农杆菌介导的葡萄风信子愈伤组织遗传转化体系的优化

葡萄风信子(Muscari spp.)为百合科葡萄风信子属植物的总称，该属植物多具有稀少的正蓝色花色，是研究单子叶植物花青苷合成机理的模式材料。为开发一种高效的葡萄风信子遗传转化体系，本试验以葡萄风信子常见种亚美尼亚(M.armeniacum)、栽培品种‘黑眼睛’(M.aucheri‘Dark Eyes’)为材料，用叶片和花蕾分别诱导获得愈伤组织，对愈伤组织的潮霉素敏感性进行测试，对根癌农杆菌介导的愈伤组织遗传转化体系进行优化。试验结果表明：葡萄风信子亚美尼亚和‘黑眼睛’愈伤组织的潮霉素临界浓度分别为150 mg·L^-1和120 mg·L^-1。GUS染色结果显示不同基因型、不同农杆菌菌株及不同功率超声处理的愈伤组织瞬时转化效率差异不显著。而液体培养的花源愈伤组织能获得更高的瞬时转化效率，为葡萄风信子遗传转化的最优受体。其最高瞬时转化效率为98.73%。试验共获得了209块抗性愈伤组织，经PCR和RT-PCR检测，阳性率可达90%。本研究为在葡萄风信子中快速有效的开展基因功能研究奠定了技术基础。     

桑树花青素还原酶基因MaANR的克隆和表达分析

花青素还原酶(ANR)是原花青素单体生物合成过程中的关键酶之一,对花青素在植物组织中的积累有重要调控作用。通过检索川桑(Morus notabilis)基因组数据库鉴定获得了ANR候选基因序列,并以人工四倍体果桑品种嘉陵30号的桑椹c DNA为模板克隆了ANR基因(Ma ANR),其CDS序列长1 014 bp,编码337个氨基酸残基。聚类分析结果表明Ma ANR与草莓、西洋梨的花青素还原酶Fa ANR和Pc ANR的亲缘关系较近。实时荧光定量PCR检测Ma ANR在桑椹中的表达量最高,在桑树其他部位和组织中的表达量极低,在茎中几乎检测不到表达;Ma ANR在生长发育早期的桑椹中表达量较低,在快速生长过程的桑椹中高量表达,而在花青素大量合成的桑椹成熟时期表达量极低。初步推测Ma ANR可能是桑椹中花青素积累的重要负调控因子。     

几个主要砂梨品种SUC基因的克隆及表达分析

蔗糖转运蛋白（sucrose/H +cotransporter或sucrose transporters,SUC）在调节同化产物的分配过程中具有重要作用。为研究梨果实发育成熟过程中关键的蔗糖转运蛋白及其生理功能,以重庆市主栽3个砂梨品种‘翠冠’(Pyrus pyrifolia Nakai ‘Cuiguan’)、‘黄花’(Pyrus pyrifolia Nakai‘Huanghua’)及‘圆黄’(Pyrus pyrifolia (Burm.f.)Nakai cv.‘Wonhuwang’)为试材,通过转录组测序获取高表达的SUC基因。随后采用进化聚类的方法,对其生理功能进行预测。结果表明,PrSUC2, PrSUC3, PrSUC4基因在三个梨栽培品种的果实中都有表达,而PrSUC1只在‘黄花’果实中表达。进一步的qPCR分析表明,这4个基因在‘黄花’的枝梢、叶片、花中同样具有一个较高的表达。进化聚类分析发现,PrSUC3和PrSUC4能够与拟南芥中Clade I/SUT1蛋白聚类,暗示它们更有可能参与了梨果实和其他组织中蔗糖的转运。     

葡萄冬芽主芽坏死情况调查与解剖分析

[目的]探索葡萄冬芽主芽坏死的规律,分析影响主芽坏死的可能原因,为研究降低冬芽主芽坏死栽培技术措施提供理论依据。[方法]利用解剖观测的方式对湖南省、山东省等种植的‘红地球’冬芽进行对比观测;对湖南省种植的7种欧亚种葡萄(‘美人指’、‘香妃’、‘红罗莎里奥’、‘爱神玫瑰’、‘白罗莎里奥’、‘甲斐乙女’、‘红地球’),4种欧美种葡萄(‘摩尔多瓦’、‘金手指’、‘阳光玫瑰’、‘夏黑’)共计11个葡萄品种冬芽主芽坏死率进行统计学分析;对葡萄的萌芽期、摘心期、盛花期、第一次膨大期、浆果生长期、浆果成熟期、采果期、休眠期8个不同时期的冬芽主芽坏死情况进行追踪解剖观测。[结果](1)湖南省、山东省‘红地球’葡萄冬芽均存在主芽坏死现象,且湖南地区更严重。(2)湖南省主栽的11个葡萄品种均出现了主芽坏死现象,不同品种之间具有显著性差异(P>0.05),且欧亚种坏死程度显著大于欧美品种(P>0.05)。(3)主芽坏死高峰期为第一次膨大期和浆果成熟期,且主芽坏死一经形成不可逆转。(4)结果枝较营养枝主芽坏死率高,且各品种主芽坏死率较高的节位均集中在第7、8节位。[结论]第一次膨大期和浆果成熟期主芽坏死出现高峰期,初步推断是由于这两个时期树体营养急需造成主芽坏死严重,品种基因型、品种属性、树体营养不足、较高的赤霉素含量均可能是影响葡萄冬芽主芽坏死的主要因素。     

蒙农杂种冰草AcdMYB1基因克隆及表达分析

‘蒙农杂种’冰草(Agropyron cristatum×A.desertorum‘Hycrest-Mengnong’)具有干草产量高，适口性好，抗逆性强的特点，是中国北方干旱地区建立人工草地的适宜草种。本研究利用同源克隆方法从‘蒙农杂种’冰草中克隆得到的1个MYB类转录因子基因(命名为AcdMYB1),对其进行了生物信息学分析和表达分析。结果表明：该基因cDNA序列长度为1 161 bp,包含完整开放阅读框(ORF)为969 bp,编码322个氨基酸，具有MYB转录因子的保守结构域。AcdMYB1与小麦族的山羊草、普通小麦、野生二粒小麦的同类基因亲缘关系最近，序列一致性均在90%以上。组织表达中AcdMYB1基因在穗中的表达量最高，其次为叶、根，茎中表达量最低；在模拟自然干旱胁迫下，能够显著降低AcdMYB1的表达水平。烟草亚细胞定位显示，该蛋白定位于细胞核。本研究为进一步探索‘蒙农杂种’冰草AcdMYB1基因及MYB转录因子家族提供了科学依据。     

行内生草对葡萄果实品质的影响

以‘贝达’砧‘巨峰’葡萄为试材,研究了行内生草对‘巨峰’葡萄果实品质的影响。连续3年测定结果表明：行内生草略微增加了可溶性固形物含量,对葡萄单粒重和可滴定酸的影响不大;葡萄果皮花青苷含量表现出了较大的差异性,但不同年份间没有明显的一致性,说明行内生草可能不是引起这种差异的决定性因素。行内生草并不显著地影响葡萄香气物质总量,但影响了香气物质比例,行内种紫花苜蓿提高了酯类物质比例,降低了醛类物质比例,而行内种黑麦草和自然生草降低了酯类物质比例,提高了醛类物质比例。     

不同栽培架式不同品种葡萄一年生植株冬芽萌发和成花情况调查

【目的】：探明栽培于广州的一年生\"V\"型架四个葡萄品种(‘夏黑’、‘阳光玫瑰’、‘温克’和‘东方之星’）和平棚架两个品种（‘夏黑’和‘阳光玫瑰’）春季萌芽和成花规律。【方法】落叶后2周完成冬剪。1周后,用3%单氰胺处理一级枝和主蔓上的冬芽,主蔓一半的冬芽的进行刻伤处理。6周后,全园调查冬芽的萌发和成花情况,同时记录芽所在节位的粗度。【结果分析】‘东方之星’成花率最高,‘阳光玫瑰’和‘温克’次之,‘夏黑’成花率最低;刻伤处理可提高冬芽萌发率;粗度在0.7-1.5cm的结果母枝芽萌发率和成花率相对较高。一级枝的冬芽萌发和成花率均高于主蔓;而相同品种的\"V\"型架萌发时间普遍早于平棚。【结论】须适度控制营养梢的生长,使其成为粗度适宜的结果母枝,可利用刻伤处理促进冬芽萌发,不同栽培架式和品种冬芽萌发时间有差异,掌握这些物候特点对指导广东品种选择和生产技术具有积极意义。     

3个无核鲜食葡萄品种在福建古田的引种表现

2014~2017年连续4年对引进栽培无核鲜食葡萄品种‘无核翠宝’、‘爱神玫瑰’、‘丽红宝’开展区域试验观察。结果表明：3个无核鲜食葡萄品种在福建古田综合性状表现优异：早结丰产、无核香味、抗病耐贮、适应性强,初步认定适宜在福建葡萄种植区域内发展。     

杂花苜蓿叶绿体基因组特征及系统发育分析

本研究以‘草原3号’杂花苜蓿(Medicago varia‘Caoyuan No.3’)为材料，采用第二代高通量测序技术，对叶绿体基因组序列进行分析、组装及注释，以探究杂花苜蓿在系统发育中的位置及在分子水平上与其近缘物种的关系。结果表明：杂花苜蓿绿体基因组全长125 317 bp,为典型四分体结构，不存在IR区缺失的情况，GC含量为33.87%。叶绿体基因组共编码106个基因，其中蛋白质编码基因54个，涉及36 498个密码子。3种不同类型的88个SSR位点分布不均衡，在LSC,SSC,IR区域的SSR数量各自为79,7和2个。对苜蓿属7个植物进行共线性分析发现其重排现象严重。系统发育分析发现杂花苜蓿与紫花苜蓿的亲缘关系最近。本研究可为苜蓿属植物遗传变异、特异基因挖掘以及品种选育改良等研究提供参考。     

不同授粉品种对‘灿烂’兔眼蓝莓着果率与果实性状的影响

以‘天赐五号’、‘天赐八号’、‘蓝金’和‘奥尼尔’等4个蓝莓品种作为授粉品种,对‘灿烂’兔眼蓝莓进行异花授粉,以‘灿烂’兔眼蓝莓自花授粉为对照,研究了不同授粉品种对着果率、果实品质和果实外观性状的影响,以期为‘灿烂’兔眼蓝莓生产栽培选择适宜授粉树提供科学依据。研究结果表明：4个授粉品种与‘灿烂’间都具良好的亲和性,对着果率、可溶性固形物含量、花色苷、总酸含量、单果重、纵径、横径、果形指数、萼洼、果蒂、萼片、果形和果梗分离等性状均有显著影响。虽然‘天赐八号’授粉后着果率显著低于‘天赐五号’、‘蓝金’,但其着果率仍可以达到70%以上,同时其可溶性固形物含量、花色苷、总酸含量、单果重、纵径、横径、果形指数等亦显著优于其他授粉品种,这表明‘天赐八号’为‘灿烂’最佳授粉搭配品种。     

猪TRIM3基因克隆、生物信息学及组织表达分析

【目的】克隆大白猪三基序结合蛋白3（tripartite motif-containing 3,TRIM3）基因,并对其进行生物信息学和组织表达分析。【方法】采用PCR技术扩增并克隆大白猪TRIM3基因CDS全长序列,连接pMD18-T载体并转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,通过蓝白斑筛选阳性克隆,菌液PCR鉴定后测序,与不同物种TRIM3基因序列比对并构建系统进化树;应用多种在线软件对其编码蛋白进行生物信息学分析,并利用实时荧光定量PCR方法检测TRIM3基因在大白猪不同组织中的相对表达量。【结果】大白猪TRIM3基因CDS序列全长2 235 bp,编码744个氨基酸。相似性和遗传进化分析结果显示,大白猪与野猪的相似性最高,达99.7%,与鸭的相似性最低,为75.1%;大白猪TRIM3基因与野猪先聚为一类,与牛和山羊亲缘关系较近。生物信息学分析显示,大白猪TRIM3蛋白分子质量为80.58 ku,理论等电点（pI）为8.32,不稳定系数为40.85,为亲水性蛋白,但不是分泌蛋白,无糖基化位点,预测其有60个磷酸化位点,主要存在于细胞质内;在TRIM3蛋白二级结构中以无规则卷曲为主,占41.67%,三级结构模型预测结果与二级结构一致。组织表达分析表明,大白猪TRIM3基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉、气管、结肠中均有分布,肺脏中表达量最多且显著高于其他组织（P＜0.05）。【结论】本研究成功克隆大白猪TRIM3基因CDS全长序列,并进行了生物信息学和组织表达分析,为进一步研究大白猪TRIM3蛋白的免疫学功能提供理论依据,对探究大白猪TRIM3基因参与先天性免疫和抗病毒感染分子机制具有重要意义。     

山羊生长分化因子9基因FecTT突变检测

本研究采用PCR-RFLP方法检测生长分化因子9(growth differentiation factor 9, GDF9)基因FecTT突变在济宁青山羊、贵州白山羊、大足黑山羊、陕南白山羊、古蔺马羊、马头山羊、波尔山羊、成都麻羊、萨能奶山羊、文登奶山羊、板角山羊、金堂黑山羊、关中奶山羊、川东白山羊、安哥拉山羊、辽宁绒山羊、内蒙古绒山羊等17个山羊品种中的分布。结果表明,在17个山羊品种中都未检测到FecTT突变,提示,GDF9基因影响Thoka绵羊高繁殖力的FecTT突变对以上17个山羊品种的繁殖力均没有显著影响。     

Association of endogenous viral genes with quantitative traits in chickens selected for high egg production and susceptibility or resistance to Marek's disease

1. The association of endogenous viral ( ev ) genes with quantitative traits in 2 genetically distinct sets of White Leghorn strains were investigated. Strain S had been selected for susceptibility to Marek's disease (MD) whereas strain K had been selected for resistance to MD and high egg production and egg weight. 2. In all, 8 ev genes were typed. Ev 10, ev 19 and ' newB ' occurred exclusively in strain S, ' newA ' occurred only in strain K, and ev1 , ev3 , ev6 and ev8 occurred in both strains. 3. Whereas ev6 and ev8 were associated with reduction in egg production rate in strain S, in strain K, the presence of ev3 was associated with increased group specific antigen. 4. The genetic background of the chicken strain may play a role in the way certain ev genes affect traits. 5. It was thought that the position of ev genes on the chromosome may be important and their association with traits of economic importance make them potential genetic markers for uncovering quantitative trait loci.     

Lupoid Dermatosis in Five German Short-haired Pointers

Résumé— La dermatose lupoïde du Braque Allemand doit être considéré comme une génodermatose bien que le nombre de cas décrit soit faible. Cette maladie concerne de jeunes chiens. Aucune prédisposition sexuelle n'est notée. Pour l'instant, cette maladie n'a été observée que chez le Pointer. Le diagnostic repose sur l'examen clinique et l'examen histopathologique des biopsies cutanées. Le pronostic est généralement réservé, mais l'utilisation des acides gras et un traitement symptomatique peuvent être préconisés. [Vroom, M.W., Theaker, M.J., Rest, J.R., White, S.D. Lupoid dermatosis in five German short-haired pointers (Dermatose lupoïde chez cinq Braques Allemands). Resumen— La dermatosis lupoide del Pointer Alemán de pelo corto podria ser un genodermatosis, aunque el número de casos descritos es bajo. Esta enfermedad se presenta en perros jóvenes. No hay predisposición por sexo. Hasta el momento sólo se ha descrito como tal en el Pointer Alemán de pelo corto. El diagnóstico se realiza mediante examen clinico e histopatológico de biopsias cutáneas. El pronóstico es grave, pero se recomienda un tratamiento sintomático y con ácidos grasos. [Vroom, M.W., Theaker, M.J., Rest, J.R., White, S.D. Lupoid dermatosis in five German short-haired pointers (Dermatosis lupoide en cinco perros Pointer alemán de pelo corto). Abstract— Lupoid dermatosis of the German short-haired pointer may be a genodermatosis, although the number of cases reported is low. The disease occurs in young dogs. There is no sex predisposition. Until now the disease has only been consistently described in the German short-haired pointer. Diagnosis can be made by clinical examination together with histopathological examination of skin biopsies. The prognosis is usually poor, but fatty acid and symptomatic treatment should be attempted.     

黔北麻羊UCP2基因组织表达及其多态性与生长性状的关联分析

本研究旨在探讨黔北麻羊解耦联蛋白2（uncoupling protein 2,UCP2）基因的遗传多态性及其与生长性状的关联性,以期为黔北麻羊的育种改良提供理论依据。以200头6月龄黔北麻羊为研究对象,采用直接测序法检测黔北麻羊UCP2基因的SNP位点,并将其与黔北麻羊生长性状进行关联分析;实时荧光定量PCR检测UCP2基因在黔北麻羊不同组织中的表达水平。结果显示,UCP2基因存在4个SNPs位点,分别为：g.29614172 A>G、g.29619320 G>T、g.29619721 C>T和g.29620037 A>G,均产生3种基因型,其中g.29619320 G>T和g.29620037 A>G为错义突变,g.29619320 G>T突变导致甘氨酸（Gly）变为半胱氨酸（Cys）,g.29620037 A>G突变导致苏氨酸（Thr）突变为丙氨酸（Ala）。多态信息含量显示,4个SNPs位点均表现为中度多态（0.25 < PIC < 0.5）。χ²检验结果表明,g.29614172 A>G、g.29619721 C>T和g.29620037 A>G突变位点在黔北麻羊群体中均处于Hardy-Weinberg平衡状态（P>0.05）,g.29619320 G>T突变位点极显著偏离了Hardy-Weinberg平衡状态（P<0.01）。连锁不平衡分析显示,g.29619320 G>T和g.29619721 C>T位点具有强连锁效应。实时荧光定量PCR结果表明,UCP2基因在黔北麻羊各组织中均有不同程度的表达,其在肺脏中的表达量最高,其次是脾脏、肝脏和心脏,其余组织表达量较低。关联性分析结果表明,g.29614172 A>G位点AG和GG基因型个体体重、体斜长、胸宽、胸深、胸围及管围均显著高于AA基因型,g.29619320 G>T位点TT基因型个体胸深、胸围及管围均显著高于GT和GG基因型,g.29619721 C>T位点CT基因型个体体高显著高于CC和TT基因型,g.29620037 A>G位点GG基因型个体体重、胸深及管围均显著高于AG和AA基因型个体（P<0.05）。本试验结果初步揭示UCP2基因对黔北麻羊部分生长性状有显著影响,发现的4个SNPs位点可作为黔北麻羊经济性状选择的遗传标记。     

白三叶化感作用相关基因CHS的克隆及生物信息学分析

白三叶(Trifolum repens)化感物质中含有多种化学成份,主要含有酚类与萜类及黄酮类物质,而查尔酮合成酶(CHS)是类黄酮途径的第一限速步骤,对于黄酮类物质的合成至关重要。本试验从白三叶中克隆了CHS基因cDNA序列,并对白三叶CHS基因进行了生物信息学分析。结果表明克隆到的CHS基因全长cDNA序列1473bp,其中包含了1170bp的开放阅读框(ORF),起始密码子为ATG,终止密码子为TAA,103bp的5′UTR和200bp 3′UTR编码389氨基酸。且白三叶的CHS基因与同属于豆科的苜蓿CHS、大豆CHS、鹰嘴豆CHS和豌豆CHS亲缘关系最近,处于同一分支,这与植物分类相一致。     

不同树形对夏黑葡萄生长及果实品质的影响

本试验以3年生夏黑葡萄为材料,研究不同的整形方式对果实生长发育、果实品质和着色程度的影响。结果表明：不同整形对夏黑葡萄生长及果实品质存在差别,H型整形能显著提高果实大小、单果重和可溶性固形物含量,提高花青苷含量,促进果实着色,降低可滴定酸含量。其中,H型(包括HB,HL)整形的可溶性固形物含量分别比T型的提高了3.18%和0.6%,比V型的提高了10.48%和7.71%;果皮中花青苷含量的大小依次为HB〉HL〉T〉V。     

Study on the Expression Profiles of A-FABP Gene in 5 Goat Breeds

In order to understand the regularities of A-FABP gene expression in Guizhou native goats,and to establish the theoretical basis of molecular marker assisted selection for meat quality traits,β-actin gene was used as control,expression levels of A-FABP gene in livers,kidneys,hearts,lungs,longissimus muscle,semimembranosus muscle and subcutaneous fat of Qiandongnan small Xiang goat,Guizhou White goat,Guizhou Black goat,Qianbei Ma goat and Nanjiang Yellow goat were detected by Real-time fluorescence quantitative PCR.The results showed that A-FABP gene was expressed in all 7 tissues of 5 goat breeds,and the expression levels of A-FABP gene mRNA were all high in subcutaneous fat of 5 goat breeds;In subcutaneous fat,which was the main tissue of A-FABP gene expression in Guizhou native goats,and in longissimus muscle and semimembranosus muscle,which were directly associated with meat production property,A-FABP gene mRNA levels were all high in Qiandongnan small Xiang goat.The results suggested that the tissue distribution patterns of A-FABP gene mRNA in Guizhou native goat breeds were similar to each other.The excellent meat quality of Qiandongnan small Xiang goat might be related with the high expression levels of A-FABP gene mRNA in it's subcutaneous fat,longissimus muscle and semimembranosus muscle.     

5种山羊脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白基因的表达谱研究

为弄清贵州地方山羊脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白(adipocyte fatty acid-binding protein,A-FABP)基因mRNA的表达规律,奠定肉质性状分子标记辅助选择的理论基础,试验以β-actin基因为内参,应用实时荧光定量PCR技术检测黔东南小香羊、贵州白山羊、贵州黑山羊、黔北麻羊和南江黄羊共5个山羊品种心脏、肝脏、肺脏、肾脏、背最长肌、半膜肌及皮下脂肪7个组织器官中A-FABP基因的表达.结果表明,5个山羊品种7个组织中都有A-FABP基因表达,且5个品种中皮下脂肪A-FABP基因的表达水平都较高;在贵州地方山羊A-FABP基因表达的最主要组织--皮下脂肪,以及在与产肉性能直接相关的组织--背最长肌和半膜肌中,黔东南小香羊A-FABP基因mRNA水平都较高.结果提示,贵州地方山羊A-FABP基因mRNA的组织分布模式相似,黔东南小香羊的优良肉质特性或许与其皮下脂肪、背最长肌和半膜肌中A-FABP基因的高表达有关.     

布鲁氏菌BPE159基因缺失株的构建及BPE159蛋白对细胞自噬因子表达的影响

【目的】构建布鲁氏菌BPE159基因缺失株,研究缺失株体外生长变化特征及其在宿主细胞中的存活能力,探究布鲁氏菌感染期间分泌蛋白BPE159对自噬因子表达的影响。【方法】同源重组方法构建布鲁氏菌BPE159基因重组质粒,电转化布鲁氏菌S2308感受态细胞构建BPE159基因缺失株S2308ΔBPE159。PCR扩增BPE159基因,连接转化构建pBBR1MCS-4-BPE159载体,提取质粒进行电转化,构建BPE159基因回补株S2308ΔBPE159-C。琼脂糖凝胶电泳检测缺失株和回补株遗传稳定性。构建布鲁氏菌感染小鼠巨噬细胞RAW264.7模型,实时荧光定量PCR检测布鲁氏菌侵染后自噬细胞因子ATG5、Beclin1、LC3a和LC3b基因表达水平。以S2308、S2308ΔBPE159和S2308ΔBPE159-C株侵染小鼠巨噬细胞,收集细胞总RNA,实时荧光定量PCR检测BPE159基因缺失对布鲁氏菌侵染后自噬细胞因子表达水平的影响。在相同起始浓度下培养S2308、S2308ΔBPE159及S2308ΔBPE159-C株,观察细菌生长变化趋势;评价S2308ΔBPE159株在不同...