延边奶山羊羔羊超数排卵及体外成熟的研究

[目的]对延边奶山羊羔羊超数排卵及体外成熟进行研究.[方法]以延边奶山羊为试验对象,研究不同超排方案对羔羊卵泡发育的影响,比较了羔羊超排处理后与成年母羊卵巢内的卵母细胞体外成熟的差异.[结果]延边奶山羊的最佳超排方案为CIDR＋PMSG 800 IU注射1次＋FSH（加拿大）20 IU/次,间隔12 h注射6次;宁波产FSH超排效果不稳定,卵泡回收率低.成年母羊卵母细胞的体外成熟率显著高于母羔羊超排卵母细胞.[结论]该研究为建立延边奶山羊JIVET技术体系提供依据.     

利用双向电泳构建并优化超数排卵犊牛卵泡液蛋白质图谱

以2～5月龄超数排卵犊牛卵泡液为研究对象,比较不同pH值的IPG胶条和4种上样量(150、250、350、450 μg)对卵泡液蛋白图谱构建的影响.结果表明,在pH 4～7的IPG胶条、上样量为350 μg时,获得较好质量的卵泡液蛋白图谱,并获得约319个蛋白点.成功构建的卵泡液蛋白双向电泳技术,为进一步研究犊牛与成年牛卵泡液中差异蛋白质组学分析奠定基础.     

细毛羊羔羊超数排卵及体外胚胎生产移植

[目的]研究羔羊日龄、羔羊体重、超排方法、精卵共孵育时间对细毛羔羊超排效果及卵母细胞体外受精效果的影响.[方法]用国产FS3H对4.～9周龄羔羊进行两种超排方法处理,回收可用卵母细胞1 032枚,体外受精后移植受体98只,产羔25只.[结果]不同周龄羔羊只均获卵数和可用卵数之间差异显著(P＜0.05);不同激素方案处理组的发育卵泡两种处理方案在发育卵泡数上无显著差异(P＞0.05),但在回收率和可用卵数上差异显著(P＜0.05);不同体重组只均发育卵泡数和可用卵数之间差异显著(P＜0.05).[结论]4～6周龄的细毛羊羔羊超排获得卵母细胞数目较多;重复超排的羔羊超排效果不理想;同时,将受精液pH值调为7.5 ～7.6,并将精卵共孵育时间控制在22 ～26 h,卵母细胞体外受精及发育效果较好.     

基于iTRAQ技术的水牛卵泡液蛋白质样品预处理的优化

[目的]优化水牛卵泡液蛋白质差异表达样品制备程序,为相对和绝对定量同位素标签(iTRAQ)技术在蛋白质差异表达分析中的应用奠定基础.[方法]在蛋白质样品溶液酶解过程中,选择两种不同沉淀剂沉淀蛋白质,分别比较蛋白质酶解、iTRAQ标记反应和多肽色谱分离的效果;在纳升液相色谱(nano-LC)分离样品前用快速分离小柱进行处理,鉴定色谱分离效果,以确定蛋白质样品预处理的优化程序.[结果]相对于丙酮,使用含0.1％乙酸的丙酮—乙醇混合液(1∶1)作为沉淀剂可获得较好的蛋白质沉淀效果,蛋白沉淀为白色,蛋白质浓度为5.76μg/μL.相对于蛋白质溶液在还原烷基化后直接使用胰蛋白酶酶解,在酶解前沉淀蛋白质溶液可使蛋白样品的酶解效率更高,获得的肽段峰更丰富、峰值更高;可使多肽和iTRAQ试剂间产生有效的标记反应,母离子具有较高的碎裂效率,获得的二级碎片峰更丰富,iTRAQ试剂的特征报告离子116 m/z较117 m/z的谱图强,辨识度高;获得的多肽nano-LC分离色谱峰更丰富,峰值和分辨率更高.相对于直接进行LC分离,在nano-LC分离前用快速分离小柱对多肽溶液进行杂质处理,也可获得丰富的多肽nano-LC色谱峰,且峰值和分辨率较高.[结论]在iTRAQ试剂标记、蛋白质液相分离和差异分析前,使用适宜的沉淀剂处理蛋白质溶液,并以快速分离小柱除去多肽混合液小分子杂质,可使质谱获得更准确的鉴定结果.     

基于iTRAQ技术的水牛卵泡液蛋白质样品预处理的优化

[目的]优化水牛卵泡液蛋白质差异表达样品制备程序,为相对和绝对定量同位素标签(iTRAQ)技术在蛋白质差异表达分析中的应用奠定基础.[方法]在蛋白质样品溶液酶解过程中,选择两种不同沉淀剂沉淀蛋白质,分别比较蛋白质酶解、iTRAQ标记反应和多肽色谱分离的效果;在纳升液相色谱(nano-LC)分离样品前用快速分离小柱进行处理,鉴定色谱分离效果,以确定蛋白质样品预处理的优化程序.[结果]相对于丙酮,使用含0.1%乙酸的丙酮—乙醇混合液(1∶1)作为沉淀剂可获得较好的蛋白质沉淀效果,蛋白沉淀为白色,蛋白质浓度为5.76μg/μL.相对于蛋白质溶液在还原烷基化后直接使用胰蛋白酶酶解,在酶解前沉淀蛋白质溶液可使蛋白样品的酶解效率更高,获得的肽段峰更丰富、峰值更高;可使多肽和iTRAQ试剂间产生有效的标记反应,母离子具有较高的碎裂效率,获得的二级碎片峰更丰富,iTRAQ试剂的特征报告离子116 m/z较117 m/z的谱图强,辨识度高;获得的多肽nano-LC分离色谱峰更丰富,峰值和分辨率更高.相对于直接进行LC分离,在nano-LC分离前用快速分离小柱对多肽溶液进行杂质处理,也可获得丰富的多肽nano-LC色谱峰,且峰值和分辨率较高.[结论]在iTRAQ试剂标记、蛋白质液相分离和差异分析前,使用适宜的沉淀剂处理蛋白质溶液,并以快速分离小柱除去多肽混合液小分子杂质,可使质谱获得更准确的鉴定结果.     

牛卵巢腔前卵泡的机械分离试验

机械方法处理胎牛、犊牛和成年牛卵巢可以获得大量的腔前卵泡。胎牛卵巢用眼科手术剪刀剪碎（Ｍ１）或用组织切碎机切碎（Ｍ２）,犊牛和成年牛卵巢用组织切碎机切碎,经悬浮吹打和过滤,平均每只卵巢可获得腔前卵泡胎牛为３２８２（Ｍ１）和５６８８（Ｍ２）,犊牛为２１００,成年牛为３５２．在所分离的胎牛和犊牛卵巢卵泡中原始卵泡和初级卵泡占绝大部分,而成年牛卵巢卵泡主要是初级卵泡和次级卵泡。不论是胎牛、犊牛或成年牛,从其所分离的绝大部分腔前卵泡外观质量完好     

人卵泡液对牛未成熟卵母细胞体外培养的影响

【目的】探讨以人成熟卵泡液作为体外成熟培养液培养牛卵母细胞的可能性。【方法】观察并比较未成熟牛卵母细胞分别在灭活人卵泡液与成熟培养液、灭活与未灭活人卵泡液、未灭活人卵泡液不同培养温度(38,38.5和39℃)下,进行体外成熟培养时卵母细胞的极体排出率。【结果】在灭活人卵泡液与成熟培养液中,牛卵母细胞成熟率分别为58.5%和63.5%,二者无显著性差异(P>0.05);在未灭活人卵泡液中,牛卵母细胞成熟率(58.8%)显著高于灭活人卵泡液(37.5%)(P<0.01);在未灭活人卵泡液中38,38.5和39℃培养的牛卵母细胞的成熟率分别为60.7%,58.1%和54.1%,三组间差异不显著(P>0.05)。【结论】人卵泡液可以用于未成熟牛卵母细胞体外成熟;人卵泡液用作成熟培养液时无需灭活,培养温度为38~39℃。     

抗肿瘤活性青蛤多肽的提取工艺研究

[目的]探究具有抗肿瘤活性的青蛤多肽的最佳提取工艺路线.[方法]选择胰蛋白酶酶解青蛤,以酶解液对PC-3细胞增殖抑制率（IR）为指标,研究料液比、温度、pH、加酶量和酶解时间对多肽提取率的影响,探讨最佳工艺,并采用超滤及G25洗脱分离纯化提取液.[结果]当温度为45℃、pH为7.0、料液比为1∶3、酶解时间为6h、加酶量为300 U/g时,分子量为3～5 kD青蛤提取液的抗肿瘤活性最好;分离纯化后在280 nm波长处得到3个峰,其中峰1和峰2成分抗肿瘤活性显著.[结论]以细胞增殖抑制率为指标可以确定青蛤多肽的提取及优化工艺路线.     

绵羊不同直径卵泡卵母细胞特征及染色体形态分析

[目的]剥离不同直径卵泡卵母细胞,比较卵母细胞成熟前后的特征.[方法]测量绵羊卵巢表面卵泡直径后进行剥离,研究卵泡表面直径与卵泡实际直径之间的关系.按表面直径分组(1.0 mm以下、1.0～2.0mm、2.1～4.0 mm、4.1 mm以上),比较各分组间卵母细胞透明带厚度、卵丘复合体质量、卵母细胞成熟前后的染色体形态变化的差异.[结果]随着卵泡直径的增大,卵泡实际直径差异极显著(P＜0.01);各组间透明带厚度差异不显著(P＞0 05),但有降低的趋势;卵丘复合体质量分为A级、B级和C级,A级有增加的趋势,B级C级有降低的趋势;卵母细胞成熟后GV/GVBD比率有下降的趋势,MAT -I、NII有增加的趋势.[结论]随着卵泡直径增大,未成熟卵母细胞的质量提高,卵母细胞核成熟比例增加.     

活体采卵技术在荷斯坦奶牛繁殖中的应用

[目的]为提高优质奶牛的繁殖力,保证低成本的情况下大量生产优质胚胎,对荷斯坦奶牛采用活体采卵的方式采集卵母细胞。[方法]将4头荷斯坦奶牛分为超排组和非超排组2组,超排组对试验牛注射FSH,非超排组对对照牛不采取任何处理。对荷斯坦奶牛进行活体采卵,并对卵母细胞数进行统计。[结果]共采集到12枚卵母细胞,经过受精培养后有8枚受精卵发育良好。[结论]采用优化的活体采卵程序并配合超排技术,能够更好地利用良种奶牛,以达到动物胚胎生产和辅助生殖的目的。     

TMR对犊牛早期生长发育的影响

[目的]研究TMR对犊牛早期生长发育的影响。[方法]选取12头健康的延边黄牛公犊,分为对照组（常规饲养）和试验组（TMR）,分别在犊牛的2、3和4月龄进行体重和体尺的测量。[结果]TMR对犊牛各月龄体尺及体尺指数有提高的趋势,但影响不显著（P〉0.05）;而TMR提高了整个试验期犊牛的体重和月增重,并且在4月龄时影响达显著水平（P〈0.05）。[结论]TMR比常规饲养更有利于犊牛早期生长发育。     

南阳牛卵泡卵母细胞体外成熟培养的研究

［目的］研究南阳牛卵泡卵母细胞的体外成熟培养技术。［方法］以南阳牛卵泡卵母细胞为材料,分别在成熟培养液中添加不同激素（E2、FSH＋LH＋E2、PMSG＋hCG＋E2）、不同血清（0.6%BSA、10%FCS、10%OCS）和牛卵泡液（10%、20%和30%bFF）后对其进行体外成熟培养,研究不同处理对其体外成熟状况及发育潜力的影响。［结果］在激素添加试验中,添加FSH＋LH＋E2的效果最好,卵母细胞的成熟率及卵裂率（72.5%,52.6%）显著高于添加E2（47.5%,35.4%）组;在血清添加试验中,添加10%OCS的效果最好,卵母细胞的成熟率（73.3%）显著高于添加BSA组（51.7%）;在卵泡液添加试验中,卵母细胞的成熟率及卵裂率随卵泡液浓度的增加而降低,成熟培养液中添加10%bFF可取得与添加10%FCS相似的效果。［结论］该研究为牛卵泡卵母细胞的体外成熟培养提供了参考。     

荷斯坦奶牛生长发育规律研究

[目的]探究我国南方集约化饲养条件下特定阶段荷斯坦奶牛生长发育及体态结构的变化。[方法]对扬州大学实验农牧场的279头荷斯坦奶牛(49头犊牛、35头青年牛、195头成年牛)进行体尺测量,将测量所得原始数据进行处理得出各个生理阶段的体尺指数,用SPSS 15.0软件分析体尺指数在各生理阶段、成年牛胎次间的变化,并绘制散点图对场内犊牛和青年牛的体高、体长、胸围指标进行拟合。[结果]牛只年龄越大,体型越长;犊牛生长发育均衡;青年牛不同月龄体尺发育不均衡;成年牛因胎次的不同其体态结构呈现出无规律性,但要注意对产胎多的母牛加强补充骨骼生长发育所需营养。[结论]为奶牛场的犊牛饲养管理、青年牛培育及饲养管理、成年牛的选种选配工作提供了借鉴。     

新疆部分地区犊牛腹泻病大肠杆菌的分离、鉴定与血清型分析

[目的]为新疆犊牛腹泻病的预防提供理论依据.犊牛腹泻多是1月龄以内的犊牛出现一种以消化不良、腹泻为主要症状的消化道疾病,是造成犊牛死亡的主要疾病之一,同时引起犊牛腹泻的细菌种类不同,细菌的血清型也可能存在着地区差异型.[方法]选取新疆四个地方犊牛腹泻的粪便69份,进行细菌常规分离鉴定和血清型鉴定分析.[结果]大肠杆菌99株,沙门氏菌45株,克雷伯菌39株及未鉴定菌株20株.同时对分离的99株大肠杆菌进行血清型诊断和分析多为:O55、O44、O86和O125.[结论]新疆部分地区引起犊牛腹泻的病原菌和大肠杆菌优势血清型均存在地域性差异,为该不同地区犊牛腹泻防治提供理论依据.     

皖西白鹅产蛋期卵巢的显微与超微结构

[目的]探讨皖西白鹅产蛋期卵巢的组织学结构。[方法]应用光镜和透射电镜技术,观察皖西白鹅产蛋期卵巢形态学结构。[结果]皖西白鹅卵巢表面被覆生殖上皮,下方是白膜,其实质由皮质和髓质组成。皮质内含有不同发育阶段的卵泡和萎缩卵泡,大卵泡突出了卵巢表面,卵泡无卵泡腔,也无卵泡液,排卵后不形成黄体。电镜下,卵泡颗粒细胞胞质中有线粒体、内质网、脂滴、高尔基复合体等丰富的细胞器,并且这些细胞器随着卵泡的发育而逐渐增多。卵巢基质中有卵泡外膜细胞、间质细胞和空泡细胞3种细胞,前2种细胞胞质中有丰富的内质网,而空泡细胞胞质中脂滴较多。[结论]阐明了皖西白鹅产蛋期卵巢的显微结构与超微结构。     

添加物对小鼠腔前卵泡体外培养的影响

为探讨培养添加物对小鼠腔前卵泡生长成熟的影响,在培养液中分别加入不同体积分数的犊牛血清（ＦＣＳ）,牛卵泡液或添加促性腺激素,对小鼠腔前卵泡进行了培养。结果表明,５％以上犊牛血清明显提高腔前卵泡存活率,而１０％以上犊牛血清能明显促进卵泡的生长发育,２０％以上牛卵泡液可抑制卵母细胞的体外自发成熟分裂,并能促进腔前卵泡的生长发育,在不含犊牛血清的培养液中加入促卵泡素（ＦＳＨ）,促黄体素（ＬＨ）或ＦＳＨ＋     

骨形态发生蛋白15在兔卵巢中的免疫组化定位

[目的]探讨BMP15蛋白在兔卵巢卵泡发生过程中的调控机制。[方法]采用免疫组织化学方法测定了BMP15在兔卵巢中的表达定位情况。[结果]BMP15蛋白在原始卵泡中没有表达,在初级卵泡、次级卵泡和有腔卵泡卵母细胞及有腔卵泡颗粒细胞和卵泡液中均有表达,在黄体溶解早期也有表达,但是在闭锁卵泡中的表达则受到抑制。[结论]BMP15参与了兔卵泡发育全过程,并且与黄体溶解机制有关;而在闭锁卵泡中,其低水平的表达可能是由其他因子所抑制,进而共同调节了卵泡的闭锁。     

不同饲喂条件下犊牛胃形态发育的比较研究

为探讨3种不同饲喂条件对犊牛胃形态发育的影响,选择新生的健康荷斯坦公犊牛15头,每5头1组,随机分为牛奶和犊牛料自由采食组(Ⅰ组)、牛奶和犊牛料按比例定量采食组(Ⅱ组)和全乳饲喂组(Ⅲ组),饲喂3个月后,用大体解剖学方法,对3组犊牛胃的黏膜上皮颜色、胃黏膜形态各胃室及质量、大小比例进行观察和分析比较.结果表明:Ⅰ组犊牛胃前胃黏膜上皮颜色较深,呈现深褐色或黑色,Ⅱ组与Ⅰ组基本相似,但瓣胃黏膜上皮颜色略浅,Ⅲ组前胃与皱胃黏膜上皮颜色则均为白色;Ⅰ组、Ⅱ组黏膜形态与成年牛胃基本一致,Ⅲ组前胃黏膜乳头略显退化,但皱胃比前2组发达;Ⅰ组、Ⅱ组瘤胃质量占犊牛胃总质量的比例较大,分别为52.76%和49.78%,接近胃总质量的一半,而Ⅲ组为40.42%,占胃总质量的相对比例较小.不同饲喂条件对犊牛胃的形态发育影响显著,全乳饲喂条件下犊牛的前胃发育受到明显抑制,而牛奶与犊牛料自由采食或定量采食条件下的犊牛胃形态发育基本正常.     

不同个体牛的血清IgG水平的差异分析

研究了仔牛哺乳期血清IgG水平的变化及血清IgG含量与牛龄、性别的关系。结果表明:仔牛吃完母乳24h后血清中的IgG达到峰值(65.58±9.87)mg.mL-1,提取免疫球蛋白的原料血液应选择的牛龄在8年以下为宜;当以6￣8年的牛血液作为原料时,母牛血液IgG含量比公牛血液IgG含量高1%。     

发情期蓝狐卵泡发育的显微结构观察(英文)

[目的]对发情期蓝狐卵巢的组织结构和卵泡发育过程的变化进行研究。[方法]采集10只发情期蓝狐的左侧卵巢共计10枚,利用光学显微镜对卵巢的组织结构和卵泡的发育过程进行观察,同时利用目镜测微尺和显微照相技术分别对30个原始卵泡、30个初级卵泡、15个生长卵泡、15个囊状卵泡、15个成熟卵泡及各级卵泡中的卵母细胞进行测量和拍照。[结果]蓝狐卵巢由生殖上皮、白膜、皮质和髓质构成。皮质内分布着大量的间质细胞及不同发育阶段的卵泡,位于卵巢的外周;髓质位于皮质下层,分布着较多的血管。卵泡发育过程中,各级卵泡和卵母细胞的直径差异较大(卵泡为45.45~974.55μm,卵母细胞为30.23~147.27μm),在初级卵泡阶段出现透明带物质。卵泡闭锁发生于卵泡生长的各个时期,主要表现为卵母细胞的皱缩,细胞核固缩;颗粒细胞松散、退化。[结论]为揭示雌性蓝狐的生殖机理提供了组织学依据。