不同剂型新城疫-禽流感二联灭活疫苗免疫SPF鸡后抗体水平对比试验

不同剂型的佐剂对疫苗的免疫效果有较大的影响,本试验旨在对比不同剂型佐剂的新城疫-禽流感(简称"新-流")二联灭活疫苗的免疫效果,从而为生产上选择最佳剂型佐剂应用于新城疫-禽流流感二联灭活疫苗提供依据。分别将油包水型、水包油型、水包油包水型佐剂与新城疫及禽流感灭活抗原乳化成不同剂型的新城疫-禽流感(H9亚型,HP株)二联灭活疫苗,将这三种不同剂型的新城疫-禽流感(H9亚型,HP株)二联灭活疫苗分别免疫一组7日龄SPF鸡。每羽颈部皮下注射0.2 m L,同时设一组未免7日龄SPF鸡作为对照组,各免疫组与对照组SPF鸡于免疫组免后6、10、15、21、28、35 d进行采血,检测新城疫与禽流感抗体水平。结果表明:免疫油包水型疫苗组SPF鸡免疫后新城疫与禽流感抗体上升最快,在免后10、15、21、28、35 d的新城疫与禽流感抗体也最高,其次是免疫水包油包水型的,而免疫水包油型疫苗组的SPF鸡新城疫与禽流感抗体上升最慢,而且在免后10、15、21、28、35 d的新城疫与禽流感抗体也最低。此外,从各免疫组可以看出,在免后6 d时新城疫抗体已开始产生,在1log2以下,而禽流感抗体仍未产生。可见免疫新-流二联苗后,新城疫抗体比禽流感抗体更早产生,油包水型新-流二联苗的免后抗体高于水包油包水及水包油型,而且能持续刺激机体产生高水平抗体,更具优势。     

新-流二联灭活疫苗不同方法免疫后抗体水平检测

为探讨鸡新城疫-禽流感(H9N2 HP株)二联灭活疫苗与禽流感抗体不同组合方法免疫商品蛋鸡和商品肉鸡后抗体水平变化规律,试验分别采用A、B、C三种方法免疫商品蛋鸡与商品肉鸡各40羽,A免疫方法为只接种新-流二联灭活苗,B免疫方法为接种新-流二联灭活苗的同时注射禽流感抗体,C免疫方法为接种新-流二联灭活苗7 d后注射禽流感抗体,D组为空白对照组,各组均于免前及免后2d、6d、10d、14d、21d、28d、35d采血检测新城疫与禽流感抗体水平.结果发现,商品蛋鸡与商品肉鸡各免疫组,免后新城疫抗体均先开始下降,免后第10 d抗体开始上升,第14 d开始快速上升,第35 d达到最高,蛋鸡组最高达8log2,而肉鸡组最高达7log2.商品蛋鸡组中配合注射禽流感抗体免疫组,禽流感抗体先上升,然后下降,再继续上升,禽流感抗体保持较高的水平,不低于3log2.而未注射抗体组,禽流感抗体先下降,至第10 d下降至2log2以下,然后开始快速上升.而商品肉鸡各组禽流感抗体免后均开始下降,未注射抗体组,下降至第10 d后开始上升,注射抗体组免后第10 d时下降的幅度比未注射抗体组小,且下降至第15 d后才开始上升.说明商品蛋鸡免疫新-流二联灭活疫苗时配合注射禽流感抗体,短期内对机体禽流感抗体水平提升明显,而在商品肉鸡上配合注射流感抗体对机体禽流感抗体水平提升不明显.     

基于悬浮细胞制备的鸡新城疫-H9亚型禽流感二联灭活疫苗(La Sota株+BX13株)安全性和免疫产生期研究

为探讨悬浮细胞制备的鸡新城疫-H9亚型禽流感二联灭活疫苗(La Sota株+BX13株)(以下简称二联灭活疫苗)的安全性和免疫产生期，试验用新城疫病毒(NDV)La Sota株和H9亚型禽流感病毒(AIV)BX13株分别接种BHK-21和MDCK悬浮细胞，收获抗原液，制备二联灭活疫苗；采用1 mL/只的剂量接种21日龄SPF鸡进行二联灭活疫苗的安全性试验；以0.02、0.05、0.1、0.3、0.5 mL/只的剂量接种21日龄SPF鸡，免疫后7、14、21 d采血测定NDV HI和AIVHI抗体，并于免疫后21日龄攻毒进行免疫保护试验和免疫产生期试验。结果显示：二联灭活疫苗对SPF鸡安全，鸡只无不良反应，疫苗吸收良好；各剂量组免疫后抗体水平均逐渐升高，免疫后21 d NDV HI效价为6.1～8.5 log₂,AIV HI效价为7.5～11.2 log₂；免疫后21 d,0.02 mL/只剂量组对两种毒株的攻毒保护率均为9/10，其余剂量组均为10/10保护。研究表明，二联灭活疫苗对SPF鸡安全，以0.1 mL/只的剂量免疫SPF鸡21 d可...     

新流二联灭活疫苗与禽流感抗体不同组合免疫产蛋鸡、肉鸡后的抗体水平监测

为探讨鸡新城疫、禽流感(H9N2 HP株)二联灭活疫苗与禽流感抗体不同组合免疫商品蛋鸡与商品肉鸡后的抗体消长规律,试验选用商品蛋鸡与商品肉鸡各40只,商品蛋鸡随机分为A、B、C、D组,商品肉鸡随机分为E、F、G、H组,每组10只,A、E组鸡于7日龄颈部皮下注射新流二联灭活疫苗0.25 m L/只;B、F组鸡于7日龄颈部皮下注射新流二联灭活疫苗0.25 m L/只,同时肌肉注射0.5 m L/只的禽流感抗体;C、G组鸡于7日龄颈部皮下注射新流二联灭活疫苗0.25 m L/只,于免疫后第7天肌肉注射0.5 m L/只的禽流感抗体;D、H组鸡不免疫,作为阴性对照组。各组鸡均于免疫前及免疫后的第2,6,10,14,21,28,35天采血检测新城疫与禽流感抗体水平。结果表明:商品蛋鸡B、C组在免疫疫苗过程中配合注射禽流感抗体,禽流感的抗体效价呈先上升然后下降再上升的变化趋势,而A组未注射禽流感抗体的鸡,禽流感抗体效价则呈先下降然后上升的变化趋势;商品肉鸡各免疫组禽流感抗体效价均呈先下降然后上升的变化趋势,疫苗免疫后的前期注射禽流感抗体组的禽流感抗体效价相对高些。说明商品蛋鸡免疫新流二联灭活疫苗时配合注射禽流感抗体对机体的禽流感抗体短期提升效果较明显,可提高禽流感疫苗的免疫效果;而在商品肉鸡上配合注射禽流感抗体对机体的禽流感抗体提升效果不明显。     

不同纯化浓缩方法制备的新城疫疫苗对SPF鸡免疫效果的研究

为研究利用不同纯化浓缩方法制备的新城疫疫苗对SPF鸡免疫效果的影响,试验取经过纯化浓缩的新城疫抗原制备的疫苗、经离心未经浓缩的抗原制备成的疫苗和经浓缩未离心的抗原制备成的疫苗分别免疫30日龄SPF鸡,免疫后分别在第7d、14 d、21 d、28 d、35 d、45 d、70 d、90 d采集血清检测新城疫抗体水平。结果表明,经浓缩纯化后抗原制备的疫苗与其他两组抗原制备的疫苗相比,物理外观性状基本相同,浓缩纯化后抗原制备的疫苗其单位抗原含量更高、杂质更少,抗体水平更高,统计数据显示差异显著。因此研究得出,浓缩倍数(即抗原含量)越高,抗体水平越高,持续的时间也越长。     

肉鸡专用新流二联灭活疫苗的实验研究及临床使用效果研究

利用新型101佐剂制备肉鸡专用新流二联灭活疫苗,与进口白油佐剂新流二联灭活疫苗进行SPF鸡、AA肉鸡免疫比较,结果表明:试验一,SPF鸡10日龄免疫,免疫后7d,肉鸡专用新流组H9、ND抗体水平明显优于对照组;试验二,AA肉鸡7日龄免疫,肉鸡专用新流组禽流感H9抗体水平明显优于对照组,新城疫抗体对比不明显;试验三,AA肉鸡不同公司不同免疫日龄(1日龄、7日龄免疫)对比试验,23、30、37日龄检测新城疫、禽流感H9抗体,齐鲁肉鸡专用新流禽组流感H9抗体产生速度比同类产品及空白对照差异显著,1日龄免疫效果对比更明显;新城疫抗体对比差异不显著;试验四,田间7日龄免疫对比试验,26日龄抽检各舍抗体,齐鲁肉鸡专用新流H9抗体明显优于该公司新流,新城疫对比不明显。结果表明,齐鲁肉鸡专用新流二联灭活疫苗更适合于商品肉鸡免疫,1日龄免疫对比更明显。     

首免日龄、免疫间隔与疫苗组合对幼鸽新城疫血凝抑制抗体效价的影响

为了研究免疫方法对幼鸽新城疫血凝抑制(NDHI)抗体效价的影响,试验应用鸡新城疫活疫苗和鸡新城疫灭活疫苗对幼鸽首免日龄、免疫间隔和疫苗组合进行了研究。选择14,21,28日龄白羽王鸽健康幼鸽各32只随机分为试验Ⅰ～Ⅲ组,分别检测母源抗体效价后用鸡新城疫灭活疫苗进行首次免疫,间隔14 d后再次用鸡新城疫灭活疫苗进行第2次免疫,在首免后14天和二免后14天分别检测NDHI效价。选择21日龄白羽王鸽健康幼鸽192只分为试验1,2组,试验1组再均分为A_1组、B_1组、C_1组,试验2组再均分为A_2组、B_2组、C_2组,检测母源抗体效价后进行首次免疫。A_1组、B_1组、C_1组分别接种鸡新城疫活疫苗、鸡新城疫活疫苗+鸡新城疫灭活疫苗、鸡新城疫灭活疫苗,间隔7 d后用鸡新城疫灭活疫苗进行第2次免疫;A_2组、B_2组、C_2组分别接种鸡新城疫活疫苗、鸡新城疫活疫苗+鸡新城疫灭活疫苗、鸡新城疫灭活疫苗,间隔14 d后用鸡新城疫灭活疫苗进行第2次免疫。试验1,2组的各小组幼鸽在35日龄和49日龄时分别检测NDHI效价。结果表明:在首免日龄试验中,试验Ⅱ组、Ⅲ组幼鸽二免后14天NDHI抗体效价极显著高于试验Ⅰ组(P0.01)。在免疫间隔和疫苗组合试验中,试验1组、2组幼鸽49日龄NDHI抗体效价平均值为3.57 lb和7.25 lb,其中A_1组、B_1组、C_1组幼鸽49日龄抗体效价分别为4.88,2.92,2.92 lb,A_2组、B_2组、C_2组幼鸽49日龄抗体效价为4.50,8.53,8.72 lb。说明21日龄幼鸽首免鸡新城疫灭活疫苗、间隔14 d二免再次接种鸡新城疫灭活疫苗,可使49日龄幼鸽NDHI抗体效价达到8.72 lb。     

不同剂型禽流感疫苗对蛋鸡免疫效果的分析与讨论

使用重组禽流感病毒灭活疫苗和禽流感-新城疫重组二联活疫苗对鸡禽流感进行免疫攻毒试验,通过血凝和血凝抑制(HI)试验技术检测机体内两种不同剂型疫苗的禽流感抗体水平,从中选出最佳免疫效果的疫苗。结果显示,禽流感病毒灭活疫苗优于禽流感-新城疫重组二联活疫苗,建议在防控禽流感时使用前者。     

鸽群新城疫弱毒疫苗免疫效果跟踪报告

对40~45日龄鸽群实施新城疫低等毒力活疫苗（La系）免疫与新城疫低等毒力活疫苗（La系）加H5N2亚型禽流感灭活疫苗免疫效果的对比试验，首免后21 d进行二次免疫，并采用血凝抑制试验对80份血清进行ND和AIV H5血清抗体跟踪检测。结果表明，使用新城疫低等毒力活疫苗（La系）免疫的鸽群首免后7~21 d，ND免疫抗体随着日龄的增加而升高，但不能达到有效保护水平；首免后21 d进行二次免疫，跟踪监测到二免后35 d，ND免疫抗体呈波浪式上升；使用新城疫低等毒力活疫苗（La系）加H5N2亚型禽流感灭活疫苗免疫的鸽群抗体水平总体趋势基本相同，但ND免疫抗体水平波动较大，是否与同时免疫AIV H5有关则需要进一步试验探讨。     

放养肉鸡免疫两种新城疫-传染性支气管炎-禽流感(H9)三联疫苗的效果观察

为了探讨放养肉鸡免疫新城疫-传染性支气管炎-禽流感(H9)(新支流)三联疫苗2次即可出栏(115日龄)的可行性,试验选用市售的两种新支流三联灭活商品疫苗对广西地区主要地方品种三黄鸡进行对比免疫试验。鸡群在笼养阶段的10日龄、放养前的50日龄分别使用疫苗A(精制浓缩型油苗)、疫苗B(普通油苗)进行免疫,于首免前(10日龄)、30日龄、二免前(50日龄)、二免后一个月(80日龄)、出栏(115日龄)分别随机采血(30份/组)进行新城疫病毒(NDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、H9亚型禽流感病毒(H9 AIV)抗体的检测,并对两组鸡的成活率、出栏率和出栏均重进行统计。结果:疫苗A组的H9 AIV、NDV和IBV平均抗体水平均高于疫苗B组,疫苗A组的抗体稳定性优于疫苗B组;疫苗A组的成活率、出栏率和出栏均重均优于疫苗B组。试验表明:从鸡群抗体滴度来看,放养肉鸡只需免疫两次精致浓缩新支流三联疫苗即可维持到115日龄出栏。     

鸡新城疫-禽流感二联灭活疫苗免疫不同日龄商品肉鸡的效果比较

使用鸡新城疫-禽流感（H9N2 HP株）二联灭活疫苗分别免疫3、7、14日龄三组商品肉鸡各40羽,同时设一组空白对照组。各免疫组及对照组于3、7、14、21、28、35、42日龄采血检测新城疫、禽流感抗体,于21、28、35日龄进行禽流感病毒攻毒,对比不同日龄免疫组的抗体消涨情况及不同日龄禽流感攻毒结果。发现对照组随鸡日龄增加,新城疫与禽流感抗体逐渐下降,在42日龄时下降至0,而不同免疫组新城疫与禽流感抗体均先下降,21日龄左右开始上升,至35日龄新城疫与禽流感抗体升至6log2以上。3日龄免疫组的禽流感免疫保护效果最好,21、28、35日龄时禽流感强毒攻毒保护率均达100%;7日龄免疫组在21、35日龄时禽流感强毒攻毒保护率均达100%,28日龄时禽流感强毒攻毒保护率达70%;14日龄免疫组在28、35日龄时禽流感强毒攻毒保护率均达100%,21日龄时禽流感强毒攻毒保护率只达30%。试验表明,商品肉鸡选择3日龄免疫鸡新城疫-禽流感（H9N2 HP株）二联灭活疫苗时禽流感免疫保护效果最好,采用3日龄免疫程序可以提高新城疫与禽流感的免疫保护效果,减少养殖业的经济损失。     

CAV与REV共感染SPF鸡对疫苗免疫反应的抑制作用

用1日龄SPF鸡人工感染鸡贫血病毒(CAV)和禽网状内皮增生病病毒(REV),探讨病毒感染对鸡体疫苗免疫反应的影响。结果表明,在用禽流感病毒(AIV,H5和H9)疫苗免疫后,CAV与REV单独感染均显著抑制了鸡体对H5和H9亚型禽流感病毒灭活疫苗的HI抗体反应,在CAV与REV共感染后,这种抑制作用更为明显。CAV单独感染后鸡体对新城疫病毒(NDV)和传染性法氏囊病病毒(IBDV)疫苗的免疫反应受到抑制,但与对照组在统计学上的差异不显著,然而,CAV可以显著加重REV感染对鸡体在NDV和IBDV疫苗免疫后抗体反应的抑制作用。从而证实CAV与REV共感染在疫苗免疫抑制上有协同作用。     

禽流感油乳剂灭活疫苗的研究

将6种不同亚型的禽流感病毒（AIVH2N9、H3N8、H5N1、H5N2、H7N1、H9N2）分别接种鸡胚,收获尿囊液,经甲醛灭活,以矿物油为佐剂制成油乳剂灭活疫苗。疫苗接种4和8周龄SPF鸡,注苗后均无不良反应。每种亚型疫苗免疫后14天和21天攻毒保护率均达90％-100％。分别用H5N1和H9N2亚型灭活疫苗免疫8周龄SPF鸡、25和28周龄健康商品蛋鸡,免疫后7天产生免疫力,14天保护率达100％,21天后抗体达高峰,仔鸡接苗后最高血凝抑制（HI）几何平均滴度（GMT）为7.3-8.0log2,蛋鸡为8.0-10.5log2。免疫后180天,抗体效价不低于6.5log2。免疫后180天分别以AIV攻击,H5亚型疫苗组,用强毒攻击无一发病和死亡,对照鸡全部发病死亡;H9亚型疫苗组,对照鸡在攻毒后72小时停产,免疫鸡无一发病且产蛋正常,对同源攻毒的保护率达100％。     

禽流感H9亚型流行毒株交叉免疫保护试验

采用北京市农林科学院畜牧兽医研究所1998年-2008年在北京及河北省分离的4株禽流感病毒H9亚型流行毒株,分别制备不同分离毒株灭活疫苗,免疫SPF鸡,进行交叉免疫保护试验。结果表明,用4个不同时期的分离毒株所制备出的灭活疫苗免疫鸡后,各免疫组鸡禽流感(H9亚型)的HI抗体效价均明显上升,所诱导产生的HI抗体效价基本相同;不同时期分离毒株大多产生了较好的交叉保护力。用1998年、2004年及2006年分离的流行毒株制备出的灭活疫苗能够保护2008年流行毒株的攻击。     

鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感(H9亚型)三联灭活疫苗对禽流感H9亚型流行株攻毒的保护作用

为了监测鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感(H9亚型)三联灭活疫苗(LaSota株+M41株+SS/94株)对H9亚型禽流感病毒流行毒株的免疫保护效果,采用H9亚型禽流感病毒SS/94株及2009—2010年现地分离的3株H9亚型禽流感病毒对已免疫上述三联灭活苗的SPF鸡进行攻毒试验。结果显示,试验鸡以0.3 mL/只的剂量免疫三联灭活苗后21 d,其H9亚型禽流感病毒的HI抗体效价可达8～11log2,此抗体水平可抵抗2×106EID50的H9亚型禽流感病毒SS/94株、BLCN09株、WDZ09株、YT10株的攻击,攻毒保护率均达90%(9/10)以上。可见,以SS/94株作为禽流感疫苗抗原制备的三联灭活苗具有良好的免疫原性,能使免疫鸡抵抗2009—2010年期间现地分离的多株H9亚型禽流感病毒的攻击。     

H9亚型禽流感油乳剂灭活苗免疫产生期内T淋巴细胞表型亚类的检测与研究

采用免疫荧光法、使用流式细胞检测仪对经H9亚型禽流感病毒人工感染SPF鸡、H9亚型禽流感油乳剂灭活苗免疫SPF鸡以及经免疫后使用H9亚型禽流感病毒攻毒后的SPF鸡外周血、脾脏、胸腺中T细胞表型亚类(CD4+、CD8+、TCR1+)的变化规律进行了监测,结果表明,H9亚型禽流感油乳剂灭活苗免疫后抗原的缓慢释放可在一定程度上激发机体的细胞免疫应答,使免疫活性T淋巴细胞得到活化,免疫后鸡体外周血中CD4+、CD8+和TCR1+T细胞的数量呈现出一明显升高的过程;同时,人工感染免疫鸡后,脾脏和胸腺TCR1+T细胞的数量上升,外周血CD4+、CD8+和TCR1+T细胞的数量少量降低或维持不变,随后短期即恢复正常;而人工感染SPF对照鸡后,外周血CD4+、CD8+和TCR1+T细胞的数量呈现下降趋势.     

H9亚型禽流感油乳剂灭活苗免疫、免疫后攻毒及人工感染鸡抗体的监测

本研究采用ＡＧＰ、ＨＩ等试验方法，对经Ｈ９亚型禽流感油乳剂灭活苗免疫、免疫后攻毒以及经Ｈ９Ｎ２活毒人工感染后的ＳＰＦ鸡抗体产生、消长规律进行了测定，结果表明人工感染ＳＰＦ鸡和免疫鸡一周后，ＡＧＰ的检出率即可达到１００％；Ｈ９亚型禽流感油乳剂灭活苗自免疫后一周内即可产生ＨＩ抗体，２１－２８天达到高峰，并能对相同亚型病毒感染引发良好的免疫反应。     

鹅源H5N1亚型禽流感病毒感染雏鸡免疫器官细胞凋亡的研究

为研究鹅源H5N1亚型禽流感病毒(AIV)人工感染雏鸡免疫器官细胞凋亡的动态变化,本研究将50只1日龄SPF雏鸡随机分为两组。试验组雏鸡于7日龄,分别经鼻、眼、口同时感染105TCID50的鹅源H5N1亚型AIV,分别于感染后3d、4d、5d、7d和14d迫杀,采取胸腺、法氏囊和脾脏,应用TUNEL染色法和透射电镜技术观察其细胞凋亡的动态变化情况。结果显示,试验组雏鸡的胸腺和脾脏凋亡细胞数量在感染后3d～7d极显著高于对照组(p<0.01);法氏囊凋亡细胞数量在感染后3d～4d比对照组明显增加(p<0.05或p<0.01)。组织器官超微结构检测可见凋亡细胞核染色质固缩并凝结成块,聚集在核膜周围,呈新月状或环状;细胞质浓缩。表明鹅源H5N1AIV能够诱导感染雏鸡免疫器官发生细胞凋亡。