AtSUC3缺失对拟南芥愈伤组织分化及其蔗糖代谢的影响

以拟南芥愈伤组织为材料,研究了拟南芥蔗糖转运蛋白基因AtSUC3经T-DNA插入突变对拟南芥愈伤组织的分化及其蔗糖代谢的影响。试验结果表明:愈伤组织出现的时间早于atsuc3,且生长略快于atsuc3,二者质地均疏密适中;在蔗糖浸泡液中的果糖和葡萄糖不是由愈伤组织外渗的,而是转化酶作用于培养基中蔗糖的结果;野生型愈伤组织的蔗糖转化酶活性略高于atsuc3愈伤组织,野生型愈伤组织浸泡液中蔗糖的浓度始终低于atsuc3,而浸泡液中的葡萄糖浓度高于atsuc3。因此,AtSUC3缺失使拟南芥愈伤组织的分化和生长受阻,但影响不大;atsuc3愈伤组织对蔗糖的吸收能力弱于野生型;AtSUC3T-DNA插入突变体由于对蔗糖的吸收能力降低,而增加对葡萄糖的吸收,以作为对碳源的补偿。     

中国粗榧愈伤组织诱导及再生体系的建立

以中国粗榧(Chinesecephalotaxussinensis)茎尖、幼叶为外植体材料进行愈伤组织诱导,分化及再生苗的生根、移栽的主要影响因素,建立了中国粗榧的再生体系。结果表明,培养基以MS 6BA NAA 2,4D为佳,培养温度为28℃,相对湿度为70%,光照时间8h/d,3周后开始形成愈伤组织。0.1mg/L2,4-D在SH培养基上诱导愈伤组织分化成芽,分化率平均每块愈伤可达6.1±0.33个芽,最适生根条件为1/2MS 1.0mg/LNAA。     

红刺玫愈伤组织诱导再生体系的建立

红刺玫(Rosa multiflora Thunb.var.cathayensis)为蔷薇科蔷薇属野蔷薇的一个变种,半常绿灌木,花色粉红。红刺玫以花期长、耐受高温和高湿气候等特性成为园林绿化的新宠[1]。但红刺玫的单瓣花和花色单一的缺陷限制了其广泛的应用,改良红刺玫花色引起园艺工作者的极大兴趣。然     

野生型拟南芥叶片愈伤组织诱导的研究

[目的]研究野生型拟南芥叶片愈伤组织的诱导。[方法]以野生型拟南芥叶片为外植体,通过将其切段后接种在添加有不同浓度6-BA和NAA的MS培养基上,研究了拟南芥愈伤组织的诱导和再生植株。[结果]6-BA对于愈伤组织诱导不可缺少,但其浓度太高易产生玻璃化;NAA单独使用利于生根,配合6-BA使用利于分化芽;获得最适愈伤组织诱导培养基为MS＋0.50mg/L6-BA＋0.10mg/LNAA,愈伤组织诱导率可达100%。[结论]为进一步开展拟南芥的遗传转化或细胞培养奠定了基础。     

马铃薯叶片愈伤组织再生体系的建立

以8个马铃薯品种(系)为试材,进行叶片离体再生研究。结果表明,云薯501愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+6-BA 3mg/L+NAA 0.3 mg/L+GA310 mg/L,愈伤诱导率为100%,诱导不定芽分化的优化培养基为MS+6-BA 3 mg/L+GA310 mg/L,芽的分化率为86.3%;会-2的愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+6-BA 3 mg/L+NAA 0.5 mg/L+GA310 mg/L,愈伤诱导率为95.7%,诱导不定芽分化的优化培养基为MS+6-BA 3 mg/L+NAA 0.02 mg/L+GA310 mg/L,芽的分化率为65.4%。上述2个品种适宜用作马铃薯转基因实验的载体,其他6个马铃薯品种(系)的愈伤诱导率很低,有的品种(系)没有愈伤组织产生,不能作为马铃薯基因转化的载体。     

野生型拟南芥叶片愈伤组织诱导的研究

[目的]研究野生型拟南芥叶片愈伤组织的诱导。[方法]以野生型拟南芥叶片为外植体,通过将其切段后接种在添加有不同浓度6-BA和NAA的MS培养基上,研究了拟南芥愈伤组织的诱导和再生植株。[结果]6-BA对于愈伤组织诱导不可缺少,但其浓度太高易产生玻璃化;NAA单独使用利于生根,配合6-BA使用利于分化芽;获得最适愈伤组织诱导培养基为MS＋0.50 mg/L 6-BA＋0.10mg/L NAA,愈伤组织诱导率可达100%。[结论]为进一步开展拟南芥的遗传转化或细胞培养奠定了基础。     

剑麻叶片愈伤组织诱导及再生体系的建立

以剑麻幼叶为外植体,进行愈伤组织的诱导试验,建立从愈伤组织到再生植株的培养体系。结果表明：诱导愈伤组织阶段表现最优的配方是N6＋NAA0．2mg／L＋6-BA3．0mg／L,而后愈伤组织转入MS＋TDZ1．0mg／L＋NAA0．05mg／L的培养基中48d便可诱导出芽,在生根培养基MS中生根率可达90％。     

洋葱花梗愈伤诱导及再生体系的建立

为建立洋葱愈伤诱导及再生体系,本试验以8个不同洋葱品种花梗为外植体进行愈伤组织诱导及再生苗等研究。结果表明,黑暗、25℃条件下,诱导培养基为MS+1.8 mg/L 2,4-D+2.0 mg/L甘氨酸+700mg/L脯氨酸+1.0 g/L干酪素水解物+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂时,不同洋葱花梗均能形成愈伤组织,诱导率为100%,表明该诱导过程不受基因型影响。不同洋葱花梗愈伤组织再生苗培养基为MS+30 g/L蔗糖+8g/L琼脂,其诱导成苗过程与生根同步,移栽成活率达90%;‘环球’的再生频率最高,为30%。     

玉米自交系愈伤组织的诱导及再生

利用黑龙江省生产上大面积使用的8个优良玉米自交系的幼胚为外植体诱导愈伤组织，研究了基因型和2，4－D浓度对愈伤组织诱导的影响。结果表明：玉米的组织培养对基因型的依赖性较强；愈伤诱导阶段需要较高的2，4－D浓度，继代过程中要根据愈伤组织的生长情况及时调整2，4－D浓度。同时对影响玉米愈伤组织的分化、植株再生及其移植的因素进行了分析。     

锥花福禄考叶片愈伤组织诱导与植株再生

以锥花福禄考的叶片为外植体,进行愈伤组织诱导、不定芽分化增殖及生根培养,确定了锥花福禄考快繁体系的最适培养条件:(1)初代培养基:MS BA0．4mg／L NAA1．5mg／L;(2)丛生芽增殖培养基:MS 6-BA1．0mg／L IBA0．1mg／L GA31．5mg／L;(3)生根培养基:1／2MS NAA0.1mg／L。     

高羊茅成熟胚愈伤组织诱导及植株再生

[目的]优化高羊茅成熟胚的组织培养条件。[方法]以高羊茅成熟胚为外植体,MS为基本培养基,探讨不同浓度激素和激素组合对愈伤组织诱导、继代培养及植株分化的影响。[结果]添加2,4-D2.0mg/L的MS培养基中愈伤组织的诱导率最高,达63.5%;在1.0～4.0mg/L范围内,随着培养基中2,4-D浓度的降低,愈伤组织的颗粒性增强,致密性增加,含水量下降,其中MS＋2,4-D2.0mg/L为愈伤组织继代的最佳培养基;愈伤组织在含2.0mg/L6-BA和0.10mg/LNAA的MS培养基上植株分化率最高,达80.2%;将再生苗转移至不含植物生长调节剂的1/2MS培养基上进行增殖、壮苗,然后将其移栽入沙质壤土中,移栽成活率可达90%。[结论]该研究建立了高羊茅的高效再生体系。     

低温及碳源对拟南芥菜胚愈伤组织诱导和植株再生的影响

以低温处理1～4d的野生型拟南芥菜种子胚为外植体，分别培养在附加激素为2，4－D（0．05mg／L），BA（0．05mg／L）的B5和MS两种基础培养基上，每种培养基的碳源分别为蔗糖和葡萄糖．结果发现均有愈伤组织的形成，其中B5＋蔗糖培养基有较高的诱导频率；当蔗糖为碳源时，胚外植体先萌发出子叶，然后在下胚轴长出愈伤组织，而改用葡萄糖时，整个胚外植体都形成愈伤组织；将诱导出的愈伤组织转移到B5、MS和1／2MS3种附加2，4－D（0．05mg／L）和BA（0．5mg／L）培养基上进行植株的再生，发现在MS和1／2MS两种培养基上有芽的生成．再将生芽组织转接到1／2MS生根培养基上，均可诱导生根．剥去种皮与低温处理种子有相同的效应，都能打破种子的休眠，这表明低温打破种子休眠的效应部位不是在胚．     

安祖花愈伤组织诱导和植株再生的研究

为建立适合安祖花遗传转化的受体体系,分别选取安祖花组培苗带叶柄的叶片和带叶柄的茎段为外植体,进行了愈伤组织的诱导和植株再生试验。结果表明:以带叶柄的茎段为外植体对愈伤诱导效果好于带叶柄的叶片。使用带叶柄茎段为外植体,以1/2MS BA 1.0 mg/L 2,4-D 0.1 mg/L为基本培养基进行愈伤组织诱导和继代培养,愈伤组织诱导率最高为89.65%;使用3%蔗糖作为碳源的1/2MS添加0.1 mg/L KT能显著提高诱导率;添加NAA 0.5 mg/L或2,4-D 0.5 mg/L有助于生根。     

观赏草——紫粟紫威愈伤组织诱导及其再生体系的建立

以萦粱紫成的成熟种子为材料,建立起了紫粱萦成的再生体系:种子表面灭菌方式为:75%乙醉浸池1min,然后0.1%升汞浸泡13min;在附加2.0mg/L 2,4-D,0.3 mg/L 6-BA,690mg/L脯氨酸,500mg/L水解酪蛋白,3%蔗糖和6g/L琼脂的N6培养基中愈伤诱导率最高,达100%;在诱导培养基中添加100mg/LVc可以有效抑制愈伤褐化;附加0.1mg/L 6-BA和o.2写活性炭的N6培养基愈伤分化率最高,达90%;生根培养基为附加3%蔗糖和6 g/L琼脂的1/2 MS培养基.     

孟士德薰衣草愈伤组织诱导和植株再生

取孟士德薰衣草叶片、茎段、芽为外植体,设置6组不同激素水平进行组织培养试验,结果显示：以MS＋BA2．0mg·L^-1（单位下同）＋NAA0．1或MS＋BA2．0＋IBA0．15为培养基诱导愈伤组织效果好;茎段的愈伤诱导率高达92．5％;芽的萌动早、愈伤诱导率达80％;叶的诱导效果最差,愈伤诱导率为35％,且极易褐变死亡。愈伤组织在MS＋BA1．0＋IBA0．1培养基上继续培养．形成大量的丛生芽。单个芽在1／2MS＋NAA0．2培养基上进行生根培养,生根率达98％。试验表明芽适合作快速繁殖材料,茎段适合先形成愈伤组织再诱导植株再生。     

草坪型高羊茅成熟种子胚性愈伤组织诱导及植株再生

以5种草坪型高羊茅成熟种子为外植体材料,探讨外植体消毒和不同激素组合对愈伤组织诱导、继代培养以及植株分化的影响。结果表明,不去种皮与去种皮相比,能显著提高高羊茅成熟种子发芽率和出愈率。猎狗5号和野马2号在添加2,4 D10.0mg/L的培养基中愈伤组织诱导率最高;新秀和颂歌的出愈率在2,4 D浓度为8.0mg/L时达到最高;野火的出愈率在2,4 D浓度为4 0～10 0mg/L时变化不大,仅为10.5%～11.2%。用3.0g/L的水晶洋菜(Gelrite)代替琼脂做培养基疑固剂可促进愈伤组织生长及向胚性愈伤组织转化;愈伤组织在含BA2.0mg/L和NAA0.5mg/L的MS培养基上植株分化率较高,其中猎狗5号在此培养基上的愈伤组织植株分化率达72.8%。     

石竹愈伤组织诱导及植株再生

通过诱导愈伤组织再分化和直接诱导不定芽这两种途径获得了石竹的再生植株，比较了不同植物生长调节剂配比在离体培养中的效应。认为6-BA是诱导长期培养的愈伤组织再分化最有效的外源激素，适宜的质量浓度范围在0.5-2.0mg/L之间，当6-BA为1.0mg/L，NAA为0.3mg/L时，愈伤组织不定芽分化频率最高，小苗生长状况也最好；将6-BA与NAA，IBA，Ad等生长调节剂混合使用可提高诱导效果，增殖继代培养基中6-BA的质量浓度在0.1-0.3mg/L之间为宜，浓度过大，虽然芽增殖数量增多，但苗的畸形化和愈伤化现象严重。     

防风愈伤组织诱导及植株再生体系研究

以防风为材料,研究不同外植体、激素组合、培养基对愈伤组织诱导及植株再生的影响。结果表明,茎段是防风组织培养较为理想的外植体材料。诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+1.5 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L KT+1.0 mg/L 6-BA,最高出愈率为96.7%;诱导不定芽的最佳培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA,最高诱导率为75%;诱导根的最佳培养基为1/2MS+0.5 mg/L NAA+0.1 mg/L 6-BA,生根率达65%;组培苗的移栽成活率达80%。     

Landersberg生态型拟南芥愈伤组织的诱导和植株再生体系的研究

以landersberg生态型的拟南芥为试材,建立了一套简便有效的组培体系。无菌苗的生长采用竖直培养,易于收集外植体。莲座叶、叶柄、下胚轴、根分别作为外植体在B5+5 mg/L2,4-D+0.5 mg/L KT培养基上诱导愈伤组织,结果表明,莲座叶作外植体出愈慢,出愈率低,愈伤组织质量较差;叶柄、下胚轴和根作外植体出愈快,且愈伤组织质量好,后期易分化。根外植体在MS+5 mg/L KT+0.1 mg/L IAA配方的出芽诱导培养基上诱导2～3周后,愈伤组织能有效分化出芽,分化率达100％。分化出的芽移至MS+2 mg/L NAA培养基上竖直培养,2周左右诱导分化出根,然后移至MS培养基上开花结果。