重庆地区柑桔衰退病毒多态性研究

柑桔衰退病毒(CTV)存在着复杂的株系分化现象.在使用弱毒株交叉保护防治柑桔衰退病时需要对田间病毒株系组成进行分析,并对选用的株系进行单蚜分离纯化.作者运用限制性片段长度多态性和单链构象多态性对田间获得的168个CTV样品和2个蚜传毒株的外壳蛋白基因进行分析,了解重庆市田间CTV组群构成情况,发现田间CTV以多株系混合发生为主,其中主要是CP/HinfⅠRFLP第1、3和6组群,约占总数的90%,并以强毒株混合感染为主.甜橙中CP/HinfⅠRFLP的组群构成最为复杂.单头褐色桔蚜从柚类至甜橙传播CTV的效率低(不足1%),该蚜的取食可改变CTV的株系组成.     

江西柑橘主产区柑橘衰退病毒分离株组群分析

为检测江西柑橘主产区柑橘衰退病毒分离株组群的构成情况,运用限制性片段长度多态性(RFLP)对收集自江西柑橘14个主产区果园的CTV分离株进行分析。发现209份样品的CP/HinfⅠ酶切结果中182份样品表现出单一CP/HinfⅠRFLP谱型,占鉴定样品总数的87.1%,其中以CP/HinfⅠRFLP第3和第1组群的分离株构成为主,分别占样品总数的55.5%和26.8%;混合CP/HinfⅠRFLP组群样品占12.9%。本次检测中发现有1个分离株为第4组群,5个分离株为第5组群,可能为潜在的弱毒分离株。本次试验中检测的江西柑橘样品以CTV单一组群感染为主。     

柑桔碎叶病毒,茎陷衰退病毒脱除技术研究

Calavan等(1972)报道采用40/30℃ 44/30℃6 2星期,脱除北京柠檬碎叶病毒。Roistacher等(1972)采用50℃湿热处理北京柠檬3～22h,得到无碎叶病毒,并于1976、1977年报道,茎尖嫁接不能脱除柑桔碎叶病毒(CTLV)。宫川(1980)提出40/30℃120日脱除椪柑、蕉柑等碎叶病毒。Koizumi(1984)采用40/30℃9日 35/30℃13～20日 茎尖     

4种柑橘衰退病毒源单蚜传毒分离株CP基因的分子特征

 对4种柑橘衰退病毒源及其31个单蚜传毒分离株的CP基因做了限制性片段长度多态性(RFLP)和单链构象多态性(SSCP)分析,并对其中8个单蚜传毒分离株的CP基因进行了序列分析。实验明确了所研究柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)的CPG/Hinf I RFLP组群和CPG/SSCP模式,二者能较好地对应并有效验证了单蚜传毒对CTV毒源的分离纯化作用;CP基因序列分析结果表明,相同CPG/Hinf I RFLP组群的单蚜传毒分离株间具有高度的序列相似性,而不同CPG/Hinf I RFLP组群单蚜传毒分离株间则存在较大差异;通过与已知生物学特性CTV分离株比较,初步建立了上述CP基因分子特征与病毒生物学特性之间的联系。     

柑桔衰退病毒弱毒株及其筛选方法

不同研究方法揭示了柑桔衰退病毒存在着复杂的株系分化现象。本文用分子生物学技术与生物学鉴定相结 合的方法区别柑桔衰退病毒强弱毒株,利用其弱毒株交叉保护机理为筛选有保护作用的弱毒株提供了强有力的手 段。     

柑橘衰退病毒柚分离株的p25/Hinf1 RFLP分析

对123个柑橘衰退病毒柚分离株进行p25/Hinf1 RFLP分析明确:样品中,单一p25/Hinf1 RFLP组群样品占样品总量的82.9%,说明我国田间受侵染柚类中柑橘衰退病毒株系相对较为单一;RFLP组群6的样品占样品总量的79.7%,说明目前柚类生产上的优势流行株属于p25/Hinf1 RFLP组群6,初步认定为强毒株系;柑橘衰退病毒株柚分离株S102、S104、S106、S108属于p25/Hinf1 RFLP组群5,初步认定是弱毒株系。     

6种柑橘类植物对柑橘衰退病毒分离株TR-L514变异的影响

 柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)存在复杂的株系分化现象,运用弱毒株交叉保护防治柑橘衰退病时需了解不同类型柑橘对CTV构成的影响。作者将CTV分离株TR-L514嫁接接种到6类柑橘植物上获得了18个亚分离株,并对这18个亚分离株和TR-L514进行了指示植物鉴定,p25基因的限制性片段长度多态性(RFLP)和单链构象多态性(SSCP)分析,p23基因的序列比较。结果表明,CTV株系对不同柑橘类植株的适应性存在差异。TR-L514嫁接到不同柑橘类植株其构成会发生变化,在甜橙上可以同时检测出p25//HinfⅠ RFLP第1和6组群,并具有比在其它4类柑橘上更为复杂的SSCP谱型构成,因此甜橙可能更适宜于CTV的增殖。TR-L514及18个亚分离株的p23基因序列差异可能与不同类柑橘植株的适应性有关。     

应用常规RT-PCR和荧光定量RT-PCR检测柑桔衰退病毒

 根据柑桔衰退病毒(CTV)P20基因序列设计cquctv9/cquctv10特异引物对,以柑桔RNApolymeraseⅡ基因作为内参照,建立了柑桔衰退病的常规RT-PCR快速检测体系;依据柑桔衰退病毒P20基因序列设计cquctv1/cquctv2特异引物对和TaqMan探针cquctvp1,建立了柑桔衰退病荧光定量RT-PCR快速检测体系。常规RT-PCR检测下限是含有CTV的50pg总RNA,荧光定量RT-PCR法的检测下限是2fg纯CTV片段。荧光定量RT-PCR的灵敏度相对比常规RT-PCR高100倍。利用常规RT-PCR和荧光定量RT-PCR体系对从2005年3月到2006年7月采自田间的样品进行检测,结果表明,2种检测体系都有很好的特异性和准确性;对183个田间柑桔苗木样品带毒率检测结果表明,荧光定量RT-PCR检出率为(82.5%),比常规RT-PCR检出率(73.2%)高。     

甜瓜黄斑病毒三亚分离物S RNA的分子特征

 甜瓜黄斑病毒（Melon yellow spot virus, MYSV）首次发生于日本,造成甜瓜和黄瓜的严重损失,Kato等系统地研究了病毒的传播方式、寄主范围、超微结构和基因组特征,认为MYSV应为番茄斑萎病毒属（Tospovirus）的1个新种［1,2］。2006年以来,台湾的西瓜［3］和黄瓜［4］上相继发现MYSV。2009年春季,古勤生在海南三亚的保护地甜瓜上发现一种新发生的病毒病,发病率30%~100%,病株出现系统性黄化坏死斑点,为MYSV侵染的典型症状,结合分子检测结果判定病原为MYSV。     

从福建分离的广东赛葵曲叶病毒的分子特征

 从中国福建省表现曲叶和脉突症状的赛葵上分离到病毒分离物FJ1~FJ6。利用菜豆金色花叶病毒属病毒的特异性简并引物PA/PB,在所有6个分离物中都分离到了约500bp长度的病毒部分DNA片段。这些DNA片段与已报道的广东赛葵曲叶病毒(Malvastrum leaf curl Guangdong virus,MLCuGdV)的核苷酸序列同源性高达90%-93%。随机挑选FJ3分离物进行全基因组DNA的克隆测序。结果表明,FJ3 DNA全长2765个核苷酸,具有典型的双生病毒科病毒的基因组结构特征,与MLCuGdV的同源性为92.9%,表明FJ3是MLCuGdV的一个分离物。系统进化分析表明,除了MLCuGdV,FJ3与其它赛葵上分离到的双生病毒的亲缘关系都较远,而与分离自中国南方番木瓜上的双生病毒聚成簇,有较近的亲缘关系。进一步比较分析各蛋白编码的氨基酸序列发现,FJ3可能是一个种间重组分子,它可能是由中国番木瓜曲叶病毒或广东番木瓜曲叶病毒和另外的未知病毒重组产生的。     

引起重庆主栽柑桔品种衰退病的病毒株系组群分析

 柑桔衰退病毒(CTV)存在着许多生物学特性不同的株系。通过铲除感染强毒株植株或利用弱毒株交叉保护的方式来防治柑桔衰退病都需要对CTV株系进行准确、可靠的鉴定。本文根据对CTV衣壳蛋白基因(CPG)的限制性片段长度多态性(RFLP)分析,发现在重庆主栽柑桔品种的衰退病毒主要以CP/Hinf I RFLP第1、3和6组群为主,并且在田间以多株系混合感染为主。     

柑桔碎叶病毒的发生与初步鉴定

 采用特洛亚枳橙(Troyer citrange),卡里佐枳橙(Carrizo citrange)、鲁斯克枳橙(Rusk citrange)和厚皮来檬(Citrus excelsa)作指示植物,鉴定出黄岩栽培的柑桔本地早,少核本地早、槾桔、早桔、朱红、乳桔、椪柑.北京柠檬、兴津温州及采自温州的柳橙等10个品种,无论枳砧或构头橙砧的都感染有碎叶病毒(Tatter Leaf Virus)枳橙的症状是叶片出现黄白色斑点,皱缩,畸形,茎下出现黄白色条斑,扭曲;厚皮来檬的症状是叶片黄白色斑点,皱缩、畸形.田间栽培的构头橙砧柑桔品种比枳砧的表现耐柑桔碎叶病毒。枳橙的TLV病叶和田间本地早(积)叶片、花瓣能汁液磨擦豇豆(Vigna sp.)叶,并能回接豇豆,接种3—5天后,豇豆叶即出现红褐色(木占)斑,电镜初步观察到为450—900nm长杆状病毒粒子。     

柑桔衰退病为害及其防治

柑桔衰退病又称速衰病,在我国几乎遍及柑桔产区,为害极大.由于该病害表现的症状易与导致树势衰弱的其他病害相混淆,因此,对于它的严重性尚未引起应有的重视.     

柑桔黄梢(龙)病毒和柑桔枝条组织耐热力的初步研究

 将蕉柑健康树的芽条和感染黄梢(龙)病的芽条置于不同温度的热水和湿热空气中处理一定时间后,测定前者的嫁接成活力和后者的传病力。初步试验结果说明:在湿热空气中,黄梢病毒在46℃ 6小时,48℃ 4及5小时,50℃ 1、1.5及2小时,52℃ 30、45、及60分钟,54℃ 25及30分钟,58℃ 10分钟,和60℃ 2、3及5分钟后,皆失去传病力;而经同样处理的健康蕉柑芽条嫁接成活力完全不受影响;将这些芽条育成苗木,生长也完全正常。但在热水中,经43℃ 4小时以上,46℃ 1.5小时以上,50℃ 20分钟以上和54℃ 5分钟以上等处理后,皆显著失去嫁接成活力,经以上温度较短时间处理的病芽也不失去传病力。     

小菜蛾抗药性衰退的初步研究

小菜蛾抗药性衰退的初步研究罗余平，黄彰欣，吴佳教（华南农业大学植保系广州５１０６４２）杀虫剂轮换使用是克服害虫抗药性的有效方法。为了更好地应用这种方法防治小菜蛾［Ｐｌｕｌｅｌｌａ　ｘｙｌｏｓｌｅｌｌａ（Ｌ）］，就应探讨小菜蛾对某种杀虫剂出现抗药性后，...     

柑桔黄龙病毒研究初报

試驗用萊檬(Citrus aurantifolia)及麻疯柑(C.hystrix)作指示植物,用两广黃龙病区病株接穗嫁接接种,表現脉明、叶脉木栓化、茎部凹斑、及矮化、小叶等典型退化病毒(tristeza virus)所致症状,可知我国柑桔黄龙病与国外柑桔退化病(tristeza)系同一种病毒(或病毒群)所致。无病区的四川江津、湖南溆浦和北京的健康甜橙、桔类、及北京檸檬也带有黄龙病毒,可見黄龙病毒的分布远较病区为广。各种柑桔上所带黄龙病毒株系的強弱不同;在碰柑上的为强毒系,甜橙上的为强毒系或较弱毒系,桔类及北京檸檬上的各别为較弱毒系及弱毒系。     

柑桔红蜘蛛抗药性初步研究

本文应用玻片浸渍法,用克螨特,氧化乐果,螨克、单甲脒、尼索朗等5种杀螨剂,对本地施药桔园柑桔红蜘蛛进行毒力基线测定,结果表明,对上述5种杀螨剂均未形成明显抗药性.     

枸头橙种子中柑桔衰退-茎陷点病毒的鉴定

 采用双抗体夹心-酶联免疫吸附测定试验(DAS-ELISA)对枸头橙种子中柑桔衰退-茎陷点病毒的带毒情况进行了鉴定。结果表明,从严重感染茎陷点病的枸头橙罹病树采集的种子可检测到柑桔衰退病毒(CTV)。种子带毒量以内种皮为较高,剥皮种子次之,外种皮呈阴性。种子在4℃冰箱内贮藏1~2年后仍带毒,但带毒量有所下降。对带毒种子繁殖的实生苗及嫁接在实生苗上的墨西哥来檬的检测结果,有部分呈阳性,种植在防虫隔离网室内的100余株2年生枸头橙实生苗,用无毒珠心系的墨西哥来檬芽嫁接进行生物鉴定,经2年观察未发现症状     

柑桔木虱传递柑桔黄龙病的初步研究

柑桔木虱是柑桔黄龙病主要媒介昆虫。几年来的试验初步表明:无病植株上繁殖木虱成虫,在病树上吸毒20—30天以上就可传病。黄龙病病原在成虫体内约经20—30天循回期、带毒后木虱成虫,虫口密度大(20头/苗以上),吸食传毒1天即可发病;虫口密度小(1—5头/苗),吸食传毒7—14天也能传病。潜伏期一般2—8个月,个别株2年才发病,病梢于冬季回接,3—5个月后也表现出和虫传发病苗相同的斑驳状病症。