小且白、而普通野生型菌株(Eccw)则为红而又大的菌落。
EccM的苗落特征与下列因素有关:①当以葡萄糖、果糖、蔗糖或其它相关的糖类为碳源时,EccM菌株产生的酸特别多,若培养基中加入碳酸钙、菌落周围可形成酸溶的透明圈;②CPG培养基的缓冲力很弱,只有KingsB的1/8-1/10,EccM生长后、培养基pH很快降到5.5以下,这是生长的pH下限值;③在pH<6时,菌体脱氢酶活性受到强烈抑制,还原TTC的能力明显减弱。
上述因素共同作用就使EccM在TTC平板上生长差,颜色白,与EccW很容易区别开。     

硫酸铜防治马铃薯软腐病及其对薯块有关酶类的影响

 用0.05% CuSO₄·5H₂O浸泡马铃薯薯块半小时,几乎完全防治了贮藏期的细菌性软腐病。田间试验中,叶面喷洒0.1% CuSO₄·5H₂O能显著减轻黑胫病的发生。叶面喷铜后叶片,茎杆和子薯的含铜量提高,子薯对伤口接种和皮孔接种的抗性增强。叶面喷铜对子薯的多酚氧化酶、过氧化物酶活性没有明显影响。生长期内喷25次和10次铜使薯块组织的苯丙氨酸(PAL)活性升高。用CuSO₄·5H₂O浸泡薯块或向薯块的酶抽提液中直接加入Cu²⁺,对多酚氧化酶和过氧化物酶活性均影响不大,而PAL活性显著降低。文中讨论了Cu²⁺在薯块抗性中的作用。     

大白菜软腐细菌从幼根侵染的组织病理学研究

 将大白菜种子置于培养皿内的滤纸上发芽。滤纸用不同浓度的洗涤与不洗涤的软腐欧氏杆菌(Erwinia carotovora pv.carotovoar Dye)悬浮液,离心上清液,培养基浸出液和灭菌生理盐水浸润。在25℃下培养26小时后,用细菌悬浮液处理的幼芽发病率为8-95%不等。病苗生长量为对照(用生理盐水处理)的17-80%。扫描电镜观察的结果指出,接种后病原细菌首先在根毛区发现,以后才在伸长区和成熟区发现大量病菌。成熟区表皮细胞与细胞交界处的细胞壁有被分解的迹象。在幼苗的导管及其附近的薄壁细胞内均发现了病原细菌,检出率分别为16%和3%。在病苗组织内和幼根表面的病菌可产生微纤丝。病苗幼茎经压气处理24小时后,对其断面进行扫描电镜观察,结果表明,病菌可将导管的外壁与纹孔膜分解而使导管解体仅剩螺蚊加厚部分或呈网孔状。     

大白菜软腐病潜伏侵染的组织病理学研究

厌气诱发24～48小时后,大白菜叶柄上可以出现由潜伏侵染的软腐欧氏杆菌(Erwinia carotovora subsp.carotovora)引起的水渍状浸离斑。对病斑的邻近组织(病斑以上1～5毫米)断面进行电镜扫描观察,结果指出,病原细菌最初是潜伏在维管束的导管中的。这些细菌生长繁殖后可以消解螺纹导管间的薄壁部分,最后使螺纹松驰解体,再进一步扩展到邻近的薄壁组织为害,表现症状。叶柄表面没有任何自然孔口,但有自然形成的不规则细微裂痕。细菌在完好的叶柄表面不进行分裂繁殖,但在裂痕附近有繁殖和堆积现象。细菌在叶片上的气孔附近没有明显的聚集和繁殖迹象。有菌的气孔会由于被刺激产生的胶状分泌物而阻塞。