悬铃木叶片DNA提取方法研究

以悬铃木组织培养苗叶片为材料,比较了提取叶片DNA的4种方法:SDS-Ⅰ,SDS-Ⅱ,CTAB-Ⅰ,CTAB-Ⅱ,并用紫外光谱吸收、凝胶电泳、限制性内切酶酶切、RAPD等方法进行鉴定.研究结果表明,4种方法提取的DNA的得率约为0 347～0 518μg·mg-1,分子量约为23kb,均可被酶切.此外,CTAB-Ⅰ和CTAB-Ⅱ提取的DNA可用于RAPD分析.综合考虑得率、纯度等因素,作者认为CTAB-Ⅱ法可作为悬铃木叶片DNA提取的最佳方法.     

风信子DNA不同提取方法的效果比较

采用简易CTAB法、改良CTAB法、SDS-CTAB法、高盐法和CTAB-硅珠法等5种方法对风信子花蕾、叶片和鳞片基因组DNA进行提取.比较DNA纯度、电泳、得率等指标,结果表明:CTAB-硅珠法没有获得DNA,其他方法均可提出DNA;在纯度方面,简易CTAB法＞SDS-CTAB法＞改良CTAB法＞高盐法;在得率方面,简易CTAB法＞改良CTAB法＞高盐法＞SDS-CTAB法.简易CTAB法提取的DNA纯度较高,OD260/OD280为2.01,OD260/OD230为2.33,浓度为406.8ng·μL-1,得率为175.95ng· μL-1.花蕾、叶片适合风信子基因组DNA的提取.     

泡桐叶片RNA提取方法的研究

以豫杂1号泡桐为试验材料,采用Trlzol,改良Trizol Ⅰ,改良Trizol Ⅱ,CTAB和Plant RNAtrip等方法提取其叶片总RNA,并用A260/A280值和琼脂糖凝胶电泳检测RNA的得率、纯度和完整程度.结果表明,不同方法提取的RNA在得率、纯度和完整度方面存在一定的差异.改良Trizol Ⅱ法提取RNA的A260/A280值为1.989,得率为171.0μg·g-1,电泳琼脂糖凝胶上有28,18,5 S rRNA 3条清晰的谱带,是泡桐叶片RNA提取的最佳方法.     

不同方法对石榴叶片DNA提取效果的影响

以4个石榴(PunicagranatumL )品种为实验材料,用SDSⅠ,SDSⅡ,CTABⅠ,CTABⅡ4种方法提取石榴叶片DNA 结果表明,SDS法提取得率为500～600μg·g-1,但OD值偏低,为1 50～1 70;RAPD分析无扩增;CTAB法所得DNA得率为200～500μg·g-1,OD值为1 80～1 90;RAPD分析扩增带清晰CTABⅠ和CTABⅡ相比,操作简单、省时,得率高,综合考虑CTABⅠ是石榴叶片DNA提取的最佳方法     

DNA-AFLP分析用辣椒基因组DNA提取方法的优化

采用SDS法、CTAB-1法和CTAB-2法提取辣椒(Capsicu mannuum)叶片DNA,通过紫外吸收和琼脂糖凝胶电泳检测,证明CTAB-2法所提取DNA的质量和纯度较高;以此DNA为模板进行DNA-AFLP分析,特征条带清晰、基本无脱尾,适用于DNA-AFLP等分子生物学研究。     

板栗基因组DNA不同提取方法的比较

板栗组织中富含多酚类、糖类以及单宁类等次生代谢物质,因而难以提取比较高质量的DNA分子。本实验利用三种不同提取方法,分别是改良CTAB法、CTAB-乙醚萃取法、简易法提取板栗不同部位的基因组DNA。纯化的DNA分别经过核酸蛋白分析仪、电泳以及PCR技术检测,表明改良CTAB法和CTAB-乙醚萃取法都适用于板栗嫩叶、成熟叶片及韧皮部组织DNA的提取,提取的DNA纯度较为理想,能够满足后续分子生物学的要求。     

贺兰山紫蘑菇基因组DNA提取方法研究

[目的]研究适合于贺兰山紫蘑菇（Corinarius rufo-olivaceus）基因组DNA的提取方法。[方法]通过采用改良CTAB法Ⅰ、改良CTAB法Ⅱ、SDS法、Doyle-Doyle法和KI法5种基因组DNA提取方法,分别提取贺兰山紫蘑菇的基因组DNA,用DU800核酸蛋白检测仪测定其DNA含量、浓度和纯度,并通过琼脂糖凝胶电泳进行提取结果比较。[结果]5种不同的提取方法均能提取该紫蘑菇的基因组DNA,其中KI法提取的DNA纯度、浓度和得率为最好。[结论]KI法是贺兰山紫蘑菇（C.rufo-olivaceus）DNA提取的适宜方法,该法具有简单、便捷、省时、适合基因组DNA大量提取的特点。     

棉花DNA提取方法的探讨

就提取棉花基因组DNA的两种基本方法及其相应的改进方法作了系统比较研究.结果表明:改进的SDS法和CTAB法分别优于原SDS法和CTAB法,两种改进方法提取棉花基因组DNA效果一致.DNA的得率与提取方法有关,还与棉花的取材部位有关.改进的CTAB法DNA得率高于改进的SDS法;采用改进的CTAB法提取棉花不同部位基因组DNA,其DNA得率的高低依次为花药>花瓣>叶片>纤维.由改进方法提取的棉花基因组DNA能完全双酶切,能满足SSR和AFLP等后续分子生物学研究的需要.     

枳壳基因组DNA提取方法的比较研究

以枳壳(酸橙)叶片为试验材料,采用改良CTAB法、CTAB-硅珠法、SDS法、高盐低pH法和周世良法5种方法提取枳壳基因组DNA,并通过紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳及SSR-PCR扩增3种检测方法比较DNA的提取效果,以期找到枳壳DNA的最佳提取方法.结果表明,5种方法中SDS法提取的DNA浓度最高(平均为900ng/μl),纯度最好(OD260/OD280平均值为1.90),且以SDS法提取的DNA为模板进行SSR-PCR扩增检测,目的条带清晰、亮度均一、稳定性和重复性好.因此,SDS法是枳壳DNA最佳提取方法,可用于分子检测试验.     

盾叶薯蓣基因组DNA的提取及RAPD鉴定研究

盾叶薯蓣是中国特有的植物,是甾体激素的重要来源。试验采用CTABⅠ,CTABⅡ,SDSⅠ和SDSⅡ等方法对盾叶薯蓣基因组DNA的提取进行了研究,并且结合核酸测定仪、琼脂糖凝胶电泳法以及RAPD鉴定等方法对DNA质量进行了鉴定。试验结果表明,采用CTABⅠ法可提取高质量DNA供分子标记使用。     

几种提取植物DNA方法的比较

以玉米和草的叶片为材料,分别用CTAB,SDS和尿素法提取基因组DNA,通过紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳、蒽酮比色法对所提DNA的产量、质量和糖含量进行了检测比较,并对鲜样采取了不同的干燥处理。试验结果表明,鲜样和硅胶干燥的叶片提取的DNA无降解或降解很少,45℃烘干样也能提取到大量的高分子DNA,自然干燥样的提取效果因植物材料而异。     

拮抗链霉菌AFLP分析技术体系的研究

[目的]探索基于AFLP的拮抗链霉菌DNA模板制备方法及其扩增体系,为AFLP技术在链霉菌乃至放线菌资源分析中的应用提供依据。[方法]以改进的CTAB法提取DNA,利用Pst I／Mse I型AFLP试剂盒及其反应体系进行扩增,采用5％变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析扩增结果。[结果]提取了10个拮抗链霉菌菌株的基因组DNA,0.8％琼脂糖凝胶电泳检测显示其主带清晰,片段大小为37.64-40.86Kb,无降解现象,亦无RNA残留;其OD260/OD280为1.625-1.833;Pst I／Mse I双酶切产物琼脂糖电泳呈弥散荧光长带,说明酶解充分;筛选出的3对引物对DNA模板的扩增谱带清晰,多态性丰富。[结论]该研究建立的DNA模板制备方法及其扩增反应体系可用于链霉菌的AFLP分析。     

泡桐AFLP反应体系的建立及引物筛选

以豫杂一号泡桐为材料,通过对影响AFLP技术体系的各主要因素的研究,建立了适于泡桐AFLP分析的技术体系.结果表明最佳酶切体系(20μL)为500 ng模板DNA,3 U的Pst 1和Mse I,在37℃下双酶切3 h;20μL最佳连接体系中为酶切产物15 μL,0.25 μmol·L-1Pst I接头,2.5 μmol·L-1 Mse I接头,1 μL 10×T4 Buff-er,2 U T4连接酶,22℃连接18 h;20 μL最佳预扩反应体系中5 μL稀释10倍的连接产物,100 μmol·L-1dNTP,2 U Taq酶,250 μmol.L-1 Pst I和Mse I引物(P+AGT/M+AGT),2 μL 10×PCR Buffer.20 μL最佳选择性扩增反应体系中5 μL稀释20倍预扩增产物,100 μmol·L-1dNTP,2 U Taq酶,350 μmol·L-1 Pst I和Mse I引物(P+AGT/M+AGT),2 μL 10×PCR Buffer.最后,筛选出了97对适宜于泡桐AFLP分析的引物.     

几种动物生鲜肌肉组织样品DNA提取方法的比较研究

比较不同提取原理的试剂盒对动物生鲜肌肉组织DNA提取效果,为日常肉制品掺假检测与监测选择合适的DNA提取方法提供参考。以生鲜牛肉、羊肉、猪肉、鸡肉和鸭肉为试验材料,采用改良CTAB法、蛋白酶K法、SDS法和快速萃取法等原理的8种不同方法来提取组织样品DNA,并对提取DNA的完整性、浓度、纯度、试验耗时和后续实时荧光定量PCR检测等指标进行评价。结果表明,8种提取方法均可用于常见动物源性肌肉DNA的提取。与改良CTAB法相比,原理为蛋白酶K法、SDS法和快速萃取法的试剂盒避免了有机试剂的使用,且操作耗时短。实际操作中,可优先选择基于蛋白酶K法和SDS法的试剂盒进行DNA提取,其提取的DNA纯度和总量高,盐残留少,对实时荧光定量PCR的抑制少,满足肉制品掺假检测与监测的核酸提取需求。     

柑橘黄龙病病原DNA提取方法比较

【目的】筛选出一种快速高效获取柑橘黄龙病病原DNA的提取方法,为黄龙病亚洲种病原的检测奠定基础。【方法】选取5份疑似黄龙病症状柑橘叶片样品,分别采用4种试剂盒（快捷型基因组DNA提取系统、新型植物基因组DNA提取试剂盒、植物基因组DNA提取试剂盒、快速DNA提取扩增套装）及CTAB法提取柑橘叶脉基因组DNA,并用柑橘黄龙病亚洲种的16SrDNA特异引物fD1／fD2和01I／012c进行PCR扩增,DNA提取产物及PCR扩增产物在1％琼脂糖凝胶电泳上检测。【结果】快捷型基因组DNA提取系统获得的DNA质量最好,植物基因组DNA提取试剂盒和CTAB法提取DNA方法提取得到的DNA质量较好,新型植物基因组DNA提取试剂盒所获得的DNA质量较差,快速DNA提取扩增套装所获得的DNA质量最差。除陕速DNA提取扩增套装外,其余4种DNA提取方法均扩增出黄龙病亚洲种病原。【结论】快捷型植物基因组DNA提取系统试剂盒操作简单快捷,耗时短,提取的DNA效果较好,能够满足黄龙病病原PCR检测的要求。     

5种提取方法对甘蔗汁中DNA提取的效果

[目的]研究5种提取方法对甘蔗汁中DNA提取的效果。[方法]以甘蔗种茎中获得的蔗汁为材料,采用2种植物基因组提取试剂盒柱式法和磁珠法、SDS法、CTAB法及简化提取法5种方法提取DNA,对比所提取的DNA浓度、纯度及后续PCR扩增的影响。[结果]以SDS法提取获得的蔗汁DNA浓度最高,平均可达377.50 ng/m L。而柱式法的试剂盒,提取的DNA浓度最低,PCR检测没有能够获得特异的目标条带,不适合用于蔗汁DNA的直接提取。虽然简化法提取的DNA浓度较低,但是能够满足PCR扩增的要求,由于不涉及氯仿等有害物质,操作简单,适用于对DNA质量要求不高时的快速提取。[结论]SDS法最适合用于蔗汁中DNA的提取。     

拮抗链霉菌AFLP分析技术体系的研究

1材料与方法 1．1菌株供试拮抗链霉菌共10个菌株,均由该课题组分离自京郊菜田土壤和天然次生林土壤（表1）。     

适于AFLP分析的盾叶薯蓣DNA的提取方法

用传统CTAB法和改良CTAB法提取盾叶薯蓣样品的基因组DNA。结果表明:传统CTAB法与改良CTAB法提取的基因组DNA完整性都比较好,但传统CTAB法获得的DNA含有较多杂质,不能被限制性内切酶消化,改良CTAB法提取的基因组DNA杂质去除彻底,条带清晰,可以完全酶切,并能获得清晰的预扩增图谱和有丰富条带稳定的AFLP指纹,完全适合于盾叶薯蓣分子标记鉴定所需。     

不同白蚁基因组DNA提取方法的比较

[目的]筛选一种高效、简单、快速、价格合理的白蚁基因组DNA提取方法。[方法]比较了CTAB法、离心柱试剂盒和磁珠法试剂盒提取白蚁基因组DNA的效果。[结果]对于新鲜和保存得当的标本,3种方法提取的DNA质量均较好;但对于保存时间较长,出现降解的标本,磁珠法试剂盒的效果明显优于其他方法。[结论]获得分子检测所需要的最佳DNA提取方法。