球孢白僵菌诱导酶发酵液对其毒力的增效作用

为进一步确认含蛋白酶、几丁质酶、脂肪酶和淀粉酶的诱导酶发酵液对球孢白僵菌(Beauveria bassiana)菌株毒力的影响,将高毒力菌株B5、Bxs与低毒力菌株B11、BZ分别制成1×107个/mL孢悬液(I型)、孢悬液+诱导酶发酵液(V∶V=1∶1;II型)、孢悬液+灭菌诱导酶发酵液(V∶V=1∶1;III型),用浸渍法分别测定I型、II型与III型3种液体对松墨天牛(Monochamus alternatus)幼虫的毒力。结果表明:分别含有蛋白酶、几丁质酶和脂肪酶的诱导酶发酵液Ⅱ型液体,其LT50值与Ⅲ型液体LT50间的差异均为极显著(P0.01),而含淀粉酶的差异不显著。分别含有4种酶的诱导酶发酵液的Ⅲ型与Ⅰ型液体相比,LT50值之间也存在极显著差异(P0.01)。可见:含蛋白酶、几丁质酶和脂肪酶的诱导酶发酵液对球孢白僵菌毒力具有极显著的增效作用;经过酶灭活的4种诱导酶发酵液增效作用也极显著。     

不同基质传代白僵菌对桑天牛幼虫的侵染力与寄主血淋巴酚氧化酶活性的关系

以诱集自土壤中、对桑天牛Apriona germari幼虫具有较高致病性的球孢白僵菌Beauveria bassiana Bb00为出发菌株R0,经反复接种桑天牛幼虫分别获得菌株R1、R2、R3和R4,而通过反复在普通查氏培养基上传代分别获得菌株M1、M2、M3和M4。分别用R0、R2、R4和M2、M4接种桑天牛幼虫,发现在普通培养基上传代会导致菌株致病力降低,而通过桑天牛幼虫传代培养可提高菌株的致病力。桑天牛幼虫感染白僵菌后,其免疫互作使酚氧化酶活性先迅速上升,随后因菌株的适应性增强而开始下降。用菌株M2、M4接种桑天牛幼虫后,其血淋巴酚氧化酶活性比接种R2和R4的高。各菌株引起的桑天牛幼虫酚氧化酶活性出现高峰值的时间与其LT50值具有一定的相关性,反映了各菌株不同的侵染速度;同时各菌株引起的酚氧化酶活性高峰值也与其LC50值高度相关。说明桑天牛幼虫血淋巴中酚氧化酶活性与不同菌株对桑天牛幼虫的毒力具有一定的相关性,同时酚氧化酶活性也可作为反映菌株毒力的一个重要参考指标。     

球孢白僵菌脂肪酸、酯酶、脂肪酶及其与毒力的关系

研究12株球孢白僵菌脂肪酸、酯酶和脂肪酶的产生水平及菌株对马尾松毛虫毒力间的关系。结果表明：酯酶产生水平（E）、脂肪酶产生水平（L）及豆蔻酸百分含量（X）等与白僵菌菌株对马尾松毛虫的毒力（LT50）间存在一定的相关性，其相关方程分别为：LT50=2．0931/（lgE-5．1165）＋0．4091；LT50=-6．68L^2＋31．9886L；LT50=13．5192-8．7042X。     

白僵菌培养基继代培养对蛋白酶（cdep1）、几丁质酶（chit1）基因表达的影响

[目的]对球孢白僵菌D6-2和L1-1菌株进行室内培养基继代培养,比较其不同世代之间毒力及毒力相关基因表达之间的差异.[方法]对目的菌株进行室内生物测定,用LT50和LT90作为毒力评价标准来检测不同世代之间毒力的变化情况.为了明确继代培养对球孢白僵菌毒力相关酶基因表达情况的影响,以18S rDNA基因为内参,利用半定量RT-PCR对蛋白酶cdep1基因和几丁质酶chit1基因的表达情况进行检测.[结果]在107孢子/mL供试浓度下,随着世代的更替,两个供试菌株F2代相比于F1代,其LT50和LT90降低,说明其对玉米螟的毒力有所增强.而两个供试菌株F2～F5代对玉米螟的毒力呈下降趋势.在内参基因稳定表达的情况下,两个供试菌株L1-1和D62的cdep1基因和chit1基因在F1和F2代表达稳定,随着继代次数的增多,供试菌株两个基因的表达量均呈下降趋势,这与对亚洲玉米螟毒力测试的结果呈正相关性.[结论]F2代毒力和毒力酶基因表达最强,F1代与F2代基本相似或略低于F2代,F2～F5代毒力和毒力酶基因表达依次减弱.     

几种虫生真菌对枸杞负泥虫的致病性及应用

室内用浸溃接种法测定了2种不同寄主来源的球孢白僵菌(Beauveria bassiana)2菌株和金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)1菌株对枸杞负泥虫的毒力.结果表明,3种菌株对枸杞负泥虫均具有毒杀作用.绿僵菌IPPCKAS2029菌株表现了较高的毒力,对2龄幼虫的致死中时(LT50)4.39 d,校正死亡率为100%;对成虫的致病力低于幼虫,致死中时(LT50)10.65 d,校正死亡率73.8%.球孢白僵菌FW-05、Z-28两菌株的毒力弱于前者,对2龄幼虫的致死中时(LT50)分别为6.85 d和7.78 d,校正死亡率分别为86.5%和82.7%;对成虫的致死中时(LT50)分别为16.18 d和18.92 d,校正死亡率分别为61.9%和55.6%.     

球孢白僵菌对松墨天牛的致病力及其与花绒寄甲的相容性

为探明昆虫病原真菌球孢白僵菌Beauveria bassiana与天敌昆虫花绒寄甲Dastarcus helophoroides的相容性,观察4株球孢白僵菌菌株的生长性状、产孢量以及孢子萌发率,并选用Bb3275和Bb202菌株测定其对松墨天牛Monochamus alternatus的致病力以及对花绒寄甲的毒力;同时在模拟环境条件下,分别用Bb3275和Bb202菌株的孢子悬浮液先侵染松墨天牛幼虫,再按1∶1比例将花绒寄甲与受侵染的松墨天牛置于同一环境下饲养,观察花绒寄甲的死亡率。结果显示,孢子悬浮液浓度为1×10⁶孢子/mL至1×10⁸孢子/mL时,Bb3275菌株和Bb202菌株对松墨天牛幼虫和成虫的致病力与对照组相比均有显著差异;经4种浓度Bb3275和Bb202菌株侵染花绒寄甲幼虫和成虫15 d后,仅在高浓度1×10⁸孢子/mL时表现出轻微致死作用,但花绒寄甲的存活率均高于85.00%;模拟条件下,松墨天牛幼虫校正死亡率均在80.00%以上,而同环境下花绒寄甲幼虫和成虫均表现出良好的活力,且侵染率为0。表明球孢白僵菌和花绒寄甲之间具有很好的相容性,可以同时应用于松墨天牛的生物防治。     

东亚异蚤蝇及其携带白僵菌防治松墨天牛的研究

［目的］ 明确利用蚤蝇携带白僵菌防治松墨天牛（Monochamus alternatus）的效果。［方法］ 采用室内饲养结合室外释放的方法研究蚤蝇的生活史和生物学特性,并进行种类鉴定。采用蚤蝇携菌法、直接撒粉法等不同方法比较球孢白僵菌MA0813菌株对松墨天牛幼虫的防治效果。［结果］经形态学鉴定确认寄生松墨天牛的蚤蝇为东亚异蚤蝇（Megaselia spiracularis Schmitz）。该虫人工饲养、繁殖十分容易,活动能力强,飞行扩散超过400 m,在宁波全年发生10代,以蛹越冬。球孢白僵菌MA0813菌株滴涂法防治松墨天牛4～5龄幼虫,LD50为（0.145 5±0.110 5）×104孢子/头。菌蝇法防治松树内松墨天牛1～2龄幼虫,室内校正僵死虫率为46.4%;7月上中旬在山林中试验每隔100 m放菌蝇2次,校正僵死率达35%,优于其他防治方法。［结论］ 菌蝇法能明显提高对松墨天牛的防治效果。     

球孢白僵菌MZ041016菌株对平菇厉眼蕈蚊的毒力

利用球孢白僵菌MZ041016菌株5种孢子悬浮液浓度(3.6×104～3.6×108个/mL)对平菇厉眼蕈蚊成虫和幼虫进行室内毒力测定。在3.6×108个/mL浓度下成虫死亡率最高达86.72%,幼虫死亡率最高达87.69%,成虫的LC50为2.319×105个/mL,幼虫的LC50为3.082×105个/mL。在3.6×104～3.6×108个/mL浓度处理下成虫的LT50依次为8.57、6.14、5.18d和4.28d,幼虫的LT50分别为8.09、6.03、4.96d和4.53d。球孢白僵菌MZ050724菌株在室内对平菇厉眼蕈蚊的成虫和幼虫有较强的毒力。     

不同的球孢白僵菌对草地螟的毒力测定

用16个分离自内蒙古地区的球孢白僵菌(Beauveria bassiana)菌株对草地螟(Loxostege sticticalis L.)幼虫的致病力作了室内测定.结果表明,16个菌株对草地螟幼虫均表现出一定的致病率,但毒力强弱有所不同.通过对16个菌株进行毒力测定,筛选出1个毒力相对较强,有效死亡率(僵虫率)仍较高的菌株S3.同一个菌株处理下,草地螟幼虫的累积死亡率随孢子浓度增加而上升,接种后的幼虫死亡数逐日减少.说明累积死亡率是随着处理后时间的延长而递升;菌株的半死亡时间(LT50)随浓度的增加而减小.     

三株球孢白僵菌对草地贪夜蛾的毒力比较

为筛选有效防治草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda的微生物制剂,采用室内生物测定法测定从北京市、浙江省和海南省土壤样品中分离获得的3株球孢白僵菌Beauveria bassiana菌株bbbj、bbzj和bbhn对草地贪夜蛾3龄幼虫的毒力,并比较这3株菌株的产孢情况和合成白僵菌素的能力。结果显示,分离自北京市的菌株bbbj对草地贪夜蛾3龄幼虫的毒力最强,LC50为3.37×105个孢子/mL;其次为浙江省的菌株bbzj,毒力略逊于菌株bbbj;海南省的菌株bbhn毒力最弱,其在试验最高浓度108个孢子/mL处理7 d后对草地贪夜蛾3龄幼虫的致死率低于50%。菌株bbbj的产孢量远高于另外2株菌株,并且其菌丝结构上着生大量芽生孢子簇,而且菌株bbbj菌体中的白僵菌素含量最高,培养5 d后,分别为菌株bbzj和bbhn的40.08倍和65.85倍。虽然补充白僵菌素可以提高菌株bbhn的毒力,但是草地贪夜蛾幼虫对白僵菌素敏感度不高。表明球孢白僵菌菌株bbbj对草地贪夜蛾幼虫有较高的毒杀活性,具有作为草地贪夜蛾生防菌株的潜力。     

我国植物青枯菌菌株的遗传多样性和组群划分

 采用15条随机引物对我国11个省(市、区)6种不同寄主植物的43个青枯菌代表性菌株和4个国外青枯菌菌株,进行了PCR扩增.引物OPB11、OPA15、OPE1和OPZ10对上述所有菌株扩增获得了相似的产物电泳图谱,分别具1~5条谱带不等;引物OPB7、OPA10和OPF1对马铃薯菌株获得了相同的产物图谱,但对其它寄主菌株的产物间有明显差别;引物OPA14、OPC,6、OPG14、OPF5、OPK14、OPK20和OPK17对于不同菌株的扩增产物多态性很强.供试菌株被聚类为2个组群,即组群A和组群B.组群A中又可分为7个亚组(A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7),其中A1含有2个类型(A1-1、A1-2);组群B中也可分为2个亚组(B1、B2),其中B1含有3个类型(B1-1、B1-2、B1-3),B2也含有3个类型(B2-1、B2-2、B2-3).RAPD组群A中包含了27个来自我国不同地区的马铃薯菌株,主要是3号小种、生化变种2;组群B中含有20个来自不同地区、不同寄主的菌株,分属于其它不同的小种和生化变种.研究结果表明,我国青枯菌菌株RAPD组群的划分与菌株的地理来源关系不大,而与寄主来源有明显相关性.此外,通过对我国青枯菌菌株组群进行同源性PCR分析表明,来源自马铃薯的3号小种菌株属于美洲分支"Americanmm",而来自其它寄主的青枯菌1号、5号小种菌株属于亚洲分支"Asiaticum",与本研究RAPD组群A和组群B的划分是一致的.     

燕麦叶斑病病原菌鉴定及其生物学特性

为明确内蒙古、河北地区燕麦叶斑病病原菌种类及其生物学特性,采用组织分离法对病原菌进行分离,通过形态学特征及18SrDNA序列分析进行分类鉴定,以离体和活体叶片接种进行致病性测定,并采用十字交叉法对病原菌的生物学特性进行研究。结果表明,共分离到3株菌株R1、H44和B8,根据形态学特征和18SrDNA序列分析将3株菌株均鉴定为燕麦内脐蠕孢菌Drechslera avenacea(M.A.Curtis ex Cooke)Shoemaker,有性态为燕麦核腔菌Pyrenophora avenae S.Ito et Kurib.。3株菌株均为致病菌,在离体和活体叶片上均能产生腐烂坏死病斑。3株菌株的菌丝在5~30℃、pH 5~11范围内均可生长,其中菌株R1和H44的最适生长温度为25℃、最适生长pH为8,菌株B8的最适生长温度为20~25℃、最适生长pH为7~8。3株菌株对碳源的利用效果中均以淀粉最好,对乳糖利用效果最差;菌株R1的最适氮源是硝酸铵,对蛋白胨和尿素利用效果最差;菌株H44和B8的最适氮源是蛋白胨,菌株H44对硫酸铵利用效果较差,3株菌株都不能利用碳酸铵,且菌株B8也不能利用尿素。     

新疆11种豆科作物立枯丝核菌菌丝融合群及营养亲和群研究

从新疆11种豆科作物病株上或病株根围土样中分离纯化出250个立枯丝核菌（Rhizoctonia DC）,番红O KOH染色后观察细胞核数目,经测试全部菌株均为多核,用标准菌株测定融合群, 250个菌株分属为AG 1、AG 2、AG 3、AG 4和AG 5共5个融合群,出现频率分别为16.4%、33.2%、0.4%、32.4%和17.6%,营养亲合群判别结果表明,AG 1、AG 2、AG 4和AG 5下各有2个VCG,说明新疆豆科作物立枯丝核菌各主要菌丝融合群内均有不同程度的分化。     

广西苏云金杆菌资源调查研究

1978～1982年,对广两地区苏云金杆菌的资源,包括分布、种类、毒力等进行了系统调查。从不同经纬度的11个县44个点,采集土壤、虫尸样品4454份,分离出172个菌株。经过生理、生化和血清学的分析试验,作出分类鉴定;并找出广西苏云金杆菌的优势种为蜡螟变种,占94％,其毒力也是最强的。     

马铃薯黄萎病病原菌营养亲和群、生理小种、交配型鉴定以及致病力差异分析

为明确引起马铃薯黄萎病的大丽轮枝菌Verticillium dahliae的遗传变异和致病力的差异,对从内蒙古及其周边地区马铃薯发病株上分离得到的29株大丽轮枝菌的营养亲和群、生理小种和交配型进行了测定,利用伤根接种法进行致病力分化研究。结果表明,供试的29株马铃薯大丽轮枝菌菌株被划分为VCG2B、VCG4B和VCG4A三个营养亲和群,其菌株数分别为11、2和16株;供试的29株菌株均鉴定为单一的2号生理小种和MAT1-2-1交配型。供试的29株大丽轮枝菌菌株间致病力存在一定的差异,其中NCP-1菌株的致病力最强,病情指数为83.33;而NWS-5菌株的致病力最弱,病情指数仅为10.85;不同营养亲和群菌株的平均致病力也存在显著差异,VCG4B型菌株的平均致病力最高,平均病情指数为67.18;其次为VCB2B型菌株,平均病情指数为42.50,而VCG4A型菌株致病力最弱,平均病情指数仅为20.54。     

绿僵菌IMI330189菌株突变体库的建立及毒力相关突变株的筛选

为了研究绿僵菌毒力相关的功能基因,采用农杆菌介导的转化方法将携带苯菌灵抗性标记基因的T—DNA导入绿僵菌IMI330189中,获得了绿僵菌突变体库,采用人工饲料诱饵法测定了突变株对3龄东亚飞蝗Locustamigratoria的毒力。研究发现,突变株对东亚飞蝗的毒力都有不同程度的改变,在诱饵剂浓度为10^8孢子．g-1下,野生型菌株IMI330189对东亚飞蝗的致死中时（LT50）为4-3d;突变株189-1的毒力略有提高,其LT50值为3．5d;其余突变株的毒力均降低,且突变株189—4、189—5、189—6、189—10、189-11、189—13和189—15几乎丧失了对东亚飞蝗的毒性,校正死亡率小于50％。本研究为进一步分离毒力相关基因、探索绿僵菌的致病机制奠定了基础。     

两株拟除虫菊酯类农药高效降解菌混合降解性能研究

从拟除虫菊酯类农药生产车间下水道驯化污泥中分离筛选出两株可同时降解联苯菊酯、甲氰菊酯、氯氰菊酯的高效菌株M6R9和M5R14,经鉴定为产气肠杆菌Enterobacter aerogenes和缺陷假单胞菌Pseudomonas diminuta。通过单一菌和混合菌对比实验,发现单一菌及混合菌对联苯菊酯、甲氰菊酯、氯氰菊酯的降解率均与接菌量(OD415nm)呈正相关,且降解过程满足一级动力学方程。在含联苯菊酯、甲氰菊酯、氯氰菊酯各100 mg/L的基础培养基中,接菌量相同(单一菌OD415nm 均为0.2,混合菌中M6R9和M5R14的OD415nm各为0.1),于30 ℃、pH 7.0、180 r/min下培养3 d,发现混合菌对联苯菊酯、甲氰菊酯、氯氰菊酯的降解率分别比单一菌M6R9和M5R14提高2.5%、3.4%、2.3%和14.5%、14.6%、15.5%,半衰期分别缩短8.1、14.8、13.1 h和40.3、50.7、46.4 h,表明混合菌对联苯菊酯、甲氰菊酯、氯氰菊酯的降解存在协同作用,即混合菌可提高3种菊酯类农药残留的去除率。     

Control of Aspergillus growth and aflatoxin production using natural maize phytochemicals under different conditions of water activity

The effects of the natural phytochemicals trans-cinnamic acid (CA) and ferulic acid (FA) alone at concentrations of 1-25 mM and in 16 combinations (M: mixtures) on growth and aflatoxin B(1) production by Aspergillus flavus Link and A. parasiticus Speare were evaluated. Studies on growth rate and aflatoxin B(1) production were carried out in vitro in relation to a water activity a(w) of 0.999, 0.971, 0.955 and 0.937. Overall, CA at concentrations of 10 and 20 mM and FA-CA mixtures M3 (20 + 5 mM respectively), M8 (25 + 5 mM), M9 (1 + 10 mM), M10 (10 + 10 mM), M11 (20 + 10 mM), M12 (25 + 10 mM), M13 (1 + 20 mM), M14 (10 + 20 mM), M15 (20 + 20 mM) and M16 (25 + 20 mM) were the treatments most effective at inhibiting growth of the four species assayed. All strains were much more sensitive to all natural phytochemicals tested on growth rate at a(w) = 0.937. CA and the FA-CA mixtures M1 (1 + 1 mM respectively), M4 (25 + 1 mM), M5 (1 + 5 mM), M6 (10 + 1 mM), M7 (20 + 1 mM), M8 (25 + 5 mM), M9 (1 + 10 mM), M10 (10 + 10 mM), M11 (20 + 10 mM), M12 (25 + 10 mM), M13 (1 + 20 mM), M14 (10 + 20 mM), M15 (20 + 20 mM) and M16 (25 + 20 mM) completely inhibited aflatoxin B(1) production by all strains at a(w) = 0.999, 0.971, 0.955 and 0.937. Decreased aflatoxin B(1) levels in comparison with the control were observed with FA at 1, 10, 20 and 25 mM with the strains RCM89, RCM108 and RCM38 at a(w) = 0.971, 0.955 and 0.999 respectively. The data show that CA and FA can be considered as effective fungitoxicants for A. flavus and A. parasiticus in in vitro assay. The information obtained is part of an ongoing study to determine their application at the storage level.     

Heterogeneity of Xanthomonas campestris pv. hederae Strains from Araliaceous Hosts

ABSTRACT Xanthomonas campestris pv. hederae (synonym X. hortorum pv. hederae) strains (59 total) were collected from plants in the araliaceae family. Strains were isolated from Hedera helix, Schefflera arboricola, Brassaia actinophylla, and Polyscias spp. from Florida, California, Hawaii, and New Zealand. All strains produced yellow mucoid growth; hydrolyzed esculin, starch, casein and gelatin; were pectolytic; produced urease; and grew on minimal media containing asparagine. All bacterial strains were pathogenic on H. helix (English ivy), B. actinophylla (dwarf schefflera), and Polyscias fruticosa (ming aralia). No differences in symptomatology were detected among strains; however, severity of symptoms usually was greatest on the host of origin. In planta growth rates of representative strains isolated from H. helix, B. actinophylla, and Polyscias spp. also were compared among these three hosts. In all cases, populations grew more rapidly when strains were inoculated to their original host species. All 59 bacterial strains were compared by 95-carbon source GN microplate, fatty acid methyl ester (FAME), and restriction fragment-length polymorphisms (RFLP), with the pulse-field gel electrophoresis method, analyses. All three analyses grouped strains into two distinct groups that correlated with the host of origin. Using metabolic profiles, 75% of the H. helix strains were separated from strains isolated from Brassaia and Schefflera and 95% of the Polyscias strains. FAME analysis separated strains into two distinct groups, with 96% of the H. helix strains placed in one group. RFLP analysis placed all of the H. helix and Schefflera strains in one group, as well as 33% of the Brassaia strains, whereas the other group contained all of the Polyscias strains and the remainder of the Brassaia strains. It is apparent that the pathovar hederae is made up of heterogeneous populations that can be separated by biochemical, pathological, genetic, and physiological analyses into two groups that are closely associated with the host of origin.     

夜蛾斯氏线虫对松树上松墨天牛的毒力测定和室内防治效果

在室内测定了夜蛾斯氏线虫对松枝中松墨天牛的致死中量和致死中时。将TDM模型引入试验结果的分析中，72h后松墨天牛老龄幼虫的LD50为1．2767条／头，LB50为1．6716d；蛹的LD50为1．4417条／头，LB0为1．2627d。结果表明：随着时问的延长，LD50逐渐减少；随着线虫剂量的增加，LT50逐渐缩短。通过线虫寻向移动速度试验得出：夜蛾斯氏线虫与松墨天牛幼虫相距4—10cm情况下的效果较好。通过不同防治方法试验得出：施入夜蛾斯氏线虫防治松墨天牛，12d后，浸泡法的效果最好，海绵法次之，注射法较差。