驽巴贝斯虫病PCR检测方法的建立和应用

根据驽巴贝斯虫(Babesia caballi)18S rRNA基因序列设计1对特异性引物,扩增出452 bp核苷酸片段,建立了检测驽巴贝斯虫病的PCR方法。敏感性试验结果表明,该方法最低能检出0.01 fg/μL驽巴贝斯虫DNA模板。特异性试验结果显示,在被检测的6个巴贝斯虫株中,仅驽巴贝斯虫株能扩增出特异性片段,马泰勒虫、双芽巴贝斯虫、莫氏巴贝斯虫、卵形巴贝斯虫、大巴贝斯虫的扩增结果均为阴性。对45份马属动物血样进行检测,本研究建立的PCR方法测得驽巴贝斯虫病的阳性率为26.67%(12/45),与显微镜检测方法进行了比较,结果显示PCR检测方法可显著提高驽巴贝斯虫的检出率。     

1例马驽巴贝斯虫病的诊治

<正>马驽巴贝斯虫病是由梨形虫纲驽巴贝斯虫(Basia caballi)寄生于马、驴、骡的红细胞内引起的一类血液原虫病。该病主要的传播者是硬蜱。笔者于2009年诊治了1例典型病例,通过综合诊治取得满意的疗效,现报告如下。1发病情况     

马类家畜驽巴贝斯虫病的诊断及防治

马类家畜驽巴贝斯虫病是由梨形虫纲、驽巴贝斯虫(Basia caballi)寄生于马类家畜的红细胞内而引起的一类血液原虫病。虫体大于宿主红细胞半径,典型虫体为双梨籽形,尖端相连成锐角形,每个虫体有两团染色质。该病主要的传播者是硬蜱。笔者自1999年5月开始,先后参与天水市秦州区、武山县、清水县、张川县等地发生的大家畜驽巴贝斯虫病的诊治,并取得了良好效果,现将诊断及防治体会总结如下。1流行特点1.1具有地域性特征。从村民居住较为集中村庄的牲畜发病情况看,如果有一家的牲畜发病,该村其它人家就会陆续零星出现发病情况,但不一定是与之相邻…     

马驽巴贝斯虫Bc48蛋白的纯化及其应用

为了解新疆南北疆部分疫区马匹携带驽巴贝斯虫(Babesia caballi)抗体情况,运用实验室已构建保存的地方虫株重组Bc48为靶抗原,将重组原核表达质粒pGEX4T-1-Bc48转化至BL21表达系统中,诱导表达出36 KDa的重组蛋白。经KCl法切胶纯化重组蛋白后作为rELISA包被抗原,对阿克苏、伊犁、和硕等7个区域的随机采集样品(n=256)进行马驽巴贝斯虫抗体检测。结果显示,Bc48重组抗原能够精确识别马驽巴贝斯虫标准阳性和阴性血清;所检测的临床样品中,驽巴贝斯虫抗体阳性率为19.5%,其中,南疆2个地区(和硕、阿克苏)马驽巴贝斯虫病阳性率分别为30%、9%;北疆5个地区(昭苏种马场、伊犁卡拉苏、洪纳海乡、阿尕什敖包乡和富蕴县区域)马驽巴贝斯虫抗体阳性率分别为17%、12.5%、17%、5%和35%。本次调查结果为新疆驽巴贝斯虫防控措施及疫苗和驱虫药的使用提供必要的理论依据。     

新疆喀什部分地区驴梨形虫病检测初报

为了解新疆维吾尔自治区南疆部分地方驴泰勒虫和驽巴贝斯虫病的存在情况,本文采用PCR技术和竞争性酶联免疫吸附试验(c-ELISA)检测喀什部分地区驴泰勒虫病和驽巴贝斯虫病的流行情况。调查结果显示,喀什地区疏勒县和疏附县驴寄生虫总感染率为45.17%。通过PCR方法检测出19份血样感染泰勒虫病,感染率为36.84%;未检出驽巴贝斯虫病。通过c-ELISA方法检测出96份血清感染泰勒虫病,感染率为7.29%;驽巴贝斯虫的感染率为1.04%。通过本次驴寄生虫感染调查,对喀什部分地区驴寄生虫感染情况有了初步了解,为该地区驴的健康发展提供了科学依据。     

马驽巴贝斯虫ddPCR检测方法的建立

马驽巴贝斯虫(Babesia caballi)病是马属动物的一种血液原虫病,被农业农村部列为二类动物疫病.本研究旨在建立一种针对马驽巴贝斯虫病的ddPCR检测技术.利用马驽巴贝斯虫特异性引物及探针对反应体系进行优化,测试了方法的特异性、稳定性及灵敏性,对30份可疑样品进行了初步检测.结果显示,该方法具有较好的稳定性,最...     

一例马驽巴贝斯虫病的诊治报告

<正>马驽巴贝斯虫病是由巴贝斯科、巴贝斯属的马驽巴贝斯虫寄生于马属动物的红细胞内引起的一种寄生虫病。也称马焦虫病、梨形虫病,主要症状是高热、贫血、黄疸。现将本人经历的病例报告如下:1临床症状2015年04月30日,普兰店市城子坦办事处金厂村农户王某致电,家养5匹马,出现发热、不爱吃食、流汗的感冒症状。     

马驽巴贝斯虫病中西医综合防治

马驽巴贝斯虫病由驽巴贝斯虫（Babesiaca—balli）经媒介蜱传播寄生于马属动物红细胞内引起的一种血液原虫病,我国将其列为二类动物疫病。其病原为驽巴贝斯虫,传播媒介为森林革蜱（Dermacentorsilvarum）和草原革蜱（D．nuttalli）o20世纪60年代中期以来,在甘肃省陇东南地区的马属动物中流行着一种以高热、贫血、黄疸、心肺机能障碍等为主要症状的疫病,70—80年代,     

以GST-BC_(48)重组蛋白作诊断抗原对延边地区驽巴贝斯虫病血清流行病学调查

驽巴贝斯虫病是由驽巴贝斯虫 (Bcaballi)引起的一种以高热、贫血、黄疸、出血、呼吸困难等症状为特征的具有一定的地区性和季节性的血液原虫病 ,严重危害养马业的健康发展[1] 。目前在寄生虫病的血清学诊断中常用的虫体抗原有纯化难、制备有限、部分交叉反应等缺点[2 ] ,而重组抗原作为诊断抗原具有敏感性高、特异性强、制备简单、易纯化等优点[3 ,4] 。本试验以重组蛋白作为诊断抗原 ,用ELISA法对延边地区驽巴贝斯虫病进行了血清流行病学调查 ,旨在为制定驽巴贝斯虫病的有效防制措施提供较为系统的流行病学资料。1　材料与方法诊断抗原 …     

南北疆部分地区马驽巴贝斯虫病血清学调查

为了解南北疆养殖马区域马匹感染驽巴贝斯虫情况,笔者采用竞争性酶联免疫吸附试验(eELISA)与血涂片镜检法相结合的试验法,对伊犁和巴州两地区马匹随机抽样(N--454),进行驽巴贝斯虫病血清学调查。经c-Elisa调查发现,驽巴贝斯虫状况(呈抗体阳性)总感染率为33.2%;其中北疆4县马驽巴贝斯虫感染率分别15.8%、7.9%、5.7%和2.6%;南疆和静县感染率为O.4%。经血液涂片检查发现极少部分抗体阳性全血发现虫体,其总阳性率6.6%。无临床症状的马匹血清抗体阳性率高说明该地区存在‘传染源'、传播蜱虫,故加以防范。     

新疆部分地区马驽巴贝斯虫病感染PCR检测调查

为了解新疆部分地区马匹感染马驽巴贝斯虫病的流行情况,通过PCR方法对不同地区所采集的样品进行检测,并对不同地区和不同年龄段马驽巴贝斯虫感染情况进行单因素方差分析。结果显示,所检测的504份马血样中,54份血样为阳性,阳性率为10.71%。其中北疆昭苏种马场、阿勒泰、吐鲁番托克逊马驽巴贝斯虫阳性率分别为20.61%、5.17%、0;巴音布鲁克牧场、和静地区马驽巴贝斯虫阳性率分别为0和8.59%。从阳性样品中都检测到了驽巴贝斯虫BC48基因片段,与已知序列的同源性为99%。X≤3,3X≤6,6X≤9,X9四个年龄段马驽巴贝斯虫感染率分别为9.76%、10.53%、11.21%和11.65%。单因素方差分析结果表明,昭苏种马场与阿勒泰、巴音布克牧场分别存在极显著性差异(P0.01);巴音布鲁克牧场与和静也存在极显著性差异(P0.01);昭苏种马场与吐鲁番托克逊存在显著性差异(P0.05),其余各地方差异不显著。各个年龄段马驽巴贝斯虫感染无显著性差异。本试验的研究数据可为研究新疆马驽巴贝斯虫分布特点提供数据支撑。     

马泰勒虫病致死孕马报道

<正>马泰勒虫(Theileia equi,旧称马巴贝斯虫)和马驽巴贝斯虫(Babesia caballi)是寄生于马属动物红细胞内,是马梨形虫病的主要病原。据报道马泰勒虫病比驽巴贝斯虫病有更强的致病性和传播能力[1]。马泰勒虫(Theileria equi)隶属于泰勒科(Theileriidae Levine)泰勒属(Theileria),是寄生于马属动物红细胞体内,临床以稽留热、贫血、黄疸等为     

驽巴贝斯虫TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法的建立

为建立快速检测驽巴贝斯虫Bc-48基因的方法,本研究根据Bc-48保守基因序列设计合成特异性引物和MGB荧光探针,以构建的重组质粒作为阳性标准品,经条件优化后建立了检测Bc-48基因的TaqMan-MGB荧光定量PCR方法。结果显示,该方法能够特异性检测驽巴贝斯虫,而对其它病原检测均为阴性;该方法最小检出量为5.17×10~1拷贝/μL的标准质粒,敏感性是常规PCR的100倍;组内与组间重复性试验的变异系数均小于1%,重复性好;采用所建立的方法和常规PCR分别对90份临床样品进行检测,结果显示本研究建立的驽巴贝斯虫TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好,可以用于驽巴贝斯虫病临床样品诊断、流行病学调查。本研究为蜱传马梨形虫病的防控提供新的方法。     

内蒙古和新疆两地草原革蜱源性马驽巴贝斯虫病病原DNA检测

为探究来源于内蒙古西部某地的草原革蜱及新疆境内广泛分布的草原革蜱携带同一种病原-驽巴贝斯虫的情况。本试验借助光学、电子显微镜进行鉴定了采自于不同植被(包括内蒙古、新疆两地)的草原革蜱;并参考驽巴贝斯虫Bc48基因序列,合成引物,提取该种蜱携带的马驽巴贝斯虫病原DNA,进行PCR扩增、检测。结果显示,来自内蒙古(N=147)、新疆(N=200)两地的草原革蜱在假头基部、多孔区、齿式、气门板等超微结构形态方面基本相似。经PCR成功扩增出了草原革蜱所携带的驽巴贝斯虫病原DNA阳性条带452 bp;来源于内蒙古西部某地的草原革蜱携带驽巴贝斯虫的阳性率为8.16%(12/147),来源于新疆和静县平原的草原革蜱驽巴贝斯虫的阳性率为13.50%(27/200)。这些参数可为草原牧区优势分布蜱虫-草原革蜱所传播家畜血液原虫病的防治提供科学依据。     

马焦虫病的流行特点及防治措施

马焦虫病是由焦虫纲驽巴贝斯焦虫(亦称马焦虫)和马巴贝斯焦虫(亦称马纳塔焦虫)寄生于马的红细胞内而引起的一类原虫病。     

驽巴贝斯虫病巢式PCR检测方法的研究

针对驽巴贝斯虫（Babesia caballi）rap—1基因序列设计内外两对引物，从实验室感染驽巴贝斯虫的马匹上采集全血提取DNA，采取两次扩增的方法，获得222bp基因片段，经测试此靶序列为驽巴贝斯虫特异性基因片段。采用本研究方法对已知的阳性马匹和阴性马匹进行检测，准确率为100％。     

新疆昭苏地区马梨形虫病病原及抗体检测

马梨形虫病是由马驽巴贝斯虫和马泰勒虫寄生于马属动物的红细胞内所引起的一类血液原虫病,呈全球性分布,尤其在新疆发病率更高,处于逐年上升趋势,对区域性马产业的发展影响极大。为了解2018年新疆昭苏养马区域马梨形虫的感染情况,随机采集昭苏县18个乡镇的马全血及血清各858份,采用PCR和间接ELISA分别进行检测,对两种方法检测的18个地区、不同年龄阶段的马驽巴贝斯虫、马泰勒虫及混合感染情况进行统计学分析。结果显示,PCR检测马驽巴贝斯虫、马泰勒虫及混合感染的阳性率分别为12.12%、13.87%和2.80%;间接ELISA检测马驽巴贝斯虫、马泰勒虫及混合感染的抗体阳性率分别为15.50%、10.14%和2.56%;不同年龄阶段筛查结果显示,在6岁以下的马匹感染马驽巴贝斯虫、马泰勒虫及混合感染的阳性率较高,并且不同地区的不同年龄阶段马匹的马梨形虫感染率存在不同程度的差异。此次获得的昭苏县马梨形虫感染情况的一线数据,可为当地养马区域马梨形虫病的综合防控提供技术支撑。     

驽巴贝斯虫病巢式POR检测方法的研究

针对驽巴贝斯虫(Babesia caballi)rap-1基因序列设计内外两对引物,从实验室感染驽巴贝斯虫的马匹上采集全血提取DNA,采取两次扩增的方法,获得222bp基因片段,经测试此靶序列为驽巴贝斯虫特异性基因片段。采用本研究方法对已知的阳性马匹和阴性马匹进行检测,准确率为100%。     

马类巴贝斯虫病的防治

马类巴贝斯虫病主要侵害马、骡、驴。病原是由驽巴贝氏虫（旧名马焦虫）和马巴贝氏焦虫寄生于马属动物的红细胞内所引起的血液原虫病。临床表现发病急、发热、黄疸、贫血、出血和呼吸困难等症状。     

马梨形虫病双重PCR检测方法的建立

为了建立马梨形虫病双重PCR检测方法,试验根据Gen Bank发表的驽巴贝斯虫和马泰勒虫18S rRNA保守基因序列分别合成2对特异性引物,以核酸混合物为模板,优化反应条件建立马梨形虫病双重PCR检测方法,并检验该方法的特异性和敏感性。同时用该双重PCR检测方法对采自昭苏种马场的马疑似病例全血进行检测,并与镜检法和单重PCR法进行比较。结果表明:该双重PCR检测方法能对驽巴贝斯虫和马泰勒虫核酸扩增出大小为529 bp和789 bp特异性目的片段,而对双芽巴贝斯虫、环形泰勒虫、羊泰勒虫、牛巴贝斯虫核酸的扩增均为阴性;驽巴贝斯虫和马泰勒虫阳性DNA被稀释1×108倍时均能检出其相应目的片段;对采集的46份马疑似病例血样进行PCR诊断,其中驽巴贝斯虫感染率为30.4%(14/46),马泰勒虫感染率为41.3%(19/46);双重PCR检测方法与单重PCR方法的符合率为100%。说明建立的双重PCR检测方法具有一定的特异性和敏感性,可用于驽巴贝斯虫和马泰勒虫临床感染隐性病例的联合检测与鉴别诊断。