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为建立快速、准确的非洲猪瘟(African swine fever,ASF)检测方法,试验针对ASFV的晚期翻译p72蛋白基因构建了标准品质粒和标准曲线,并利用荧光定量PCR技术对OIE和CADC提供的引物和探针进行灵敏性的比对及对多种DNA提取试剂盒提取的ASFV DNA检测效率进行了评价,为ASFV的高效检测提供数据参考。结果表明:构建的ASFV晚期p72基因的标准品质粒和标准曲线中,p72标准品质粒的检测效率与灵敏度较优。通过使用OIE、CADC分别提供的引物、探针和多种DNA提取试剂盒进行ASFV荧光定量PCR检测,发现CADC提供的引物和探针对于ASFV的检测更加灵敏,Axygen品牌的DNA提取试剂盒对ASFV的检测性价比更高。 相似文献
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为了比较市场上国产及进口非洲猪瘟病毒(ASFV)ELISA抗体检测试剂盒的产品质量和使用效果,本试验对B、C、D三种进口试剂盒和A、E、F三种国产试剂盒进行敏感性、特异性和重复性比较。结果显示,试剂盒B、D、E、F分析敏感性均为1∶512;试剂盒C分析敏感性为1∶256;试剂盒A分析敏感性为1∶128;诊断敏感性比较结果为试剂盒B>试剂盒D、F>试剂盒E>试剂盒C>试剂盒A;6种试剂盒对7份特异性质控血清的检测结果均为阴性,表明6种试剂盒均具有排除潜在交叉反应的病原抗体的能力;诊断特异性比较结果为试剂盒A、C、D>试剂盒F>试剂盒E>试剂盒B;批内重复性结果显示,6种试剂盒的批内变异系数(CV%)均在15%以内。结果表明,非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测国产试剂盒与进口试剂盒的敏感性、特异性和批内重复性相差无几,国产试剂盒的兴起解决了以往过度依赖昂贵的进口试剂盒的问题,国产化替代进程在不断加速。 相似文献
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为探究非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)标准物质作为试剂盒评价体系的可行性,比较了市场上5种主流品牌ASFV荧光PCR检测试剂盒的检测性能。使用ASFV P72基因核酸标准物质作为模板,根据5种试剂盒说明书分别进行相应的荧光定量PCR检测,结合扩增曲线、Ct值,分析不同试剂盒的敏感性、可重复性以及所需反应时间。结果显示:5种试剂盒的阴性、阳性对照均成立,最低检测限均为5.9×10-1拷贝/μL;4个厂家的试剂盒线性关系R2>0.98,其中最优的R2=0.994,离散度最小;各试剂盒的实际反应耗时与理论反应耗时均有一定差异(0.20~0.96 h)。结果表明,各生产厂家使用P72基因作为靶基因研制的ASFV荧光PCR检测试剂盒都可以使用ASFV标准物质作为评价体系,来评判试剂盒的检测性能。本试验为各实验室不同样品检测的ASFV荧光PCR检测试剂盒选择提供了一种可用的评价方法。 相似文献
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对5个厂家的6种非洲猪瘟荧光PCR试剂盒检测的敏感性和一致性进行综合比较,选取已知阳性的核酸样品作为待测样品进行梯度稀释,每组设置三个平行对照,使用A1、A2、B、C、D、E6种试剂盒,按照各厂家试剂盒说明书对所有样品进行非洲猪瘟荧光PCR检测及结果判定,并从检出ct值的样品数量、检出核酸最低拷贝浓度、检出ct值的平均值和检出ct值的离散度四个维度来综合评估对6种试剂盒的敏感性和一致性.结果显示:检测灵敏度方面,由高至低的排名为试剂盒D>试剂盒C>试剂盒A2>试剂盒E>试剂盒B>试剂盒A1;检测一致性方面,试剂盒D>试剂盒C>试剂盒A2>试剂盒E>试剂盒B=试剂盒A1.综合6种试剂盒的敏感性和一致性来看,试剂盒D的灵敏度和一致性最好,试剂盒C稍低于试剂盒D,但差距很小,几乎在同一水平,试剂盒A2灵敏度和一致性次之,其余三种试剂盒E>试剂盒B>试剂盒A1. 相似文献
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<正>据农业农村部网站消息,农业农村部发布公告指出,2019年2月1日起,全面开展生猪屠宰及生猪产品流通等环节非洲猪瘟检测,旨在进一步做好非洲猪瘟防控工作,降低生猪屠宰以及生猪产品流通环节病毒扩散风险。公告指出,生猪屠宰厂(场)应当按照有关规定,严格做好非洲猪瘟排查、检测及疫情报告工作,并主动接受监督检查。公告强调,生猪屠宰厂(场)要严格入场查验,发现有下列情形之一的,不得收购、屠宰有关生猪: 相似文献
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12月14日,农业农村部下发进一步做好非洲猪瘟实验室检测工作的通知,内容如下。一、疫病检测程序首次发生疑似非洲猪瘟疫情的省份,按照《农业农村部办公厅关于做好非洲猪瘟实验室检测工作的通知》(农办牧〔2018〕54号)(以下简称《通知》)有关要求,由中国动物卫生与流行病学中心进行确诊。再次发生疑似非洲猪瘟疫情的,由省级动物疫病预防控制机构进行确诊;各受委托实验室发现疑似阳性结果,要将疑似阳性样品送省级动物疫病预防控制机构进行确诊。确诊后要将病料样品送中国动物卫生与流行病学中心备份。 相似文献
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2018年12月13日,农业农村部发布,贵州省毕节市赫章县和七星关区非洲猪瘟疫区解除封锁。2018年12月14日,农业农村部发布,云南省普洱市思茅区非洲猪瘟疫区解除封锁。2018年12月17日,农业农村部发布,湖南省常德市桃源县、怀化市沅陵县、山西省太原市非洲猪瘟疫区解除封锁。2018年12月18日,农业农村部发布,内蒙古自治区锡林郭勒盟阿巴嘎旗、正蓝旗和兴安盟科右中旗非洲猪瘟疫区解除封锁。 相似文献
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<正>农业农村部为了做好当前非洲猪瘟防控工作,加强非洲猪瘟防控技术科研攻关,重点推进非洲猪瘟快速检测等内容的研究,加强各环节非洲猪瘟病毒检测工作。农业农村部发布诸多政策明确非洲猪瘟病毒相关实验活动的生物安全监管工作,要求聚焦非洲猪瘟疫苗研发和综合防治等关键技术,协调有关部门设立科研专项资金,加大科研投入和攻关力度。2019年1月3日,农业农村部发 相似文献
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非洲猪瘟已经成为我国养猪业防控的头号疫病,而荧光PCR方法是广泛用于各实验室非洲猪瘟病毒检测的首选方法。为提高相关实验室非洲猪瘟病毒荧光PCR检测的准确性,针对非洲猪瘟病毒荧光PCR检测过程可能存在的"假阳性"和"假阴性"现象,从全面质量管理理论的"人、机、料、法、环"等具体方面,详细阐述了这些现象产生的原因及改进措施或解决方案,从而为我国各级兽医实验室、屠宰场、养殖场、第三方检测机构等开展非洲猪瘟病毒检测提供参考,同时也为其他疫病病原的荧光PCR检测提供借鉴。 相似文献