马铃薯茎尖超低温保存研究

以马铃薯栽培品种甘农薯1号的试管苗为材料,进行了茎尖超低温保存技术的研究,结果表明,预培养3～4 d,用玻璃化溶液PVS2室温下处理20～30 min,直接投入液氮中冷冻保存,然后接种在MS添加2.50 mg/L KT、1.25 mg/L IAA和1.25 mg/L 6-BA的培养基上,经过恢复培养,茎尖成活率可达42.8%.     

欧李茎尖玻璃化法超低温保存及植株再生

对欧李(Cerasus humilis)茎尖进行了玻璃化法超低温保存及植株再生研究,结果表明,预培养对欧李茎尖超低温保存有一定的影响,茎尖在含有0.5 mg.L-1BA和2 M甘油的B 5培养基上室温(25℃)下预培养3 d成活率最高;最佳预处理时间为60%PVS2处理10~20 min,玻璃化液(PVS2)处理时间为0℃下60 min.在优化的保存条件下,植株再生率达83.9%,再生植株生长和分化正常.这是欧李超低温保存成功的首例报道.     

柿休眠芽茎尖玻璃化法超低温保存及植株再生

 对柿 (DiospyroskakiThunb .)休眠芽茎尖进行了玻璃化法超低温保存及植株再生研究 ,结果表明 ,1.5～2 .0mm茎尖在含有 0 .3、0 .5和 0 .7mol·L-1蔗糖的改良MS培养基 (KNO3 和NH4NO3 减半 )上预培养各 1d ,室温(2 0℃ )下装载液 (2mol·L-1甘油 ,0 .4mol·L-1蔗糖 )停留 2 0min ,0℃下玻璃化液 (PVS2 或PVS3 )处理 30～ 4 0min ,投入液氮保存 1d后 ,4 0℃水浴化冻 1min ,含蔗糖 1.2mol·L-1的改良MS培养基洗涤 2 0min ,接种于含 0 .2mg·L-1CPPU、1mg·L-1BA、0 .0 5mg·L-1IAA、5 0 0mg·L-1可溶性PVP、30g·L-1蔗糖和 7g·L-1琼脂的改良MS培养基 (再生培养基 )表面的滤纸上 ,暗处理 1d后转移到新鲜的上述再生培养基中 ,暗培养 1周后转到正常光下 ,成活率高达 70 .2 % ,再生植株生长和分化正常。本研究结果为柿种质的长期保存提供了新途径。     

树莓茎尖玻璃化法超低温保存及植株再生研究

为了建立适于树莓茎尖的超低温保存技术程序,试验以树莓茎尖为试材,对树莓玻璃化法超低温保存进行了研究。结果表明适于树莓的超低温保存技术流程是先低温驯化21d,在含0.8mol/L蔗糖的固体培养基预培养4d,再经玻璃化液(PVS2)处理120min后浸入液氮,解冻后茎尖存活率达75%。     

菠萝茎尖玻璃化法超低温保存及植株再生

以菠萝为试材,建立试管无性系,进行玻璃化法超低温保存及植株再生研究,结果表明,约2.0 ～3.0 cm的菠萝茎尖于含有0.Smol/L蔗糖的培养基上预培养l～2d,剥取含1～2片叶原基(1.0～2.5 mm长)的茎尖,室温(25℃)下用LS装载液预处理50min,再用PVS2溶液于0℃下处理40 min,换入新鲜的PVS2溶液后迅速投入液氪,保存24h后在40℃水浴中迅速化冻90 s,用1.2 mol/L的蔗糖培养液洗涤2次,每次10 min,然后转入含0.3 mol/L蔗糖的MS培养基上,暗培养48 h后转入含BA 0.5 mg/L的MS培养基上,暗培养1周后转移到正常光下,4个菠萝品种(澳大利亚卡因、夏威夷、巴厘、台农16号)的成活率分别为96.5％、95.3％、78.6％、87.7％,再生率分别为93.2％、92.6％、76.7％、87.7％.再生植株生长和分化正常,其形态上与对照一致,生根后可移栽成活.     

越橘离体茎尖包埋玻璃化超低温保存

为越橘种质资源保存提供新途径，试验研究了越橘组培苗茎尖包埋玻璃化法超低温保存方法。结果显示适宜的条件包括：剥取顶芽茎尖（长1.0～1.5 mm），在（25±2）℃黑暗条件下预培养1 d；使用移液枪吸取茎尖与藻酸盐溶液，滴入氯化钙溶液中形成包埋球（直径4 mm）；包埋球在加载液中加载1.5 h（室温）；包埋球转入PVS2溶液处理4 h(0℃)；将装有包埋球的冷冻管投入液氮保存1 h；取出液氮中的冷冻管迅速转入37℃水浴锅中解冻1～2 min，在室温下取出包埋球，在卸载液中卸载20 min；卸载的茎尖在再生培养基上（25±2）℃黑暗培养5 d；之后在正常光照条件下培养30 d。所测试的8个越橘基因型平均再生率为57.9%，最高再生率为78.5%，最低为41.7%。     

木薯茎尖包埋-玻璃化法超低温保存及植株再生

主要探讨装载时间、蔗糖浓度、预培养时间和PVS2处理时间对木薯种质超低温保存后成活率的影响.结果表明,长约1.5 mm的木薯茎尖用海藻酸钙包埋后,在含有2 mol.L-1甘油和0.4 mol.L-1蔗糖的装载液装载30～40 min,然后在含有0.5mol.L-1蔗糖的改良MS培养基上预培养2 d,0℃下PVS2处理4 h后快速投入液氮(LN),1 h后取出,在40℃水浴中化冻90 sec,用含有1.2 mol.L-1蔗糖的改良MS培养液洗涤20 min,接种于恢复培养基中(MS 0.02mg.L-1NAA),暗培养3～5 d,转移至正常光下,最高成活率接近70%;再生植株生长和分化正常.     

扁桃休眠茎尖包埋玻璃化超低温保存的初探

[目的]研究包埋玻璃化法对扁桃休眠茎尖超低温保存的影响,为扁桃资源的超低温保存提供理论依据.[方法]采用不同预培养蔗糖浓度和预培养时间、不同装载液处理时间、不同玻璃化液处理时间及不同化冻方式对莎车14号扁桃休眠茎尖包埋玻璃化超低温保存存活率进行比较.[结果]将低温贮藏的扁桃休眠茎尖剥成1～2 mm,用3;的海藻酸钠包埋,在含0.4 mol/L蔗糖的0.1 mol/L CaCl2溶液中固定30 min后形成包埋丸,用含有0.5 mg/L蔗糖的MS培养基预培养3d,放入装载液(MS+2 mol/L甘油+0.4 mol/L蔗糖)中处理20 min,0℃下用PVS2处理30 min后迅速投入液氮,超低温保存24 h后取出,放入40℃水浴锅中化冻1～2 min,用1.2 mg/L蔗糖的MS洗涤液洗涤20 min,转入含0.3 mg/L 6-BA和0.3 mg/L IAA的MS培养基中培养,存活率达45;.[结论]包埋玻璃化法能够提高莎车14号扁桃休眠茎尖超低温保存的存活率.     

药用植物种质资源超低温保存及遗传变异特性研究进展

超低温保存是目前长期保存植物种质资源最有效的方法,已广泛应用于数百种植物。综合国内、外植物种质资源超低温保存的研究进展,从超低温的保存原理、保存程序、再生材料相对存活率测定及其遗传变异特性检测等方面对药用种质资源超低温保存技术的研究现状进行了总结。     

柿休眠芽茎尖包埋玻璃化法超低温保存及植株再生

主要探讨蔗糖浓度、装载时间和PVS2处理时间对部分中国甜柿种质超低温保存后成活率的影响。结果表明,长约1 mm的柿休眠芽茎尖用海藻酸钙包埋后,在含有0.3 molL-1蔗糖的改良MS培养基(KNO3和NH4NO3减半)上预培养1 d,室温(25℃)下PVS2处理2 h后快速投入液氮(LN),1 h后取出,在40℃水浴中化冻1～2 min,用含有1.2 molL-1蔗糖的改良MS培养液洗涤20 min,接种于含ZT(玉米素)2.2 mgL-1、PVP(聚乙烯吡咯烷酮)600 mgL-1的改良MS培养基,暗培养3～5 d,转移至正常光下,最高成活率接近100%;再生植株生长和分化正常。     

薄荷属植物的数量分类

选取30个主要性状,对薄荷属6个种38个居群进行了数量分类研究。Q型聚类分析结果表明,叶的平或皱是较稳定的,可以作为薄荷属植物分类的主要标准。按照"欧氏距离远近"原则,Q型聚类分析可以比较理想地将38个居群在L3=0.618水平上分为5个系,即日本薄荷系、灰薄荷系、薄荷系、唇萼薄荷系、椒样薄荷系,其中日本薄荷系又可分为日本薄荷亚系和皱叶留兰香亚系,椒样薄荷系又可分为椒样薄荷亚系与留兰香亚系。R型聚类分析基本上能反映性状间的相关性,可以为今后进一步进行性状的取舍和观测提供定量化的依据。     

留兰香挥发油的薄层分离及抗菌活性研究

[目的]对留兰香挥发油的组分及抗茵活性进行研究。[方法]采用薄层色谱法对留兰香挥发油的组分进行初步分离,采用扩散法及紫外可见分光光度法对留兰香挥发油的抗菌活性进行测定。[结果]以石油醚：乙酸乙酯（V：V=6：1）为层析液时,留兰香挥发油的分离效果最好,分离出4种主要物质;留兰香精油对3种试验茵株的抑茵性为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）〉金黄色葡萄球菌（Staphy-lococcus aureus）〉大肠杆菌（Escherichia coli）;对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的最低抑菌浓度（MIC）分别为：O．50、1．00、3．50μ／ml。[结论]留兰香挥发油具有抑茵作用,这为综合开发留兰香提供了理论基础。     

椒样薄荷挥发油化学成分分析

采用水蒸气蒸馏法从椒样薄荷(Mentha piperitaL.)中提取挥发油,并运用气相色谱-质谱联用技术对其化学成分进行了分析。从椒样薄荷挥发油中鉴定出46种化学成分,占总出峰面积的97.982%。其中含量较高的为薄荷醇(32.533%)、薄荷酮(23.577%)和3,7,7-三甲基-二环[4,1,0]庚烷(10.379%)。     

不同辣椒品种果实发育过程中DNA甲基化的MSAP分析

【目的】分析辣椒GB14和GB38果实发育过程中酶切位点的甲基化,为在分子水平上研究辣椒红素调控规律、在辣椒遗传育种中奠定理论基础。【方法】对辣椒果实发育成熟过程中的DNA甲基化修饰进行分析。【结果】DNA半甲基化条带比率与全甲基化条带比率均随着籽粒的生长发育而逐渐升高,两种辣椒果实绿熟期和红熟期基因组总体甲基化比例分别为36.51%、36.38%、35.57%和35.45%。对甲基化表现呈多态性变化的8个片段回收、测序分析表明,DNA甲基化发生的位点既存在于基因组的编码区,也存在于非编码区。【结论】在辣椒果实发育过程中,DNA甲基化修饰发生了巨大的变化;CCGG位点的半甲基化水平与辣椒红素积累呈正比。     

薄荷和泽漆提取液对稻曲病菌的离体抑制作用

分别用薄荷和泽漆提取液对稻曲病菌进行离体抑菌活性研究。结果表明，薄荷提取液对病菌的抑制效果较好，在10％浓度下对厚垣孢子和分生孢子的抑制达100％，而泽漆提取液的抑制率分别为14．79％和7．23％。此外，薄荷提取液还能显著抑制菌丝生长，引致菌落发生变异。本研究为开发防治稻曲病的植物源农药奠定了基础。     

车前种质资源遗传多样性ISSR分析

[目的]研究江西、湖南、湖北等7个省份的车前种质资源的遗传多样性。[方法]采用ISSR技术,对28份车前样品进行遗传多样性和亲缘关系分析。[结果]从40条引物中共筛选出16条可用于车前遗传多样性分析的ISSR引物,共扩增出131条带,其中多态性条带(PPB)有107条,占81.7%。ISSR数据分析显示,多态性位点百分率(P)为75.3%;平均等位基因观测数为0.071 3;有效等位基因数为0.299 0;Nei,s基因多样性指数(H)为0.360 1;Shannon多态性信息指数(I)为0.535 4。[结论]车前种质资源遗传多样性的地理差异较为明显;野生种与栽培种基因型差异较大。     

百子莲胚性愈伤组织玻璃化法超低温保存体系建立及遗传稳定性分析

采用单因素随机区组试验及多因素、多水平正交试验方案建立了百子莲胚性愈伤组织(embryogenic callus,ECs)玻璃化法超低温保存体系。将由花梗诱导的胚性愈伤组织接种至预培养基(MS+0.5mol/L蔗糖+1%琼脂)上,在4℃下预培养2d后,在室温下加入装载液(MS+0.4mol/L蔗糖+2mol/L丙三醇+10mmol/L KNO3)处理60min;利用改良后的PVS 2玻璃化溶液(MS+0.4mol/L蔗糖+30%丙三醇+15%乙二醇+15%DMSO)在0℃下处理40min,将含有ECs的冻存管投入液氮中冻存1h;在40℃水浴中快速解冻90s;用洗涤液(MS+1.2mol/L蔗糖+10mmol/L KNO3)处理30min,每10min换1次新鲜的洗涤液;洗涤后,接种到胚性愈伤组织增殖培养基上恢复培养24h后,相对成活率分别达56.9%(TTC法)和43.3%(Evans blue法)。恢复培养55d的百子莲胚性愈伤组织经过AFLP多态性检测后未发现基因组变异,证明该方法可用于百子莲种质资源的超低温保存。     

黑麦草属种质资源遗传多样性研究

就国内外黑麦草属牧草的分类、分布情况、形态及解剖学特征和遗传多样性进行总结和探讨,以期为黑麦草属资源进一步研究提供借鉴与参考.     

川牛膝(Cyathula officinalis Kuan.)RAPD和AFLP标记的多态性聚类分析

[目的]用RAPD和AFLP技术对采自主产区不同地域的川牛膝Cyathula officinalis Kuan.、头花杯苋Cyathula capitata(Wall) Moq及它们的杂交品种杂交牛膝Hybrid accsssion进行多态性和聚类分析研究。[方法]用酚-氯仿法提取的基因组DNA,经RAPD及AFLP程序扩增后分别用琼脂糖凝胶和PAGE电泳检测,使用NTSYSpc-2.10s软件用UPGMA方法对检测结果进行聚类。[结果]RAPD和AFLP技术在分析遗传多样性和品种鉴定方面各有优缺点;采自同一地方的川牛膝具有最近的亲缘关系,头花杯苋、杂交牛膝与其他采自各地的川牛膝品种之间的遗传差异较大。[结论]在川牛膝中,DNA的差异与地域性有较大关系,说明药材确有地道性的特征,从而在DNA水平上证明了药用植物上的地道性观点。     

亚洲薄荷内生真菌多样性研究

采用纯培养的方法对广西所采50株健康亚洲薄荷150茎段、350片叶子中分离纯化内生真菌。用形态学分类鉴别方法依据产孢内生真菌在标准培养基的菌落颜色、菌落形态及孢子的着生方式进行鉴定。部分不产孢内生真菌利用促孢培养基培养结合分子生物技术对不产孢子内生真菌进行比对鉴定。结果从亚洲薄荷中分离出481株内生真菌,隶属1纲5目6科20属。丛梗孢科Moniliaceae是其优势科,其中拟青霉属Paecilomyces、轮枝孢属Verticillium、枝顶孢属Acremonium为主要菌群,分别占11.88%、7.92%和8.91%。叶子明显以叶点霉属Phyllosticta(17.21%)、小齿梗霉属Rhinotrichum(13.49%)、黑团孢属Nigrospora(11.16%)、枝顶孢属Acremonium(10.70%)为优势菌株,而茎则以拟青霉属Paecilomyces(18.60%)、轮枝孢属Verticillium(13.95%)为优势菌株。表明亚洲薄荷内生真菌具有丰富的多样性,其中拟青霉菌属是其优势菌落,其中还分离培养到枝顶孢属内生真菌,拟青霉菌和枝顶孢属菌物有抗菌活性,和薄荷的抗菌活性是否有联系还需进一步研究。