RNAi分子机制和研究方法进展

RNAi,即RNA干扰,是生物体感受双链RNA后诱导同源靶基因沉默的现象.RNAi现象最早是在对线虫的研究中发现长双链RNA(dsRNA)导致线虫同源mRNA降解,后来发现,dsRNA相比正义、反义单链RNA具有更强的基因沉默效应[1].     

RNA干涉与基因沉默的研究进展

RNAi是指外源dsRNA引发身体内的基因的同源序列降解,从而表现出基因转录后的沉默后现象,到目前为止在真菌、拟南芥、线虫、锥虫、水螅、涡虫、果蝇、斑马鱼、小鼠等真核生物中都发现存在这一基因沉默机制。研究表明,RNA干涉与植物中的共抑制、真菌中的基因压制熏很可能具有共同的基本分子机制。它可以用于功能基因组学研究,也可用于克服转基因生物的基因沉默现象,使外源基因在遗传改良生物中能更好地表达,还用于基因治疗,抑制有害基因的表达等。     

RNAi技术的应用

将双链RNA导入细胞内会引起与其同源的基因的沉默，这种现象称为RNA干扰（RNA interference，RNAi）。作者从RNAi技术的历史、作用机制、应用以及前景4个方面，其中主要就其应用方面的研究作一综述。     

RNAi基因沉默的动力学研究进展

RNA干扰(RNAi)是一种由小双链RNA介导的转录后基因沉默现象。在RNAi发挥基因沉默效能的过程中,许多因素都会直接或间接的影响最终的沉默效率和沉默时间。论文从siRNA类型的选择、siRNA的递送和细胞内的RNAi途径3个方面对RNAi途径中各个影响其效能发挥的因素及其解决方法做一综述,同时对描述RNAi基因沉默动力学的数学模型及其应用进行了介绍。     

RNA干扰及其应用进展

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种由双链RNA介导的基因沉默现象。RNAi主要发生在核外,RNAi具有操作简便快速等特点。RNAi现象自发现至今已逾10年,在此期间,已将研究重点由机理研究转向应用研究。文章以RNAi的应用为重点,从RNAi的起源、可能的作用机制、作用特点、研究方法、应用前景及展望等方面进行了综述。     

RNA干扰和病毒基因沉默

RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是正常动植物体内的一种通过双链RNA来沉默基因的自然现象。细胞内存在的双链RNA(dsRNA)被特异性的内切酶切割成为一种由长约21nt～23nt的小分子干扰RNA(siRNAs),有时它在正常的细胞中就存在,这种小分子干扰RNA和一些相关蛋白质组成RNA诱导沉默复合体我们称为来发挥作用。主要通过与特定基因编码的信使RNA(mRNA)作用来高效特异地阻断特定基因的表达。RNAi具有高效性和高度特异性,可能成为阻断病毒入侵和关闭基因的新技术,在基因功能研究和疾病基因治疗中发挥重要作用。     

RNA干扰与基因沉默

1995年康奈尔大学的Guo等在利用反义RNA技术特异性阻断秀丽新小杆线虫(C．elegans)中的par-1基因表达时，意外发现在对照组中给线虫注射正义RNA，同样也抑制了par-1基因的表达。1998年华盛顿卡耐基研究所的Fire和麻省理工学院的Mello证实了Guo等观察到的正义RNA抑制基因表达的现象，其主要原因是由于体外转录所得RNA中污染了微量双链RNA(dsRNA)，但把体外转录得到的单链RNA(ssRNA)纯化后注射到线虫体内，     

RNAi技术在动物病毒性疾病研究中的应用

使靶基因表达沉默的RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术,由于其独特的生物学作用,已经作为动物疫病防控领域的新手段在动物病毒性疾病研究中得到了广泛的应用。本文对RNAi技术在猪病、禽病及牛病研究中的应用进行简要综述。     

RNAi技术——一项使特异基因表达沉默的新技术

RNAi技术是新近发展起来的一种使特异基因表达沉默的方法 ,这项技术还处于起步阶段。本文对RNAi技术的概念、作用机制和应用前景等方面作了介绍。     

紫花苜蓿MsCOL1基因RNAi表达载体的构建及转化

根据紫花苜蓿CONSTANS类似基因MsCOL1基因(登录号:DQ661682)序列,设计含有酶切位点的两对特异性引物,以紫花苜蓿cDNA为模板,分别合成用于构建干扰载体的正反义片段,将正反义片段分别插入表达载体pART27的相应位置,构建含有发夹结构的RNAi载体pART-S-A.利用农杆菌介导方法,将pART-S-A转化到紫花苜蓿中,经PCR检测,获得了7株转基因植株.经RT-PCR检测,证明转基因植株中MsCOL1基因表达量有所下降,其中5株的表达量明显的降低.结果表明,已构建成功具有发夹结构的RNAi载体pART-S-A,它可有效的抑制紫花苜蓿MsCOL1基因.     

RNAi及其在家畜繁殖中的应用

双链RNA介导的、序列特异的基因沉默的过程称为RNAi（RNAinterference）。它作为新兴的基因阻断技术，具有特异性、高效性，存在放大效应等，为功能基因特异性失活提供了一种有效方法，正成为研究基因功能的重要工具。同时，RNAi还为基因组、基因治疗、药物探察研究提供了有效技术。本文简单介绍了RNAi的发现、特征、作用机制及在家畜繁殖中的应用等方面的研究进展。     

山黧豆CASase基因的克隆及RNAi载体的构建

β-腈基丙氨酸合成酶（CASase）是调控山黧豆（Lathyrus sativus）内源毒素β-ODAP合成的关键酶。本研究以山黧豆幼根RNA为模板,利用RT-PCR扩增了505 bp的山黧豆CASase基因序列;通过Gateway BP反应将扩增片段连接到入门载体构建pENTR-CASase。经测序验证后,将目的片段插入到植物表达载体构建pSGRNAi-CASase,并将其转化到农杆菌GV3101中;为进一步的遗传转化奠定了基础。     

紫花苜蓿光敏色素A基因片段的克隆及其RNA干扰载体的构建

苜蓿(Medicago sativa L.)的秋眠性是一种光周期效应。研究植物体内重要的光受体-光敏色素A(phyto-chromeA,phyA),可能揭示其调控苜蓿秋眠性的机理。为研究其与苜蓿秋眠性的关系,本研究根据RNA干扰(RNAinterference,RNAi)技术原理,以紫花苜蓿幼嫩叶片为材料,提取总RNA,选取基因cDNA序列同源性较低区域设计特异性引物,并引入相应的酶切位点,利用RT-PCR克隆phyA正、反向片段,经过3次亚克隆,构建了phyA的RNAi表达载体,制备了适合转染植物组织的农杆菌菌液,为获得缺失phyA植株创超了条件。     

RNA干扰在动物病毒病治疗上的应用

RNA干扰(RNAi)是近年来发现的由双链小RNA(siRNA)介导的以序列特异性方式诱导同源mRNA降解的新技术。由于其特异性和有效性,已被认为是一种重要的特异性基因阻断技术,在抗病毒研究中已取得很大成果。内源性RNAi机制在低等动物中的病毒免疫作用已经明确,但在高等动物病毒感染中的研究仍处于讨论阶段。因此,通过人工方法在高等动物体内建立有效的RNAi体系来抵抗病毒已成为国内外学者的研究重点之一。近来,将RNA干扰技术应用于许多病毒性疾病的治疗性研究均取得了显著的基因沉默效果,为高等动物病毒病的预防和治疗开辟了一条新途径。论文就RNAi的作用机制和其在动物病毒病治疗上的应用进行了综述。     

RNAi抑制动物病毒的增殖

本文介绍了RNAi的发现及作用机理,总结了RNAi抑制A型流感病毒、口蹄疫病毒、登革热病毒和猪瘟病毒复制的机理,并讨论RNAi基础上抗病毒治疗的可能性。虽然RNAi的应用还有一定的局限性,但仍然被认为是对抗病毒感染最有效的方法之一,并具有非常光明的前景。     

捻转血矛线虫Hc38基因的克隆及其RNAi载体的构建

根据RNAi目标序列的选取原则和捻转血矛线虫Hc38基因(登录号AY749124)产物的保守结构域所在核苷酸序列设计引物,采用RT-PCR方法从绵羊捻转血矛线虫雌性成虫中扩增出约400bp cDNA序列,与AY749124序列同源性为99%.将目的序列亚克隆到RNAi载体L4440中,经PCR和酶切鉴定证明,成功构建了捻转血矛线虫对应于Hc38基因的RNAi载体L4440-Hc38.     

利用RNAi技术培育家蚕核型多角体病毒抗性品种的研究进展

家蚕核型多角体病毒属于杆状病毒科,包涵体亚科,它引起的家蚕核型多角体病是蚕业生产上的主要病害,培育家蚕核型多角体病毒抗性品种是防治该病的有效措施,而RNAi技术为家蚕核型多角体病毒抗性品种的培育提供了新的方法。本文综述了近年来利用RNAi技术培育家蚕核型多角体病毒抗性品种的研究进展。     

RNAi及其在家畜繁殖中的应用

双链RNA介导的、序列特异的基因沉默的过程称为RNAi(RNA interference)。它作为新兴的基因阻断技术,具有特异性、高效性,存在放大效应等,为功能基因特异性失活提供了一种有效方法,正成为研究基因功能的重要工具。同时,RNAi还为基因组、基因治疗、药物探察研究提供了有效技术。本文简单介绍了RNAi的发现、特征、作用机制及在家畜繁殖中的应用等方面的研究进展。