我国对噬菌蛭弧菌的研究(九)

<正>近年来,由于多种原因,国内许多肠道致病菌广泛地污染着水源、威胁着人群健康。尤其是El Tor霍乱弧菌引起的霍乱(属国际检疫传染病),自1961年以来一直不断地扩散和蔓延;由伤寒沙门菌引起的伤寒、副伤寒的发病率近年来在我国某些省、市、自治区显著回升,1988年江苏省的发病率竟高达531.36/100,000;另外,由副溶血弧菌引起的食物中毒以及广大农村秋季腹泻病的发病率也均显著升高。     

我国对噬菌蛭弧菌的研究(十)

<正>7国外对蛭弧菌的研概况1962年发现蛭弧菌以来,各国至今已发表论文500余篇,研究者对它的分类学、细胞学、免疫学、生理学、生物化学、分子生物学、生态学以及蛭弧菌与宿主菌的相互作用等进行了大量的工作。7.1蛭弧菌的基本特征蛭弧菌的基本特性,可概括为如下几点:(1)一般呈弧、杆状,有时呈螺旋状;(2)菌体狭小。宽约0.3~0.45μm;(3)端生鞭毛;很少多于1根,鞭毛带鞘,并着生于     

我国对噬菌蛭弧菌的研究（二）

1.4 蛭弧菌的形态结构蛭弧菌噬菌斑革兰染色高倍镜观察,可见典型的、多量的革兰氏阳性、小的弧状杆状细胞。蛭弧菌噬菌斑悬滴相差显微镜下可见到运动极其活泼,呈跳跃式积极追捕宿主的蛭弧菌细胞,在相差显微镜下可以连续观察蛭弧菌吸附、侵染,进入、增殖、生长、裂解宿主细胞的全过程。     

我国对噬菌蛭弧菌的研究（五）

4.3蛭弧菌在自然水（或土壤）中的分布及数量调查我们自1979年以来先后7次在江苏、山东、北京和安徽等31个市、县258处共采水（泥）样325份,以El Tor霍乱弧菌、福氏志贺菌、副溶血弧菌、大肠杆菌为宿主菌进行检查,在任一宿主菌上出现噬菌斑者为阳性结果,共检出阳性254份（78.15%）。如样品中加宿主菌培养增殖后再以自来水宿主双层平板检查,则阳性率均有明显提高。     

我国对噬菌蛭弧菌的研究（七）

5.3蛭弧菌在自然环境河水中对细菌的净化作用我们在江苏省盐城市境内的自然环境河水中观察了蛭弧菌Bd81对不凝集弧菌17040-1等的净化作用。自然河水的选择：河流东西走向,河堤上有芦苇、杂草等。河水肉眼观察稍有浑浊,河水中有水草等水生物分布,并有鱼、虾、蚌、蛙、蟾蜍、蛇等水生动物存在。河水自然p H（7.1~7.8）。河水中没有检出不凝集弧菌17040-1的噬菌体。     

我国对噬菌蛭弧菌的研究（一）

细菌的寄生菌为Stolp和etzold1962年首次在德国的土壤中于一种植物假单胞菌上发现的.1 96 3年Stolp和Starr 又在美国加利福尼亚州的土壤、污水中用独特的分离技术得到了这类细菌,并命名为Bdellovibrio bacteriovorus （噬菌蛭弧菌,简称蛭弧菌）.因发现这类细菌,Stolp等曾被授予Koch奖金.由于此类菌对宿主菌的“寄生”和“裂解”的生物特性引起了人们极大的兴趣,2 0多年来,美国、苏联、日本、以色列、法国、加拿大和印度等国家的实验室都在进行对这类菌的研究.     

我国对噬菌蛭弧菌的研究（六）

5.1 蛭弧菌在灭菌湖水中对宿主菌的净化作用 蛭弧菌Bd81、Bd98在PH7．4～7．6的灭菌湖水中,对宿主福氏志贺菌有显著的清除作用,     

我国对噬菌蛭弧菌的研究（四）

2.3蛭弧菌对伤寒沙门菌的裂解作用蛭弧菌Bd81、Bd98对206株（江苏省地方菌201株,标准菌5株）伤寒沙门菌有显著的裂解作用,在自来水双层琼脂平板上,大多数可以形成清晰透明的噬菌斑,裂解强度不完全一致。Bd81裂解率为96.6%,Bd98裂解率为99.02%。     

我国对噬菌蛭弧菌的研究（三）

1.7蛭弧菌在死的宿主菌中的生长特性蛭弧菌Bd81、Bd98于加热及氯仿处理失活的宿主菌双层琼脂平板上,比在未经处理的活的宿主菌双层琼脂平板上更迅速形成噬菌斑,后者一般需40~48h才可出现噬菌斑。在加热及氯仿处理的宿主菌双层琼脂平板上只需14h,形成噬菌斑的数目也大大增多。例如在100℃加热致死的宿主菌中Bd81增加105倍,Bd98增加约72倍,在80℃加热致死的宿主菌中Bd81增加151倍,Bd98增加73倍。氯仿处理致死的宿主菌上Bd81增加74倍,Bd98增加67倍。     

噬菌蛭弧菌的生物学特性研究

噬菌蛭弧菌（以下简称蛭弧菌）是一类专门以捕食细菌为生的寄生性细菌。广泛存在于自然水体，污水及土壤中，并能从动物或人体粪便中检出。它比通常的细菌小，能通过细菌滤器，有类似噬菌体的作用，但它不是病毒，它具有细菌的一切形态特征。1962年首次发现于菜豆枯萎病假单胞菌体中，命名为Bdellovibriobacteriovorus，由于它们具有特殊捕食生活方式以及有可能充当决定自然界中微生物种群变动的角色，因而引起了许多科学工作者的兴趣。我们利用分离到的一株具有控制鱼类暴发性出血病病原的蛭弧菌BdNA1和由淡水渔业研究中心分离并保存的嗜…     

噬菌蛭弧菌的研究及应用(四):噬菌蛭弧菌微生物生态制剂在虾蟹养殖中的应用

在我国,虾蟹养殖用药品的生产和使用极不规范,养殖者盲目使用抗菌药物和消毒剂,造成虾蟹产品中药物残留严重超标,使得我国虾蟹产品的出口在国际市场屡受挫折。因此,要彻底解决抗生素及其他化学药物残留对人体的危害,扩大虾蟹产品在国际市场上的出口规模,一是必须规范我国水生动     

噬菌蛭弧菌的研究及应用(六)噬菌蛭弧菌微生物生态制剂在海水水生动物养殖中的应用

海水养殖是海洋渔业中的重要产业之一，海水养殖的水生动物的种类主要包括贝类、虾类、蟹类和鱼类。贝类主要为牡蛎、贻贝、扇贝、泥蚶、蛤、缢蛏、鲍、珍珠贝类等；虾类主要为对虾、罗氏沼虾、日本龙虾等；鱼类主要为鲻鱼、梭鱼、罗非鱼、鲷鱼和石斑鱼等。     

噬菌蛭弧菌的研究及应用(六) 噬菌蛭弧菌微生物生态制剂在海水水生动物养殖中的应用

海水养殖是海洋渔业中的重要产业之一,海水养殖的水生动物的种类主要包括贝类、虾类、蟹类和鱼类。贝类主要为牡蛎、贻贝、扇贝、泥蚶、蛤、缢蛏、鲍、珍珠贝类等;虾类主要为对虾、罗氏沼虾、日本龙虾等;鱼类主要为鲻鱼、梭鱼、罗非鱼、鲷鱼和石斑鱼等。海水水生动物是指终生生活在海水里的水生动物。我国的海水水生动物养殖产量居世界之首。据国家海洋局《中国海洋经济统计公报》记载,2006年我国海洋渔业的总产值为4533亿元,占海洋产业总产值的24.6%。其中海水水产品的总产量达3715万t,而海水养殖产量为2309万t。2007年上半年海洋渔业创造…     

噬菌蛭弧菌的研究及应用(五):噬菌蛭弧菌微生物生态制剂在淡水水生动物养殖中的应用

淡水水生动物是指能生活在含盐量低于3‰的水体中，系统发生过程中未曾脱离水体生活的一级水生动物。我国的淡水水生动物资源非常丰富，加上人工养殖的水产品，市场供应充足。特别是淡水鱼类，世界上现有约10000种，我国就有1000种左右。     

噬菌蛭弧菌预防对虾弧菌感染的应用研究

采用16S rDNA特异引物对63F和842R对蛭弧菌标准菌株Bdellovi briobacteriovorus 109-J和实验菌株Bd-9913进行了PCR鉴定,使用Bd-9913菌株分别对3株虾类病原菌溶藻弧菌Vibrio alginolysticus LS01、HF09,副溶血弧菌V．parahaemolyticus V28以及1株大肠埃希氏菌Escherichia coli CH-42进行裂解。结果表明,10^5PFU／ml的Bd-9913对于10^9CFU／ml的宿主菌具有较好的裂解效果。采用3．0×10^5PFu／mlBd109-J和Bd-9913分别与饲料混合（v／w）后投喂3．0g左右的凡纳滨对虾幼虾,14d内未发现对虾异常,且在对虾肠道内检测不到Bd109-J及Bd-9913,证明二者对于凡纳滨对虾幼虾是安全的。对正常养殖了50d的室外集约化虾池水体分别泼洒终浓度0．3mg／L的二氯异氰脲酸、0．3mg／L季胺盐络合碘和3．0×10^5PFU／ml蛭弧菌,后者对于抑制水体弧菌活菌浓度的效果明显优于化学消毒剂。当每隔20d左右分别进行一次上述水体处理,通过比较体内弧菌感染的对虾个体数,发现从肝胰腺分离到弧菌的对虾数量二者无显著差异,但从血淋巴分离到弧菌的对虾数量,蛭弧菌处理组显著少于化学消毒剂处理组,显示了蛭弧菌在预防对虾弧菌感染方面的优越性。     

噬菌蛭弧菌、噬菌体和细菌素(三)

<正>3.3细菌素的化学组分及理化性质细菌素是一种具有生物活性蛋白质类物质。大多数细菌素是含有蛋白质和脂多糖的复合物多浆体,相当于菌体O抗原。细菌素抑制菌体的生长作用与蛋白质成分有关,在蛋白酶的作用下,可破坏其抑菌活性,其活性也与糖脂质有关。弧菌在pH1.3～12.5的范围内作用30min不受影响,56℃环境经5h或煮沸1min不被灭活。但是37℃、pH8.0的环境中与0.05%的胰蛋白酶接触20min,或100℃、10min可灭活。绿脓菌素在pH6.5～9.5环境中是稳定的,经蛋白酶作用,冻融或蒸镏水透     

噬菌蛭弧菌、噬菌体和细菌素(二)

<正>2.2噬菌体的形态与结构噬菌体不能在光学显微镜下观察到,因此,对噬菌体形态、结构的认识,得从电子显微镜开始,这一点与细菌素是相同的。噬菌体个体叫做病毒粒子,它的形状有3种,包括蝌蚪形、微球形和纤丝形。目前已知大部分噬菌体是属于蝌蚪形,它由头和尾两部分组成。噬菌体尾部的结构比较复杂,是感染、吸附、侵入宿主细胞的器官。蛭弧菌、细菌素不具有这种结构上的     

红假单胞菌培养噬菌蛭弧菌的研究

为探索环保型的噬菌蛭弧菌宿主菌菌种,本文用红假单胞菌作为宿主菌进行了培养噬菌蛭弧菌的研究,系统地探索了pH值、缓冲系及温度等环境因子对培养效果的影响。实验表明用红假单胞菌培养噬菌蛭弧菌,其环境影响因子、出斑时间、出斑数量、培养收获浓度等方面均与大肠杆菌无差异,最佳培养条件为25℃～30℃、pH值7．0～8．0、PBS缓冲系、并添加一定量的钙、镁离子,光合细菌中红假单胞菌可完全取代污染菌大肠杆菌培养噬菌蛭弧菌,生产环保型的蛭弧菌制剂,并简化了生产程序。并建立了蛭弧菌的培养采收标准,同时初步提出了一种简易的蛭弧菌浓度的计算方法——裂解系数计算法。     

噬菌蛭弧菌的研究及应用④噬菌蛭弧菌微生物生态制剂在虾蟹养殖中的应用

在我国,虾蟹养殖用药品的生产和使用极不规范,养殖者盲目使用抗菌药物和消毒剂,造成虾蟹产品中药物残留严重超标,使得我国虾蟹产品的出口在国际市场屡受挫折.因此,要彻底解决抗生素及其他化学药物残留对人体的危害,扩大虾蟹产品在国际市场上的出口规模,一是必须规范我国水生动物养殖用药品的生产和使用,二是要寻求抗生素及其他化学药物的替代品,力求实施无公害养殖.     

噬菌蛭弧菌对乌鳢养殖水质的影响

为了探讨噬菌蛭弧菌制剂净化水质和病害防治的效果,试验以0.75 mL/m2的用量向乌鳢养殖池泼洒浓度为1.0×108pfu/mL的噬菌蛭弧菌制剂,观察7 d内养殖池的pH、DO、NH3-N、NO2--N含量及弧菌总数等主要水质指标以及乌鳢死亡数目的变化。向乌鳢养殖池加入噬菌蛭弧菌后,试验组与对照组相比,NH3-N、NO2--N含量及弧菌总数明显减少(p<0.05),DO明显增大(p<0.05),但pH变化不明显(p>0.05);乌鳢死亡率也明显减少(p<0.05)。试验结果表明,以0.75 mL/m2的用量向乌鳢养殖池泼洒浓度1.0×108pfu/mL的噬菌蛭弧菌制剂,有利于提高DO含量及乌鳢存活率,降低NH3-N、NO2--N含量及弧菌总数。