高效液相色谱-串联质谱法测定蛋和奶中氨基糖苷类药物残留

建立了高效液相色谱-串联质谱法测定蛋和奶中氨基糖苷类药物(双氢链霉素、卡那霉素A、庆大霉素、链霉素、妥布霉素、潮霉素B、大观霉素、阿米卡星、新霉素B和安普霉素)残留.用5％三氯乙酸水溶液提取目标物,经HLB固相萃取柱净化,高效液相色谱柱分离,梯度洗脱,外标法定量.结果表明,10种药物在各自范围内线性关系良好,R2>0.99,方法的检出限为10.0～50.0μg/kg,定量限为30.0～100.0μg/kg,平均回收率为62.3％～110.4％,相对标准偏差为1.0％～13.6％.该方法简便、准确、灵敏,且扩大了检测范围,适用于蛋和奶中氨基糖苷类药物的定量测定.     

食品中氨基糖苷类抗生素快速分析方法研究进展

氨基糖苷类抗生素是一类广谱性抗生素,在临床和动物医疗中应用广泛,从而导致它在动物源性食品中广泛残留。目前,各国针对庆大霉素、卡那霉素、新霉素以及链霉素/双氢链霉素设有最高残留限量。由于检测样本数量庞大,并且检测目标物种类众多,因此对简便、快速的分析方法需求愈加强烈。以特异性抗体为基础的免疫分析方法在氨基糖苷类抗生素的快速分析中占有重要地位,同时核酸适配体被筛选出来并被引入到快速分析领域,丰富和发展了快速分析的类型。主要综述基于能够特异性识别氨基糖苷类抗生素抗体和适配体构建的快速分析方法,包括单一药物分析和多残留分析方法,以期对该领域的发展趋势和方向提供参考。     

辽宁地区猪源大肠埃希菌氨基糖苷类抗生素耐药基因的检测与分析

为了解辽宁地区猪源大肠埃希菌对氨基糖苷类抗生素的耐药情况,采用K-B纸片法对65株猪源大肠埃希菌菌株进行6种氨基糖苷类抗生素的药敏试验,同时采用PCR方法对耐药菌株rpsl基因和4种氨基糖苷类钝化酶基因aac(3)-Ⅳ、aad A、aac(6')-Ⅰb-cr、aac C4进行检测及序列分析,并将阳性样品与Gen Bank中登录的序列进行同源性比较。结果显示,辽宁地区猪源大肠埃希菌对链霉素、妥布霉素、新霉素、卡那霉素、丁胺卡那霉素、庆大霉素的耐药率分别为26.2%、15.4%、18.5%、29.2%、4.6%、21.5%;23株耐药菌株rpsl基因检出率为100%;4种氨基糖苷类钝化酶基因aac(3)-Ⅳ、aad A、aac(6')-Ⅰb-cr、aac C4检出率分别为13.0%、8.7%、69.6%、4.3%。以上结果表明,在氨基糖苷类抗生素中耐药性最低的是丁胺卡那霉素,rpsl基因及氨基糖苷类钝化酶基因普遍存在于辽宁地区猪源大肠埃希菌中。     

猪源大肠杆菌对氨基糖苷类药物耐药性及耐药基因检测

为调查云南大理某地区猪源致病性大肠杆菌对链霉素、卡那霉素、新霉素、妥布霉素、阿米卡星和庆大霉素的耐药性,并获悉氨基糖苷类2个耐药基因strA、strB的携带情况,试验采用抗菌药物敏感试验纸片法探究55株大肠杆菌对6种氨基糖苷类药物的耐药性,通过常规PCR检测strA、strB携带率。结果表明,链霉素、卡那霉素、新霉素、妥布霉素、阿米卡星和庆大霉素的耐药率依次为50.9%、40.0%、30.9%、43.6%、12.7%、41.8%。strA、strB检出率分别为76.4%和72.7%,同时含有2种耐药基因的频率高达50.9%,说明云南大理受检地区猪源致病性大肠杆菌的耐药情况严重。     

鸡源大肠杆菌对氨基糖苷类抗生素耐药性检测林

从四川省不同养殖场分离鉴定出233株鸡源大肠杆菌,采用微量肉汤稀释法对链霉素、庆大霉素、阿米卡星、卡那霉素、大观霉素、安普霉素和新霉素等7种氨基糖苷类药物进行耐药性检测.结果显示,233株大肠杆菌对氨基糖苷类药物的耐药性较为严重(耐药率范围31％～81％),对不同药物呈单向交叉耐药性,56.6％的菌株呈多重耐药性.     

超高效液相色谱-串联质谱法测定猪肉中苯并咪唑类药物残留

试验建立了猪肉中5种苯并咪唑类药物残留的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)残留分析方法。噻苯达唑、阿苯达唑、芬苯达唑、奥芬达唑、苯硫氨酯在10.0～600μg·kg~(-1)线性范围内,标准曲线相关系数(r)分别为r=0.993 6、r=0.998 3、r=0.991 2、r=0.992 1、r=0.999 9,方法检出限分别为4.43、6.12、9.97、5.53和3.74μg·kg~(-1)。加标回收实验中苯并咪唑类药物加标浓度分别为30.0、100和300μg·kg~(-1),回收率为86.8%～98.8%,相对标准偏差为3.2%～11.1%。方法简单、快速、准确,适用于可食动物肌肉中5种苯并咪唑类药物残留的检测。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定猪肉中苯并咪唑类药物残留

试验建立了猪肉中5种苯并咪唑类药物残留的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)残留分析方法。噻苯达唑、阿苯达唑、芬苯达唑、奥芬达唑、苯硫氨酯在10.0～600μg·kg~(-1)线性范围内,标准曲线相关系数(r)分别为r=0.993 6、r=0.998 3、r=0.991 2、r=0.992 1、r=0.999 9,方法检出限分别为4.43、6.12、9.97、5.53和3.74μg·kg~(-1)。加标回收实验中苯并咪唑类药物加标浓度分别为30.0、100和300μg·kg~(-1),回收率为86.8%～98.8%,相对标准偏差为3.2%～11.1%。方法简单、快速、准确,适用于可食动物肌肉中5种苯并咪唑类药物残留的检测。     

食品动物源大肠杆菌耐药性分析及16S rRNA甲基化酶基因的检测

【目的】对四川地区临床分离的437株健康动物源及82株患病动物源大肠杆菌(E.coli)的耐药性及其机制进行研究,为临床合理用药提供理论依据。【方法】用3种氨基糖苷类药物和11种非氨基糖苷类药物对分离的大肠杆菌进行药物敏感性试验(K-B纸片法)。选取至少耐1种氨基糖苷类药的大肠杆菌作为供试菌,通过PCR检测其16SrRNA甲基化酶基因armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD、rmtE和npmA;对阳性菌株进行质粒接合试验;并用K-B纸片法分析临床菌和接合子对抗生素的敏感性。【结果】437株健康动物源和82株患病动物源大肠杆菌对14种抗菌药物表现出不同程度的耐药性。健康动物源大肠杆菌对氨苄西林、氯霉素、磺胺甲恶唑的耐药率较高,分别为69.79%,50.8%和68.72%,对庆大霉素、卡那霉素、阿米卡星比较敏感,敏感率分别为75.97%,67.73%和97.02%;其中有134株分离菌至少对1种氨基糖苷类药物表现出耐药性。患病动物源大肠杆菌除对美罗培兰耐药率较低(为3.66%)外,对其余药物的耐药率在32.93%~100%,且都对至少1种氨基糖苷类药物表现出耐药性。多重耐药分析表明,健康动物源大肠杆菌主要分布于0~4耐,而患病动物源大肠杆菌至少耐7种抗菌药物,主要分布于10~14耐。在134株耐氨基糖苷类抗生素大肠杆菌中,检测到5株含rmtB基因,检测率为3.73%,未检测到armA、rmtA、rmtC、rmtD、rmtE和npmA基因。在82株患病动物源大肠杆菌中,检测到1株含armA基因,10株含rmtB基因,检出率分别为1.22%和12.2%,未检测到rmtA、rmtC、rmtD、rmtE及npmA基因;接合试验的耐药质粒传递率为100%,受体菌接合频率在(9.2×10-9)~(4.8×10-6)。【结论】四川地区健康动物源大肠杆菌对抗生素呈中低水平耐药,多重耐药以4耐及以下为主,占63.84%,主要由rmtB基因引起;而患病动物源大肠杆菌对抗生素则呈高水平耐药,89.02%为10~14耐,主要由rmtB和armA基因引起。     

链霉素人工抗原的制备与鉴定

链霉素经氧-羧甲基羟胺肟化处理后引入羧基,采用EDC一步法分别合成免疫原BSA-EDC-SM和包被抗原OVA-EDC-SM;用戊二醛法和1,4-丁二醇缩水甘油醚分别合成BSA-GA-SM和BSA-di-SM;采用SDS-PAGE凝胶电泳和紫外扫描测得BSA-EDC-SM、BSA-GA-SM和BSA-di-SM的BSA与SM的分子结合比分别为1:23、1:15和1:10.用3种免疫原免疫Balb/C小鼠,获得了高价、敏感和特异的抗血清.BSA-EDC-SM免疫组中1#小鼠的多克隆抗体对SM的IC50为45.8üg/mL,对双氢链霉素(DHSM)的交叉反应为90.6%,与其他氨基糖苷类药物或抗生素药物的交叉反应均小于0.001%.BSA-di-SM和BSA-GA-SM免疫组的多克隆抗体对DHSM、其他氨基糖苷类药物或抗生素类药物的交叉反应均小于0.001%.     

鸡肌肉组织中四环素类和氟喹诺酮类药物多残留检测

建立了能同时提取净化鸡肌肉组织中多残留的前处理并使用高效液相色谱分别检测的方法。样品经McIlvaine缓冲液、McIlvaine缓冲液-甲醇混合液提取后,过Oasis HLB固相萃取柱,5%甲醇(φ)淋洗,甲醇洗脱,40℃氮气吹干,磷酸-三乙胺缓冲液/乙腈复溶。样品四环素类药物用紫外检测器检测,波长365 nm,氟喹诺酮类药物用荧光检测器检测:激发波长280 nm,发射波长为480 nm。结果显示:鸡肌肉组织中4种四环素类药物OTC、TC的检测限是5μg/kg,CTC、DOXY的检测限是16μg/kg,回收率范围60.6%～89.1%,变异系数范围1.9%～14.3%;4种氟喹诺酮类药物的检测限均为2μg/kg,回收率范围77.5%～86.3%,变异系数范围2.8%～7.4%。说明该方法灵敏度高、适应性强,适用于鸡肌肉组织中上述4种四环素类药物和4种氟喹诺酮类药物残留的一次性检出。     

猪饲料中有机胂类药物残留检测方法——高效液相色谱法

有机胂类药物是一类抗菌促生长药物,具有促生长、改善饲料效率的作用,并且对产蛋和猪毛色均有较好作用。但是长期使用含有有机胂砷制剂的饲料喂养动物,这些药物会残留于动物的器官、组织中,通过食物链危害人类健康。建立高效液相色谱法对猪饲料中4种有机胂类药物[对氨基苯胂酸(阿散酸)、3-硝基-4-羟基苯胂酸(洛克沙胂)、4-硝基硝苯胂酸(硝苯胂酸)、对脲基苯胂酸(卡巴胂)]的残留进行了检测。实验结果表明,饲料样品以甲醇和乙酸混合溶液为提取剂,CuSO4沉淀蛋白,通过采用高效液相色谱-紫外法检测,4种有机胂类药物线性范围为0.1~20μg/mL,定量限为5μg/g,平均回收率>80%,相对标准偏差<10%。该方法能同时检测猪饲料中4种有机胂类药物残留,前处理简单,回收率高,检出限低,可为饲料样品中有机胂类药物残留的监测与控制提供有效的检测方法。     

氨基糖苷类药物的危害及其检测方法研究进展

氨基糖苷类药物是一个种类丰富的抗生素类别,因其能防治某些动物性疾病且能促进动物的生长发育,在养殖业中应用广泛。但长期高剂量使用该类药物,会因其降解困难对环境造成危害,并且可通过食物链传递给人。该类药物能够在人体内蓄积,从而产生耳毒性、肾毒性等危害。因此,检测食物中氨基糖苷类药物的残留十分必要。对氨基糖苷类药物的危害及其检测方法进行综述,并对其未来发展方向进行展望。     

结合PRiME HLB净化快速测定动物源性食品中二硝托胺残留的超高效液相色谱-串联质谱法

试验建立了经PRiME HLB净化的动物源性食品中二硝托胺残留的超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)检测方法。样品经0.2%甲酸-乙腈水溶液提取后,采用Oasis PRiME HLB固相萃取柱净化,用ACQUITYUPLC BEH C18(1.7μm,3.0 mm×100 mm)色谱柱分离,以纯水-甲醇作为流动相进行梯度洗脱,在负离子模式下进行多反应监测模式(MRM)扫描。二硝托胺添加浓度在2.50～250μg·kg~(-1)呈现良好的线性关系(R≥0.997),检出限和定量限分别为0.735和2.45μg·kg~(-1)。在加标回收实验中,二硝托胺的回收率范围为82.7%～99.2%,相对标准偏差为2.8%～5.3%。试验结果表明,该方法简单、快速、准确,净化效果好,检出限低,回收率高,灵敏度好,适用于动物源性食品中二硝托胺残留的准确定性定量。     

鸡大肠杆菌对氨基糖苷类药物高水平耐药的16S rRNA甲基化酶检测

为了解河南地区鸡源大肠杆菌对氨基糖苷类药物高水平耐药的16S rRNA甲基化酶的流行情况,对2005～2008年在河南地区病鸡的病料中分离保存的429株大肠杆菌进行药敏试验,并分别设计特异性引物对其进行16S rRNA甲基化酶基因的聚合酶链式反应扩增.检测结果显示,在6种氨基糖苷类药物高水平耐药的16S rRNA甲基化酶基因中,仅检测出ArmA和RmtB,检出率分别为20.7%(89/429)和23.3%(100/429).且随时间的推移,ArmA和RmtB的出现几乎是逐年增高.提示河南地区鸡大肠杆菌对氨基糖苷类药物高水平耐药的16S rRNA甲基化酶产生率较高,且以ArmA和RmtB为主.     

细胞穿透肽增强氨基糖苷类抗生素杀菌作用的方法

为验证细胞穿透肽能否增强氨基糖苷类抗生素杀菌作用,选用具代表性的3种氨基糖苷类抗生素(妥布霉素、卡那霉素及链霉素)处理平台期大肠杆菌.在特定抗生素处理浓度和处理时间下,进行平台期大肠杆菌杀伤效果组间比较,用ANOVA算法分析试验结果差异性;并使用N PN染色法探究细胞穿透肽增强氨基糖苷类抗生素杀菌作用机制.结果表明:细...     

超高效液相色谱-串联质谱法检测鸡肉中6种大环内酯类药物残留量

建立鸡肉中6种大环内酯类药物的高效液相色谱-串联四级杆质谱(UPLC-MS/MS)残留分析方法。样本在乙腈水溶液提取下经PRiME HLB固相萃取柱净化,氮吹浓缩后定容过膜上机检测。在1.00～50.0μg·L~(-1)线性范围内,红霉素、替米考星、泰乐菌素、林可霉素、吉他霉素和螺旋霉素的标准曲线相关系数(r)0.999,方法检出限0.95μg·kg~(-1),空白样品加标回收率范围为75.8%～110.7%,相对标准偏差11.50%,适用于可食动物肌肉红霉素、替米考星、泰乐菌素、林可霉素、吉他霉素和螺旋霉素残留的检测。     

β2-受体激动剂类药物多残留间接竞争ELISA检测方法的建立

【目的】建立β_2-受体激动剂类药物多残留间接竞争ELISA检测方法,为动物食源性β_2-受体激动剂类药物残留的快速检测提供技术支持。【方法】以沙丁胺醇多克隆抗体为基础,优化间接竞争ELISA的检测条件,建立一种快速检测猪尿中沙丁胺醇、卡布特罗、西布特罗、克伦特罗、溴布特罗、马布特罗、克伦潘特、可尔特罗、吡布特罗、马喷特罗、比托特罗与妥布特罗等12种β_2-受体激动剂类药物的间接竞争ELISA检测方法。【结果】建立的β_2-受体激动剂类药物间接竞争ELISA检测方法的最佳反应条件为:37℃,抗原以1∶10 000倍包被1 h,抗体以1∶40 000稀释作用40 min,酶标抗体以1∶20 000稀释作用40 min。采用建立的间接竞争ELISA最佳反应条件对猪尿中的β_2-受体激动剂类药物残留进行检测,结果表明12种β_2-受体激动剂类药物在0.1～20μg/L范围内线性关系良好,相关系数均大于0.952;检出限为0.15μg/L,定量限为0.5μg/L;在0.5与1.0μg/L的添加浓度下,回收率为68.4%～114.2%,批内、批间RSD分别为0.4%～10.1%和0.4%～12.5%。【结论】所建立的β_2-受体激动剂类药物残留ELISA检测方法操作简单、快速,灵敏度高,适用于猪尿中β_2-受体激动剂药物的筛选与检测。     

高效液相色谱同时测定鸡蛋中4种激素残留量的方法

对鸡蛋中的甾类同化激素残留的检测方法进行了探索,使用高效液相色谱方法检测雌二醇、雌酮、雌三醇、睾酮4种激素类药物的残留。4种激素药物残留最低检出限为0.01μg/ml,该方法样品回收率在75.8%～104.3%,操作简便。     

四环素类药物多残留酶联免疫检测方法

 【目的】构建一种四环素类药物多残留酶联免疫检测试剂盒。【方法】将四环素类药物与载体蛋白相连作为抗原免疫动物,获得了抗四环素类药物的抗体,建立了动物性食品中四环素类药物残留的ELISA检测方法,并将该试剂盒的检测性能与进口试剂盒比较,对实际样品的测定结果与高效液相-串联质谱法比较。【结果】人工抗原中四环素与蛋白质分子的结合比约为15﹕1,血清效价达到1﹕2 000倍以上,50%抑制浓度(IC50)为3 μg?L-1左右,7种四环素类药物交叉反应率在58%～100%之间,牛奶和鸡肉中四环素类药物的检测限分别为6.6 μg?L-1和6.5 μg?kg-1, 在鸡肉中四环素、土霉素和金霉素的回收率在40%～120%之间。【结论】试剂盒的最低检测限为0.3 μg?L-1,检测范围为0.3～30 μg?L-1,可同时测定兽医常用的四环素、金霉素、土霉素和多西环素4种药物残留。灵敏度、精密度和准确度均能满足兽药残留检测要求。     

GC-MS法测定大白菜中嘧霉胺等4种农药残留量

建立用气质联用仪同时分析大白菜中嘧霉胺、氟虫腈、哒螨灵和苯醚甲环唑等4种农药残留的分析方法.采用乙腈高速匀浆提取,过石墨化碳黑-氨基固相萃取柱净化,选用离子扫描模式分析定量.结果表明,在添加标准品浓度为0.20 mg/kg时,嘧霉胺等4种农药残留峰面积与质量浓度呈现良好的线性关系,添加回收率分别为100.55%、95.05%、93.80%、92.75%,检出限分别为0.01,0.02.0.01,0.05 mg/kg.试验方法取得了很好的线性关系且回收率较好,保证了较好的准确度和精密度.