荧光定量PCR技术及其在动物检疫中的应用

作为体外基因的快速扩增技术,PCR的应用存在很多局限性,如伴随高敏感性而引起的假阳性、EB染色对操作者的危害及环境的污染。为了克服这些缺陷,荧光定量PCR(fluorescence quantitative poly-merase chain reaction,FQ-PCR)应运而生,FQ-PCR解决了传统PCR方法不能准确定量、易交叉污染等实际问题,反应过程中通过实时监测PCR反应体系中的荧光信号便可得知靶序列初始浓度,从而达到快速定性、定量检测的目的。按照荧光产生的原理,可将FQ-PCR分为染料法和探针法两种类型。染料法是在常规PCR反应体系中加入SYBR Green I等荧光染料,…     

防止PCR检测动物疫病反应体系污染措施

PCR技术是利用DNA聚合酶,在体外大量合成(扩增)DNA片段的分子生物学技术.具有特异性好、灵敏度高、简便快速等特点.即使在10万个细胞中含有一个拷贝的待检核苷酸序列,也可用PCR技术检测出来.     

用尿嘧啶糖基化酶预防PCR污染的研究

利用尿嘧啶糖基化酶能特异性地降解ＤＮＡ双链中尿嘧啶核苷的作用,在ＰＣＲ体系中以ｄＵＴＰ代替ｄＴＴＰ使产物中掺入ｄＵＴＰ,在ＰＣＲ扩增前用ＵＤＧ水解,即可特异性地预防ＰＣＲ产物的污染。引用该酶消化建立的防污染ＰＣＲ体系,０．１Ｕ的ＵＤＧ即可预防１０＾３－１０＾１０产物分子污染,并用于动物标本中土拉热弗朗西丝氏菌的检测,证明ＵＤＧ－ＰＣＲ可以特异性地检出标本中的靶细菌。     

应用PCR技术检测兽医生物制品中污染病毒的研究

本文阐述了PCR(基因扩增 )技术的原理、基本操作方法 ,及其在兽医生物制品疫苗污染病毒检测中的应用。着重介绍了应用PCR技术检测新城疫病毒和瘟病毒的方法 ,具有快速、敏感、特异性高等优点 ,对兽医生物制品的研究、生产和临床应用具有一定的指导意义     

PCR实验常见污染的原因及对策

聚合酶链式反应（PCR）是分子生物学技术的一种,由于其反应特异性强,操作简单、快速,对纯度要求低,且灵敏度高等优点,被广泛应用于兽医实验室的检测、监测等工作中。PCR实验室布局要求严格,需设置四个区域,一是试剂储存和准备区,二是样本制备区,三是扩增反应混合物配置和扩增区,四是扩增产物分析区。进入各个区域进行操作必须遵循单一方向原则,避免交叉污染。虽然PCR实验室布局设计要求严格,但是在基层实验室实际操作中还会遇到一些污染问题。在实验过程中,极其微量的污染都会造成实验结果的不准确以致实验失败。     

应用SYBR Green Real Time PCR技术检测细胞培养物中支原体污染

根据常见支原体23S rRNA的保守区域基因序列,设计通用引物,应用SYBR Green Real Time PCR技术,研究建立了细胞培养物中支原体污染的快速检测方法。该方法能检测到污染细胞培养物的6种常见的支原体,敏感度达4.2×10-2pg/mL模式株的DNA。     

动物疫病PCR检测实验室的污染与对策

PCR(polymerase chain reaction,聚合酶链式反应)技术是美国Cetus公司人类遗传研究室的科学家Mullis于1985年发明的一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法,又称为基因的体外扩增法。这种技术操作简单,容易掌握,有极高的灵敏度,结果可靠。近几年,随着PCR相关技术的发展,复合PCR、定量PCR、荧光PCR等PCR技术在动物疫病的快速检测方面得到了广泛应用,为动物疫病的诊断及检验检疫提供了良好的依据。但该方法较强的扩增能力也带来了令人头痛的问题?易污染,极其微量的污染即可造成假阳性的产生。1引起PCR污染的因素1.1 PCR试剂的…     

减少猪场臭气污染的方法

论文从猪体内和体外两方面探讨了减少猪场臭气排放和除臭的一些方法.体内方法主要包括改变日粮成分和使用各种添加剂;体外方法主要包括在猪粪中添加一些除臭物质或在猪舍、粪道空间使用电净化技术及生物过滤技术等.     

3种PCR引物对猪瘟活疫苗中支原体污染的检测

本研究以GenBank中登录的几种常见支原体的16S rRNA基因序列为标准,依据其属、种特征设计了3对引物,对猪肺炎支原体DNA进行PCR扩增,建立PCR扩增体系和条件。然后以此体系和条件对从市场上随机购买的猪瘟活疫苗样品进行检测。结果显示：3对PCR引物都可以从疫苗样品中检测到支原体的污染,3对引物的检出率分别为20%、17.1%和14.3%,说明猪瘟活疫苗中的支原体污染为多种支原体的混合污染,污染源较为复杂。     

减少猪场氮污染的方法

规模化猪场废水中含有高浓度的氮,会给环境造成很大的污染,为此国内外学者对去除猪场中的氮污染进行了大量的探索,归纳总结了国内外学者研究的减少猪场氮污染的方法与工艺,以亟为猪场减排污染提供参考.     

牛早期胚胎性别鉴定PCR反应体系的优化研究

根据牛SRY基因序列设计合成2对巢式PCR引物作为性别鉴定引物，根据牛酪蛋白基因序列设计了一对引物作为内标引物建立了牛胚胎性别鉴定的PCR反应体系。同时对常规PCR和巢式PCR在牛早期胚胎性别鉴定中的实用性进行比较。15头公牛、13头母牛的DNA样品检测结果表明：使用巢式PCR公牛可以扩增出205bp的SRY基因片段和403bp的酪蛋白基因片段，母牛只能扩增出403bp的酪蛋白基因片段；而使用常规PCR时公牛扩增出255bp的SRY基因片段和403bp的酪蛋白基因片段，母牛只能扩增出403bp的酪蛋白基因片段，其性别鉴定结果和实际完全一致。由于巢式PCR只需10个细胞就可以在紫外透射分析仪下看到扩增结果，而常规PCR则需要20～30个细胞，所以胚胎性别鉴定时使用巢式PCR效果更好。试验采用巢式PCR鉴定了10个奶牛胚胎的性别，同时还对血清是否会对试验结果产生影响进行了研究。     

减少猪场氮污染的方法

规模化猪场废水中含有高浓度的氮,会给环境造成很大的污染,为此国内外学者对去除猪场中的氮污染进行了大量的探索,归纳总结了国内外学者研究的减少猪场氮污染的方法与工艺,以亟为猪场减排污染提供参考。     

纳米PCR技术及其在动物疫病检测领域的应用

纳米聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术是将纳米材料应用PCR所形成的一门新兴技术,提高了PCR检测的准确性、可靠性。本文重点介绍了主要用于PCR反应的纳米材料及其特性,纳米材料增强PCR反应的机制,及其在动物疫病检测中的应用和未来发展前景。     

实时荧光PCR技术在动物疫病诊断中的应用研究

实时荧光定量PCR技术于1996年美国Applied Biosystems公司推出以来,取得飞速发展。该技术通过在普通PCR反应体系中加入荧光探针或荧光染料,在PCR过程中直接检测荧光信号的变化情况,从而能够实时监测整个PCR进程,     

鸡毒支原体MG荧光定量PCR技术评估实验室MG核酸污染方法

为了评估鸡毒支原体(MG)非免疫鸡群的MG感染,常采用MG荧光定量PCR技术进行监测;而在鸡群的MG净化监控前,需要对实验室进行MG核酸污染评估,无污染后才能进行后续的净化检测工作.本实验采用MG荧光定量PCR技术评估实验室各区域的MG核酸污染情况,如果存在核酸污染,需要采取一系列的消毒措施,直至实验室MG核酸污染监控...     

第三方检验检测机构PCR检测室防核酸污染措施

随着社会的需求,第三方检验检测机构的数量日益增多。检测数据的准确性不仅关乎检测机构的检测水平,也直接影响行政机关的执法效力,因此检测实验室必须确保其检测数据科学公正、准确可靠。核酸检测是第三方检验检测机构中最常见的检测项目,而气溶胶污染是核酸检测中最主要最常见的污染,也是困扰绝大多数实验室的难题,必须要加以重视。本文就本中心在核酸检测防污染方面的体会进行初步总结。     

PCR技术在禽流感诊断中的应用

传统AIV诊断方法如病毒分离鉴定、酶联免疫吸附实验、间接血凝抑制实验及病毒中和实验等在实际生产中,由于其操作过程繁琐费时,敏感度低     

支原体PCR检测方法的建立和应用

依据GenBank中登录的常见细胞污染支原体16S rRNA基因序列,选择高度保守的区域设计引物,建立了一种快速灵敏的支原体PCR检测方法.该方法可以特异性检测出6种支原体,并能敏感的检测到10个拷贝数的目的基因.采用建立的PCR方法和传统的培养法对23个不同样品(细胞、血清、疫苗成品、半成品)进行检测,符合度100％.该方法的建立可大大缩短疫苗生产过程中支原体检验所需时间.     

巢式PCR在动物疫苗支原体污染检测中的应用

在动物疫苗研制过程中,应用巢式PCR方法,设计两套引物,扩增支原体16S与23SrRNA基因间隔区序列,可以检测造成细胞污染的常见支原体种类。本试验应用该方法检测三批样品和阴性对照均无特异性目标条带,即三批疫苗样品支原体检测均为阴性。阳性对照样品在200-400bp之间出现特异性目标条带,实验表明所建立的巢式PCIL方法是一种快捷、灵敏、准确的检测方法,可以用于检测动物疫苗细胞培养物中支原体污染。