酶标記的方法在病毒学上的应用——植物病毒血清学新进展

在植物病毒学研究中,利用血清学方法来诊断植物病毒,在科研上和生产上均发挥了一定的作用。但抗血清广泛应用,目前仍有一定的局限性,不是所有的植物病毒都能制备抗血清。有些植物病毒抗性弱,在植株体内含病毒量很低或专化性很强的昆虫介体传播的病毒均很难或不能制备抗血清。因此,抗血清的应用技术有待于提高。1976年Voller     

黄瓜绿斑驳花叶病毒抗血清制备及应用

用葫芦[Lagenaria siceraria（Molina）Stand．]作为黄瓜绿斑驳花叶病毒（Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV）的繁殖寄主,通过差速离心和PEG二次沉淀法进行病毒提纯,用提纯病毒液免疫新西兰兔制备CGMMV抗血清。制备的CGMMV抗血清经间接ELISA法测定效价为1：5120;利用制备的抗血清检测田间样品,证明其可以用于CGMMV的血清学及免疫捕获RT—PCR检测。研究结果对今后开展葫芦科作物CGMMV检测,及时发现疫情以便采取防控措施,避免病毒扩散为害,确保葫芦科作物的安全生产具有重要意义。     

Asia1型口蹄疫病毒P1基因的原核表达及其抗血清的制备

[目的]研究Asial型口蹄疫病毒P1基因原核表达及其抗血清的制备。[方法]利用基因克隆技术获得Asia1型口蹄疫病毒（FM-DV）的P1基因,然后将P1基因重组到pET-32a（＋）质粒中;转化大肠杆菌BL21感受态细胞,经IPTG诱导及蛋白纯化后,进行SDS-PAGE分析;将重组菌BL21培养物用超声波裂解,对该融合蛋白进行分离纯化后免疫新西兰兔,制备P1蛋白抗血清。[结果]获得了重组性阳性克隆;SDS-PAGE结果表明在105 kD处出现了目的条带;Western-blot分析表明,抗血清可与原核表达的P1蛋白特异性结合,ELISA方法检测抗血清的效价可达到1∶5 120,[结论]为建立FMDV的血清学诊断方法及其基因工程疫苗的研究奠定了基础。     

Asia1型口蹄疫病毒P1基因的原核表达及其抗血清的制备

[目的]研究Asial型口蹄疫病毒P1基因原核表达及其抗血清的制备。[方法]利用基因克隆技术获得Asia1型口蹄疫病毒（FMDV）的P1基因,然后将P1基因重组到pET-32a（＋）质粒中;转化大肠杆菌BL21感受态细胞,经IPTG诱导及蛋白纯化后,进行SDS-PAGE;将重组菌BL21培养物用超声波裂解,对该融合蛋白进行分离纯化后免疫新西兰兔,制备P1蛋白抗血清。[结果]获得了重组性阳性克隆;SDS-PAGE结果表明在105kD处出现了目的条带;Western-blot分析表明,抗血清可与原核表达的P1蛋白特异性结合,ELISA方法检测抗血清的效价可达到1∶5120。[结论]该研究结果为建立FMDV的血清学诊断方法及其基因工程疫苗的研究奠定了基础。     

木毒蛾核多角体病毒血清学的初步研究

<正> 血清学方法是研究病毒和鉴定病毒的重要手段,目前国内外已广泛地应用于人、畜传染性病害、植物病害的快速诊断、病毒株系分类鉴别、病毒亲缘关系的分析,病毒潜伏性及流行病学等方面研究。但有关昆虫病毒抗血清的制备及应用,在国内尚未见报导。为了进一步探索木毒蛾病毒的世代传递途径,传布媒介、潜伏传染过程及各虫期与各组织器官带毒体检测等方法,1978—1980年,我们对木毒蛾核多角体病毒(NPV)抗血清的制备与应用方法进行了初步探讨,现将几年来的研究结果报导如下:     

菲律宾引种香蕉花叶病毒的鉴定

根据病毒生物学特性，粒体形态和血清学性质，明确在厦门地区种植的菲律宾引种香蕉，表现花叶症状病株上分离的一个病毒分离物是属于黄瓜花叶病毒亚组Ⅱ。该分离物能通过摩擦接种染供试１１科５２种植物中的１０科４７种；能够由棉蚜传播；失毒温度为５０￣５５℃，稀释终点为１１＾－３￣１０＾－４，体外存活期为２４￣４８ｈ。提纯病毒粒球状，直径约２８￣３０ｎｍ。用该分离物提纯病毒免疫家兔制备的抗血清，经琼脂双扩散方法测     

甘薯病毒病检测技术研究进展

简要概述了侵染甘薯的羽状斑驳病毒(SPFMV)、潜隐病毒(SPLV)、轻斑驳病毒(SPFMMV)、退绿矮缩病毒(SPCSV)、脉花叶病毒(SPVMV)等10余种病毒种类;着重综述了检测甘薯病毒常用的生物学、血清学、分子生物学等几种主要检测技术的原理和特点。生物学方法是依据病毒侵染后在甘薯或指示植物上的外观症状进行识别,但检测速度慢,易受季节限制;血清学技术是利用病毒外壳蛋白的抗原性,据特异性的抗体抗原免疫学反应检测病毒存在,但制备抗血清需时间长,对含量少和无蛋白外壳的病毒无法检测;分子生物学方法是以核酸为基础,通过检测病毒核酸来证实病毒的存在,该技术具有灵敏度高、特异性强、适应范围广等特点。     

一种新的微量免疫制备植物病毒抗血清的方法(简报)

血清学检测是最主要的植物病毒诊断鉴定方法,制备专化性强的高效价抗血清为检测成功的关键。以家兔作免疫动物时,常规免疫途径为皮下或肌肉结合耳静脉注射、免疫剂量为1～10mg 病毒/次,这对某些浓度低、难于大量繁殖或提纯的病毒相当困难,且大剂量注     

苹果褪绿叶斑病毒的抗血清制备及其检测应用研究

用昆诺藜(Chenopodium quinoa)为诊断和分离寄主,从混合感染潜隐病毒的苹果花瓣中分离纯化出苹果褪绿叶斑病毒。经纯化的病毒,在繁殖寄主—昆诺藜上增殖扩大。采用聚乙二醇沉淀和差速离心技术,从感染病毒的昆诺藜中提纯出褪绿叶斑病毒作为抗原,免疫家兔,经心脏采血,制备出了该病毒的抗血清。用制备的抗血清进行了检测褪绿叶斑病毒的方法和对脱毒苗以及生产苹果树的带毒情况作了初步研究。A蛋白酶联免疫法适于检测苹果褪绿叶斑病毒。     

兔抗猪繁殖与呼吸综合征病毒血清在Marc-145细胞上对病毒复制影响

制备兔抗猪繁殖与呼吸综合征病毒抗血清,探索其对病毒复制影响,通过大量培养猪繁殖与呼吸综合征病毒XH-GD株病毒,高速离心后蔗糖梯度纯化浓缩并免疫新西兰大白兔,4免后采集抗血清,ELISA法测定效价。同时将抗血清与病毒共同孵育接种Marc-145细胞,荧光定量PCR和TCID50测定病毒复制情况。成功制备兔抗猪繁殖与呼吸综合征病毒抗血清,效价达1640,抗血清可以在m RNA水平和TCID50上降低病毒滴度。结果表明,兔抗猪繁殖与呼吸综合征病毒抗血清可以在Marc-145细胞上抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒复制。     

水稻普通矮縮病毒抗血清研究初报

一、普矮病毒的提純与抗血清制备水稻病毒病的诊断签定,以往多采用生物学方法,实验时间长、程序繁杂工、作量大,而且受环境条件的限制,远不能适应生产上对病害的予测予报和防治的要求。近年来,植物病毒抗血清技术的应用及进展较快,目前已知的禾谷类作物病毒除少数之外,     

H9N2亚型禽流感病毒株的分离和鉴定

用非免疫鸡胚从病死鸡的脑组织中分离到禽流感病毒。此病毒能凝集鸡红细胞,而且这种凝集可以被特异性抗血清所抑制。通过对分离株进行血清学试验、最小致死量致死鸡胚平均死亡时间测定、鸡致病力试验、回归试验,证明该分离株为H9N2亚型禽流感病毒。     

大蒜茎尖组培苗的检测

从市售阿城紫皮蒜生长的叶片经ＰＥＣ沉淀差速离心提纯,获得复合病毒制剂,得率为４．９０ｍｍ（１００ｇ）－１叶。电镜观察病毒粒体为长度５５０～８００ｎｍ的线状物,经抗血清测定主要为洋葱黄矮病毒（ＯＹＤＶ）和大蒜潜隐病毒（ＧＬＶ）。用复合病毒制剂免疫制备的抗血清效价为１０２４～２０４８。ＯＹＤＶ抗血清检测茎尖脱毒组培苗,脱毒率为５０％左右,用ＧＬＶ抗血清检测,脱毒率为９５％～９７％,复合病毒抗血清检测结果与ＯＹＤＶ相同。证明复合病毒抗血清可用于组培苗的检测。组培脱毒大蒜在田间种植１年后发病率为５０％,３年后达８０％。茎尖组培脱毒率不高。需用抗血清逐株检测挑选,淘汰病苗,才能获得健康无毒的大蒜群体。     

引起二月兰花叶病的芜菁花叶病毒研究

在表现花叶、植株矮化、茎叶坏死和畸形的十字花科观赏植物二月兰（Ｏｒｙｃｈｏｐｈｒａｇｍｕｓｖｉｏ－ｌａｃｅｕｓ）上分离到一种线状病毒,其病毒粒子分布范围为７８０～８００ｎｍ．通过寄主反应测定、病毒提纯和形态观察、血清学反应测定,确定该病毒为芜菁花叶病毒（ＴｕＭＶ）．病毒分离物ＡＨ１回接二月兰无病毒苗,引起黄斑、系统花叶、系统坏死和畸形,在供试十字花科植物上均产生系统侵染,并在洋酸桨等茄科供试寄主上引起系统症状．ＡＨ１与来自十字花科甘蓝型油菜上的一个ＴｕＭＶ有紧密的血清学关系,但在寄主反应上与之有一定差异．对自然发病的二月兰植株和接种ＡＨ１分离物的系统寄主用ＴｕＭＶ抗血清进行免疫电镜观察,均检测到线状病毒粒子,用ＣＭＶ抗血清、ＴＭＶ抗血清进行检测,均没有发现相关病毒．作者认为：ＴｕＭＶ即是引起二月兰花叶病的病原．这是ＴｕＭＶ侵染该属植物的首次报道．     

植物病毒保藏和检测的简易方法

为适应基层科研单位需要，介绍用氯化钙干燥法保藏植物病毒，用血清学方法（免疫双扩散技术和对流免疫电泳技术）检测植物病毒的具体方法。     

侵染水仙的虎眼万年青花叶病毒外壳蛋白的原核表达、抗血清制备及应用

采用特异性表达引物PCR扩增了一个从英国围裙水仙样品上分离的虎眼万年青花叶病毒外壳蛋白基因序列.构建原核表达载体,制备了OrMV分离物的外壳蛋白抗血清.对制备的抗血清进行了Western-blot检测,血清学关系研究并应用于样品的间接ELISA检测.     

一串红花叶病及其病原研究

１９８９─１９９２年间对杭州等地一串红（Ｓａｌｖｉａｓｐｌｅｎｄｅｎｓ）花叶病的发生及其病原进行了系统研究，从病株上分离得到的１７个病毒分离物，经生物学和血清学反应测定均符合黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）的特点。病毒分离物Ｍ－２２不能经由桃蚜传播使黄苗榆等供试寄主发病。用０．５ｍｏｌ／Ｌ磷酸钾盐缓冲液对Ｍ－２２进行提纯，提纯病毒经醋酸铀负染，测定其粒子大小为３０．２ｎｍ。ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳测定Ｍ－２２的外壳蛋白分子量约为２８ｋＤ，经琼脂双扩散测定，Ｍ－２２与几个已知ＣＭＶ抗血清均有强阳性反应，Ｍ－２２与一个番茄不孕病毒（ＴＡＶ）抗血清有阳性反应，但其抗血清与供试ＴＡＶ抗原无阳性反应。ＥＬＩｓＡ反应测定结果表明，Ｍ－２２与一个来自于十字花科大白菜上的ＣＭＶ分离物和一个来自于前科烟草上的ＣＭＶ分离物，在血清学关系上有明显差异。根据实验结果，作者认为目前在杭州等地侵染一串红的病原病毒主要是ＣＭＶ，侵染一串红的ＣＭＶ分离物Ｍ－２２可能是一个独立的血清型．     

南方水稻黑条矮缩病毒外壳蛋白p1O的原核表达和抗血清制备及应用

南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV) p10蛋白由其基因组片段S10编码,根据SRBSD海南分离物S10序列(EU523360)设计特异性引物扩增编码p10蛋白的片段,并亚克隆至原核表达载体pET-28a+,以大肠杆菌BL21 plysS为宿主菌进行高水平表达,利用纯化的p10蛋白免疫兔子,制备了p10蛋白的特异性抗血清.ELISA检测显示,p10蛋白的抗血清可与来自湖南不同地区的白背飞虱病汁液发生强烈的血清学反应,表明该抗血清适用于田间SRBSDV的快速诊断.     

鸡传染性法氏囊病毒的分离、纯化与抗血清的制备

采用鸡胚尿囊液培养传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）。将培养病毒的鸡胚尿囊液经高速离心，聚乙二醇（ＰＥＧ）沉淀、蔗糖垫底超速离心、ＮａＢｒ密度梯度离心，可获得纯化的鸡传染性法氏囊病毒带。通过透射电子显微镜观察，表明ＩＢＤＶ颗粒呈六角形，直径约６０ｎｍ，无囊膜，其浮力密度为１．３０～１．３６ｇ／ｍｌ。实验所分离的病毒粒子的平均含量为１．７２ｍｇ／ｍｌ。用这种病毒免疫健康家兔制备抗ＩＢＤＶ的血清，获得了效价在１∶３２以上的抗血清，抗血清有较高的纯度和专一性     

家蚕病毒性软化病毒简易提纯的研究

在软化病毒抗血清制备中,开展了供免疫用抗原的简易纯化工作。主要步骤是将软化病蚕中肠在磷酸缓冲液及氯仿中抽提澄清,硫酸铵盐析,结合3000rpm离心30分钟,沉淀用少量pH7.2的磷酸缓冲液悬浮并经3000rpm离心60分钟,上清液即为供免疫用的纯抗原。用上法纯化所得病毒悬液,在紫外分光光度计上测得的吸收高峰为260,271nm;电子显微镜观察中除了球形病毒粒子外没有看到其他物质;用此法纯化为抗原所得到的抗血清在对流免疫电泳试验中特异性典型,且无交叉反应出现。