掘氏疫霉卵孢子萌发研究

 掘氏疫霉(Phytophthora drechsleri)种内菌株直接交配产生的卵孢子分别用0.1% KMnO₄处理20分钟和0.3% H₂O₂处理2分钟在S+L培养基上(26℃)培养7天萌发率>70%。H₂O₂是本研究首次报道的一种刺激掘氏疫霉卵孢子萌发的处理剂,其效果略优于KMnO₄。用KMnO₄和H₂O₂处理均可有效地抑制卵孢子悬浮液中菌丝片段及菌丝膨大体的萌发生长。在一定时期内卵孢子萌发率随卵孢子保存时间的增加而增加,保存30天和45天的卵孢子分别用KMnO₄和H₂O₂处理萌发率最高。卵孢子保存期间有无光照对萌发率无显著影响,但卵孢子荫发时给予光照对萌发有明显的促进作用,保存30天的卵孢子在光照下萌发率为60-70%,在黑暗中仅0-16%。卵孢子萌发过程中的光照条件以黑光灯8小时,日光灯16小时交替连续照射7天效果最好,其次为黑光灯单独连续光照,以日光灯单独照射效果较差。所测定的6种培养基中以S+L培养基对卵孢子萌发的效果最好,其次为V₈+L和WA+L。蜗牛酶、纤维素酶、土壤浸出液和黄瓜果提取液对掘氏疫霉卵孢子萌发无明显刺激作用。     

掘氏疫霉卵孢子在田间越冬的研究

 掘氏疫霉Phytophthora drechsleri Tucker phy-5 A1型与phy-64A₂型配对培养,在VA培养基上产生的卵孢子数量最多。卵孢子在15cm深土壤中,经过1988-1989年冬季,存活率为82.95%。卵孢子连同VA培养基制成悬浮液,白天散光照射、夜间黑暗比全部黑暗萌发率高;加土壤浸渍液比加蒸馏水萌发率高。     

KMnO_4和H_2O_2刺激掘氏疫霉卵孢子萌发对单卵孢株生物学性状的影响

本文对经KMnO_4、H_2O_2刺激掘氏疫霉(Phytophthora drechsleri)卵孢子萌发建立的单卵孢株群体应用于掘氏疫霉遗传研究的可行性做了研究。2个掘氏疫霉菌株(A_1、A_2交配型各1株)经聚碳膜间隔配对产生的卵孢子用KMnO_4、H_2O_2以及不用上述氧化剂处理分别建立K、H、C 3个单卵孢株群体(卵孢子萌发率8—16%)。在群体水平上对来自同一亲本的上述3个群体生物学性状比较结果表明,H_2O_2处理刺激卵孢子萌发不影响生长速度、菌落形态、耐35℃高温生长、致病力及交配型的遗传稳定性,所建立的单卵孢株群体可用于上述性状的遗传研究;KMnO_4处理导致掘氏疫霉A_1和A_2交配型在自交后代各自分离为A_1、A_2、A_1A_2和A_2、A_1A_2,但不影响其他生物学性状的遗传稳定性,所建立的单卵孢株群体可用于除交配型性状以外的其他生物学性状的遗传研究,不宜用于交配型正常遗传规律的研究。用KMnO_4处理掘氏疫霉A_1或A_2交配型菌株单株自交产生的卵孢子,从A_1菌株自交后代获得A_2和A_1A_2以及从A_2菌株自交后代获得A_1A_2交配型单卵孢株的结果说明,掘氏疫霉异宗配合菌株体内可能同时包含控制A_1和A_2交配型的遗传因子,在正常条件下有1种交配型遗传因子不表达。KMnO_4处理可望作为揭示交配型遗传本质的有用试验手段。     

掘氏疫霉抗土菌灵突变体的诱导及其特性研究

掘氏疫霉Phytophthora drechsleri是引起黄瓜疫病的主要病原菌。采用紫外线诱导获得了20株掘氏疫霉抗土菌灵的突变体,并对其生物学特性进行了研究。结果表明,掘氏疫霉对土菌灵 的抗性突变频率高于对甲霜灵的抗性突变频率,但其抗性水平低于抗甲霜灵突变体,在1.3~4.3倍 之间;掘氏疫霉对土菌灵的抗性在继代培养和常温保存过程中稳定,突变体的生长速率与亲本敏感 菌株相比发生了不同程度的变化;此外,掘氏疫霉抗土菌灵突变体对甲霜灵和烯酰吗啉无交互抗性。     

苎麻疫霉抗甲霜灵突变株的生物学特性研究

 甲霜灵对疫霉菌生物学性状的影响较为复杂,从田间或室内诱变获得的抗甲霜灵(Mt^r)突变株,除抗药性性状发生变异外,其它生物学性状(如致病力、产孢能力、孢子萌发、培养性状等)亦可能发生变异^[1]。但亦有报道指出,疫霉菌的Mt^r与Mt^s菌株的生长速率、孢子囊形成、孢子萌发等性状基本相似^[2]。     

土壤环境对大豆疫霉Phytophthora sojae卵孢子萌动的影响

为明确土壤环境对大豆疫霉Phytophthora sojae卵孢子萌动的影响,将增强型绿色荧光蛋白标记的大豆疫霉卵孢子以2 500个卵孢子/g干土的比例接种于无菌黑土中,荧光显微镜下计数卵孢子的萌动率以明确其最适宜的土壤温度和含水量;在此基础上,从5种类型土壤和5种轮作体系土壤中筛选适宜卵孢子萌动的土壤环境。结果表明,25℃土壤温度和30%土壤含水量最适合大豆疫霉卵孢子萌动,萌动率为95.78%;黑土和盐碱土分别是最适合和最不适合卵孢子萌动的土壤类型,萌动率分别为94.94%和14.67%;卵孢子萌动率与土壤有机质含量、p H值和Ca2+含量间无明显相关性。大豆连作田和玉米连作田土壤适合卵孢子萌动,萌动率为96.33%和95.00%,小麦连作田土壤不适合卵孢子萌动,萌动率仅为39.33%。     

重庆地区辣椒疫霉对氟吡菌胺的敏感性及抗性突变体的生物学性状

为明确重庆地区辣椒疫霉对氟吡菌胺的抗性风险,采用菌丝生长速率法测定了采自重庆未使用过氟吡菌胺地区的110株辣椒疫霉菌株对氟吡菌胺的敏感性,并对辣椒疫霉抗氟吡菌胺突变体的诱导方法及抗性突变体的主要生物学性状进行了研究。结果表明:110株辣椒疫霉对氟吡菌胺的EC₅₀平均值为(0.32 ± 0.11) μg/mL,不同菌株的敏感性频率呈连续单峰曲线分布,未出现敏感性明显下降的亚群体,因此可将该EC₅₀平均值作为重庆地区辣椒疫霉对氟吡菌胺田间抗性监测的敏感基线。通过紫外诱导菌丝体的方法,共获得3株可稳定遗传的抗氟吡菌胺突变体,抗性倍数介于69.5~98.5之间,突变频率为0.86%;抗性突变体BS11-5-1与亲本菌株BS11-5在菌丝生长速率、温度适应性、产孢子囊能力及致病力方面均无显著差异,而抗性突变体JLP11-4-2和JLP11-4-3在菌丝生长速率、温度适应性、产孢子囊能力及致病力方面均显著低于亲本菌株JLP11-4;不同抗性突变体对渗透压的敏感性与亲本菌株之间均存在不同程度差异;3个抗性突变体对Biolog PM1中95种碳源的利用情况与亲本菌株基本相似。交互抗性测定表明,辣椒疫霉抗氟吡菌胺突变体对甲霜灵、霜脲氰、烯酰吗啉、丁吡吗啉及嘧菌酯之间均不存在交互抗性,建议可将氟吡菌胺与上述几种杀菌剂交替或混合使用。     

辣椒疫霉对双炔酰菌胺的敏感性测定及其 抗药突变体生物学性状研究

研究了辣椒疫霉对双炔酰菌胺的敏感性及其抗药性风险。采用菌丝生长速率法测定了分别采自河北定兴、藁城和山东寿光、青州等地的173株辣椒疫霉菌株对双炔酰菌胺的敏感性,结果表明,其EC50值介于0.002 7~0.049 9 μ g/mL之间,平均EC50值为0.021 9±0.010 2 μ g/mL,敏感性呈单峰曲线分布;采用紫外诱导+菌落角变和药剂驯化的方法分别处理10个供试菌株,各获得7株和1株突变体,其抗性倍数在41.50~394 437.77之间,突变频率分别为1.46%和1.43%。对突变体部分生物学性状的研究表明,抗性突变体与其亲本菌株在菌丝生长速率、致病性、产孢能力、适合度指数和竞争力方面均具有不同程度的差异;抗性突变体DX 2-3 20m和DX 2-3 F7的产孢量、适合度和竞争力均高于亲本菌株,有利于抗性群体的形成。研究表明,辣椒疫霉对双炔酰菌胺存在中等抗性风险。     

中国华北地区瓜类尖孢镰刀菌对咪鲜胺的敏感性及抗药突变株生物学性状研究

为明确中国华北地区瓜类尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum Schl.对咪鲜胺的抗药性现状及抗药突变株的生物学性状,采用菌丝生长速率法,分别测定了采自北京、山东、河北等地未使用过咪鲜胺的112株瓜类尖孢镰刀菌对咪鲜胺的敏感性,并通过药剂驯化的方法获得尖孢镰刀菌抗咪鲜胺突变株。结果表明:咪鲜胺对112株瓜类尖孢镰刀菌的平均EC50值为（0.030 1±0.030 4）μg/mL,菌株频率呈连续单峰曲线分布,未发现敏感性明显下降的亚群体,因此,可将该EC50值作为瓜类尖孢镰刀菌对咪鲜胺的敏感基线。药剂驯化共获得7株抗咪鲜胺突变株,其抗性倍数介于6.2~26.8之间;突变株在菌丝生长速率、菌丝干重和致病力等方面均明显低于亲本菌株,差异显著;仅突变株HG13052701-R1的抗药性可以稳定遗传,其他6株抗咪鲜胺突变株的抗药性均不能稳定遗传。室内交互抗性测定结果表明,咪鲜胺仅与戊唑醇之间有交互抗性,与多菌灵和齅霉灵之间均无交互抗性关系。研究表明,瓜类尖孢镰刀菌在药剂选择压下可以形成抗咪鲜胺群体,具有低等抗药性风险。     

SO2对灰霉葡萄孢和交链孢的抑制作用

灰霉葡萄孢（Ｂｏｔｒｙｔｉｓｃｉｎｅｒｅａ）和交链孢（Ａｌｔｅｒａｒｉａｓｐ．）是鲜食葡萄采后贮运中的主要病原菌ＳＯ２能有效地控制它们引起的鲜食葡萄的采后腐烂,作者分别设定５０μｌ／Ｌ．１ｈ,１００μｌ／Ｌ．１ｈ,２００μｌ／Ｌ．０．５ｈ,２００μ／Ｌ．１ｈ和对照５个处理,研究了不同剂量的ＳＯ２对灰霉葡萄孢和交链孢的孢子,菌丝及所引起的腐烂的抑制作用,研究了不同剂量的ＳＯ２对灰霉葡萄孢和交链孢的孢     

稻曲病菌侵染对水稻小穗发育的影响及H_2O_2的变化趋势

稻曲病是由稻绿核菌(Ustilaginoidea virens)侵染引起的水稻穗部病害,在全世界不同稻作区均有发生,并在近年呈加重趋势。本研究通过水稻穗期接种后的显微观察及H_2O_2检测,分析了稻曲病菌侵染引起的小穗结构变化及侵染过程中H_2O_2变化趋势。结果表明,稻曲病菌侵染会导致水稻花粉粒畸形、雌蕊发育受抑制、小穗无法正常扬花授粉,抑制谷粒的正常形成,造成稻曲球及白色秕粒的产生。受侵染小穗的H_2O_2含量显著高于对照,其中处于突破颖壳期的受侵染小穗H_2O_2含量是对照的7倍;形成白色秕粒的小穗H_2O_2含量是对照的11倍;二氨基联苯胺染色结果显示,形成稻曲球的小穗中,在受侵染小穗的花药基部、花药顶端、浆片等部位颜色变深,形成H_2O_2富集区;形成白色秕粒的小穗中,H_2O_2富集的特征更为明显,富集区域与病菌在小穗内的侵染途径密切相关。     

葡萄应答霜霉病过程中多磷酸肌醇激酶基因与过氧化氢的作用机制

以对霜霉病不同抗性的葡萄品种左优红和霞多丽为材料,利用分子生物学和植物生理学试验手段,结合药理学试验,探讨葡萄在应答霜霉病过程中葡萄多磷酸肌醇激酶基因（VvIPK2）和H2O2的作用机制。接种霜霉病菌后15 h葡萄叶片VvIPK2表达量是正常水平的12倍,接种后3 hH2O2含量达最大值,同时苯丙氨酸解氨酶和几丁质酶活性升高;多磷酸肌醇激酶（IPK2）抑制剂、外源H2O2及H2O2清除剂均能改变霜霉病菌所引起的抗性葡萄品种左优红叶片PAL和几丁质酶活性的变化,同时可以影响不同抗性品种叶片的感病情况;IPK2抑制剂对葡萄霜霉病菌引起的H2O2水平变化没有影响;清除H2O2可减弱葡萄霜霉病菌对VvIPK2表达量的诱导效应。研究表明H2O2位于IPK2的上游,通过调控PAL和几丁质酶活性参与葡萄应答霜霉病过程。     

水稻MKK10-2激酶可诱导烟草细胞死亡和活性氧产生

MAP kinase级联信号在植物生长发育、抗病和抗逆等进程中发挥重要作用。水稻OsMKK10-2基因受脱落酸、干旱、盐和冷胁迫诱导表达。酵母双杂和pull down实验表明OsMKK10-2能与下游激酶OsMPK1、OsMPK5和OsMPK6相互作用,且OsMKK10-2N端MPK停泊位点决定了其与下游MPKs间的互作。OsMKK10-2:GFP融合蛋白定位在烟草细胞质和细胞核。不过,较长时间表达OsMKK10-2可以导致烟草细胞死亡和ROS产生,且依赖于其N端的MPK停泊位点。研究结果为进一步揭示OsMKK10-2的生物学功能奠定了基础。     

Bentazone and bromoxynil induce H and H2O2 accumulation, and inhibit photosynthetic O2 evolution in Synechococcouselongatus PCC7942

Using a unicellular cyanobacterium, Synechococcouselongatus PCC7942, we have shown that cytosolic acidification, O₂⁻; H₂O₂ production and photosystem II-inactivation are the causes of cell death from bentazone/bromoxynil incubations. Butyric acid evoked solely pH lowering response and yet inhibited PS II activity indicating that herbicide-caused acidification is sufficient to kill the cyanobacterial cells, but other factors like excess H₂O₂ production due to an imbalance in the peroxide sequestration machinery might be contributory. While the activities of superoxide dismutase and pyrogallol peroxidase increased consequent to herbicide incubations and displayed oligomeric states with mobility shift, catalase and glutathione peroxidase though present remained insensitive.     

脊萤叶甲的生物学特性及其防治

脊萤叶甲Theone silphoides (Dalman)是新疆荒漠草地的重要害虫。近年在新疆局部地区受害严重,并有逐年加重的趋势。该虫发生严重的地区蒿草叶片被食光,影响了畜牧业发展。蒿类植物在草地牧草产量的构成中比例大,在营养价值上如蛋白质含量超过禾本科牧草,特别是粗脂肪含量高于禾本科、豆科草类0.5～1倍,是家畜春季催乳、秋季抓瞟、冬季保膘的优良牧草;它还能抗旱、抗风沙,具有较强的固沙能力。有关脊萤叶甲的研究在国内外均未见报道。作者于1991～1995年进行了调查和防治试验,结果如下。     

蜡质芽孢杆菌R2防治水稻纹枯病研究

 选用我们从稻株上分离筛选的能促进水稻生长发育的蜡质芽孢杆菌(Bacillus cereus)R₂号菌株,分别在室内和田间测定其对稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani AG-1)的拮抗性和防病效果。在PDBA平板上,R₂对病菌菌丝生长的抑菌带可达10.9mm宽。在WA平板上可抑制病菌菌核萌发,R₂菌量为4×10⁶、2×10⁷、2×10⁹cfu/ml时,病菌菌核萌发菌丝指数分别较对照降低28.2%、39.7%、56.4%。用菌量为2×10⁹cfu/ml的R₂菌液处理人工接种病菌的离体稻叶,对纹枯病病斑扩展的控制效果为55.5%,随R₂菌量降低,其控制效果相应递减。用菌量为4×10⁷cfu/ml的R₂菌液喷施田间人工接种病菌的稻株,对纹枯病的防效可达43.8%。     

戊唑醇和三唑醇种衣剂对小麦幼苗生长发育的影响

三唑醇、戊唑醇用于小麦种子处理,当包衣浓度分别高于０．３ｇ ａｉ／ｋｇ种子和０．６ｇ ａｉ／ｋｇ种子时,对小麦的发芽及出苗都有较为严重的影响;对小麦的生长发育有明显的影响主要表现为株高降低,根长、胚芽鞘高度、第１片真叶长减小,而分根数增加,第１片真叶宽增大;除包衣用量大于１．２ｇ ａｉ／ｋｇ种子百株鲜重明显降低外,其余与空白对照无明显差异。相同用量下,戊唑醇对小麦幼苗生长发育的抑制作用要比三唑醇的     

转基因甘薯旱后复水的修复机制和叶片喷施H2O2的效果

对转入铜/锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn SOD)和抗坏血酸氧化酶(APX)基因的甘薯和非转基因甘薯进行PEG胁迫处理(PE组)和H2O2处理后再胁迫处理(PE+组),对比胁迫后两个处理组及其对照组的抗氧化酶活性、MDA与H2O2的变化情况.得出胁迫和复水前期,转基因植株抗氧化酶活性和光合速率高于非转基因植株,MDA和H...     

Co-stressors chilling and high light increase photooxidative stress in diuron-treated red alga Kappaphycus alvarezii but with lower involvement of H2O2

Diuron is one of the most commonly found N-phenylurea herbicides in marine/estuarine waters that promotes toxic effects by inhibiting photosynthesis and affecting the production of reactive oxygen species (ROS) in autotrophs. Since photo- and thermoacclimation are also ROS-mediated processes, this work evaluates a hypothetical additive effect of high light (HL) and chilling (12 °C) on 50 nM diuron toxicity to the highly-photosynthetically active apices of the red alga Kappaphycus alvarezii. Additive inhibition of photosynthesis was mainly evidenced by significant decreases of quantum yield of photosystem II and electron transfer rates upon co-stressors exposure to diuron-treated algae. Under extreme 12 °C/HL/diuron conditions, unexpected lower correlations between H₂O₂ concentrations in seawater and radical-sensitive protein thiols were concomitantly measured with the highest indexes of photoinhibition (parameter β). Altogether, these data support the hypothesis that co-stressors chilling/HL additively inhibit photosynthesis in diuron-exposed K. alvarezii but with less involvement of H₂O₂ in injury effects than with only chilling or HL.     

基于Fe3O4/ZrO2磁性纳米颗粒选择性富集-电感耦合等离子体发射光谱法检测蔬菜中痕量有机磷研究

研究了磁性纳米微粒Fe3O4(核)/ZrO2(壳)(以Fe3O4@ZrO2表示)对有机磷(OPs)农药的选择性吸附性能。利用其富集水相中的OPs并在外加磁场下分离,采用氢氧化钠洗脱,建立了采用纳米Fe3O4@ZrO2磁性分离富集-电感耦合等离子体发射光谱(ICP-AES)法测定蔬菜中痕量OPs的新方法。以甲胺磷为OPs模拟物,考察了Fe3O4@ZrO2的用量、吸附时间、洗脱剂种类、浓度和共存物质等因素对OPs分离富集效率的影响。结果表明:在pH =7.0时,选用0.5 g Fe3O4@ZrO2富集200 mL含0.1 mg/L的甲胺磷水样,振荡2 h后,甲胺磷可被Fe3O4@ZrO2完全富集,经10 mL 1 mol/L的氢氧化钠洗脱1 h,采用ICP-AES法测定,对OPs的检测限(3 σ )可达4.4 μ g/L。样品添加回收率在99% ~115%之间,相对标准偏差为3.5% ~7.8%(n=4)。由于用ICP-AES法测定蔬菜中的OPs时,蔬菜中的蛋白、色素、纤维等基质几乎无干扰,因而省去了用有机溶剂萃取的过程。由于Fe3O4@ZrO2对OPs的富集倍数可达20~100倍,使得该方法的检测限低于常规气相色谱法,且可用于热稳定性差、无紫外吸收的OPs分析。该方法简单准确、精密度好,可以满足蔬菜表面痕量OPs残留的分离和测定。