狂犬病病毒Flury株(LEP)在乳鼠脑内及BHK-21细胞上的传代固定及生物学特性测定

将狂犬病病毒Flury株(LEP)通过乳鼠脑和BHK-21细胞系交叉传代10代,并对交叉传代获得的各代毒种进行对细胞的适应性、病毒含量、毒力的测定。结果表明:病毒经乳鼠脑内传代后,能很好的在BHK-21细胞上增殖,各代次病毒含量均在10-6.0TCID50/0.1 mL以上,平均达到10-6.75TCID50/0.1 mL;对3～5日龄乳鼠平均LD50达到10-5.5/0.03 mL,对11～13g小鼠平均LD50达到10-4.6/0.03 mL;毒力试验证明,交叉传代的细胞毒对犬和家兔无致病性。     

浅谈猪繁殖与呼吸综合征病毒中和抗体的研究进展

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由其病毒(PRRSV)引起的养猪业的重要传染病。研究发现在病毒GP5蛋白的外功能区找到一个线性中和表位(B表位)和一个线性非中和表位(A表位),且A表位会阻滞或降低机体对B表位的免疫应答,延迟中和抗体的产生。此外,B表位上及其周围的糖基化位点也掩盖了其部分免疫原性,降低了机体对其的反应。研究表明,B表位不是中和表位,并且中和抗体在防控PRRSV感染中发挥着重要作用。文章综述了中和抗体的保护作用、中和表位和糖基化作用等方面的研究进展。     

猪伪狂犬病病毒粤A株的分离与鉴定

从广东番禺某猪场病死仔猪中分离到一株疑为猪伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）毒株,通过对其理化特性的鉴定,中和试验,实验动物回归试验,电镜观察,ＰＣＲ扩增及感染力测定,发现其对氯仿、乙醚均敏感,能中和Ｐｒ不标准阳性血清,实验兔接种该病毒后,发生瘙痒并麻痹致死,电中见病毒粒子呈示规则圆形并带有囊和纤窝。ＰＣＲ体外扩增可见其不Ａ株在同一水平位置上有相同的电泳带,用Ｍａｒｃ１４５测定其毒为１０＾７．５ＴＣＩＤ５０／     

血清稀释液的筛选及犬抗狂犬病病毒血清抗体正常值范围的确定

应用间接ELISA法进行抗体检测是评价狂犬疫苗免疫效果的一种快捷有效手段。首先筛选得到一种灵敏、特异的血清稀释液;然后应用其对采集自不同地区的812份未免疫犬血清稀释并进行间接ELISA检测;以OIE标准阴、阳性犬血清为对照,随机选取不同A450范围的犬血清应用RFFIT进行检测;以RFFIT效价低于0.1 IU/ml的犬血清,计算阴性血清正常值范围和95%的可信区间,并建立标准品的回归方程。结果显示：所筛选到的血清稀释液灵敏、特异,有756份血清样品的效价低于0.1 IU/ml,犬抗狂犬病抗体阴性血清的正常值范围为0.127 3±0.059 8,95%的可信区间为0.078 1-0.172 3。应用OIE犬阳性血清标准品建立了A450和抗血清效价的回归方程：A=1.139 IU＋0.470。该试验结果为犬狂犬病防制以及犬狂犬病抗体ELISA检测试剂的研制奠定了基础。     

鸡减蛋综合征病毒中和性单克隆抗体的制备、鉴定及在双抗体夹心ELISA中的应用

为了制备针对鸡减蛋综合征病毒(EDSV)的中和性单克隆抗体,首先纯化得到重组EDSV纤维蛋白,经血凝试验(HA)鉴定纤维蛋白的血凝活性,HA效价为1∶2⁷。之后将纤维蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,免疫4次后,小鼠血清的间接酶联免疫吸附试验(iELISA)效价最高达到1∶409 600,间接免疫荧光试验(IFA)效价最高达到1∶12 800。取效价最高免疫小鼠脾细胞进行细胞融合制备杂交瘤细胞,结合iELISA和IFA检测,经过多轮亚克隆,最终成功获得了2株稳定分泌中和性单克隆抗体的杂交瘤细胞株9G12和10E11。iELISA结果显示,单克隆抗体9G12和10E11的腹水效价分别为1∶128 000和1∶1 020 000;IFA效价分别为1∶2 000和1∶8 000。Western blot检测结果显示,单克隆抗体9G12和10E11均不能识别变性的EDSV纤维蛋白,表明二者识别纤维蛋白的构象型表位。病毒中和试验结果表明,单克隆抗体9G12和10E11均具有中和活性,中和效价分别为1∶2⁷和1∶2⁴。亚型鉴定表明...     

伪狂犬病病毒贵州分离株gE基因主要抗原表位区真核表达研究

收集贵州省思南县某猪场送检的哺乳仔猪病料,采用Vero细胞盲传、核酸鉴定及测序分离到1株伪狂犬病病毒贵州分离株。扩增其gE基因主要抗原表位区,构建pcDNA3．1（＋）－gE重组真核表达质粒,将其转染Vero细胞,采用间接免疫荧光（IFA）检测基因在Vero细胞中的表达,同时将重组质粒免疫BALB／c小鼠,进行免疫学评价。结果表明：萨基因主要抗原表位区在Vero获得瞬时表达,转染的Vero细胞呈特异性绿色荧光;将构建的重组真核表达质粒免疫BALB／c小鼠,经间接ELISA和T淋巴细胞亚群含量测定表明,重组质粒具有较好的免疫原性。     

番鸭呼肠孤病毒弱毒疫苗在番鸭体内中和抗体消长规律的研究

为明确番鸭呼肠孤病毒弱毒疫苗在番鸭体内中和抗体消长规律,采用固定病毒稀释血清法,测定了经弱毒疫苗免疫后的雏番鸭不同时间其血清中和抗体效价。结果显示：疫苗注射1日龄雏番鸭,免疫后28 d部分鸭血清中出现抗体,35 d全部鸭血清中出现抗体;6个月抗体效价达高峰,有效免疫期在18个月以上。表明番鸭呼肠孤病毒弱毒疫苗诱导的中和抗体产生期较晚,但持续期长。     

猪伪狂犬病病毒新流行株主要糖蛋白的分子特征分析

【目的】进一步了解猪伪狂犬病毒新流行株的遗传特征。【方法】对从安徽某猪场分离的1株猪伪狂犬病病毒(PRV)AH株进行遗传进化分析及主要糖蛋白gB、gC、gD、gE的序列分析。【结果】PRV AH株与国内2011年以来的流行毒株非常相似,但与Bartha株及其他国外毒株遗传关系较远;国内流行毒株与Bartha株及其他国外毒株相比,其主要糖蛋白均存在明显的连续氨基酸的缺失和插入,且部分突变位点位于这些糖蛋白的重要功能区。【结论】从分子水平上解析了PRV新流行株与疫苗株Bartha株的遗传差异,为进一步深入研究Bartha株疫苗免疫失败的原因提供了理论依据。     

狂犬病病毒分子生物学研究进展

综述了狂犬病病毒基因组结构、基因型及其结构蛋白的结构与功能的分子生物学进展,为进一步认识和控制狂犬病奠定基础。     

黄牛狂犬病病毒的分离和鉴定

应用鼠脑传代,从具有神经症状的病牛脑组织中分离获得5株病毒,经电子显微镜观察呈典型弹状病毒样粒子.用抗狂犬病毒CVS(狂犬病毒Ⅰ型代表株)免疫血清作ELISA检测及小鼠中和试验,证明分离株病毒为狂犬病毒.用狂犬病相关病毒Lagos bat(狂犬病毒2型)、Mokola(狂犬病毒3型)和Duvenhage(狂犬病毒4型)免疫血清对分离株病毒作交叉中和试验,结果发现分离株病毒与Duvenhage有较密切的抗原联系.而与Lagos bat及Mokola病毒没有抗原联系.用自制狂犬病毒“核蛋白”单克隆抗体作夹心间接ELISA检测分离株病毒的感染鼠脑均呈阳性反应,5株病毒与CVS及其互相之间没有明显差异.结论认为,由河南省黄牛分离的病毒为狂犬病毒.     

羊抗鸡酶标二抗用于鹅血清抗体检测的研究

通过比较鸡IgG与鹅IgG的相似性,探讨羊抗鸡酶标二抗用于检测鹅血清抗体的可行性。用辛酸-硫酸铵盐析法提纯鸡、鸭、鹅、小鼠、兔、猪、羊的IgG,比较上述动物IgG粗提物的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱,并用蛋白免疫转印法定性检测上述动物血清IgG与羊抗鸡酶标二抗的结合情况;然后用直接ELISA方法分析不同动物血清分别与抗鸡酶标抗体和抗鹅酶标抗体结合程度的差异;最后用间接ELISA方法比较两种酶标抗体对同一鹅群大肠杆菌抗体的检测结果。结果表明,鸡、鸭、鹅IgG具有较大的相似性,都能够与抗鸡酶标二抗结合;羊抗鸡酶标二抗可以替代抗鹅酶标二抗来检测鹅的血清抗体。     

LH抗体间接ELISA检测方法的建立

以高纯度的促黄体素（LH）作为包被抗原,建立了检测LH抗体的间接ELISA法,该法的最适抗原包被浓度为1μg/mL,最佳酶标山羊抗小鼠抗体稀释度为1∶1500.该法只与LH阳性小鼠血清呈现阳性反应,而与LH阴性小鼠血清和小鼠促卵泡素（FSH）阳性血清呈现阴性反应.结果表明,该法具有良好的特异性和重复性,可用于LH免疫后抗体水平检测.     

检测克伦特罗的免疫传感器抗体膜再利用效果评价

将生物技术与微电子技术相结合,研制出了检测克伦特罗的免疫生物传感器样机。在研制抗体膜（感受器）过程中,应用了尿素和SSC处理法对抗体膜进行复活再利用,结果上述2种方法处理的抗体膜的响应电流值与初次利用的抗体膜的响应值差异不显著（P〉0．05）,对化学信号的感受性和传导性未发生显著性改变。由此可知,抗体膜用上述2种方法复活后,性能良好,完全可重复再利用。     

检测禽霍乱抗体间接ELISA法的建立

以方阵滴定法选择出最适ＥＬＩＳＡ反应条件,用系列稀释法测定２１份血清样品的禽霍乱抗体ＥＬＩＳＡ效价（ＥＴ）,并与相应血清样品１∶２００倍稀释的Ｐ／Ｎ值配对,作线性回归分析,得到回归方程ｙ＝２１９．６７３ａ－１８３．５７０（ｒ＝０．９４４）和标准曲线,从而建立起快速定量测定禽霍乱抗体的间接ＥＬＩＳＡ方法——阳阴比值ＥＬＩＳＡ效价法（Ｐ／ＮＩ－ＥＴ法）。利用该法,血清样品只需作１∶２００倍稀释,测定其Ｐ／Ｎ值,通过回归方程（或标准曲线）即可求得ＥＴ．     

单克隆抗体技术在植物中的研究应用

介绍了单克隆抗体技术及其基本原理,综述了单克隆抗体技术在植物病原菌、植物病毒及植物其他方面的应用研究。     

狂犬病神经元包涵体的观察

观察患狂犬病的牧羊犬大脑皮层海马的锥体细胞浆内的包涵体。对一只患狂犬病的牧羊犬进行病理学剖检及抗原检测,并取病犬大脑皮层的海马回部组织制作组织学切片观测包涵体。病理剖检结果表明,尸体无特征变化。取犬唾液和脑组织匀浆液进行抗原检测,结果均呈阳性。根据发病情况、病理学剖检及抗原检测,可诊断为狂犬病。在患狂犬病的牧羊犬大脑皮层海马的锥体细胞浆内有2~5μm的圆形或椭圆形紫红色的包涵体。