金黄色葡萄球菌CP5偶联鞭毛蛋白疫苗对小鼠乳腺炎模型的保护作用

以鞭毛蛋白(flagellin)作为载体蛋白,通过化学偶联至金黄色葡萄球菌5型荚膜多糖(CP5),并在小鼠模型上检验多糖疫苗对小鼠存活及其乳腺的保护作用.将小鼠分为4组:生理盐水组、CP5单独免疫组、牛血清白蛋白(BSA)-CP5偶联组和flagellinCP5偶联组,每组10只,分别进行皮下免疫,均含CP5 10 μg;共免疫两次,两次免疫间隔3周.第2次免疫两周后,用金黄色葡萄球菌分别对小鼠腹腔、乳腺进行攻毒,并通过实时定量PCR对乳腺组织细胞因子IL-4、IL-10、IFN-γ、IL-12的表达进行检测.结果表明,CP5偶联鞭毛蛋白疫苗对小鼠乳腺具有显著的保护效果,并在乳腺组织部位诱导了Th1型细胞因子表达,说明鞭毛蛋白是CP5的理想载体蛋白.     

鼠伤寒沙门氏茵鞭毛蛋白FIiC的原核表达及纯化

对鼠伤寒沙门氏菌的鞭毛蛋白FliC的基因进行克隆、鉴定和原核表达,为鞭毛蛋白佐剂作用的研究奠定基础。以鼠伤寒沙门氏菌8014菌株基因组DNA为模板,PCR扩增Flic基因,产物与T载体连接,经测序鉴定正确后与表达载体pQE30（＋）连接构建重组表达质粒Flic—pQE30,将此重组质粒转化人表达宿主E．coliXLI—Blue菌株内抽提质粒,酶切鉴定正确后对转化菌株以1PTG进行诱导后,表达产物经镍离子亲和层析柱纯化后,进行SDS—PAGE和Westernblot分析。测序结果显示,FliC为完整的编码区基因1485bp,编码495个氨基酸残基,蛋白相对分子质量约为56kDa。经SDS—PAGE分析表明,以37℃、1mM的IPTG诱导5h,表达效果最好,诱导产物是与理论值相符的56kDa的融合蛋白。经western—blotting检测,表达的重组蛋白FliC可与小鼠抗鼠伤寒沙门氏菌全菌体多抗血清反应得到清晰的目的条带,表明表达的重组蛋白具有良好的反应原性。成功进行了鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白nic基因的克隆表达,为进一步研究其免疫佐剂作用奠定了基础。     

鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白FliC的原核表达及纯化

对鼠伤寒沙门氏菌的鞭毛蛋白FliC的基因进行克隆、鉴定和原核表达,为鞭毛蛋白佐剂作用的研究奠定基础。以鼠伤寒沙门氏菌8014菌株基因组DNA为模板,PCR扩增Flic基因,产物与T载体连接,经测序鉴定正确后与表达载体pQE30(+)连接构建重组表达质粒Flic-pQE30,将此重组质粒转化入表达宿主E.coli XL1-Blue菌株内抽提质粒,酶切鉴定正确后对转化菌株以IPTG进行诱导后,表达产物经镍离子亲和层析柱纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot分析。测序结果显示,FliC为完整的编码区基因1 485 bp,编码495个氨基酸残基,蛋白相对分子质量约为56 kDa。经SDS-PAGE分析表明,以37℃、1 mM的IPTG诱导5 h,表达效果最好,诱导产物是与理论值相符的56 kDa的融合蛋白。经western-blotting检测,表达的重组蛋白FliC可与小鼠抗鼠伤寒沙门氏菌全菌体多抗血清反应得到清晰的目的条带,表明表达的重组蛋白具有良好的反应原性。成功进行了鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白Flic基因的克隆表达,为进一步研究其免疫佐剂作用奠定了基础。     

霍山石斛多糖单克隆抗体的制备及多糖组织分布研究

[目的]探讨霍山石斛多糖口腔注射后多糖在小鼠体内的分布状况。[方法]以霍山石斛原球茎中提取的一种多糖与牛血清白蛋白偶联后作为抗原,免疫小鼠获得单克隆抗体,以获得的单克隆抗体为一级抗体对小鼠进行免疫组织化学试验。[结果]证实了CDAP活化法可有效偶联多糖与蛋白质,且以制备的偶联物能引起小鼠免疫反应从而制备出所需的单克隆抗体,利用获得的活性较高、特异性较好的单克隆抗体得到多糖在小鼠组织的分布图。[结论]该方法可为霍山石斛多糖进入机体后分布情况提供科学依据。     

牡丹籽油软胶囊回复突变试验的研究

[目的]采用鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验(Ames)对牡丹籽油软胶囊进行安全性毒理学试验。[方法]试验选用鼠伤寒沙门菌TA97、TA98、TA100和TA102菌株,将牡丹籽油软胶囊配制成浓度为5.0、1.0、0.2、0.04 mg/皿4个剂量,和阳性对照组(叠氮钠、2-氨基芴、敌克松)进行比较,观察各菌株的回变菌落数。[结果]牡丹籽油对4个菌株诱发的回变菌落数均未超过对照组2倍,为阴性结果。[结论]牡丹籽油对鼠伤寒沙门氏菌无直接致突变作用。     

表达PRRSV GP3蛋白减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株的构建

构建表达猪PRRSV GP3蛋白的口服重组减毒鼠伤寒沙门氏菌活载体疫苗株。将去信号肽序列的PRRSV ORF3基因插入到表达载体pYA3341(Asd+)中,构建重组质粒pYA3341-ORF3。将重组质粒电转入鼠伤寒沙门氏菌疫苗株X4550(Asd-、Cya-、Crp-),获得重组疫苗菌株X4550(pYA3341-ORF3)。体外鉴定重组菌表达的GP3蛋白、重组菌特性并进行小鼠免疫试验。酶切鉴定和序列测定证实重组质粒构建成功,SDS-PAGE电泳及Western blot检测有GP3特异性蛋白条带,小鼠免疫后可检测到GP3蛋白抗体。成功构建能稳定表达PRRSV GP3蛋白的口服减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株。     

MSL抗菌肽对鼠伤寒沙门氏菌感染的预防作用

本实验目的是探讨MSL抗菌肽对鼠伤寒沙门氏菌感染的预防作用。取4周龄健康小白鼠50只,随机分成5组。阴性对照组正常饲喂;阳性对照组腹腔注射鼠伤寒沙门氏菌培养物15μL/只(4×108cfu/m L),正常饲喂;试验组腹腔注射鼠伤寒沙门氏菌培养物,剂量同阳性对照组,饮水中分别按25μg/m L、50μg/m L、100μg/m L添加MSL之后正常饲喂。试验共进行14d,每天观察小鼠临床表现,病死小鼠进行剖检,试验结束后检测存活小鼠血液生化指标。结果,100μg/m L MSL抗菌肽对鼠伤寒沙门氏菌感染有较好的预防作用。     

氟苯尼考双混悬型乳剂的体外药效学研究(英文)

[目的]为了探明氟苯尼考双混悬型乳剂的体外药效学特征。[方法]以氟苯尼考注射液为对照组对氟苯尼考双混悬型乳剂进行5种细菌的最低抑菌浓度(MIC)、最低杀菌浓度(MBC)和耐药突变选择窗(MSW)的测定,对鼠伤寒沙门氏菌进行抗生素后效应(PAE)和抗生素后亚抑菌浓度效应(PASME)的测定。[结果]相对于普通注射液氟苯尼考双混悬型乳剂对5种细菌的MIC和MBC无明显变化,但其明显缩小了对5种细菌的MSW(P<0.01),并且明显的延长了对鼠伤寒沙门氏菌PAE和PASME(P<0.01)。[结论]氟苯尼考双混悬型乳剂在体外能够减小细菌耐药几率,明显延长抗生素对细菌的后效应时间,从而有效地提高抗菌效果。     

代森锰原药的致突变性试验研究

[目的]探讨代森锰原药的致突变性。[方法]用KM小鼠进行小鼠骨髓多染红细胞微核试验和小鼠睾丸精母细胞染色体畸变试验,以及鼠伤寒沙门氏菌回复突变（Ames）试验。[结果]在小鼠骨髓多染红细胞微核试验和小鼠睾丸精母细胞染色体畸变试验中．阴性对照组与阳性对照组比较,差异有显著性（P〈0．01）;各剂量组与阴性对照组比较,差异均无显著性（P〉0．05）,且均低于阳性对照组（P〈0．05,P〈0．01）。在Ames试验中,4株试验菌在0．1～1．0mg／皿的试验剂量下（活化或非活化）均没有引起自发回变数2倍增加。[结论]根据《农药登记毒理学试验方法》中的评定标准,小鼠骨髓多染红细胞微核试验、小鼠睾丸精母细胞染色体畸变试验和鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验（Ames试验）在所选剂量范围内结果均为阴性,代森锰原药未呈现致突变性。     

蛋鸡群沙门氏菌的监测

[目的]了解蛋鸡场沙门氏菌的感染情况。[方法]采用沙门氏菌抗原和抗体检测方法对2012~2015年采集的广东省蛋鸡场样品进行检测。采用ELISA方法对1784血清样品进行了肠炎沙门氏菌和1 387份血清样品进行了鼠伤寒沙门氏菌抗体检测;采用凝集试验方法对1 391份血清样品进行了鸡白痢沙门氏菌抗体检测;采用细菌培养、PCR方法对采自广东省的活鸡/死鸡、环境拭子等1 458份样品进行了沙门氏菌检测。[结果]肠炎、鼠伤寒、鸡白痢3种血清型沙门氏菌抗体的阳性率分别为16.70%、10.09%和1.01%;沙门氏菌抗原检测的阳性率为1.65%。[结论]蛋鸡群中存在肠炎、鼠伤寒、鸡白痢等3种沙门氏菌不同程度的感染,但是蛋鸡群的总体感染率不高。     

玉蕈生物制剂对小鼠体液免疫功能的影响

[目的]探讨玉蕈生物制剂对小鼠体液免疫功能的影响。[方法]分别以1、2、4 g/(kg.bw)3个剂量组的玉蕈生物制剂灌胃小鼠30 d,测定抗体生成细胞和血清溶血素。[结果]玉蕈生物制剂能提高小鼠抗体的生成细胞数和血清溶血素水平。[结论]玉蕈生物制剂具有增强小鼠体液免疫功能的作用。     

云芝多糖对鸡新城疫体液免疫效果的影响

[目的]探究云芝多糖对鸡新城疫体液免疫抗体水平的影响。[方法]云芝多糖以肌肉注射、口服和稀释疫苗滴鼻点眼3种方式配合鸡新城疫克隆30疫苗免疫7日龄雏鸡,首免10 d后进行第2次免疫,并分别于首免后第5、10、18、25、30、40、70天测定其血凝抑制(HI)抗体效价。[结果]3种作用方式下的云芝多糖均具有明显增强体液免疫效果的作用。其中,以口服免疫组的抗体水平上升得最高,持续时间最长,但其用量较大;注射组抗体产生最快,但持续时间比口服组略短。滴鼻点眼组的抗体效价与对照组差异显著(P<0.05)。[结论]云芝多糖能大大提高机体的体液免疫水平。     

复合螺旋藻多糖对小鼠抗辐射损伤的作用机制研究

[目的]研究复合螺旋藻多糖对X射线辐射损伤小鼠的保护作用.[方法]将螺旋藻多糖（PSP）与银杏叶提取物（GBE）按1∶1比例配制不同浓度的复合螺旋藻多糖.昆明种小白鼠随机分为5组（空白对照组、对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组）,空白对照组不做处理,对照组灌服生理盐水,高、中、低剂量组灌服相应药物,连续14 d,对小鼠进行X射线全身照射,照射后继续灌服药物7d.[结果]高、中、低剂量组外周血白细胞数与对照组差异性均显著（P＜0.01）,并可显著提高小鼠脾脏和胸腺指数（P＜0.01）,CD4 ＋/CD8＋比例上升（P＜0.01）,细胞恢复明显加快,高剂量组CD4＋/CD8＋比例更接近空白对照组.[结论]复合螺旋藻多糖对X射线辐射损伤小鼠的免疫功能有一定的保护作用.     

东北玉簪多糖提取分离及组成研究

[目的]研究玉簪多糖的提取分离及其组成。[方法]利用水提醇沉法得粗多糖,并依次用30%、50%、80%乙醇分部沉淀得多糖CP1、CP2、CP3;经Superdex-100凝胶柱色谱分离得CP4、CP5。采用光谱法和色谱法对其总糖含量、单糖组成等进行了分析。[结果]东北玉簪5个多糖样品酸性糖含量为20.36%~52.76%、中性糖含量为34.07%~55.62%。[结论]东北玉簪多糖CP1~CP5均为中性糖和酸性糖的混合物。     

Immune response to cholera toxin epitope inserted in Salmonella flagellin

Bacterial flagella are potent immunogens and aromatic-dependent (aro) Salmonella as live vaccines evoke humoral and cellular immune responses. Such strains expressing epitopes of protective antigens as inserts in flagellin would provide a novel way to vaccinate against diseases caused by unrelated pathogens. A synthetic oligonucleotide specifying an epitope of cholera toxin subunit B was inserted in a Salmonella flagellin gene. The chimeric flagellin functioned normally and the epitope was expressed at the flagellar surface. Parenteral administration to mice of an aro A flagellin-negative strain of S. dublin expressing the chimeric flagellin gene evoked antibody to cholera toxin.     

气相色谱法测定新疆桑枝多糖中单糖组成及含量

[目的]建立测定桑枝多糖中单糖的组成及含量的方法.[方法]水提醇沉法提取桑枝多糖,CF3 COOH水解多糖,水解产物用盐酸羟胺、吡啶和醋酸酐衍生化,生成糖腈乙酸酯衍生物,气相色谱法测定桑枝多糖的单糖组成及含量.[结果]新疆桑枝多糖由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖等组成,含量分别为鼠李糖（11.8 mg/ml）、阿拉伯糖（14.4 mg/ml）、木糖（1.6 mg/ml）、甘露糖（1.9mg/ml）、葡萄糖（22.3 mg/ml）及半乳糖（28.0 mg/ml）.[结论]该方法简便、灵敏、准确可靠,可用于桑枝多糖中单糖的组成及含量测定.     

培养条件对奶牛金葡菌5型荚膜多糖产量的影响

[目的]研究不同培养条件对牛源金葡菌5型荚膜多糖产量的影响,以便于CP5的生产制备,从而为开展奶牛金葡菌新型多糖疫苗的研究奠定基础。[方法]从患隐性乳腺炎奶牛乳样中分离金葡菌,鉴定荚膜多糖血清型,对5型荚膜多糖菌株,采用BHI,哥伦比亚固体培养基,mod110三种培养基,每种培养基分别采用固体培养,碳源为葡萄糖的液体培养和碳源为乳糖的液体培养三种方式,共组成9种不同培养条件进行培养,研究培养条件对金葡菌荚膜多糖产量的影响。[结果]不同培养结果表明,与常用哥伦比亚培养基比较,BHI培养基能降低荚膜多糖产量,而mod110培养基能提高荚膜多糖产量;同种培养基,固体培养方式比液体培养方式有更高的荚膜多糖产量,同时乳糖作为碳源可提高荚膜多糖产量。     

培养条件对奶牛金葡菌5型荚膜多糖产量的影响（英文）

[Objective] The effect of different culture conditions on type 5 capsular polysaccharide production of Staphylococcus aureus from diary cattle was studied to provide simple way for CP production and preparation and laid foundation for carrying out new polysaccharide vaccine research.[Method] Staphylococcus aureus was isolated from milk sample of sick dairy cattle and capsular polysaccharide serotypes were identified.Type 5 capsular polysaccharide was cultured on BHI,solid columbia and mod110 culture media.Glucose and lactose were taken as carbon sources for every culture media in solid and liquid state.Therefore 9 different culture conditions were taken to study the effect of culture conditions on capsular polysaccharide production.[Result]Different culture conditions indicated that compared with columbia culture media,BHI culture media could decline capsular polysaccharide production and mod110 culture media could increase capsular polysaccharide production.While for same culture media,solid culture media was better for capsular polysaccharide production,meanwhile,taken lactose as carbon source could increase capsular polysaccharide production.     

培养条件对奶牛金葡菌5型荚膜多糖产量的影响

奶牛乳腺炎是奶牛生产上的重要疾病,不仅影响奶牛的产奶量、降低牛奶品质,而且严重威胁消费者健康,已成为制约奶牛业发展的主要原因之一。据国内外相关资料显示,50％以上的奶牛乳腺炎是由金葡菌（Staphylococcus aureus,S.aureus）所引起的。研究发现,94％～100％的从患乳腺炎奶牛乳汁中分离到的金葡菌菌株表面带有多糖物质构成的保护性荚膜荚膜具有11种血清型,