辣椒枯萎病拮抗木霉菌的筛选及鉴定

【目的】探明辣椒根际土壤中对尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）有拮抗作用的微生物,筛选可抑制辣椒枯萎病的生防菌,为绿色防控辣椒连作导致的枯萎病提供有效的生防微生物资源。【方法】采用平板稀释法分离辣椒不同生长阶段的根际土壤中的微生物,再通过平板对峙法筛选拮抗菌株并鉴定拮抗菌发酵液抑菌活性,结合形态学和分子生物学方法鉴定拮抗菌株种类。【结果】从辣椒根际土壤中共分离出真菌50株,其中5株木霉菌株对尖孢镰刀菌有拮抗作用,对峙培养抑菌率为60.47%～78.04%,LJ06020803菌株的抑菌率最高,为78.04%,其不含菌体的发酵液抑菌率为40.92%;根据LJ06020803菌株形态学特征和系统发育树鉴定其为哈茨木霉菌（Trichoderma harzianum）。【结论】菌株LJ06020803为哈茨木霉菌（Trichoderma harzianum）,对辣椒枯萎病病原菌有很好的拮抗效果,可作为一种生防资源用于防治辣椒枯萎病。     

蓝莓根际土壤真菌多样性及根腐病拮抗菌的筛选

为了解贵州栽培蓝莓根际土壤微生物多样性,筛选对蓝莓根腐病病原菌具有拮抗作用的微生物,采用平板稀释法和对峙培养法研究蓝莓根际土壤真菌多样性及其对蓝莓根腐病病原菌的拮抗作用。结果表明:80株菌株的菌落有明显差异,利用菌株r DNA–ITS序列进行BLAST比对,将80株菌株划分为11个属51个种,相似度为99%～100%。其中子囊菌门真菌共9个属、44个种、65株;接合菌门有2属,分别为孢球托霉属和毛霉属,7个种共15株。青霉属真菌为子囊菌门菌株的优势属,占子囊菌门菌株的33.85%;孢球托霉属真菌为接合菌门菌株的优势属,占接合菌门菌株86.67%。蓝莓根际土壤真菌数量为2.96×105 cfu/g,Shannon-Wiener多样性指数为2.046 1,Pielou均匀度指数为2.282 0,Margalef丰富度指数为0.853 3。在80株蓝莓根际土壤真菌中,对蓝莓根腐病病菌抑制率在50%以上的菌株有22株,抑制率在70%以上的有8株,其中日本曲霉、棘孢木霉和盖姆斯木霉菌株抑制效果最好,表现出良好的生防应用前景。     

哈茨木霉NBL-Z1定殖动态及对草莓根腐病防治效果

本研究测定哈茨木霉NBL-Z1菌株无菌发酵滤液对5种病原菌的拮抗活性,并检测该菌的定殖能力及对草莓根腐病的防治效果,以期筛选出对病原真菌具有良好拮抗效果、安全、高效的生防菌.结果表明,哈茨木霉NBL-Z1菌株无菌发酵滤液对5种供试病原真菌有较强的拮抗作用,处理96、144 h,NBL-Z1菌株对尖孢镰刀菌菌丝生长的抑菌率均为100.00％;接种后28 d,菌株NBL-Z在草莓根表定殖数量达到最大,为8.10×107 CFU/g;NBL-Z1菌株对盆栽草莓根腐病的防效为65.6％,同时可促进盆栽草莓植株生长,提高果实产量.研究表明,NBL-Z1菌株能有效防治草莓根腐病并促进草莓植株生长,具有较高的潜在应用价值.     

辽宁省药用植物根际土壤木霉属真菌的多样性

对采集于辽宁省药用植物62份土壤样品的木霉属真菌进行分离,获得木霉属真菌78株,采用形态学方法从中鉴定出9种木霉属真菌,分别是哈茨木霉(Trichoderma harzianum)、绿色木霉(T.viride)、粗壮木霉(T.strigosum)、长枝木霉(T.longibrachiatum)、卷曲木霉(T.spirale)、钩状木霉(T.hamatum)、康氏木霉(T.koningii)、顶孢木霉(T.fertile)和多孢木霉(T.polysporum).其中哈茨木霉分离到34株,占分离到木霉菌总数的43.6%.采用对峙培养法,共筛选出对5种靶标菌抑制率大于70%,对靶标菌菌丝抑制作用明显的菌株4株,其中哈茨木霉2株,绿色木霉1株,钩状木霉1株.     

致病疫霉生防木霉菌株筛选鉴定及生物学特性1）

通过拮抗研究和发酵液抑制致病疫霉菌丝生长、孢子囊萌发以及孢子囊释放游动孢子的研究,从6株生防木霉菌株中筛选出对致病疫霉菌具有生防作用的高效生防木霉菌株T-28,该菌株对致病疫霉的拮抗等级为I级,发酵液对菌丝生长抑制率为64．71％,孢子囊萌发相对抑制率为64．41％,孢子囊游动孢子释放相对抑制率为68．31％。经ITS PCR扩增产物分析,T-28菌株与Trichoderma harzianum Rifai的ITS序列具有99％的最大同源性,验证为哈茨木霉。对哈茨木霉T-28进行生物学特性测定发现其对生长温度、pH、碳源和氮源要求不严格,是具有广泛适应性和广阔应用前景的高效生防菌。     

三七根际耐皂苷木霉菌的分离鉴定及其拮抗促生活性评价

为筛选出三七根际具有拮抗促生活性的耐皂苷木霉菌,通过收集一年生健康三七根际土壤进行木霉菌株的分离,并测定三七根系分泌物对木霉菌孢子萌发的影响以及皂苷对木霉菌菌丝生长的抑制效果,筛选获得耐皂苷的菌株,进一步对其分类鉴定后进行拮抗根腐病病原菌活性测定以及盆栽促生效果、根际定殖能力及其对连作障碍缓解效果的评价。结果表明:试验共分离到6株木霉菌株,其中2株对三七根系分泌物敏感性较低,经过形态学特征和ITS序列比对鉴定为绿色木霉(Trichoderma viride)T3和渐绿木霉(T. viridescens)T20。T3和T20菌株对三七主要根腐病病原菌恶疫霉菌(Phytophthora cactorum)、毁灭柱孢菌(Cylindrocarpon destructans)、茄腐镰刀菌(Fusarium solani)、尖孢镰刀菌(F. oxysporum)和雪腐镰刀菌(Monographella cucumerina)均具有较强的拮抗效果,对恶疫霉菌抑制率分别可达到61.76%和70.59%;T3和T20菌株能促进三七植株的生长,将其接种于三七连作土中,在接种20 d后能够在根际较好的定殖,增加三七植株的存苗率,降低根腐病发病率。该研究结果为缓解三七连作障碍提供了重要的生防菌资源。     

哈茨木霉对几种病原菌的拮抗作用及液体产孢培养条件的研究

通过对峙培养法测定了哈茨木霉(Trichoderma harzianum Rifai Strain TXL051)对10种病原菌的拮杭作用,并对哈茨木霉在PDA液体培养基中产孢条件进行了研究。结果表明,哈茨木霉对10种病原菌均有抑制作用,是具有较好生防潜力的木霉菌。液体产孢最适条件pH 7,温度28℃,提高转数,增加光照均对产孢有促进作用。利用真菌18S rDNA通用引物扩增、测序获得了该哈茨木霉菌株的18S rDNA序列。     

玉米苗期根腐病生防木霉菌的筛选

为筛选出由串珠镰孢菌引起的玉米苗期根腐病生防木霉菌,对分离出的木霉菌株,采用对峙培养及室内盆栽试验对木霉菌(Trichoderma spp.)进行了拮抗效果筛选及防效试验.结果表明:从分离出的92株木霉菌中采用PDA培养基复筛出拮抗效果较好的木霉菌10株(T-A2,T-B5,T-B8,T-B11,T-C7,T-C10,T-D3,T-E4,T-E8,T-F3),再从10株木霉菌中筛选出1株对串珠镰孢菌(Fusarium moniliforme Sheld.)有较好拮抗效果的优良木霉菌T-C7菌株,该菌株对串珠镰孢菌的抑制率达到87%以上;盆栽试验中,应用木霉菌T-C7防治玉米苗期根腐病,其防效为47.49%.     

辣椒枯萎病生防木霉菌T21的分离鉴定及其生物学特性研究

为获得辣椒枯萎病高效生防木霉菌,从健康辣椒根际土壤中分离筛选生防木霉菌,经形态学与分子生物学方法进行菌株鉴定,采用单因素试验对其生物学特性进行研究。筛选出一株高效生防木霉菌T21,经鉴定该菌株为哈茨木霉,其平板对峙抑菌率为70.51%,其无菌发酵液对病原菌菌丝生长抑制率和病原菌孢子萌发抑制率分别为82.56%,100%,对辣椒枯萎病防治效果为66.58%。生物学特性研究表明,菌株T21菌丝最适生长条件是培养温度为30℃,全光照,pH为4,培养基为PDA培养基,葡萄糖、木糖、果糖或蔗糖作为碳源,牛肉膏作为氮源,金属离子为Mg2+和Mn2+;菌株T21最适产孢条件是培养温度为25℃,全光照,pH为5或6,培养基为GPY培养基,木糖作为碳源,牛肉膏作为氮源,金属离子为Cu2+、Ca2+和Mg2+。本研究为进一步生物防治辣椒枯萎病提供了理论基础。     

烟田瓜果腐霉的分离鉴定及其拮抗木霉菌株的筛选

采用诱捕法从烟田土壤中分离到1株腐霉(Pythium spp.),鉴定为瓜果腐霉(Pythium aphanidermatum).接种试验结果表明该菌对烟草、黄瓜、辣椒具有致病性.采用对峙培养试验测定木霉菌(Trichodermaspp.)对瓜果腐霉的抑制作用,筛选出拮抗瓜果腐霉哈茨木霉(T.harzianum)菌株TGY040604,该菌株对瓜果腐霉的生长抑制率达到80%以上,其次生代谢产物对病原菌也具有一定的抑制效果.盆栽试验结果表明,该木霉菌菌株对烟草猝倒病的防效达65%,优于甲霜灵锰锌.     

哈茨木霉C184菌株对喀麦隆香蕉及大蕉根部病原菌的体外拮抗作用(英文)

体外测定了新近分离自喀麦隆香蕉及大蕉田间的哈茨木霉(Trichoderma harzianum)菌株C 184对香蕉和大蕉根部病原菌柱枝孢(Cylindrocladium pteridis)及茄镰孢(Fusarium solani),尖镰孢(Fusarium oxysporum)和曲霉 (Aspergillus sp.) 的拮抗作用. 在对峙培养中上述病原菌菌丝生长均受到明显抑制;在赛咯酚分层培养中木霉菌株对上述病原菌菌丝生长的抑制率为67%～88%;木霉菌株培养滤液对上述病原菌菌丝生长的抑制率为52%～87% .电镜下观察到木霉菌株对柱枝孢及镰孢霉的寄生过程,认为这可能是主要拮抗机制之一; 此外木霉菌株在液体培养中产生的抗生素及细胞壁降解酶也可能是抑制病原菌菌丝生长的主要原因.     

谷子白发病卵孢子重寄生真菌的分离鉴定

为了筛选出对谷子白发病卵孢子具有抑制作用的重寄生生防真菌,为谷子白发病生物防治提供一定的理论依据,研究利用诱捕法分离卵孢子表面的重寄生真菌,通过形态学对其进行初步鉴定,再对筛选出的具有潜在生防潜力的重寄生木霉菌进行分子生物学鉴定。结果表明,共分离到81株重寄生真菌;通过初步的形态学鉴定,将菌株分为4个属,分别是镰孢菌属(Fusarium)36株、青霉属(Penicillium)8株、木霉属(Trichoderma)27株、链格孢属(Alternaria)10株;结合形态学和分子生物学鉴定,从中筛选出对谷子白发病卵孢子具有潜在生防效果的重寄生真菌是木霉菌株哈茨木霉(Trichoderma harzianum)。     

星油藤根腐病镰孢属病原真菌的鉴定及其拮抗菌筛选

由镰孢属真菌引起的根腐病在星油藤种植园为害严重,限制了该作物的推广种植。为了对该病害进行有效防控,本研究对其病原菌进行分离鉴定,并对拮抗菌株进行筛选。结果表明,引起星油藤根腐病的镰孢属病原菌为尖镰孢菌(Fusarium oxysporum)和茄腐镰孢菌(F.solani)。通过梯度稀释法筛选获得拮抗菌株蜡样芽孢杆菌JK-A和枯草芽孢杆菌JK-Z;通过十字交叉法计算得出JK-A对致病性较强的镰孢属病原DZG-13、DZG-12和DZG-43的抑制率分别为68.19%、68.30%和69.70%,JK-Z的抑制率分别为69.67%、68.67%和68.44%。通过对峙培养筛选对星油藤根腐病菌具有较好拮抗效果的木霉菌株,并对其拮抗机理进行初步研究,获得一株对星油藤根腐病拮抗效果较优的木霉菌株LG004-52。     

深绿木霉T1和哈茨木霉T21抑菌活性及对番茄幼苗促生效果研究

为探究深绿木霉（Trichoderma atroviride）T1和哈茨木霉（Trichoderma harzianum）T21对7种植物病原真菌的抑菌活性及对番茄幼苗的促生效果,利用平板对峙法、平板对扣法、固体稀释法和凹玻片法研究其抑菌活性,并通过灌根法研究木霉菌对番茄幼苗的促生效果,平板对峙试验结果表明：2株木霉对7种病原菌均具有抑菌活性,其中深绿木霉T1的抑菌率为31.81%～86.16%,哈茨木霉T21的抑菌率为80.53%～91.82%;深绿木霉T1挥发性代谢产物对7种病原菌均具有抑菌活性,抑菌率为39.78%～76.78%,而哈茨木霉T21的挥发性代谢产物对7种病原菌均无抑菌活性。固体稀释法结果表明：2株木霉的无菌发酵液对7种病原菌均具有抑菌活性,其中深绿木霉T1的抑菌率为59.22%～75.22%,哈茨木霉T21的抑菌率为49.89%～79.21%。凹玻片法结果表明：2株木霉菌对病原菌孢子萌发均有抑制活性,其中深绿木霉T1无菌发酵液对病原菌孢子萌发抑制率达到44.66%～76.69%,哈茨木霉T21无菌发酵液对病原菌孢子萌发抑制率达到49.87%～100%。经2株木霉孢子...     

哈茨木霉突变菌株hc-9对病原菌的拮抗作用

以哈茨木霉(Trichoderma harzianum)突变菌株hc-9和出发菌株hc为试验材料,在25℃条件下,将其分别与四种病原真菌(立枯丝核菌、茄镰孢菌、核盘菌和茄链格孢菌)进行对峙培养,以明确哈茨木霉突变株对病原菌的拮抗作用。结果表明:哈茨木霉突变菌株hc-9与出发菌株hc相比,对四种病原真菌(立枯丝核菌、茄镰孢菌、核盘菌和茄链格孢菌)的抑制率不同,但对同种病原菌抑制率相近。由此可知,哈茨木霉突变菌株hc-9拮抗能力没有因抗性突变而降低,且哈茨木霉突变菌株hc-9的重寄生能力与哈茨木霉出发菌株hc相比没有明显差异。     

常用除草剂对木霉菌丝生长和产孢量的影响

通过常规真菌生物量测定方法,检测了新乡地区常用8种除草剂对哈茨木霉菌株菌丝生长和产孢的抑制作用。结果表明,不同除草剂对哈茨木霉的毒力不同,农基阔锄对哈茨木霉的毒力最高,对菌丝和产孢量的抑制率分别为52.5%和75.7%,田间应用除草剂时应避免与木霉同时施用。     

木霉菌对几种植物病原菌的拮抗作用

为探明木霉对植物病原菌的拮抗作用效果,筛选出优势菌株,从长沙地区的15种作物根围采集到27份土壤样本,经室内分离、纯化得到28个木霉菌菌株.利用对峙法和稀释法测定了28个菌株对花生立枯病菌、水稻纹枯病菌、水稻恶苗病菌、辣椒炭疽病菌、白术白绢病菌的拮抗作用,得到1株对5种供试病原真菌均有强烈拮抗作用的菌株,经鉴定该菌株为哈茨木霉.对峙培养可观察到,多数情况下,接种后2 d内木霉与病原菌接触,随后覆盖或侵入病菌菌落,抑制其生长,其抑制程度随木霉孢子浓度的降低而减弱.温室盆栽试验发现,哈茨木霉对番茄立枯病防效显著,喷洒高浓度的哈茨木霉分生孢子悬浮液防效可达80%以上,且具有持续防效和刺激作物生长的作用.     

木霉菌防治川芎根腐病的初步研究

从生长在不同生态环境的药用植物根际土样中分离出了一批木霉菌株，明确了木霉菌对两种病原菌的拮抗机制在于营养和空间竞争、寄生两种形式。通过室内拮抗试验和田间防病增产试验，筛选出了对尖孢镰刀菌和茄腐皮镰刀菌有较强拮抗作用的哈茨木霉T23、T158等菌株。田间试验结果表明：T23、T158制剂7500g／hm^2对川芎根腐病的防治效果分别为63．90％和57．17％，优于常用化学杀菌剂多菌灵处理。     

辣椒枯萎病主要致病菌的分离鉴定及农用拮抗菌筛选

[目的]分离鉴定辣椒枯萎病主要致病菌,探寻能够有效抑制该致病菌的生防菌株.[方法]采用植物病害组织致病菌划线分离方法分离致病菌,经形态学以及ITS区域PCR检测,确定菌株属性,通过平板拮抗筛选,确定对该致病菌具有拮抗作用的农用生防菌株.[结果]初步鉴定该致病菌为尖孢镰刀(Fusarium oxysporum),将该致病菌与11株农用微生物芽孢杆菌和3株农用微生物木霉菌进行拮抗试验,发现枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、海洋芽孢杆菌(Bacillus marinus)、坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)、甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)6株芽孢杆菌对该致病菌拮抗效果明显,长枝木霉(Trichoderma longibrachiatum)与哈茨木霉(Trichoderma harzianum)2株木霉菌对该致病菌具有明显的拮抗效果.[结论]筛选到了8株能够有效抑制该病原菌的生防菌株,为以后研究生防肥料奠定了基础.     

利用RAPD建立快速鉴定哈茨木霉的SCAR分子标记

在前期形态学分类及大量RAPD分析的基础上,选取在RAPD扩增45号哈茨木霉菌株获得的1条特异性片段,将其成功转化为1个稳定的SCAR标记.结果表明,该SCAR分子标记具有种的特异性,可将哈茨木霉属与其他木霉属分开.利用该标记对供试的45个木霉菌菌株进行PCR特异性扩增时,哈茨木霉菌菌株均能扩增出1条779 bp的DNA条带,不属于哈茨木霉的菌株则无扩增产物.