利用ISSR分子标记鉴定苦瓜杂交种纯度

[目的]采用 ISSR分子标记对苦瓜杂交一代品种秀玉1号纯度进行鉴定,为生产上提高苦瓜新品种纯度鉴定效率提供参考。[方法]利用ISSR技术和91条引物,对苦瓜品种秀玉1号及其亲本的DNA指纹进行分析。[结果]从91条引物中筛选出两条特征引物能同时扩增出F1代及其父母本的多态性条带,分别是ISSR-845和 ISSR-891,两个特异位点分别位于510和300 bp处。其中ISSR-891能够准确区分母本自交系与杂种 F1,经群体验证表明该标记与田间鉴定结果高度一致。[结论] ISSR技术具有准确、简便、高效和实用强等优点,可用于生产上苦瓜种子纯度的快速鉴定。     

利用ISSR分子标记鉴定苦瓜杂交种纯度（英文）

[目的]采用ISSR分子标记对苦瓜杂交一代品种秀玉1号纯度进行鉴定,为生产上提高苦瓜新品种纯度鉴定效率提供参考。[方法]利用ISSR技术和91条引物,对苦瓜品种秀玉1号及其亲本的DNA指纹进行分析。[结果]从91条引物中筛选出两条特征引物能同时扩增出F1代及其父母本的多态性条带,分别是ISSR-845和ISSR-891,两个特异位点分别位于510和300 bp处。其中ISSR-891能够准确区分母本自交系与杂种F1,经群体验证表明该标记与田间鉴定结果高度一致。[结论]ISSR技术具有准确、简便、高效和实用强等优点,可用于生产上苦瓜种子纯度的快速鉴定。     

利用SRAP标记快速检测西瓜杂交种子纯度

【目的】以设施、露地兼用西瓜杂交品种早佳(84-24)及其父本、母本为试验材料,利用SRAP分子标记技术进行DNA指纹图谱构建,筛选出能够快速检测西瓜早佳(84-24)杂交种子纯度的SRAP标记。【方法】选取28对SRAP引物,对供试西瓜品种早佳(84-24)及其父、母本的基因组DNA进行扩增,筛选出扩增多态性好、条带清晰、稳定的SRAP引物作为候选标记,利用100粒杂交种子进行纯度检测准确性验证。【结果】28对供试引物中有22对引物在F1及其父、母本之间扩增出多态性条带,多态性比率为78.6%,其中有1对为父本显示,母本缺失的显性SRAP引物(Me6F/Em2R)。用显性引物(Me6F/Em2R)对100粒西瓜杂交种子进行纯度检测,经聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,纯度为99.0%,与田间形态学鉴定结果(99.1%)基本一致。【结论】利用SRAP标记(Me6F/Em2R),结合聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,可以对西瓜杂交种早佳(84-24)的纯度进行快速、准确鉴定。SRAP分子标记技术在西瓜杂交种子纯度室内快速检测中有很大的应用前景。     

柑橘栽培品种（系）DNA指纹图谱库的构建

 【目的】构建柑橘栽培品种（系）的DNA指纹图谱数据库,为建立柑橘种苗纯度及真实性鉴定技术体系和技术规范奠定基础。【方法】利用SSR标记和ISSR标记对102个柑橘栽培品种（系）进行DNA指纹分析,筛选适合的特征引物,构建柑橘栽培品种（系）的指纹图谱数据库。【结果】从200对SSR引物中筛选到重复性好、多态性丰富的12对引物作为柑橘品种（系）鉴定的特征引物,12对SSR特征引物组合可鉴别42个品种（系）;在此基础上,对未出现SSR特征指纹的60个品种（系）进行ISSR指纹分析,从40个ISSR引物中筛选到2个可用于品种鉴定的特征引物,结合SSR标记,可快速、准确地鉴别70个柑橘的品种（系）。并利用这12对SSR特征引物和2个ISSR特征引物构建了70个柑橘栽培品种（系）的DNA特征指纹图谱数据库。【结论】SSR和ISSR标记适于构建柑橘栽培品种DNA指纹图谱库;指纹图谱库的建立为柑橘种苗纯度及真实性鉴定奠定了基础。     

甜椒CMS不育基因ISSR的分子标记

运用ISSR技术对甜椒CMST6A及其相应的保持系T6B基因组DNA进行了比较分析,共使用了44条随机引物,其中33条引物在两系之中都获得了扩增产物.在不育系中获得了1条稳定扩增的特异片段ISSR-81400.通过随机抽取群体的不育和可育单株对ISSR引物进行鉴定,初步认为ISSR-81400可能是与甜椒CMS不育基因连锁的分子标记.     

SCAR分子标记方法检测家蚕品种和纯度的研究

 【目的】家蚕（Bombyx mori L.）品种和纯度的鉴别，普遍依靠幼虫斑纹或茧形等形态鉴别方法，该方法易受环境影响，结果时效性和准确性差。【方法】筛选RAPD随机引物，稳定扩增出亲本品种的DNA特异性片段，转换成SCAR标记。 【结果】利用微量DNA抽提法，从家蚕主要品种苏5、苏6及其F1孵化前日卵快速提取单粒卵基因组DNA，筛选出RAPD随机引物S42，稳定扩增出苏5和苏6两个亲本品种的DNA特异性片段R5和R6，克隆和测序确认其大小分别为255bp和343bp。Blastn分析显示，R5的nt7～192与家蚕的一个非长末端逆转录转座子（AB002270.1）的nt183～368片段碱基序列有高达91%的相似性，无缺口序列。R6的nt5～340与家蚕的一个WGS（BAAB01113163.1）的nt675～337有91%的一致性，其中存在13个碱基的缺口序列。将2个亲本的RAPD标记转换成SCAR标记，分别利用合成的S42-255-2（P5-2）和S42-343-2（P6-2）SCAR标记引物，能够准确、快速地鉴别所标记的苏5和苏6及其F1蚕品种。【结论】SCAR分子标记方法能够检测家蚕品种和纯度。     

应用RAPD标记鉴定苦瓜杂种纯度

以苦瓜杂交种“闽研2号”及其亲本为材料,利用RAPD标记技术对苦瓜杂交种的多态性进行分析.结果表明:在供试的200条RAPD引物中,筛选出1个引物S115能区分杂交种及其亲本种子.利用互补型RAPD引物S115对苦瓜杂交种“闽研2号”的纯度进行了快速鉴定,结果与田间鉴定结果一致.     

甘蓝型油菜“甘杂1号”种子纯度的SSR鉴定

【目的】建立有效的鉴定"甘杂1号"种子纯度的SSR分子标记方法,为提高"甘杂1号"大田制种纯度提供分子辅助工具。【方法】以"甘杂1号"杂交种及其母本3131A和父本3116C种子为供试材料,利用SSR分子标记技术鉴定"甘杂1号"种子纯度,从200对引物中筛选出特异性强、稳定性高的SSR引物,并将SSR引物鉴定的"甘杂1号"种子纯度与田间种植鉴定结果进行比较。【结果】在200对SSR引物中,筛选出了2对在杂交种和父母本之间存在显著差异的引物(CB10569和Na12E03),且条带清晰可辨,即杂交种含有父母本的特异互补带型。将这2个引物在120株"甘杂1号"杂交种群体中进行重复验证,发现CB10569和Na12E03 2对引物鉴定出"甘杂1号"的种子纯度分别为82%,79.5%。SSR标记的鉴定结果与田间种植鉴定结果(83%)基本一致。【结论】得到的2对SSR引物CB10569和Na12E03,可用于甘蓝型油菜品种"甘杂1号"种子纯度的鉴定。     

利用SSR分子标记技术鉴定和分析茄子杂种F_1的纯度

【目的】分析、鉴定茄子杂种F1纯度,为提高茄子杂交育种效率提供参考依据。【方法】在育苗期,采用SSR分子标记技术对栽培茄×栽培茄正、反杂交种和野生茄×栽培茄杂交种进行纯度鉴定及亲缘关系分析。【结果】从124对SSR引物中筛选出15对在亲本间存在差异、扩增稳定、条带清晰的引物;从210株杂种F1单株中共鉴定出208株真杂种,杂种纯度为99.0%,鉴定结果与田间性状调查结果一致;栽培茄×栽培茄正、反交组合的F1与亲本的亲缘关系均较近,遗传关系差别微小;野生茄×栽培茄组合的F1与父本的亲缘关系均较远,且表现出偏母本遗传。【结论】SSR分子标记技术能快速、准确鉴定茄子杂交后代的纯度,可作为分子标记辅助育种手段用于指导选择符合茄子育种目标的优良杂交品种选育。     

薹菜种质资源的RAPD和ISSR分析

【目的】对29份薹菜(Brassica campestris L.ssp.chinensis Makino var.tai-tsai Hort) 种质资源进行遗传多样性和亲缘关系分析,为薹菜的种质资源保护和利用奠定基础。【方法】利用优化的RAPD和ISSR标记体系,对采自山东、江苏和北京的29份薹菜品种进行DNA多态性分析,并采用类平均法对29份薹菜品种的RAPD和ISSR扩增结果进行聚类分析。【结果】从273条RAPD引物中筛选的33个RAPD引物,共扩增出了336条清晰的谱带,其中293条显示多态性,平均每个引物扩增出10.2条多态性谱带,多态性比率为87.2%。利用RAPD标记构建了29份薹菜资源的聚类树状图,距离系数为0.63～0.79。从100条ISSR引物中筛选的45个ISSR引物,共扩增出了522条清晰的谱带,其中414条显示多态性,平均每个引物扩增出9.2条多态性谱带,多态性比率为79.3%;利用ISSR标记构建了29份薹菜资源的聚类树状图,距离系数为0.70～0.86。【结论】基于RAPD和ISSR标记构建的29份薹菜品种的聚类树状图虽有一定差异,但总体趋势一致,1、20、21号薹菜与其他品种的遗传距离相对较远。     

玉米制种田父本去杂分子标记辅助技术研究

[目的]以玉米制种田父本为研究对象,建立真实性鉴定试剂盒.[方法]采用优化的SSR分子标记技术,对制种田父本进行实证分析.[结果]利用SSR标记技术筛选出玉米的特异性引物,结合单籽粒DNA快速提取方法,建立了种子鉴定试剂盒.[结论]应用此试剂盒可快速、有效地鉴定父本的种子纯度和真实性,为田间间苗、定苗提供依据;为制种田父本去除杂株提供技术支撑.     

应用ISSR分子标记和表型性状评价孔雀草自交系的遗传关系

 【目的】对亲本遗传距离的评估是保证F1代种子杂种优势的基础工作，本研究的目的是为科学的选择孔雀草杂交育种亲本奠定基础。【方法】对12份孔雀草自交系和4份孔雀草F1代及两份万寿菊材料分别用ISSR分子标记和形态学特征进行了遗传分析。【结果】用10个引物共得到145个位点，其中138个为多态性位点；对ISSR标记和10个表型性状分别进行分析的结果表明，当优先考虑花型和材料来源两个表型性状时，两种分类方法得到的结果基本一致。【结论】在孔雀草分类中以花型和材料来源为重要依据时，能够比较客观地反映其遗传基础上的差异。在孔雀草利用杂种优势育种中，选择花型差异大，来源不同的亲本，如孔雀草nana和孔雀草黄色小英雄，孔雀草nana Petite Gold和孔雀草21605，有可能得到性状优良的杂交后代。     

基于SSR分子标记对西瓜杂交种早佳8424纯度的高通量鉴定

【目的】建立西瓜杂交种早佳8424纯度SSR分子标记鉴定体系,满足制种单位种子真实性和纯度的高通量快速准确鉴定的需求。【方法】以早佳8424及其双亲为材料,筛选条带清晰扩增稳定的多态性SSR标记,优化DNA提取和PCR扩增体系,并与传统田间鉴定结果进行比较,验证其准确性。【结果】从72对SSR引物中筛选获得4对在早佳8424上表现为双亲互补带型的引物,分布于第5、第6和第9条染色体上,片段大小约100~300 bp。将扩增片段大小不同的引物组合进行双重或多重PCR扩增,获得4个双重PCR组合。将SSR分子标记WS27+MCPI-05组合对192株种植于温室中的早佳8424杂交种纯度进行鉴定,同田间传统鉴定结果一致。【结论】筛选获得的SSR标记及其组合结合碱裂解法提取DNA可用于早佳8424西瓜杂交种纯度鉴定,效率高,操作简便且可高通量流水作业。     

花粉生活力与苦瓜植株耐冷性的关系

[目的]探索花粉萌发率与苦瓜植株耐冷性的关系,为筛选强耐冷性苦瓜品种提供参考.[方法]在9、12、15、18和25℃温度条件下,将10个苦瓜材料的花粉在培养基中培养,调查花粉萌发率,筛选可区别苦瓜材料的适宜温度.利用筛选的温度对不同苦瓜材料花粉萌发进行测定,同时苗期进行10℃冷害指数测定,分析两者的相关性.[结果]15℃可作为区别不同材料花粉萌发率的适宜温度.根据不同苦瓜材料在15℃下花粉萌发率和10℃低温处理的冷害指数差异显著性,均可将参试苦瓜材料分为3个耐冷类型,两者反映的苦瓜耐低温性能基本一致.15℃苦瓜花粉低温萌发率与植株冷害指数间呈显著负相关,相关系数为-0.8646.[结论]花粉低温萌发率可作为苦瓜品种耐冷性的鉴定指标.     

利用SSR分子标记研究苦瓜资源的遗传多样性

【目的】研究苦瓜育种资源的亲缘关系和遗传多样性,为苦瓜品种的创新和选育提供理论依据。【方法】利用16对SSR引物、SSR分子标记技术对50个苦瓜基因组进行遗传多样性和聚类分析。【结果】16对苦瓜SSR引物共扩增出90条等位基因,多态性位点百分率P、基因杂合度（He）、有效等位基因数（Ne）、Shannon-Wiener指数（H’）、多态信息含量（PIC）和遗传相似系数的均值分别为：97.78%、0.853、7.728、2.087、0.834和0.706。UPGMA聚类分析可将50份苦瓜聚为6大类,第2类包括18份材料、2个亚类组成的遗传多样性,是最为丰富、数量最大的一个群体,包含了3种类型的苦瓜。【结论】50份苦瓜材料的基因组遗传较为复杂,遗传信息较为丰富,采用定向连续性选育对苦瓜性状的累积具有重要作用。     

ISSR分子标记对杧果实生苗父本的早期鉴定

[目的]采用ISSR分子标记技术对杧果实生苗进行亲本早期鉴定,为提高杧果育种效率提供参考.[方法]采用ISSR分子标记技术,筛选不同引物鉴定97-1实生苗的父本.[结果]采用优化的ISSR反应体系,从18条引物中筛选获得4条特异引物UBC-848、UBC-857、UBC-864和UBC-868,其扩增条带多、稳定性强、多态性高、背景清晰.利用引物UBC-848、UBC-857、UBC-864、UBC-868分别对四川红柁、紫花柁和97-1实生苗进行扩增,获得的扩增片段长度在100～2000bp,四川红杧与97-1实生苗、紫花杧与97-1实生苗的共有特异性条带约为180和380 bp、280和380 bp、180和680 bp、680和770bp.[结论]采用ISSR分子标记技术和引物UBC-848、UBC-857、UBC-864、UBC-868构建了杧果实生苗亲本鉴定体系,可鉴定出97-1实生苗的父本为四川红杧,97-1实生苗是紫花杧和四川红杧的杂交种.     

苎麻自交无性繁殖系遗传关系的ISSR分析

 【目的】通过ISSR分子标记研究苎麻自交无性繁殖系资源之间的遗传关系,为育种及科学合理保存和利用现有种质资源提供理论依据和技术支持。【方法】利用ISSR分子标记对40份自交无性繁殖系（8份来自巴西,32份来自中国5个主产省）进行遗传关系分析。【结果】30条ISSR引物对40份材料的DNA模板进行扩增和电泳检测,扩增总条带数为116条,多态性达78.45％,Nei's平均遗传距离为0.2405,平均Shannon指数为0.3679,每条引物扩增2—10条条带。根据材料的地理位置来源,将40份自交无性繁殖系分为6个类群,多态位点百分率（pp）在23.28%—67.24%。Nei's遗传距离在0.0964—0.2285,Shannon指数在0.1408—0.3310。第一、第二、第三主成分的贡献率分别为72.67%、5.36%和2.11%,累计贡献率为80.15%。【结论】主成分分析与采用ISSR标记进行聚类的结果十分一致,利用ISSR标记技术可较准确地分析苎麻自交无性繁殖系的遗传多样性及亲缘关系。     

甘蓝一代杂种纯度SSR鉴定与田间鉴定的一致性研究

【目的】分析甘蓝杂交种纯度的SSR分子标记鉴定结果与田间形态学鉴定结果的一致性,寻找一种快速、准确鉴定甘蓝杂交种纯度的方法。【方法】选用SSR分子标记,筛选杂交种具有父母本互补带型的引物,用其鉴定“秦甘50”杂交种的纯度,并与田间常规鉴定结果的一致性进行比较。【结果】300对SSR分子标记引物中,有1对引物SQ1019对“秦甘50”杂交种表现为父母本互补带型;利用引物SQ1019标记鉴定“秦甘50”大田杂交种的纯度为96.3%;“秦甘50”大田杂交种经田间鉴定纯度为96.0%,2种鉴定结果的一致性高达99.7%。【结论】SQ1019是SSR分子标记“秦甘50”杂交种的特异引物,SSR分子标记是一种快速、准确鉴定“秦甘50”杂交种纯度的方法,其结果与田间常规鉴定结果相一致。     

苦瓜种质资源遗传多样性分析及抗枯萎病种质筛选

【目的】分析江西地方苦瓜种质农艺性状的遗传多样性,为苦瓜抗枯萎病品种选育及遗传改良提供参考。【方法】 2018—2020年分别在江西不同地点开展苦瓜表型性状和枯萎病抗性鉴定,分析其遗传多样性,并对其进行聚类分析和相关分析,筛选出商品性佳且抗枯萎病种质。【结果】多年多地表型性状和病害的综合鉴定表明,55份苦瓜种质表型性状具有丰富的变异,遗传多样性指数（H'）的变幅为0.091~2.122,其中第一雌花节位的H'最高,商品瓜横径和商品瓜纵径的H'次之。聚类分析将供试种质资源分成四大类群,第I类群种质早熟且综合农艺性状优异,可用于苦瓜品种早熟、高产改良;第II类群多为江西地方古老种质;第III类群瓜形美观,符合江西省消费习惯,可用作改良苦瓜商品性的亲本材料;第Ⅳ类群多为野生型苦瓜,果实较小,可用作观赏和提取功能性物质。在16个表型性状中,除瓜面光泽外,其他性状间均存在显著（P<0.05）或极显著（P<0.01,下同）相关,其中单瓜重与瓜横径和瓜纵径均呈极显著强相关,说明提高苦瓜产量可从改良瓜横径等性状着手。主成分分析结果表明,5个主成分因子对表型变异累积方差贡献率达77.544%。枯萎病抗性试验鉴定出高抗材料4份,抗病材料18份,中抗材料5份,感病材料10份,以及高感材料18份。【结论】江西地方苦瓜种质资源具有丰富的遗传多样性,育种潜力巨大,可将单瓜重、瓜纵横径、肉厚和瓜瘤大小等性状作为产量性状进行改良,以第一雌花节位和雌花数作为早熟性状进行筛选。