重庆地区柑桔衰退病毒多态性研究

柑桔衰退病毒(CTV)存在着复杂的株系分化现象.在使用弱毒株交叉保护防治柑桔衰退病时需要对田间病毒株系组成进行分析,并对选用的株系进行单蚜分离纯化.作者运用限制性片段长度多态性和单链构象多态性对田间获得的168个CTV样品和2个蚜传毒株的外壳蛋白基因进行分析,了解重庆市田间CTV组群构成情况,发现田间CTV以多株系混合发生为主,其中主要是CP/HinfⅠRFLP第1、3和6组群,约占总数的90%,并以强毒株混合感染为主.甜橙中CP/HinfⅠRFLP的组群构成最为复杂.单头褐色桔蚜从柚类至甜橙传播CTV的效率低(不足1%),该蚜的取食可改变CTV的株系组成.     

柑橘衰退病毒检测试剂研制及其分子特性研究

柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)广泛分布于世界各柑橘产区,其引起的衰退病是最具危害性的柑橘病害之一,该病毒主要通过蚜虫和带毒接穗传播.CTV存在明显的株系分化现象,除少数株系在许多柑橘品种上不产生可见症状外,大部分株系能在柑橘上产生明显症状,常见症状可分为三大类型,即速衰型、茎陷点型和苗黄型.速衰型症状主要表现在以酸橙作砧木的甜橙等感病柑橘上;茎陷点症状的发生与砧木种类无关,常导致葡萄柚或甜橙产量降低、品质下降、植株矮化;苗黄症状在田间很少发生,主要是在酸橙、来檬或葡萄柚的苗期引起严重褪绿和矮化.     

文旦柚矮化病的初步鉴定

苏鸿基(1979、1981)报道了台湾葡萄柚和柚的矮化病,接种墨西哥莱檬引起轻脉明和轻茎陷点,尤力克柠檬无黄化症状,葡萄柚叶片显著黄化和皱缩,ELISA等试验证实为衰退病毒(CTV)的一个株系。Tsai等(1992)进一步指出,柚茎陷株系引起柚严重茎陷点,称为衰退病毒矮化株系(CTV—D),并指出文旦柚矮化病在国内华南发生。作者1990年注意到浙江省玉环县文旦柚发生矮化症状树,对此病进行了调查和鉴定,初步结果报道如下。 1 发生和症状特点     

枸头橙茎陷点病的研究

由柑桔衰退病毒(citrus tristeza virus,CTV)引起的茎陷点病,是世界上许多柑桔生产国家如巴西、澳大利亚、日本和秘鲁等的重要柑桔病害,该病主要为害敏感的柑桔品种,与所用砧木无关。枸头橙(Citrus aurantium)是浙江黄岩桔区特有的砧木种,具有许多优良的栽培特点。前人的研究结果表明,它用作甜橙的砧木时,耐苗黄型衰退病。作者研究发现它对茎陷点病非常敏感,被害严重。1986年以来,作者对枸头橙茎陷点病的发生、茎陷点病对枸头橙植株的树势、产量和果型等的影响、病原病毒的鉴定以及致病力的测定等进行了研究,结果简报如下。     

引起重庆主栽柑桔品种衰退病的病毒株系组群分析

 柑桔衰退病毒(CTV)存在着许多生物学特性不同的株系。通过铲除感染强毒株植株或利用弱毒株交叉保护的方式来防治柑桔衰退病都需要对CTV株系进行准确、可靠的鉴定。本文根据对CTV衣壳蛋白基因(CPG)的限制性片段长度多态性(RFLP)分析,发现在重庆主栽柑桔品种的衰退病毒主要以CP/Hinf I RFLP第1、3和6组群为主,并且在田间以多株系混合感染为主。     

毒源和寄主对褐色桔蚜传播柑桔衰退病毒效率的影响

褐色桔蚜是柑桔衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)最有效的传播媒介,为了解不同柑桔寄主种类和毒源对褐色桔蚜传播CTV效率的影响,检测在以锦橙、凤凰柚和墨西哥来檬作毒源植株时,褐色桔蚜对10个CTV分离株的单蚜传毒率,以及蚜传前后CTV分离株p25/HinfⅠRFLP组群构成的变化,并对其中5个分离株与2个国外分离株进行了p20和p25基因相应氨基酸序列的比对分析。结果表明:褐色桔蚜传播CTV的能力受柑桔寄主种类的影响较大,以锦橙作毒源植株可以获得最高的传毒率;CTV毒株强弱以及褐色桔蚜虫态(有翅或无翅蚜)对单蚜传毒率影响不明显;褐色桔蚜传播具有p25/HinfⅠRFLP第3组群构成的CTV分离株的能力较强。     

6种柑橘类植物对柑橘衰退病毒分离株TR-L514变异的影响

 柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)存在复杂的株系分化现象,运用弱毒株交叉保护防治柑橘衰退病时需了解不同类型柑橘对CTV构成的影响。作者将CTV分离株TR-L514嫁接接种到6类柑橘植物上获得了18个亚分离株,并对这18个亚分离株和TR-L514进行了指示植物鉴定,p25基因的限制性片段长度多态性(RFLP)和单链构象多态性(SSCP)分析,p23基因的序列比较。结果表明,CTV株系对不同柑橘类植株的适应性存在差异。TR-L514嫁接到不同柑橘类植株其构成会发生变化,在甜橙上可以同时检测出p25//HinfⅠ RFLP第1和6组群,并具有比在其它4类柑橘上更为复杂的SSCP谱型构成,因此甜橙可能更适宜于CTV的增殖。TR-L514及18个亚分离株的p23基因序列差异可能与不同类柑橘植株的适应性有关。     

柑桔黄龙病毒研究初报

試驗用萊檬(Citrus aurantifolia)及麻疯柑(C.hystrix)作指示植物,用两广黃龙病区病株接穗嫁接接种,表現脉明、叶脉木栓化、茎部凹斑、及矮化、小叶等典型退化病毒(tristeza virus)所致症状,可知我国柑桔黄龙病与国外柑桔退化病(tristeza)系同一种病毒(或病毒群)所致。无病区的四川江津、湖南溆浦和北京的健康甜橙、桔类、及北京檸檬也带有黄龙病毒,可見黄龙病毒的分布远较病区为广。各种柑桔上所带黄龙病毒株系的強弱不同;在碰柑上的为强毒系,甜橙上的为强毒系或较弱毒系,桔类及北京檸檬上的各别为較弱毒系及弱毒系。     

枸头橙种子中柑桔衰退-茎陷点病毒的鉴定

 采用双抗体夹心-酶联免疫吸附测定试验(DAS-ELISA)对枸头橙种子中柑桔衰退-茎陷点病毒的带毒情况进行了鉴定。结果表明,从严重感染茎陷点病的枸头橙罹病树采集的种子可检测到柑桔衰退病毒(CTV)。种子带毒量以内种皮为较高,剥皮种子次之,外种皮呈阴性。种子在4℃冰箱内贮藏1~2年后仍带毒,但带毒量有所下降。对带毒种子繁殖的实生苗及嫁接在实生苗上的墨西哥来檬的检测结果,有部分呈阳性,种植在防虫隔离网室内的100余株2年生枸头橙实生苗,用无毒珠心系的墨西哥来檬芽嫁接进行生物鉴定,经2年观察未发现症状     

关于无毒柑桔生产的建议

一、柑桔病毒病可能成为中国柑桔产业的威胁柑桔病毒类病害种类很多,如果传入中国,将对中国的柑桔产品起到破坏和威胁作用。最近引入的一些病原物对浙江省来说也许是以前没有的,如柑桔顽固病(Spitop-lasm Citri)、柑桔石果病毒(Impietra-tura)、C 型木质陷孔病(Cachexia),还有如 Dcuterophorna 类的真菌。对发展中的柑桔业真正的和潜在的危险是柑桔病毒、     

苹果茎沟病毒柑橘碎叶株系的分布与序列分析

为明确苹果茎沟病毒(apple stem grooving virus,ASGV)柑橘碎叶株系(citrus tatter leaf virus,CTLV)在中国柑橘产区的发生分布及其分子特性,于2017—2021年对我国12个柑橘主产区开展系统调查,并采用多重比对以及系统发育分析法对CTLV的全序列进行分析。结果表明,从12个柑橘主产区采集的2 012份疑似样品中检测出413份感CTLV阳性样品。除陕西省外,其余11个柑橘主产区样品中均检测出CTLV,并且柚类样品中CTLV的检出率最高,达到32.31%。对分离获得的22株CTLV毒株和已知的7株CTLV以及5株ASGV毒株进行全序列分析,发现所有34株毒株的核苷酸序列相似性为78.6%～99.8%,且CTLV序列的保守性较高。此外,与其他4株ASGV毒株相比,本研究中22株CTLV毒株与ASGV-MK毒株(GenBank登录号为MZ127820.1)具有更近的亲缘关系。推测CTLV中国毒株间的亲缘关系可能与其采样地和寄主品种有关。     

CTV强弱毒株促进褐色橘蚜的取食

正由柑橘衰退病病毒(Citrus tristeza virus,CTV)引起的柑橘衰退病,对全世界柑橘产业造成了严重威胁。褐色橘蚜Toxoptera citricida(Kirkaldy)属半翅目蚜科,以非循回型半持久方式传播CTV,是CTV的最有效传播媒介~([1])。我国广泛分布着CTV的各种株系和传媒褐色橘蚜,对我     

温州柑桔裂皮病初步调查和鉴定

柑桔裂皮病(Exocortis)是由一种类病毒引起的危险性病害。目前在我国的四川、湖南、广东、广西、福建、台湾等省已有发生。1977年在浙江海宁从阿尔巴尼亚引入的甜橙上发现过裂皮病。温州是浙江的重要柑桔产区之一,60年代以来通过各种渠道从四川、湖南等地引入不少新品种。为了保护柑桔生产,免受裂皮病危害,以及防止该病害的传播,我们在近两年对温州主要柑桔产区进行田间调查和鉴定,现将初步调查和鉴定结果报道如下。     

应用常规RT-PCR和荧光定量RT-PCR检测柑桔衰退病毒

 根据柑桔衰退病毒(CTV)P20基因序列设计cquctv9/cquctv10特异引物对,以柑桔RNApolymeraseⅡ基因作为内参照,建立了柑桔衰退病的常规RT-PCR快速检测体系;依据柑桔衰退病毒P20基因序列设计cquctv1/cquctv2特异引物对和TaqMan探针cquctvp1,建立了柑桔衰退病荧光定量RT-PCR快速检测体系。常规RT-PCR检测下限是含有CTV的50pg总RNA,荧光定量RT-PCR法的检测下限是2fg纯CTV片段。荧光定量RT-PCR的灵敏度相对比常规RT-PCR高100倍。利用常规RT-PCR和荧光定量RT-PCR体系对从2005年3月到2006年7月采自田间的样品进行检测,结果表明,2种检测体系都有很好的特异性和准确性;对183个田间柑桔苗木样品带毒率检测结果表明,荧光定量RT-PCR检出率为(82.5%),比常规RT-PCR检出率(73.2%)高。     

大实蝇食物诱剂试验初报

大实蝇包括:密柑大实蝇Tetradacus tsuneonis(Miyake)和柑桔大实蝇Bactrocera(Tetradaws)minax(Enderlein)。该虫分布于四川、重庆、湖北、贵州、云南、陕西、广西、广东、湖南等省区。是国内外检疫对象,对于绝大部分柑桔产区来说,是一种重威胁柑桔产业发展的外来入侵生物。柑桔大实蝇的寄主植物仅限于柑桔类,以甜橙、金柑受害最重,柚子、红桔次之。柑桔大实蝇以其成虫产卵于柑桔幼果中,幼虫蛀食果肉,常引起果实未熟先黄,内部腐烂,最后果实脱落,造成严重减产。柑桔大实蝇1年发生1代,以蛹在土中越冬。成虫次年4月下旬开始出现,5月上旬为盛…     

利用病毒弱株系接种防治脐橙茎陷点病

在田间对枳砧森田脐橙利用选出的柑桔衰退病毒(CTV)和脉突病毒(CVEV)弱毒系对CTV强毒系的交叉保护作用进行了测定。结果表明,经CTV M—15A和M—16A预先接种的植株,树势强健,且果大。此外,用和CTV多克隆抗血清无反应的No.145及CVEV NO.1605弱毒系预接种植株生长也很好。     

广西柑橘衰退病和黄脉病调查及其病原病毒的遗传多样性分析

为明确柑橘衰退病毒(citrus tristeza virus, CTV)和柑橘黄脉病毒(citrus yellow vein clearing virus, CYVCV)在广西柑橘上的发生?分布及其遗传变异情况, 于2020年至2021年对百色?北海?崇左?贵港?桂林?河池?贺州?来宾?柳州?南宁?梧州和玉林等12个柑橘产区进行了病毒病调查?采用RT-PCR对采集样品进行了病毒检测, 并基于病毒分离物外壳蛋白(coat protein, CP)基因的核苷酸序列进行比对分析, 构建系统发育树?结果表明:采集的737份柑橘样品中, CTV的检出率为20.62%, CYVCV检出率为18.32%, CTV的检出率略高于CYVCV?病毒复合侵染的现象在采集的柑橘样品中普遍存在, CTV和CYVCV复合侵染率高达34.50%?对RT-PCR产物测序共获得12个CTV分离物和6个CYVCV分离物的CP基因序列?遗传多样性分析发现, CTV和CYVCV的CP基因序列都较保守, CTV分离物的遗传进化与地理来源?寄主来源均没有明显相关性, 但CYVCV分离物的遗传进化与地理位置具有相关性, 而与寄主来源无明显相关性?上述研究结果可为深入了解CTV和CYVCV在广西的流行情况以及柑橘病毒病的检疫和防控提供参考?     

柑橘衰退病毒柚分离株的p25/Hinf1 RFLP分析

对123个柑橘衰退病毒柚分离株进行p25/Hinf1 RFLP分析明确:样品中,单一p25/Hinf1 RFLP组群样品占样品总量的82.9%,说明我国田间受侵染柚类中柑橘衰退病毒株系相对较为单一;RFLP组群6的样品占样品总量的79.7%,说明目前柚类生产上的优势流行株属于p25/Hinf1 RFLP组群6,初步认定为强毒株系;柑橘衰退病毒株柚分离株S102、S104、S106、S108属于p25/Hinf1 RFLP组群5,初步认定是弱毒株系。     

通过茎尖嫁接脱除柑桔黄龙病病原体

据报道,通过茎尖嫁接可以脱除多种柑桔病毒病和类似病毒病的病原体。如引起裂皮病(Exocortis)和木质陷孔病(xyloporosis-cachexia)的类病毒;引起顽固病(stubborn)的螺原体Spiroplasma cirri,以及引起衰退病(tristeza)和侵染性杂色花叶病(infectious variegation)的病毒。